细胞生物学第2次实验

秒
甲基绿派洛宁
晾
5min
干
冲洗 5秒
0.1%酸性固绿 5min
0.1%碱性固绿
30min
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[结果观察]
酸性蛋白
碱性蛋白
整D理pNpt A和RNA的显示
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[注意事项]
使用三氯醋酸处理的目的 两人一组，每组制三张血涂片
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[作业]
1. 请回答细胞化学法在本次实验中的应用。 2. 通过本次实验学到哪些基本操作技能？ 3. 请描述本次实验的显微观察结果。
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[小结]
评价本次实验的得失 本次实验需要巩固的概念
细胞化学法 本次实验需要掌握的实验技能
1. 双毁髓处死蟾蜍的方法 2. 血涂片制作方法 3. 染色的规范操作方法 4. 洗涤方法（流水冲洗） 5. 正确的镜检方法（显微观察技术）
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[实验用品]
✓ 95%乙醇 ✓ 三氯醋酸 ✓ 甲基绿-派洛宁 ✓ 0.1%酸性固绿 ✓ 0.1%碱性固绿
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[操作流程]
暴露 胸腔
制 血涂片
取心脏血
双毁髓法处死
固
定
10min 1min
反洗 复涤 冲 洗
三氯醋酸 90℃25min
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晾干
95%乙醇
7
洗
染
涤
色
镜检
冲洗5
晾 干
遵义医学院
细胞生物学与遗传学教研室
2009年9月研制
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1
第二次实验
Ⅰ 细胞内酸性蛋白和碱性蛋白的原位显示 Ⅱ 细胞内DNA和RNA的原位显示
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2
[实验目的]
1.掌握酸、碱性蛋白以及DNA和RNA在细胞内的 分布情况；
2.了解酸、碱性蛋白以及DNA和RNA显色反应的 原理和方法。
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3
[实验原理]
1. 由于不同蛋白质分子所带酸性基团和碱性 基团数量不同，生理条件下，整个蛋白质 带负电荷多则为酸性蛋白，带正电荷多则 为碱性蛋白。可用不同pH值的固绿染色， 即可显示细胞内酸性蛋白或碱性蛋白。
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核酸的存在会影响实验结果 用三氯醋酸处理
2. 甲基绿和派洛宁是互不混淆、互不影响的 两种染色剂，由于其自身分子结构的特点， 它们可与两种聚合程度不同的核酸竞争性 结合，从而同时显示细胞内DNA和RNA 的分布部位。