甲酯化方法

一、主题内容与适用范围本标准适用于所有的动植物油脂和脂肪酸。

二、目的油脂及脂肪酸（特别是12碳以上的长碳链脂肪酸）一般不直接进行气相色谱分析，其原因是脂肪酸脂肪酸及油脂的沸点高，高温下不稳定，易裂解，分析中易造成损失。

因此，对脂肪酸及油脂的脂肪酸组分分析时，先将脂肪酸或油脂与甲醇反映，制备脂肪酸甲酯，降低沸点，提高稳定性，然后进行气相色谱分析。

三、BF3甲酯化法1、仪器（1）50ml及100ml磨口圆底烧瓶（2）回流冷凝器（长度20～30cm，有磨口连接，与烧瓶配套）（3）250ml分液漏斗（4）滴管（5）带磨口玻璃塞的试管（6）10ml移液管（7）沸石2、试剂（1）正庚烷，色谱纯（2）轻汽油（沸程40～60℃）（3）无水硫酸钠，分析纯（4）0.5M的氢氧化钠甲醇溶液（不用标定），配制如下：称取2g NaOH溶于100ml甲醇中（甲醇的含水量不得超过0.5％<m/m>），该溶液放置一段时间后会出现白色沉淀，这不影响脂肪酸甲酯化制备。

（5）12～25％（m/m）BF3的甲酯溶液（6）饱和的NaCl水溶液（7）甲基红指示剂：用60％的乙醇配置0.1％的甲基红溶液（8）氮气：含氧量低于5mg/kg3、操作方法，（1）取大约350mg油样加入50ml烧杯中，移取6ml 0.5M的NaOH于油样中，并加入几粒沸石，连接回流装置，开始加热回流，回流过程中要不断摇动烧瓶。

（2）当烧瓶内的油珠消失，溶液变得透明时（大约需要5～10分钟），从冷凝器上端加7ml BF3甲醇溶液于烧杯内（用移液管移取），然后继续回流1分钟。

（3）然后从冷凝管上端加入2～5ml正庚烷后，再回流1分钟。

（4）撤离火源，取出烧瓶，向烧瓶中加入一定量的饱和NaCl溶液，轻轻上下颠倒数次后，静置分层。

（5）从烧杯内的上层溶液中取出约1ml转移到磨口试管中，并加入适量的无水硫酸钠，以去除痕量的水分，得到的此甲酯化样品以备气相色谱分析用。

几种脂肪酸甲酯化方法的比较

几种脂肪酸甲酯化方法的比较脂肪酸甲酯化方法是将脂肪酸与甲醇反应，生成相应的脂肪酸甲酯。

脂肪酸甲酯的应用广泛，常用于制备生物柴油、乳化剂、护肤品等。

下面将对几种常用的脂肪酸甲酯化方法进行比较。

1.酸催化甲酯化酸催化甲酯化是最常见的脂肪酸甲酯化方法之一、它通过在反应体系中加入酸催化剂，促进脂肪酸与甲醇的酯化反应。

常见的酸催化剂有硫酸、硫酸氢钠、硫酸铵等。

该方法具有操作简单、反应速度较快、成本较低等优点。

然而，酸催化条件下易产生酸水解反应和酸催化剂的脱水反应，会降低脂肪酸的收率和质量。

2.酶催化甲酯化酶催化甲酯化是一种绿色、高效、具有较高反应选择性的脂肪酸甲酯化方法。

常用的酶催化剂有脂肪酶、酶和蛋白酶等。

酶具有良好的催化活性、高化学稳定性和多次重复使用的能力。

相比于其他方法，酶催化甲酯化更环保，不会产生有毒废物和大量的反应副产物。

然而，酶催化甲酯化的反应速度较慢，酶催化剂价格较高，对反应温度和pH值较为敏感。

3.碱催化甲酯化碱催化甲酯化是一种常用的酯化方法。

它通过在反应体系中加入碱催化剂，如氢氧化钠、氢氧化钾等，促进脂肪酸与甲醇的酯化反应。

碱催化甲酯化反应速度快、转化率高，并且生成脂肪酸甲酯的收率高。

然而，碱催化甲酯化会形成大量的碱皂，需要进行酸化处理和中和，产生大量废液，增加了生产成本。

4.带电催化甲酯化带电催化甲酯化是一种新兴的脂肪酸甲酯化方法。

它是利用带电催化剂催化脂肪酸与甲醇的酯化反应，不需要加入酸或碱催化剂。

带电催化剂在反应体系中不断进行离子交换，从而提高反应速率和产率。

该方法具有催化效率高、废液产生少的优点。

然而，带电催化剂的合成和回收较为困难，仍需要进一步的研究和改进。

二、总结不同的脂肪酸甲酯化方法各有优点和限制。

酸催化甲酯化方法操作简单、成本低，但容易产生酸水解反应和产生废弃物。

酶催化甲酯化方法具有高效、选择性好、环保等特点，但反应速度较慢，酶催化剂价格较高。

碱催化甲酯化反应速度快、转化率高，但会产生大量废液和碱皂。

甲酯化方法的异同

甲酯化方法的异同甲酯化是一种常见的有机合成反应，它通常涉及将甲酸与一种醇反应生成对应的酯化合物。

甲酯化反应在工业上具有广泛的应用，可以用于生产饱和脂肪酸甲酯，作为可再生能源的生物柴油，或者用于生产香精和药物等化合物。

甲酯化方法有很多不同的变体，根据具体反应条件和催化剂的选择，其反应机理和效果也有所不同。

以下将分别介绍几种常见的甲酯化方法，并比较它们之间的相似之处和差异之处。

1. 酸催化甲酯化方法:酸催化甲酯化反应是最常用的甲酯化方法之一。

在此类反应中，通常使用强酸作为催化剂，如硫酸、磷酸或氯化铵等。

这些酸具有促进酯化反应的活性位点，从而加速反应的进行。

以甲酸为例，酸催化甲酯化反应的机理通常可以分为两步：首先是酸催化的甲酸质子化步骤，生成活性甲酸离子；然后是甲酸离子与醇发生酯化反应，生成酯化产物。

酸催化甲酯化方法的优点是条件温和，反应速度快，但其缺点是催化剂与反应物很难分离，容易造成环境污染。

2. 酶催化甲酯化方法:酶催化甲酯化是一种比较新的方法，它利用酶作为催化剂来促进甲酯化反应的进行。

例如，利用酯酶可以将甲酸与醇催化生成酯化产物。

酶催化甲酯化方法的优点是催化剂活性高，催化剂与反应物容易分离，避免了环境污染。

此外，该方法对温度和压力的要求也较低，具有较好的反应适应性。

不过，酶催化甲酯化还面临着酶的稳定性和成本等问题。

3. 碱催化甲酯化方法:与酸催化法相比，碱催化甲酯化方法使用碱作为催化剂。

这种方法通常使用碱金属氢氧化物，如钠氢氧化物和钾氢氧化物。

在反应中，碱催化剂作为酸的对应碱，能够与酸中的质子结合形成对应的碱盐。

碱催化甲酯化反应的机理与酸催化方法类似，也主要分为两个步骤：碱质子化和酯化。

不同的是，碱催化法中的碱催化剂比强酸更容易与反应产物分离，减少了催化剂的残留。

总的来说，甲酯化方法在酸、酶和碱的催化下，都可以有效实现甲酯化反应。

这些方法都有各自的特点和应用领域。

从反应机理的角度来看，它们都需要先将甲酸质子化，再与醇发生酯化反应。

_植物油脂肪酸甲酯化方法比较与含量测定

钟左右的效果为最佳。

参考文献：[1]唐勤学,陶小林,黎司.有机磷农药残留速测仪的研究进展[J].化工时刊,2008,22(9):68[2]蔡建荣,张东升,赵晓联,等.食品中有机磷农药残留的几种检测方法比较[J].中国卫生检验杂志,2002,12(6):750-752[3]袁东,封雪松,付大友,等.饲料中总磷、无机磷和有机磷的含量测定[J].四川轻化工学院学报,2002,15(4):42-46[4]武汉大学等校编.分析化学实验[M].北京:高等教育出版社,1985:21[5]刘德生.环境监测[M].北京:化学工业出版社,2001:176[6]于景荣,陈兵.磷钼蓝光度法测定锰铁矿中的磷[J].理化检验-化学分册,1998,34(12):563-564[7]朱静平,刘兴艳,马建华,等.应用磷钼蓝分光光度法测定红橘中有机磷[J].广西农业科学,2005,36(4):351-352[8]桑宏庆,于秋生.紫外分光光度法测定甜蜜素[J].饮料工业,2006,9(11):27-29收稿日期：2013-12-02植物油脂肪酸甲酯化方法比较与含量测定伍新龄1，2，王凤玲1，2，*，关文强1，2（1.天津市食品生物技术重点实验室，天津300134；2.天津商业大学生物技术与食品科学学院，天津300134）摘要：通过比较不同甲酯化方法、气相色谱升温程序，确定了植物油中脂肪酸成分的气相色谱分析方法，并对5种食用植物油的主要脂肪酸含量进行了分析和比较。

结果表明：三氟化硼-甲醇快速甲酯化法具有操作简单、时间短、甲酯化率高的优点。

利用CP-Sill 88高极性气相色谱柱，优化的升温程序为：初始温度170℃，保持1min ，以10℃/min 升温速率升至200℃，再以1℃/min 升温速率升至220℃，保持3min ，20min 内即可有效分离6种脂肪酸。

用建立的方法测定5种食用植物油6种脂肪酸的含量，标准曲线的相关性好，相关系数范围为0.9994~0.9999，检出限低。

脂肪酸酯化方法

脂肪酸极性很强，是一种热敏性物质，在高温下容易发生聚合、脱羧、裂解等副反应。

直接进行分析，柱温很高，高温固定相难以选择，色谱峰易拖尾，保留时间不重复，有时有假峰出现等。

对脂肪酸的色谱分析，一般都需要进行前处理。

C5以下的脂肪酸可先转变为乙酯、丙酯或苯甲酯，C6以上的脂肪酸可先转变为甲酯，这样除可降低脂肪酸的极性外，还有利于选择固定相和色谱分析操作。

甲酯化方法：
取500mg脂肪酸样品于酯化烧瓶中，加入7mL BF3甲醇溶液（14%BF3甲醇溶液），装上冷凝器，沸腾2分钟后，从冷凝器上部加入5mL己烷，再沸腾1min，停止加热，将酯化瓶取下，加入氯化钠饱和溶液至己烷达到瓶口，取出约1mL己烷溶液于试管中，加入少量的无水硫酸钠，取上层液体直接注入色谱仪。

当样品中有C6及C8脂肪酸时，按上述方法酯化后，加入50mL 氯化钠饱和溶液，盖上瓶塞，振动20次，放置1min后，分离出上层己烷液，在下层中加入5mL己烷，同上操作。

合并己烷溶液，加入无水硫酸钠干燥后，取己烷溶液直接注入色谱仪。

共轭亚麻酸甲酯化方法的比较和优化

共轭亚麻酸甲酯化方法的比较和优化袁高峰;陈小娥;李铎【摘要】The lipids should be methylated before analysis of fatty acid in oils and biological samples by the gas chromatography. Different methods for methylation of conjugated linolenic acid (CLNA) in the two chemical forms, free fatty acid (FFA) and triacylglycerol (TAG) were compared by using the Trichosanthes kirilowii seed oil, which was rich in CLNA. The punicic acid (the predominant form of CLNA in Trichosanthes kirilowii seed oil) was seriously isomerized into other CLNA isomers when the Trichosanthes kirilowii seed oil (CLNA in the form of TAG) was methylated by using acid catalyst. However, the Trichosanthes kirilowii seed oil could be completely methylated by 0.5 mol/L NaOMe/methanol at 55 ℃ for 20 min without isomerization of CLNA. The results showed that precise methylation methods should be chosen according to the chemical forms of CLNA. For lipids with negligible FFA, it could be methylated by 0. 5mol/L NaOMe/methanol at 55 ℃ for 20 min. For lipids with considerable content of FFA, it could be methylated by the following two steps; First, the lipids were hydrolyzed into FFA by 0. 3 mol/L KOH/90% ethanol at 37 ℃ for 2 h; second, the FFA was methylated by 1 mol/L H2SO4/methanol at 50 ℃ for 10 min.%气相色谱分析油脂和生物样品的脂肪酸时样品需要进行甲酯化,本研究以富含共轭亚麻酸(CLNA)的栝楼籽油为材料,针对共轭亚麻酸三酰甘油和共轭亚麻酸自由脂肪酸两种脂质形式进行了甲酯化方法的优化和比较.结果表明直接以栝楼籽油(三酰甘油形式)采用酸性催化的方法进行甲酯化,在高温和长时间的反应条件下,石榴酸(栝楼籽油含有的主要CLNA)严重异构为其他形式的CLNA,而碱性催化的方法进行甲酯化,55℃反应20 min既能使甲酯化完全,且石榴酸等CLNA保持稳定,适宜作为自由脂肪酸含量低的脂质的甲酯化方法.而对自由脂肪酸含量高的脂质可以采用先以0.3 mol/L氢氧化钾90％乙醇溶液37℃皂化裂解2h,再采用1 mol/L硫酸甲醇溶液50℃反应10 min进行甲酯化.【期刊名称】《中国粮油学报》【年(卷),期】2011(026)010【总页数】6页(P70-74,92)【关键词】共轭亚麻酸;气相色谱(GC);甲酯化;碱催化;酸催化【作者】袁高峰;陈小娥;李铎【作者单位】浙江海洋学院食品与药学学院、医学院,舟山316000;浙江大学食品科学与营养系,杭州310029;浙江海洋学院食品与药学学院、医学院,舟山316000;浙江大学食品科学与营养系,杭州310029【正文语种】中文【中图分类】TS207.3油脂和生物样品的脂肪酸组成一般采用气相色谱(GC)来进行分析。

甲酯化方法对甘油三酯和游离型脂肪酸混合物脂肪酸分析的影响

甲酯化方法对甘油三酯和游离型脂肪酸混合物脂肪酸分析的影响张白曦;宋宇航;杨芹;张灏;陈卫【摘要】在重组解脂耶氏酵母催化红花籽油合成共轭亚油酸的过程中,大量的红花籽油与游离型亚油酸及共轭亚油酸以混合物的形式存在于发酵液上清.为了通过气相色谱准确分析催化过程中底物及产物的含量,确定甘油三酯和游离型脂肪酸混合物的最佳甲酯化方法至关重要.本试验选择盐酸-甲醇法、盐酸-甲醇(甲苯)法、三氟化硼-甲醇法、氢氧化钠-甲醇法、酸碱综合法和重氮甲烷法6种方法,对红花籽油、游离型共轭亚油酸和二者混合物分别进行甲酯化,通过气相色谱定量分析,比较甲酯化效率.结果表明盐酸-甲醇(甲苯)法甲酯化程度高,且操作简便、安全、经济,是样品为甘油三酯和游离型脂肪酸混合物的最适甲酯化方法.【期刊名称】《中国粮油学报》【年(卷),期】2016(031)009【总页数】5页(P95-99)【关键词】甘油三酯;游离型脂肪酸;共轭亚油酸;甲酯化效率【作者】张白曦;宋宇航;杨芹;张灏;陈卫【作者单位】江南大学食品学院,无锡214122;江南大学食品学院,无锡214122;江南大学食品学院,无锡214122;江南大学食品学院,无锡214122;江南大学食品学院,无锡214122;江南大学食品科学与技术国家重点实验室,无锡214122【正文语种】中文【中图分类】TQ646气相色谱法是一种快速、高选择性、高分离效能的分析方法，广泛应用于甘油三酯、脂肪酸及其衍生物的定性、定量分析［1］。

由于构成脂类物质的脂肪酸，特别是十二碳以上的长链脂肪酸沸点高、高温下易裂解，需先对脂类物质进行甲酯化，与甲醇反应制备成脂肪酸甲酯，降低沸点，提高稳定性，然后进行气相色谱分析［2］。

目前常用的甲酯化方法主要有酸催化法、碱催化法及重氮甲烷法。

酸催化法常用试剂为盐酸-甲醇、硫酸-甲醇和三氟化硼-甲醇；碱催化法常用试剂为甲醇钠和氢氧化钾-甲醇；重氮甲烷法使用试剂为三甲基硅重氮甲烷［3-5］。

脂肪酸甲酯化和定量分析方法

脂肪酸甲酯化和定量分析方法三氟化硼甲酯化法1 试剂BF3－甲醇溶液正己烷2 两步法（1）苯—石油醚（1：1）1ml溶解脂肪，加14％BF3－甲醇溶液2ml，水浴100℃，维持35min（主要甲酯化PC、PE、PI等），水浴前需充氮气保护（2）取出，加入2ml苯＋2ml甲醇（主要融解胆固醇酯，游离脂肪酸），继续加热35min，同样需充氮气保护3 提取脂肪酸甲酯1～2ml正己烷，加蒸馏水平衡离心管重。

充分振荡后离心，重复两次。

3000转/min， 10min 4 加内标及浓缩加入内标物（0.1g脂肪+0.3ml内标物），旋转蒸发浓缩样品。

注意:（1）1ml试剂融解4～16mg脂肪，本试验中最大体积6ml，脂肪不超过0.1g （2）水浴甲酯化时，特富龙管不能倾斜（否则会丢失甲醇，增加BF3浓度，从而破坏PUFA）（3）加热时间过长，将导致PUFA被破坏（4）适用于脂肪和冷冻干燥样品的分析参考文献：Morrison W R and Smith L M, 1964 j.lipid research 5:600-608酸法更适合于游离脂肪酸的分析1％硫酸－甲醇酯化法此方法适用于游离脂肪酸和脂肪及水分含量较高的样品进行直接分析（寇秀颖于国萍2005 脂肪和脂肪酸甲酯化方法的研究食品研究与开发 26（2）：46～48）1 称取油脂或脂肪酸50mg，加入1％硫酸－甲醇2ml于80℃水浴60min2 冷却后加入2ml正己烷，再加蒸馏水5ml，离心，后取出上清夜，再用1ml正己烷重复提取脂肪酸甲酯，再次离心，后合并上清夜，待测。

3 加内标及浓缩加入内标物0.2～0.3ml（10mg/ml，0.1g脂肪加内标0.3ml），旋转蒸发至1ml左右2.5mol硫酸－甲醇化法称取油脂或脂肪酸50mg，加入2.5mol/L硫酸－甲醇1.0ml，于70℃水浴30min，加入2ml正己烷提取甲酯化产物，取出上清液，再次加入1ml正己烷洗涤，上清夜合并后待测参考文献同上。

甲酯化

一样品预处理准确称取待测样品5g，加入约25ml柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液（0.1mol/L pH=4.0）涡旋混匀，离心（4℃10000r/min）10min，弃去上清液。

重复洗涤3次，回收菌团；二PLFA提取1、向收集菌团中加入19ml提取液（缓冲液：甲醇：氯仿4:5:10），溶解后转移到三角瓶中（转移时一定要转移完全，技巧用缓冲液和甲醇溶解，用氯仿洗涤），避光条件下震荡萃取2h（室温200r/min），注意瓶口要密封（先用保鲜膜封住，然后再用铝箔纸）；2、向角瓶中再加入混合液10ml（氯仿：柠檬酸缓冲液1:1 V:V），摇匀静置过夜；3、将混合液全部至分液漏斗中（可补加适量氯仿，以利于分层）充分混匀，收集下层有机相于试管中，氮气吹干（40±1）℃。

4、向试管中加入适量(3ml左右)氯仿溶解提取物（可分两次加入），然后将混合液转入经活化（3ml氯仿）的硅胶小柱内，分别用6ml（3+3）氯仿、丙酮、甲醇依次洗脱（洗脱速度3滴/秒），收集甲醇相，氮气吹干；三甲酯化1、向试管中加入1ml甲苯：甲醇（1:1 v/v），0.2mol/L氢氧化钾-甲醇溶液，【（37±1）℃】水浴保温30min；2、加入0.6mol/L乙酸溶液调节pH，加入定量标准品（19:0）；3、加入正己烷和蒸馏水各2ml，涡旋混匀，将有机相转入洁净EP管中，（40±1）℃恒温，氮气吹干。

（进样测定或是4℃保存）ＧＣ－ＭＳ检测条件：用配备TR-5MS(30.0m*320um*0.25um)的Trace GC Ultra DSQⅡ检测。

色谱条件：进口温度250℃，分流比10:1；载气（He）流速1mol/L；起始柱温：40℃，保持5mim；再以5℃/min升至200℃，保持10min；质谱条件：质谱（EI）电子强度70eV；离子源温度230℃，扫描范围35-400amu；溶剂延迟时间2min。

简易碱法甲酯化

简易碱法甲酯化
1、仪器：
（1）10ml带塞磨口试管；
（2）5ml移液管（最小刻度0.1ml）；
（3）0.2ml移液管；
（4）小型离心机
2、试剂：
（1）正己烷，色谱纯；
（2）0.5M的甲醇钠（不需标定）：1.15g钠溶于100ml甲醇中（甲醇的含水量不得超过0.5％<m/m>）；
（3）无水硫酸钠
3、操作方法：
20mg左右得油样溶于2.5ml得正己烷中（试管中），加入0.1ml 得0.5M甲醇钠溶液，室温下轻摇5分钟，然后加入少量无水硫酸钠，静置1小时后于2000～3000rpm下离心2～3分钟，上层清液可用于GLC分析。

4、注解
（1）油样量不必准确称取；
（2）本试验也可省略离心分离一步，放置1小时后，直接取上层清液，进行GLC分析即可；
（3）本方法不适用于含特殊脂肪酸的油脂，同时不适用于脂肪酸的甲酯化，适用于含杂少，酸价低的油脂。

甲酯化原理

甲酯化原理
甲酯化是一种重要的有机合成方法，常用于合成酯类化合物。

其原理基于醇和酸酐在酸性条件下反应生成酯的反应机制。

在甲酯化反应中，首先醇的羟基上的负电荷攻击酸酐中的羰基碳，生成中间体酯酸酐。

随后，该中间体经过质子化形成了酸酐养体，同时释放出一个甲醇分子。

最后，甲醇负电离进行迁移和还原，生成最终产物甲酯。

甲酯化反应的速度和产率受原料的选择、反应条件以及催化剂的影响。

常见的催化剂包括无机酸（如硫酸、磷酸）和有机酸（如甲酸、丁酸）。

温度、压力、溶剂和反应时间等因素也会对甲酯化反应的效果产生影响。

甲酯化反应具有广泛的应用领域，例如在食品工业中，甲酯化反应被用于合成食品香精；在化妆品工业中，甲酯化反应则用于合成香水和护肤品等产品。

此外，甲酯化反应还是一些文化艺术品如油画和雕塑制作中使用的重要工艺。

通过控制甲酯化反应的反应条件和催化剂的选择，能够得到具有不同性质和用途的酯类化合物。

不同脂肪酸甲酯化方法对共轭亚油酸分析的影响

不同脂肪酸甲酯化方法对共轭亚油酸分析的影响一、本文概述共轭亚油酸（Conjugated Linoleic Acid, CLA）是一种具有特殊结构和生理活性的不饱和脂肪酸，因其独特的健康益处，如抗氧化、抗炎、抗癌和降低心血管疾病风险等，而受到了广泛关注。

为了准确地分析和评估CLA的含量及其在各种食品或生物样品中的分布，甲酯化方法的选择显得尤为重要。

甲酯化不仅能提高脂肪酸的分析灵敏度，还能使其更适合于气相色谱或质谱等分析技术的检测。

本文旨在探讨不同脂肪酸甲酯化方法对共轭亚油酸分析的影响。

我们将详细介绍几种常用的甲酯化方法，包括酸催化甲酯化、碱催化甲酯化以及酶催化甲酯化等，并评估它们在CLA分析中的适用性。

我们还将讨论不同甲酯化条件（如温度、时间、催化剂类型和浓度等）对CLA分析结果的影响，并提出优化甲酯化条件的策略。

通过比较不同方法的分析结果，本文旨在为CLA的准确分析提供指导，并为相关领域的研究者提供有益的参考。

二、脂肪酸甲酯化方法概述脂肪酸甲酯化是生物化学分析中的一个重要步骤，尤其在共轭亚油酸（CLA）的分析中显得尤为重要。

通过甲酯化，脂肪酸可以从其原始的甘油酯形式转化为易于分析的甲酯形式，从而便于使用气相色谱（GC）或高效液相色谱（HPLC）等仪器进行检测。

脂肪酸甲酯化的方法主要有酸催化甲酯化、碱催化甲酯化以及酶催化甲酯化等。

酸催化甲酯化方法主要利用硫酸、盐酸等无机酸作为催化剂，通过加热使脂肪酸与甲醇发生酯化反应。

这种方法操作简便，但反应时间较长，且可能产生副反应，导致结果不准确。

碱催化甲酯化则使用氢氧化钠、氢氧化钾等碱性物质作为催化剂，反应条件相对温和，但碱性物质可能对某些仪器产生腐蚀作用，影响分析结果。

近年来，酶催化甲酯化方法逐渐受到关注。

该方法利用脂肪酶或酯酶作为催化剂，具有反应条件温和、副反应少、对仪器无腐蚀等优点。

然而，酶催化甲酯化方法通常需要较高的酶浓度和较长的反应时间，且酶的稳定性也是制约其应用的一个重要因素。

甲酯化方法

甲酯化方法1、精炼纯种油取油样100~250mg左右于25mL容量瓶中，加入（1：1）石油醚：乙醚2mL，振摇，再加入0.4mol/L KOH-甲醇溶液1mL，振摇，放置30min，注水至瓶颈，等待分层，取上清液加入适量无水硫酸钠，微量进样针取1ul上机测试。

2、饲料（参考《饲料脂肪酸组成的分析测定》第13卷增刊）首先，提出粗脂肪。

然后，取100~250mg左右于25mL容量瓶中，加入（1：1）石油醚：乙醚2mL，振摇，再加入0.4mol/L KOH-甲醇溶液1mL，振摇，放置30min，注饱和盐水至瓶颈，等待分层，取上清液加入适量无水硫酸钠，微量进样针取1ul上机测试。

3、磷脂取样品100~250mg左右于25mL容量瓶中，加入正己烷2mL，振摇溶解，再加入0.4mol/L KOH-甲醇溶液1mL，振摇，放置30min，注饱和盐水至瓶颈，等待分层，取上清液加入适量无水硫酸钠，微量进样针取1ul上机测试。

4、溶血磷脂第一种方法：取样品100~250mg左右于25mL容量瓶中，加入正己烷2mL，振摇溶解，再加入0.4mol/L KOH-甲醇溶液1mL，振摇，放置30min，注饱和盐水至瓶颈，等待分层，取上清液加入适量无水硫酸钠，微量进样针取1ul上机测试。

第二种方法：取样品100~250mg左右于25mL容量瓶中，加入0.5mol/L氢氧化钠甲醇溶液4mL，70℃水浴10min，趁热加入14%三氟化硼甲醇溶液5mL，70℃水浴10min，趁热加入正己烷2mL，取出容量瓶，加入适量饱和盐水，振摇，继续加入至瓶颈，静置分层。

取上清液加入适量无水硫酸钠，微量进样针取1ul上机测试。

警告：1、三氟化硼有毒，试验必须在通风厨进行，且带上防护口罩、防护手套、穿大白褂。

2、玻璃器具用后，应立即用水冲洗。

5、鱼油取油样100~250mg左右于25mL容量瓶中，加入正己烷2mL，振摇，再加入0.4mol/L KOH-甲醇溶液2mL，振摇，放置30min，注饱和盐水至瓶颈，等待分层，取上清液加入适量无水硫酸钠，微量进样针取1ul上机测试。

甲酯化方法

一、主题内容与适用范围本标准适用于所有的动植物油脂和脂肪酸。

二、目的油脂及脂肪酸（特别是12碳以上的长碳链脂肪酸）一般不直接进行气相色谱分析，其原因是脂肪酸脂肪酸及油脂的沸点高，高温下不稳定，易裂解，分析中易造成损失。

因此，对脂肪酸及油脂的脂肪酸组分分析时，先将脂肪酸或油脂与甲醇反映，制备脂肪酸甲酯，降低沸点，提高稳定性，然后进行气相色谱分析。

三、BF3甲酯化法1、仪器（1）50ml及100ml磨口圆底烧瓶（2）回流冷凝器（长度20～30cm，有磨口连接，与烧瓶配套）（3）250ml分液漏斗（4）滴管（5）带磨口玻璃塞的试管（6）10ml移液管（7）沸石2、试剂（1）正庚烷，色谱纯（2）轻汽油（沸程40～60℃）（3）无水硫酸钠，分析纯（4）0.5M的氢氧化钠甲醇溶液（不用标定），配制如下：称取2g NaOH溶于100ml甲醇中（甲醇的含水量不得超过0.5％<m/m>），该溶液放置一段时间后会出现白色沉淀，这不影响脂肪酸甲酯化制备。

（5）12～25％（m/m）BF3的甲酯溶液（6）饱和的NaCl水溶液（7）甲基红指示剂：用60％的乙醇配置0.1％的甲基红溶液（8）氮气：含氧量低于5mg/kg3、操作方法，（1）取大约350mg油样加入50ml烧杯中，移取6ml 0.5M的NaOH于油样中，并加入几粒沸石，连接回流装置，开始加热回流，回流过程中要不断摇动烧瓶。

（2）当烧瓶内的油珠消失，溶液变得透明时（大约需要5～10分钟），从冷凝器上端加7ml BF3甲醇溶液于烧杯内（用移液管移取），然后继续回流1分钟。

（3）然后从冷凝管上端加入2～5ml正庚烷后，再回流1分钟。

（4）撤离火源，取出烧瓶，向烧瓶中加入一定量的饱和NaCl溶液，轻轻上下颠倒数次后，静置分层。

（5）从烧杯内的上层溶液中取出约1ml转移到磨口试管中，并加入适量的无水硫酸钠，以去除痕量的水分，得到的此甲酯化样品以备气相色谱分析用。

脂肪酸甲酯衍生化方法

·仪器信息网上下载的关于脂肪酸甲酯化的方法！ -|mysoybean 发表于 2009-1-13 20:11:00推荐一、主题内容与适用范围本标准适用于所有的动植物油脂和脂肪酸。

二、目的油脂及脂肪酸（特别是12碳以上的长碳链脂肪酸）一般不直接进行气相色谱分析，其原因是脂肪酸及油脂的沸点高，高温下不稳定，易裂解，分析中易造成损失。

因此，对脂肪酸及油脂的脂肪酸组分分析时，先将脂肪酸或油脂与甲醇反映，制备脂肪酸甲酯，降低沸点，提高稳定性，然后进行气相色谱分析。

三、 BF3甲酯化法1、仪器（1）50ml及100ml磨口圆底烧瓶（2）回流冷凝器（长度20～30cm，有磨口连接，与烧瓶配套）（3）250ml 分液漏斗（4）滴管（5）带磨口玻璃塞的试管（6）10ml移液管（7）沸石2、试剂（1）正庚烷，色谱纯（2）轻汽油（沸程40～60℃）（3）无水硫酸钠，分析纯（4）0.5M的氢氧化钠甲醇溶液（不用标定），配制如下：称取2g NaOH溶于100ml甲醇中（甲醇的含水量不得超过0.5％<m/m>），该溶液放置一段时间后会出现白色沉淀，这不影响脂肪酸甲酯化制备。

（5）12～25％（m/m）BF3的甲酯溶液（6）饱和的NaCl水溶液（7）甲基红指示剂：用60％的乙醇配置0.1％的甲基红溶液（8）氮气：含氧量低于5mg/kg3、操作方法（1）取大约350mg油样加入50ml烧杯中，移取6ml 0.5M的NaOH于油样中，并加入几粒沸石，连接回流装置，开始加热回流，回流过程中要不断摇动烧瓶。

（2）当烧瓶内的油珠消失，溶液变得透明时（大约需要5～10分钟），从冷凝器上端加7ml BF3甲醇溶液于烧杯内（用移液管移取），然后继续回流1分钟。

（3）然后从冷凝管上端加入2～5ml正庚烷后，再回流1分钟。

（4）撤离火源，取出烧瓶，向烧瓶中加入一定量的饱和NaCl溶液，轻轻上下颠倒数次后，静置分层。

（5）从烧杯内的上层溶液中取出约1ml转移到磨口试管中，并加入适量的无水硫酸钠，以去除痕量的水分，得到的此甲酯化样品以备气相色谱分析用。

脂肪酸甲酯化和定量分析方法

脂肪酸甲酯化和定量分析方法三氟化硼甲酯化法1 试剂BF3－甲醇溶液正己烷2 两步法（1）苯—石油醚（1：1）1ml溶解脂肪，加14％BF3－甲醇溶液2ml，水浴100℃，维持35min（主要甲酯化PC、PE、PI等），水浴前需充氮气保护（2）取出，加入2ml苯＋2ml甲醇（主要融解胆固醇酯，游离脂肪酸），继续加热35min，同样需充氮气保护3 提取脂肪酸甲酯1～2ml正己烷，加蒸馏水平衡离心管重。

充分振荡后离心，重复两次。

3000转/min， 10min 4 加内标及浓缩加入内标物（0.1g脂肪+0.3ml内标物），旋转蒸发浓缩样品。

注意:（1）1ml试剂融解4～16mg脂肪，本试验中最大体积6ml，脂肪不超过0.1g （2）水浴甲酯化时，特富龙管不能倾斜（否则会丢失甲醇，增加BF3浓度，从而破坏PUFA）（3）加热时间过长，将导致PUFA被破坏（4）适用于脂肪和冷冻干燥样品的分析参考文献：Morrison W R and Smith L M, 1964 j.lipid research 5:600-608酸法更适合于游离脂肪酸的分析1％硫酸－甲醇酯化法此方法适用于游离脂肪酸和脂肪及水分含量较高的样品进行直接分析（寇秀颖于国萍2005 脂肪和脂肪酸甲酯化方法的研究食品研究与开发 26（2）：46～48）1 称取油脂或脂肪酸50mg，加入1％硫酸－甲醇2ml于80℃水浴60min2 冷却后加入2ml正己烷，再加蒸馏水5ml，离心，后取出上清夜，再用1ml正己烷重复提取脂肪酸甲酯，再次离心，后合并上清夜，待测。

3 加内标及浓缩加入内标物0.2～0.3ml（10mg/ml，0.1g脂肪加内标0.3ml），旋转蒸发至1ml左右2.5mol硫酸－甲醇化法称取油脂或脂肪酸50mg，加入2.5mol/L硫酸－甲醇1.0ml，于70℃水浴30min，加入2ml正己烷提取甲酯化产物，取出上清液，再次加入1ml正己烷洗涤，上清夜合并后待测参考文献同上。

脂肪酸甲酯化反应原理

脂肪酸甲酯化反应原理一、概述脂肪酸甲酯化反应是将脂肪酸与甲醇在催化剂的作用下反应生成相应的脂肪酸甲酯的化学反应。

该反应是生产生物柴油的关键步骤之一，也被广泛应用于农药、香料、润滑油等领域。

二、反应机理脂肪酸甲酯化反应是一种典型的酯交换反应，其机理如下：1. 脂肪酸与甲醇发生缩合生成中间体——脂肪酸甲酯。

2. 在催化剂的作用下，生成水分子，使得平衡向右移动，提高产率。

3. 通过分离和纯化等步骤，得到目标产物——脂肪酸甲酯。

三、催化剂在脂肪酸甲酯化反应中，催化剂起着至关重要的作用。

常见的催化剂包括碱性、强质子性和金属盐等。

1. 碱性催化剂：碱性催化剂通常采用氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠等。

碱性催化剂的优点是反应速度快，但缺点是易产生皂化反应和脱水反应。

2. 强质子性催化剂：强质子性催化剂通常采用硫酸、磷酸等。

强质子性催化剂的优点是产率高，但缺点是易造成环境污染。

3. 金属盐催化剂：金属盐催化剂通常采用氯化锌、氯化铝等。

金属盐催化剂的优点是反应条件温和，不易产生环境污染。

四、反应条件脂肪酸甲酯化反应的条件主要包括温度、压力、反应时间和摩尔比等。

1. 温度：温度对反应速率和产率有很大影响。

通常在60-70℃下进行反应。

2. 压力：压力对于脂肪酸甲酯生成的影响较小，一般为大气压下进行。

3. 反应时间：随着反应时间的延长，脂肪酸甲酯生成量逐渐增加，但反应时间过长会导致产率下降。

4. 摩尔比：脂肪酸和甲醇的摩尔比对反应速率和产率也有很大影响。

一般采用3:1的摩尔比。

五、反应优化为了提高脂肪酸甲酯化反应的产率和选择性，需要对反应条件进行优化。

常见的优化方法包括催化剂种类和用量、温度、压力、摩尔比等参数的调节。

1. 催化剂种类和用量：不同催化剂对于反应速度和选择性有不同影响，需要根据具体情况进行选择。

同时，催化剂用量也需要适当控制，过多会导致产物纯度下降，过少则会影响反应速率。

2. 温度：温度对于脂肪酸甲酯生成的影响较大，需要根据具体情况进行调节。

矿产

矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。

如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。

㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。

(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。

如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。

对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。

二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。

2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。

㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。

2、矿产品价格稳定性及变化趋势。

三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。

2、矿区矿产资源概况。

3、该设计与矿区总体开发的关系。

㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。

2、矿床开采技术条件及水文地质条件。