纸层析实验资料教程

相同条件指： 1. 展层所用溶剂系统； 2. 展层剂pH值； 3. 温度； 4. 滤纸； 5. 展层的方向(横向，上行或下行)。
➢ 用纸层析鉴定样品时，一般都与标准品相比较。
若没有标准品，可选择文献记载的该物质层析 条件，根据文献Rf值进行鉴定。
三、使用试剂
主要试剂：
（1）展开剂 正丁醇:水:醋酸 = 4:5:1。 （2）茚三酮 2 g·L-1乙醇溶液。 （3）甘氨酸(5g. L-1) 亮氨酸(5g. L-1) 两种氨基酸混合液
纸层析
一、实验目的
1.掌握纸层析分离氨基酸的操作技术； 2.了解纸层析法的基本原理。
二、实验原理
纸层析法，是根据不同物质在两相中的分配 比不同而进行分离的一种微量分离方法。
•载体——层析纸（滤纸）； •固定相——滤纸上的吸湿水分； •流动相——有机溶剂（展开剂）。
纸层析的原理
由于滤纸纤维素上的羟基和水分子有较大的亲和 力, 其吸附的水相为固定相, 有机溶剂相为移动相。
➢ (2) 在点样时，不要将毛细管插错了试剂瓶。 ➢ (3) 点样斑点不能太大（其直径应小于0.5cm） ➢ (4) 展层剂接触滤纸时一定要均匀、保持前沿线与滤纸平行。 ➢ (5) 吹风温度不宜过高，否则斑点变黄。 ➢ (6) 展层结束后，切勿忘记用铅笔描出溶剂前沿。 ➢ (7) 展开过程不要打开缸盖。否则滤纸会吸水，溶剂也会挥发，使整
由于物质的极性大小不同,在两相中分配比例有 所差异。极性小的物质在有机相中分配较多,随有 机相移动较快；而极性大的物质在水相中分配较多, 移动相对较慢,从而将极性不同的物质分开
在相同的条件下，每种物质都有其固定 的Rf值。 Rf值的定义为：
原点到层析斑点中心的距离 Rf = 原点到溶剂前沿的距离
➢ 在相同的条件下，每种物质都有其固定的Rf值。
四、实验步骤
展
点
开
样
分
离
显 色
计 算 比 移 值
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五、结果处理
➢ 1、用铅笔将层析色谱轮廓和中心点描出来。 ➢ 2、测量原点至色谱中心和至溶剂前沿的距离，
计算各种已知氨基酸和未知氨基酸色谱的Rf值。 ➢ 3、分析混合样品中未知氨基酸的组分。
六、注意事项
➢ (1) 在整个操作过程中，手只能接触滤纸边缘，否则会造成滤纸上众 多斑点。
个系统的组分发生改变从而改变极性。
错误操作：
1.滤纸触壁
2.点样量过多