乙肝表面抗体检测标准化操作
乙型肝炎病毒表面抗体定量测定作业指导书
乙型肝炎病毒表面抗体定量测定作业指导书一、目的：规范乙型肝炎病毒表面抗体测定的标准操作程序，确保乙型肝炎病毒表面抗体测定的结果准确有效。
二、适用范围：在AutoLumo A2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的乙型肝炎病毒表面抗体。
三、临床意义乙型病毒性肝炎是一种重要的公众危害性疾病，据估计全球范围内目前大约有3亿乙肝病毒携带者。
感染乙型病毒性肝炎可引起广泛的急、慢性肝脏疾病，流行病学研究已经清楚地表明乙肝病毒与肝细胞癌的发生有联系。
表面抗体(Anti-HBs)是一种保护性抗体，是乙肝感染后痊愈或趋向治愈的象征；全程（3针）疫苗接种结束后1个月检测保护性表面抗体(Anti-HBs)的浓度，能够判定免疫效果。
关于表面抗体与保护力的关系，世界标准未完全统一，目前普遍认为普通人群表面抗体浓度值≥10mIU/ml，就有足够的保护作用；高危人群表面抗体浓度值≥100mIU/ml，具有足够的保护作用。
肝移植、血液透析及免疫抑制等病人定期检测表面抗体浓度值，每次检测值≥100mIU/ml为宜。
四、方法原理本产品采用双抗原夹心法原理进行检测。
用表面抗原包被磁微粒，用辣根过氧化物酶标记表面抗原制备酶结合物。
通过免疫反应形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与表面抗体的含量成正比。
五、标本的采集与处理5.1.采用正确医用技术收集血清/血浆样本，推荐对于使用普通管采血的样本，离心前样本应37℃孵育至少1h；对于使用促凝管采血的样本，离心前样本应37℃孵育至少0.5h，离心条件10000g/min，10min；对于使用抗凝管采血的样本，离心条件10000g/min，10min。
抗凝管推荐使用肝素钠作为抗凝剂，避免使用枸橼酸钠和EDTA抗凝剂。
5.2.样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。
5.3.溶血或脂血的样本不能用于测定。
5.4.样本收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在2~8℃的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20℃以下，避免反复冻融。
乙肝两对半操作规程
免疫室乙肝两对半操作规程一、试验原理“乙肝两对半”指乙型肝炎病毒表面抗原（HBSAg）、乙型肝炎病毒表面抗体（HBSAb）、乙型肝炎病毒e抗原（HBeAg）、乙型肝炎病毒e抗体（HBeAb）、乙型肝炎病毒核心抗体（HBcAb）此五项指标，目前国内医院最常用的乙肝病毒感染检测血清标志物，判断是否感染乙肝与粗估病毒复制水平初步检查。
两对半中各项试验反应原理如下： 1、乙型肝炎病毒表面抗原检测：采用ELISA“双抗体夹心法”原理，用抗-HBs包被板条，用HRP 标记抗-HBs为酶标记物，以四甲基联苯氨（TMB）和过氧化物为底物。
当标本中存在HBSAg时，该表面抗原与包被抗-HBs结合并与抗-HBs-HRP结合形成抗-HBs-HBSAg-抗-HBs-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。
在试验结束时，有颜色变化的，提示有HBSAg存在，无颜色或颜色变化微弱的，则提示不存在HBSAg。
2、乙型肝炎病毒表面抗体检测：采用ELISA“双抗原夹心法”检测人血清或血浆中的抗-HBS,采用HBSAg包被反应板，加入待测标本，同时加入HBSAg-HRP进行孵育。
当标本中存在抗-HBS时，该抗体与包被的HBSAg结合并与酶结合物形成HBSAg-抗-HBS-HBSAg-HRP复合物，洗去游离反应物，加入显色剂，将有明显颜色变化；当标本中没有抗-HBS时，加入底物后没有或只有很轻微的颜色变化。
3、乙型肝炎病毒e抗原检测：采用ELISA“双抗体夹心法”检测，用单抗-HBe包被板条，用HRP标记抗-HBe为酶标记物，以四甲基联苯氨（TMB）和过氧化物为底物。
当标本中存在HBeAg时，该HBeAg与包被抗-HBe结合并与抗-HBe-HRP结合形成抗-HBe-HBeAg-抗-HBe-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应，反之则无显色反应。
在试验结束时，有颜色变化的，提示有HBeAg存在，无颜色或颜色变化微弱的，则提示不存在HBeAg。
乙肝表面抗原试剂条操作说明书
乙肝表面抗原试剂条操作说明书操作步骤：1. 准备工作在操作前，请确保以下物品已准备妥当：- 乙肝表面抗原试剂条- 试剂条开封器- 试剂条操作台- 样本采集针- 乙肝表面抗原检测所需的标本（血液样本）- 记录表格2. 使用前准备将乙肝表面抗原试剂条和试剂条开封器放置在干燥而洁净的操作平台上。
确保操作平台没有任何杂质。
3. 样本采集使用样本采集针采集需要检测的血液样本。
确保采样过程中要按照卫生规范进行，避免交叉感染。
4. 操作步骤a) 取出一条试剂条，同时确保试剂条上的标识未损坏或模糊不清。
b) 将采集的血液样本滴于试剂条指定位置。
注意滴液量不得少于标记线，也不能超过标记线。
c) 在试剂条上滴加适量（约2-3滴）的检测缓冲液。
d) 将试剂条放置在水平表面上，等待反应发生。
反应时间约为10-15分钟。
e) 操作时间结束后，观察试剂条上的结果。
5. 结果解读a) 阅读结果应在15分钟内进行，不应延迟。
b) 结果判断应基于试剂条上显示的线条颜色。
- 若试剂条上出现两条线（测试线和对照线）显示红色或粉色，表明该血样中包含乙肝表面抗原。
- 若试剂条上仅有对照线出现，而测试线没有出现或颜色较浅，表明该血样中不含乙肝表面抗原。
- 若试剂条上的任何线条未显示，或显示结果不清晰，应重新进行测试。
6. 结果记录将结果记录在预先准备的记录表格上。
记录时应包括样本编号、操作时间、结果判断等信息。
7. 清理与处理操作结束后，将已使用的试剂条和其他废弃物放入指定的废弃物容器中。
同时，清洁操作平台和周围区域，确保卫生与安全。
注意事项：- 本试剂条仅用于乙肝表面抗原检测，其他用途请勿使用。
- 请在产品有效期内使用，过期产品可能导致结果不准确。
- 请遵循正确的操作步骤，以获得准确的检测结果。
- 请妥善保存并存放本试剂条，避免受潮或受到阳光直射。
- 如对操作步骤或结果解读有任何疑问，请咨询相关专业人员。
本操作说明书仅供参考，请确保在操作前详细阅读并理解本书上的信息。
胶体金法乙肝表面抗原检测流程
胶体金法乙肝表面抗原检测流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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乙肝六项操作及检验结果的解释演示教学
用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值 （用单波长测定时需设空白对照一孔，30分钟内完成测定，并记录结果）。
乙肝六项操作
HBeAb检测（ELISA)竞争法
•
四 .结果判断与分析
• 临界值（C.O.）的计算：
• 临界值＝（阴性对照孔OD值N+阳性对照孔OD值 P）×0.5，
1 样本的采集与处理影响
1.1 样本离心处理不全， 使得标本严重溶血及混有
红细胞的血清易沉淀或附着在聚乙烯孔内不易洗 净 ，残留在孔内的血红蛋白，具有过氧化物酶样 的活性， 催化底物显色造成假阳性， 溶血标本禁 用。
1.2 正常血液采集后半个小时至两小时开始凝固， 有时
工作中为了快速检测 ，常会在血液未开始凝固时 ，即 强行离心分离血清 。 特别是在冬天 使得血清中残留部分纤维蛋白原，在 ELISA 测定过程中可以形成肉眼可见的纤维蛋白凝块附 着在酶标反应孔壁内使得不易洗掉 易造成假阳(阴)性、 影响结果 。
4 钩状效应(Hook)影响
随着 ELISA 一步法的应用 ，在日常工作中会发现 HBsAg阴性而 HBeAg 阳性的现象 ，其原因就是当 标本中的抗原浓度过高时产生的钩状效应 (Hook)现 象 ，从而出现假阴性造成真阳性的漏检， 即随着被 测物浓度增高反而显色减弱甚至不显色， 往往造成 假阴性结果 ，采用同步稀释测定或用线性范围高的 乙肝六项定量法可以减少 Hook 效应的发生。
因此血液标本采集后要使其充分凝固后再分离血清，标 本离心时 ，可加大离心转速 ，延长离心时间 或者要节 约时间就用带分离胶的采血管采集标本。
1.3 血清标本应避免细菌污染， 细菌的一些内源性
酶本身会对相应酶作标记测定方法产生干扰。
乙型肝炎病毒抗体诊断(胶体金法SOP)标准操作程序
乙型肝炎病毒抗体诊断（胶体金法SOP）测定标准操作程序编写者：宿金涛日期：2012年3月1日一.原理：乙型肝炎病毒表面抗原、表面抗体、e抗原、e抗体、核心抗体检测试剂盒（胶体金法）采用胶体金免疫层析分析技术、将五个诊断意义相关的试剂通过一个包装组合在一起，同时进行乙型肝炎病毒五项标志物的检测，在不影响各自性能的情况下，便于客户的储存和使用。
HBsAg检测试剂采用双抗体夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T）的抗体。
测试时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的胶体金颗粒结合的抗HBsAg抗体反应。
然后，混合物随之在毛细效应下向上层析。
如是阳性，胶体金抗体在层析过程中先于标本中的HBsAg结合，随后家何物会被固定在膜上的抗HBsAg抗体结合，在测试区内（T）会出现一条紫红色带。
这条带是HBsAg抗体-HBsAg-HBsAg抗体金标粒子的复合物在膜上结合形成的。
如是阴性，则测试区内（T ）将没有紫红色带。
无论HBsAg是否存在于标本中，一条紫红色带都会出现在指控内（C）。
质控区内（C）所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。
HBsAb检测试剂双抗原夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T）的乙肝表面抗体。
测试时，标本滴入试剂加样处，标本与预包被的胶体金颗粒结合的HBsAg反应。
然后，混合物随之在毛细效应下向上层析。
如是阳性，胶体金抗体在层析过程中先于标本中的HBsAg结合，随后结合物会被固定在膜上的HBsAg抗体结合，在测试区内（T）会出现一条紫红色条带。
这条带是HBsAg-HBsAb-HBsAg金标粒子的复合物在膜上结合形成的。
如果阴性，则测试区内（T）将没有紫红色条带。
无论HBsAg是否存在于标本中，一条紫红色条带都会出现在质控区内（C）。
质控区内（C）所显现的紫红色条带是判定是否有足够标本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂的内控标准。
HBeAg检测试剂采用双抗体夹心法，试剂含有被事先固定于膜上测试区（T）的乙肝e抗体。
简易乙肝抗体试纸条操作方法
简易乙肝抗体试纸条操作方法
简易乙肝抗体试纸条是一种常用于乙肝抗体检测的快速诊断方法，下面是其操作方法：
1. 检查试纸的有效期和完好性，确保试纸没有损坏。
2. 取一滴活血液样本（一般为指尖血）使用无菌棉球或消毒酒精擦拭取血部位。
3. 用无菌针或无菌注射器采血，将血液滴于试纸的标记点上。
注意不要让血液滴到其他位置。
4. 等待约10-15分钟，观察试纸上是否出现颜色变化。
可以按照试纸说明书上的时间要求进行观察。
5. 若试纸上出现颜色条带（通常是两条杠），则表示结果为阳性，即乙肝病毒抗体阳性。
若试纸上没有出现颜色条带，则表示结果为阴性，即乙肝病毒抗体阴性。
6. 读取结果后，正确处置使用过的试纸和采血用具。
用擦拭过的棉球或纱布按压采血部位，清洁后使用酒精消毒。
需要注意的是，简易乙肝抗体试纸条是一种初步筛查工具，其结果仅供参考，如果结果为阳性，需要进一步进行乙肝病毒抗体检测以确认诊断。
另外，操作过程中需注意无菌操作和个人防护，避免交叉感染。
乙肝表面抗原 酶联免疫法
乙肝表面抗原酶联免疫法乙肝表面抗原（HBsAg）酶联免疫法是一种常用的乙肝病毒感染检测方法。
乙肝是一种由乙型肝炎病毒（HBV）引起的传染病，世界范围内乙肝病毒感染的人数众多。
乙肝表面抗原是乙肝病毒的外壳蛋白，也是乙肝病毒感染的最早出现的标志物。
通过检测乙肝表面抗原，可以及早发现乙肝病毒感染，对乙肝的预防和治疗具有重要意义。
乙肝表面抗原酶联免疫法（HBsAg-ELISA）是一种高灵敏度、高特异性的检测方法。
其基本原理是利用酶标技术，在固相载体上固定抗原抗体，将待测血清标本与之反应，然后加入酶标记的抗人免疫球蛋白，通过底物的反应产生颜色反应，最后通过酶标仪读取相应的吸光度值，根据吸光度值的大小可以判断是否存在乙肝表面抗原。
乙肝表面抗原酶联免疫法的操作步骤相对简单，操作方便，结果可靠。
首先，将标准品和待测血清标本加入孔板中，与固定的抗原抗体发生特异性反应。
然后，洗涤掉未结合的物质，加入酶标记的抗人免疫球蛋白，与乙肝表面抗原结合。
再次洗涤掉未结合的物质，加入底物，使底物发生酶促反应，产生可见的颜色反应。
最后，通过酶标仪读取吸光度值，根据吸光度值的大小判断是否存在乙肝表面抗原。
乙肝表面抗原酶联免疫法具有高灵敏度和高特异性的特点，可以检测到非常低浓度的乙肝表面抗原。
该方法的检测结果可靠，能够准确判断乙肝病毒感染的存在与否。
此外，乙肝表面抗原酶联免疫法还具有快速、经济、适用范围广等优点，因此在临床诊断和乙肝疫情监测中得到了广泛应用。
乙肝表面抗原酶联免疫法的应用不仅可以用于乙肝病毒感染的早期诊断，还可以用于乙肝病毒感染的筛查和追踪。
在乙肝疫情监测中，乙肝表面抗原酶联免疫法可以用于对高危人群的筛查，及早发现潜在的乙肝感染者。
此外，乙肝表面抗原酶联免疫法还可以用于评估乙肝疫苗的免疫效果，监测乙肝疫苗接种后的抗体水平。
乙肝表面抗原酶联免疫法是一种常用的乙肝病毒感染检测方法，具有高灵敏度、高特异性和可靠性的特点。
该方法的简便操作、快速结果和广泛应用使其成为乙肝病毒感染的重要检测手段。
乙型肝炎病毒表面抗体定量测定
一、目的：规范乙型肝炎病毒表面抗体测定的标准操作程序，确保乙型肝炎病毒表面抗体测定的结果准确有效。
二、适用范围：在AutoLumo A2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的乙型肝炎病毒表面抗体。
三、临床意义乙型病毒性肝炎是一种重要的公众危害性疾病，据估计全球范围内目前大约有3亿乙肝病毒携带者。
感染乙型病毒性肝炎可引起广泛的急、慢性肝脏疾病，流行病学研究已经清楚地表明乙肝病毒与肝细胞癌的发生有联系。
表面抗体(Anti-HBs)是一种保护性抗体，是乙肝感染后痊愈或趋向治愈的象征；全程（3针）疫苗接种结束后1个月检测保护性表面抗体(Anti-HBs) 的浓度，能够判定免疫效果。
关于表面抗体与保护力的关系，世界标准未完全统一，目前普遍认为普通人群表面抗体浓度值≥10mIU/ml，就有足够的保护作用；高危人群表面抗体浓度值≥100mIU/ml，具有足够的保护作用。
肝移植、血液透析及免疫抑制等病人定期检测表面抗体浓度值，每次检测值≥ 100mIU/ml为宜。
四、方法原理本产品采用双抗原夹心法原理进行检测。
用表面抗原包被磁微粒，用辣根过氧化物酶标记表面抗原制备酶结合物。
通过免疫反应形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与表面抗体的含量成正比。
五、标本的采集与处理5.1.采用正确医用技术收集血清/血浆样本，推荐对于使用普通管采血的样本，离心前样本应37℃孵育至少1h；对于使用促凝管采血的样本，离心前样本应37℃孵育至少0.5h，离心条件10000g/min，10min；对于使用抗凝管采血的样本，离心条件10000g/min，10min。
抗凝管推荐使用肝素钠作为抗凝剂，避免使用枸橼酸钠和EDTA抗凝剂。
5.2.样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。
5.3.溶血或脂血的样本不能用于测定。
5.4.样本收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在2~8℃的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20℃以下，避免反复冻融。
乙肝表面抗原试剂条操作说明书
乙肝表面抗原试剂条操作说明书Serum one step HBsAg test! 快速一步法定性检测人体血清或血浆中的HBsAg! 供专业人员体外诊断检测使用[用途范围]：-----乙肝表面抗原（HBsAg）胶体金法检测试剂条应用快速免疫层析技术，以定性的方式测定血清或血浆中的乙肝表面抗原，作为诊断乙肝病毒携带情况的辅助手段。
[总论]：滤过性病毒引起一系列的肝炎疾病。
常见的有甲肝、乙肝和丙肝。
在HBV病毒表面发现的复合抗原叫乙肝表面抗原（HBsAg），以前又叫澳大利亚抗原。
血清或血浆中的乙肝表抗（HBsAg）存在表明被检测个体感染HB活病毒，表现为急性或慢性病征。
典型的HBV感染过程中，在ALT水平异常之前2~3周，或病征、黄疸出现之前的3~5周，都能检测到乙肝表抗（HBsAg）的存在。
乙肝表抗目前发现主要有4种亚型：ADW，AYW，ADR和AYR；10种血清型。
——本公司生产的乙肝表面抗原（HBsAg）胶体金法检测试剂条以定性的方法快速检测血清或血浆标本中的乙肝表面抗原，灵敏度为2ng/ml。
[测定原理]：——HBsAg胶体金法检测试剂条采用两点夹心固相免疫层析法定性检测血清或血浆中的HBsAg。
在试剂条的检测区包被有抗HbsAg单克隆或多克隆抗体，质控区包被有抗鼠IgG抗体。
检测时，血清或血浆中的HBsAg与试剂条上事先包被的胶体金标记抗HBsAg单克隆抗体结合成结合物，该结合物随着膜的毛细管作用向上迁移到达检测区，与膜上的抗HBsAg抗体起反应，出现一条红色条带。
无论标本中是否存在HBsAg，当液面继续迁移至固定羊抗鼠IgG区带时，质控区必定会出现一条红色条带。
如果检测区(T)出现红色条带，则提示阳性结果，表明被测者已经感染HBV；只有质控区（C）出现红色条带，则提示阴性结果，表明被测者没有感染HBV；质控区（C）红色条带同时作为试剂的内控标准，有助于判定样本量是否足够或层析过程是否正常。
实验五：ELISA法检查乙肝表面抗原(HBsAg)
用
实验材料
HBsAg酶联免疫分析试剂盒 HBsAg阳性品，阴性对照品 移液枪，枪头 湿盒 酶标板，酶标仪 一次性手套 记号笔 计时器
实验步骤
结果判定
•定性测定 定性测定的结果判断作出“有”或“无”的回答，分别用 “阳性”、“阴性”表示。在这种半定量测定中，将标本作 一系列稀释后进行试验，呈阳性反应的最高稀释度即为滴度。 根据滴度的高低，可以判断标本反应性的强弱，这比观察不 稀释标本呈色的深浅判断为强阳性、弱阳性更具定量意义。 待测孔（P）与对照孔（N）的比值（P：N）大于1.5或2者 为阳性，N为阴性对照孔。
免疫标记技术
用标记物标记抗体或抗原进行抗原抗体反应借以提高免
疫学诊断的敏感性
放射性同位素： 酶：辣根过氧化物酶、 荧光素 ：异硫氰酸荧光素（黄
125I、131I
碱性磷酸酶
绿色荧光）、藻红蛋白、 罗丹
明（红色荧光）
放射免疫检测法（RIA） 酶免疫检测法（EIA） 免疫荧光检测法（IFA）
免疫酶测定法
(Enzyme ImmunoAssay,EIA)
• 用酶标记的抗原或抗体进行的抗原抗体反应。
– 辣根过氧化物酶(HRP)，碱性磷酸酶(AP)
• 特点：
高度特异性：保持抗原抗体反应的特异性 高灵敏度：酶催化底物显色的高效性，pg水平微量检测 定性定量检测：反应液颜色深浅或光密度值
• 分类：
2、ELISA基本原理
(1).抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面，并保持 其免疫学活性。例如：蛋白质分子结构上的疏水基团与聚 苯乙烯表面的疏水基团能产生互作用而吸附。 (2).抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物，而此 种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性； (3).酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的 颜色反应来判定是否有免疫反应的存在，而且颜色反应的 深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，由此进 行定性或定量分析。
乙肝快速抗体检测标准操作规程
乙肝快速抗体检测标准操作规程一、引言本操作规程旨在确保乙肝快速抗体检测工作的准确性、可靠性和规范性，为乙肝病毒感染的早期筛查提供科学依据。
二、术语和定义1. 乙肝：指乙型肝炎病毒（HBV）感染。
2. 快速抗体检测：利用快速检测试剂盒进行乙肝抗体检测的方法。
3. 检测试剂盒：专门用于乙肝等疾病快速抗体检测的试剂盒。
三、仪器和试剂准备1. 快速检测试剂盒：根据实验需要选择合适的检测试剂盒，保证其有效期内且储存条件良好。
2. 阅读器或显微镜：用于读取检测结果。
3. 空白样本管：用于制备和保存质控品和待测样本。
四、操作步骤1. 检测前准备：- 确认检测环境干净整洁，无灰尘和杂质。
- 检测人员须佩戴好手套，并进行手部消毒。
2. 样本制备和加样：- 取出空白样本管，尽量避免污染。
- 加入待测样本，按照检测要求使用适当的样本量。
3. 加试剂：- 打开检测试剂盒，取出试纸。
- 将试纸放入样本管中，确保试纸充分与样本接触。
4. 反应：- 根据检测试剂盒的说明书，确定反应时间，并严格控制反应时间，避免超时或不足时间。
5. 结果读取：- 将试纸取出，放入阅读器或显微镜中，并按照说明书所示方法进行结果读取。
- 结果判定完毕后，记录结果，包括阳性、阴性或无效等。
6. 结果分析和报告：- 根据实验室标准和临床需要，对结果进行分析和解释。
- 编写检测报告，提供实验室负责人签名和日期。
五、质控和错误处理1. 质控：- 每天开始工作前，使用已知结果的质控品进行质控检测，并记录结果。
- 检测过程中应另外加入阴性和阳性质控品，确保实验结果准确可靠。
2. 错误处理：- 如发现异常结果，应及时停止实验，并检查检测步骤和操作是否正确。
- 如实验无效，重新进行实验。
- 如果问题仍然存在，寻求实验室负责人或专业人员的帮助和指导。
六、安全注意事项1. 严格遵守实验室安全规定，正确佩戴个人防护装备。
2. 注意避免样本和试剂的交叉污染。
3. 废弃物应按照规定分类和处理。
乙肝抗体的检测实验报告
一、实验背景乙型肝炎病毒（HBV）感染是全球范围内重要的公共卫生问题。
乙肝抗体检测是临床诊断和预防乙型肝炎的重要手段。
本次实验旨在通过酶联免疫吸附试验（ELISA）检测乙型肝炎表面抗体（HBsAb），了解实验对象的免疫状态，为乙型肝炎的防控提供依据。
二、实验目的1. 掌握乙型肝炎表面抗体ELISA检测方法；2. 评估实验对象的免疫状态；3. 为乙型肝炎的防控提供依据。
三、实验原理乙型肝炎表面抗体ELISA检测原理基于抗原抗体特异性结合反应。
将乙型肝炎表面抗原（HBsAg）包被于微孔板，加入待测血清，若血清中存在HBsAb，则与包被的HBsAg结合。
再加入酶标记的二抗，若HBsAb与HBsAg结合，则酶标记的二抗与HBsAb结合。
最后加入底物显色，根据颜色深浅判断HBsAb的存在。
四、实验材料1. 乙型肝炎表面抗原（HBsAg）包被微孔板；2. 待测血清；3. 酶标记的二抗；4. 底物；5. 洗涤液；6. 酶标仪；7. 移液器；8. 试剂盒说明书。
五、实验方法1. 标准曲线绘制：将不同浓度的HBsAb标准品按试剂盒说明书操作，检测吸光度（A值），以A值为纵坐标，HBsAb浓度为横坐标，绘制标准曲线。
2. 实验操作：a. 将微孔板置于酶标仪上，调整波长为450nm；b. 向微孔板每孔加入50μl待测血清，置于酶标仪上，37℃孵育30分钟；c. 向微孔板每孔加入50μl酶标记的二抗，置于酶标仪上，37℃孵育30分钟；d. 向微孔板每孔加入底物，置于酶标仪上，37℃孵育15分钟；e. 向微孔板每孔加入终止液，终止反应；f. 测量各孔的A值。
3. 结果判断：a. 根据标准曲线，计算待测血清的HBsAb浓度；b. 以HBsAb浓度≥10mIU/ml为阳性，低于10mIU/ml为阴性。
六、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：根据标准曲线绘制结果，A值与HBsAb浓度呈正相关。
2. 实验结果：本次实验共检测30份血清样本，其中18份样本HBsAb浓度为10mIU/ml以上，12份样本HBsAb浓度低于10mIU/ml。
乙肝表面抗原确证实验作业指导书
· 对于7.0≤COI≤30的有反应性标本
100μl标本+100μl证实试剂
100μl标本+100μl对照试剂 或·
对于COI>30的有反应性标本，标本先用Elecsys通用稀释液作1：20稀释。
100μl稀释的标本+100μl证实试剂
100μl稀释的标本+100μl对照试剂
平行测定PreciControl HBs Ag 2,以便对操作进行核对：
180μl PreciControl HBs Ag 2+20μl证实试剂
180μl PreciControl HBs Ag2+20μl对照试剂
充分混匀，将以上几种反应物15－25度温育30-60分钟或 2－8度温育过夜。
ElecsysHBsAg测定：将预处理标本置于仪器的标本区，记录标识数据。按ElecsysHBsAg试剂操作说明书进行检测。
2.标本要求
Elecsys HBsAg试验重复呈现有反应性的人血清或血浆标本。标本采集和准备与Elecsys HBsAg试验相同。
3.试剂、校准品、质控品和其他所需材料
采用罗氏原装配套试剂。
试剂：
瓶1：证实试剂（黑盖），2瓶，1.3ml。抗HBsAg>200IU/l，人血清。含
防腐剂。
瓶2：对照试剂（白盖），2瓶，1.3ml。人血清,抗HBsAg<3IU/l。含防
· 第2步：加入链霉亲和素包被的微粒，让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。
· 第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去。电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。
实验五ELISA法检查乙肝表面抗原
实验五ELISA法检查乙肝表面抗原
一、实验原理
ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种酶联免疫法，它利用可见的酶促
反应（如酶标）来测定或检测特殊的抗原或抗体，也称为酶标免疫分析（ELISA）。
它的作用是，通过特定抗原与特殊抗体之间的特异性结合，
使反应剂（受体物质）发生可见的改变，以此来测定定量或定性的被测物
质（抗原或抗体）是否存在。
ELISA法是用来检测乙肝表面抗原（HBsAg）的一种快速简易的方法。
首先，将患者血清在微孔板上预先唾液，然后在微孔板上涂上特异性抗原
抗体，抗体和抗原结合形成复合体，最后将这种复合体添加进反应液中，
在其中一种特殊条件下，复合体中的受体物质会发生反应，此时可见的酶
标反应就出现了，检测结果就可以出现了。
二、实验步骤
1、准备实验样本和实验设备：患者血清样本，抗体，反应液，微孔板，洗涤盒，细胞培养室，实验酶标板和其他实验用品等。
2、抗原抗体涂覆：将患者血清在微孔板上唾液，然后用特异性抗体
对抗原抗体进行涂覆，并将抗体抗原复合体形成复合体。
3、反应液加入：将复合体加入反应液中，并在恒温水浴箱中反应，
使受体物质发生反应，产生可见酶标反应。
4、检测并判断结果：检测。
乙型肝炎表面抗原(HBsAg)实验操作规程(吉比爱)
1.目的和适用范围：1.1.为保证血液检测的结果正确性，规范实验操作，特制定本操作规程。
1.2.适用于本实验室，全体工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。
2.术语：无。
3.职责：3.1.实验室工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。
3.2.实验室负责人负责最终实验室报告的签发。
4.工作程序4.1.操作说明4.1.1.实验原理：应用双抗体夹心酶联免疫法原理检测人血清或血浆中的HBsAg。
用特异性抗-HBs抗体包被酶标板，待检血清或血浆中的 HBsAg可与包被抗体反应，再与酶标抗—HBs抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。
加底物（TMB）显色，在酶标仪上测定后根据吸光值（A值）判定有无HBsAg的存在。
4.1.2.实验所需设备和材料：酶标分析仪、洗板机、50ul加样器、100ul加样器、37℃恒温孵育箱，一次性加样吸头、试剂槽、过程记录单等。
4.1.3.实验室环境条件：实验检测的室温应保持在18℃-25℃之间。
4.1.4.实验流程：标本接收核对→编制加样顺序的布局图→设置条孔→加样→加酶标记物→温育→洗板→加显色剂→温育→加终止液→酶标仪读数→结果判断→结果报告4.2.实验操作步骤：4.2.1.准备：自2-8℃试剂冰箱中取出试剂盒，在室温中平衡30分钟；包被板平衡至室温后才可打开外包装，以防止板条吸收空气中的水蒸气；将20倍浓缩洗涤液用纯化水20倍稀释后备用。
剩下的试剂及时封存于2℃-8℃冰箱中，以备后用。
4.2.2.设定：将待测样品按需排列设定加样顺序。
每板实验设空白对照1孔（若用双波长检测，可不设空白对照孔），阴性对照3孔，阳性对照2孔。
4.2.3.加样：将所需数量的板条固定于板架。
除空白对照孔外，在相应孔中加入阴性阳性对照和待检样品各100ul.4.2.4.温育第一次：贴上封口胶，置37℃温育60分钟。
4.2.5.加酶：小心撕去封口胶，除空白孔外，每孔加入酶工作液100ul.4.2.6.温育第二次：贴上封口胶，置37℃温育30分钟洗涤：小心撕去封口胶。
乙肝病毒表面抗原测定操作规程010
乙型肝炎病毒表面抗原测定操作规程文件号：WH-MY-010版本：第1版共：3页2009年3月1日起实施本规程每2年复审一次复审日期：2010年2月27日复审人：雷凤珠规程编写者：王莉红审批者：王金成批准日期：2010年2月28日检验科主任：雷凤珠1、检验目的：乙肝表面抗原测定2、检测原理：本试剂在微孔条上预包被纯化乙肝表面抗体(HBsAb),配以酶标抗体（HBsAb-HRP）及TMB显色剂等其他试剂，采用双抗体夹心法法原理检测人血清(或血浆)中的乙肝表面抗原（HBsAg）.3、试剂和仪器：3.1试剂：上海科华生物有限公司3.23.3试剂稳定性：原装试剂在2－8℃避光保存，有效期6个月。
3.4仪器：3.4.1 TE-B型定时微量振荡器3.4.2 37℃水浴箱（上海山连）4、标本：4.1静脉抽取空腹患者标本3.0ml(真空采血管)，将血液放置在37℃水浴箱中30分钟后，分离血清。
4.2样品后收到后不要急于分离血清，以免血块收缩不良造成结果假阳性。
4.3溶血标本不能用于检测，因溶血可造成假阳性结果出现。
4.4用完的标本，应在样品管上注明日期，放置在2－8℃冰箱中保存一周。
4.5样品放置一周后，逐管加入1：50的84消毒液，并放置4小时后，装入医疗垃圾袋由专人按医疗垃圾处理。
5、操作5.1操作步骤：5.1.配液：将20ml浓缩洗涤液（20×）用蒸馏水或去离子水稀释至400ml备用。
5..2编号:将样品对应微孔按序号编号,每板应设阴、阳性对照各2孔和空白对照1 孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步相同），5. 3加样：分别在相应孔中加入待测样品或阴、阳性对照50ul。
5.4加酶：每孔加入酶标试剂1滴（50ul）,轻轻振荡混匀。
5.5温育：用封板模封板后置37℃温育30分钟。
5.6洗涤：将孔内液体用吸引器吸干，用洗涤液洗涤5遍，用吸引器吸干。
5.7显色：每孔加入显色剂A、B液各1滴(50ul),,轻轻振荡混匀, 37℃避光显色10分钟。
血清乙型肝炎病毒表面抗体检测ELISA-检验科免疫室作业指导书
血清乙型肝炎病毒外表抗体检测ELISA1.原理在微孔条上预包被被纯化乙肝外表抗原,配以酶标记抗原〔HBsAg-HRP及TMB等其它试剂,采用夹心法原理检测人血清〔或血浆〕中乙肝外表抗体〔HBsAb.2.标本采集2.1采集前病人准备：受检者应空腹2.2标本种类：血清或血浆2.3标本要求：采集病人静脉血3ml 〔可用EDT砒凝〕,室温放置不超过4小时,别离血清备用.3.标本储存：2-8 C保存不应超过1周,-20 C不应超过3个月,-70 C 长期保存,应预防反复冻融.4.标本运输：密封,室温运输.5.标本拒收标准：污染、标本量缺乏、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测.6.试剂6.1试剂名称：乙型肝炎病毒外表抗体诊断试剂盒6.2试剂生产厂家：英科新创〔厦门〕科技.6.3包装规格：96Test/Kit6.4试剂盒组成：HBsAb微孔板,HBsAb酶标记抗原,HBsAb阳性对照血清,HBsAb 阴性对照血清,浓缩洗涤液,底物A,底物B,终止液,封口膜,自封袋.6.5试剂储存条件及有效期：2-8C避光保存,有效期9个月.7.仪器设备7.1仪器名称：自动酶标仪7.2仪器厂家：Rayto7.3仪器型号：RT-21008.操作步骤8.1平衡：将试剂盒各组分取出,平衡至室温〔18-25C〕,微孔板开封后,余者及时以自封袋封存.8.2配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀〔如有晶体应充分溶解〕,浓缩洗涤液和蒸储水或去离子水按1:19稀释后使用.8.3编号：将微孔条固定于支架,按序编号.8.4加样：分别用加样器在对照孔中参加阴、阳性对照血清各50 l 于相应孔中.8.5力口酶：分别在每孔中参加酶标记抗体50 l,轻拍混匀.8.6温育：置37c温育60分钟,室温平衡5分钟.8.7洗涤：用洗涤液充分洗涤5次,洗涤完扣干〔每次应保持30-60 秒的浸泡时间〕.8.8显色：每孔参加底物A、B各50 l,轻拍混匀,置37c暗处15 分钟.8.9终止：每孔加终止液50 l,混匀.8.10测定：用酶标仪单波长450nm或双波长450/630nm测定各孔OD值〔用单波长测定时需设空白对照一孔,30分钟内完成测定,并记录结果〕.9.结果判断与分析9.1临界值〔C.O.〕的计算：临界值=阴性对照孔OD值NX 2.1,阴性对照OD均值大于0.1时应重新试验,小于0.05时以0.05计算.9.2结果判定：样品OD值S/C.O>=1者为HBsAb阳性样品OD值S/C.O<1者为HbsAb阴性10.质量限制每次试验用含30mIu/mlHBsAb的质控血清同步检测,S/CO值应在限制范围内；如失控,那么要检查试剂效期、储藏温度、试验温度是否正常、操作步骤是否正确,直至重新试验使其在控.11.参考范围阴性或阳性12.临床意义HBsAb阳性说明存在HBV的保护性抗体.13.操作性能：灵敏度高,特异性好.14.方法局限性：样品显色深浅与样品中抗体的含量没有一定正相关.15.考前须知15.1每板建议设阴阳性对照血清各两孔, 设空白对照时,不加样品及酶标记抗体,其余各步相同.15.2洗涤时各孔均须加满,预防孔口内有游离酶未能洗净.15.3加试剂前应将试剂瓶翻转数次,使液体混匀.如果滴加,滴加前应弃去1—2滴.滴加时瓶身应保持垂直,以使滴量准确.注意勿将试剂滴在孔壁上.15.4所有样品都应按传染源处理.15.5封口膜使用说明15.5.1微孔板拆封后,在取出当天所需的微孔条后,其余微孔条可以封口膜封存以预防受潮.在封存时,注意勿把封口膜粘贴到微孔条底部,以免影响其透光性.15.5.2微孔板温育时,以封口膜覆盖孔口,可预防其他因素对实验带来的非预期的影响.15.6不同品名、不同批号的试剂不可混用,以免产生错误结果.16.当检测系统〔仪器〕不能工作时,所采取的补救举措：应保证所有操作步骤正确无误；可以比对阴阳对照,肉眼判读；无法准确判读者,应留样待系统正常后复查.17.参考文献：中华人民共和国卫生部医政司编.全国临床检验操作规程〔第二版〕412页.18.其它：必须按规定使用经中国药品生物制品检定所检定并贴有“检定合格〞防伪标签的试剂.。
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乙肝表面抗体检测标准化操作
实验室名称 项目 编号 制定日期
瑞慈医院检验科 乙肝表面抗体
1. 检测项目名称
乙肝表面抗体
2. 检测原理
雅培公司的乙肝表面抗体分析采用微粒子酶免疫法。
3. 试剂
3.1 品牌：AUSAB
3.2 试剂贮存和稳定性
储存要求：试剂盒要求在2~80C保存
未开封的试剂在冰箱或分析仪上可保存30天。
4. 仪器
Abbott AXSYM
5. 测定
操作过程详见仪器操作程序。
5.1 失控措施
复查质控值，分析原因（仪器、试剂、质控品、水、温度等），并记录纠正过程。
5.2 测定
详见Abbott AXSYM项目操作步骤，可根据不同的条形码信息自动进行检测
主要仪器参数如下：
分析项目 AUSAB
分析类型 MEIA
单位 mIU/ml;
定标方法 2或6点定标
5.3 定标：
5.3.1 定标液： 雅培公司提供
5.3.2 定标频率：使用新批号试剂须重新定标
根据质控情况按需要重新定标
5.4 质控：
5.4.1 质控品：雅培公司提供
5.4.2 质控值：质控值应在建立的的质控范围内
质控值范围应适应各实验室的具体需要
5.5 测定范围
半定量分析
5.6 检测完毕，血标本置于4~80C冰箱内保存7天，以备复查。
6. 参考范围：
6.1 当检测值为0-10时, 为阴性。
6.2 当检测值大于10时，为reactive，提示AUSAB阳性。
7. 结果解释：
AUSAB为HBV的中和抗体，有清除HBV，防止再感染的作用。一般在恢复期出现，
提示感染终止，注射过乙肝疫苗者也可为阳性。
8. 病人准备和标本要求
8.1 血标本
血清：静脉抽血3ml于普通血清管内，分离血清。
稳定性：2~8℃稳定5天，-20℃可稳定4周
8.2 标本核对制度：标本号与申请但单号不符的标本或明显污染的标本不予接收
9. 注意事项
9.1 试剂于2-8℃贮存，使用前避免摇动而产生气泡。
9.2 采集标本时注意避免溶血。
9.3 标本检测前须充分震荡混匀
操作人员 部门主管 质量负责人
姓名
日期