猪瘟疫苗的概述及制作过程

猪瘟疫苗生产工艺改进的几点考虑
1、使用化学成分明确的细胞培养基 化学成分明确的细胞培养基一方面能提供足够的营养，供细胞生长，同时避免动物来
源成分（如由水解乳蛋白）带来外源病毒（如BVDV）及其抗体的污染。 2、使用低血清细胞培养基，减少血清使用量，提高细胞维持时间 清大天一有适合细胞培养生长的低血清MEM（MD611）细胞培养基，可使血清使用量
2.猪瘟脾淋苗 （1）普通苗 （2）政府采购专用苗
我国猪瘟的流行特点
流行范围广 呈散发流行趋势 发病年龄小，成年猪带毒现象严重 非典型和繁殖障碍型猪瘟增多 免疫失败现象严重 与猪蓝耳病、猪园环病毒病、猪伪狂犬病、猪链球菌病、
猪肺疫等并发或继发感染
我国猪瘟疫苗的特点
我国的猪瘟疫苗是用中国系猪瘟兔化弱毒 株（简称C株）生产的，它是我国于20世纪 50年代初期，从河北省石家庄地区的患猪瘟 的病猪中分离到的一株猪瘟强毒，称为石 门株（Shimen strain），将该强毒株通过大 耳白兔经历4年多时间，传代至430代，使毒 力减弱成为疫苗株，即C株。
将检验合格的病毒培养液和5%蔗糖脱脂牛奶稳 定剂按一定比例混合，分装，进行冻干。
猪瘟病毒的病毒特征
1、猪瘟病毒（HCV）感染细胞超薄切片的电子显微镜观 察表明，该病毒颗粒在膜结合的胞浆内空胞中装配并成熟 ，然后经胞外释放。
2、56℃处理60分钟或60℃10分钟可灭活细胞培养液中的 HCV。HCV在pH5～10时稳定，pH5.2时最适宜生长，但在 低于pH4或高于pH11时快速灭活。
猪瘟免疫失败的原因
疫苗质量不高 疫苗管理不当 免疫程序不合理 猪群中存在其它免疫抑制病感染 母猪持续感染和仔猪胎盘感染——是免疫失败的重要原因
猪瘟亚临床感染→胎盘感染→母猪繁殖障碍→仔猪带毒 →后备母猪→ 亚临床感染 免疫后过敏反应时有发生
猪瘟疫苗的制作过程
一、细胞培养 1、制苗用细胞 牛睾丸细胞或羊肾细胞。 2、生长培养液 目前的细胞培养液为乳汉（欧）液，或MEM＋10%新生
猪瘟疫苗的概述及制作过程
08动医班 —1957 猪瘟脾淋组织苗（湿苗） 1958—1959 猪瘟脾淋组织苗（湿苗） 1959—1963 猪瘟脾淋组织冻干苗
1964—1971 猪瘟乳兔组织苗（湿苗） 猪瘟牛体反应苗（湿苗）
1972—1973 猪瘟乳兔组织苗（湿苗） 猪瘟牛体反应苗（湿苗）
（2）培养基和血清的质量可靠、稳定。应确保无外源病毒 、支原体、细菌等污染，无牛病毒性腹泻病毒（BVDV）及 其抗体。用于生产猪瘟细胞苗的牛血清都要事先检测有无 BVDV中和抗体的存在。
（3）制备原代牛睾丸细胞时，防止细胞消化过度。 （4）合适、营养丰富的细胞培养基。丰富的营养成分对细
胞的生长、带毒状态维持和毒价的提高有直接影响。 （5）转瓶的洗涤应遵循严格的清洗程序。转瓶洗涤不干净
，容易导致细胞不贴壁生长。
二、 病毒感染、维持和收获
1.生产用毒种有脾毒和细胞毒，脾毒是用选择定 型热反应兔脾脏冷冻或冻干保存制备的；细胞毒 是将用新鲜脾毒制成0.3%～0.5%的病毒悬液接种 生长良好的牛睾丸细胞或羊肾单层细胞，取二收 、三收的细胞培养液作为生产用毒种。脾毒应选 择兔体反应在36小时之前，同时防止脾毒采集过 程的污染。
C株的特点： ①免疫原性良好，经肌肉注射可产生坚强的免疫
力，并可维持1~2年。 ②免疫力产生快，48小时产生完全免疫力，96小
时产生坚强免疫力。
③安全性高，反应小，各种类型的猪均可使用 ， 剂量加大至10~20头份甚至更大无明显不良反应。
④稳定性好，不变异，不散毒，不返祖。C株疫 苗早已是被世界公认的优秀疫苗，并在国内及其 它国家广泛应用获得很高的评价。
1）细胞培养液（乳汉液）营养不足，尤其是使用高压灭 菌液，高温可使一些营养成分损失，造成细胞生长状态不 良；
2）细胞培养液较多存在外源病毒，尤其是牛病毒性腹泻 病毒（BVDV）会直接造成病毒滴度降低；
3）成熟释放的病毒在维持液中耐受性较差，造成病毒滴 度较低；
4）病毒毒种毒力较低，并在传代过程中弱化。
牛血清+1%双抗（青/链霉素），pH7.0～7.2左右。 3、维持液 目前的维持液为乳汉（欧）液，或MEM＋2～5%新生牛
血清+1%双抗（青/链霉素），pH7.4～7.6。
细胞生长良好的几个注意事项
（1）制苗用细胞应选用非猪瘟疫区，无口蹄疫、粘膜病等 传染病地区的1～4日龄健康小公牛或10日龄以内的健康羔 羊。其家H健康生长的
1974—1975 猪瘟乳兔组织冻干苗 1976—1981 猪瘟乳猪肾细胞冻干苗 1981—1983 猪瘟乳兔组织冻干苗 1982—1987 猪瘟羊肾细胞冻干苗 1987—2002 猪瘟牛睾丸细胞冻干苗 2002至今 猪瘟牛睾丸细胞冻干苗
猪瘟脾淋组织冻干苗
猪瘟疫苗系列
1.猪瘟细胞苗 （1）普通苗 （2）零免苗 （3）精制苗 （4）政府采购专用苗
该病毒不产生细胞病变效应(CPE)，可连续多次 收液。取已形成良好单层的牛睾丸细胞（或羊肾 细胞），弃去培养液，接种含3%～5%细胞毒种 或0.2%～0.3%脾毒种的维持液。接毒后4或5日第 一次收获换液，以后每4－6日收获换液1次，可 连续12～15收左右，有的厂家可收更多。一般来 说，12～15收前的毒价合格率高，疫苗质量好。 接毒时，细胞生长状态的好坏影响细胞产毒。也 可对细胞带毒分散，分散比率1：4左右，可增加 收次和产量。
3、猪瘟病毒的抗原性和血清学与牛粘膜/病毒性腹泻病毒 (MD/BVDV)密切相关，两者同源性很高，能互相诱导一 定程度的同源病毒抗体，细胞或培养液中若存在牛病毒性 腹泻病毒(BVDV)及其抗体，可与猪瘟病毒发生中和反应 ，造成疫苗生产的失败。
病毒收获液毒价不高的可能原因
如果病毒收获液毒价不高，即病毒家兔感染量（RID）较 低，制成的疫苗易造成免疫失败。猪瘟疫苗生产中毒价不 高的可能原因：