脂多糖通过TLR4-Src信号介导微囊胞吞血管内皮钙黏蛋白和增加血管通透性

脂多糖通过TLR4-Src信号介导微囊胞吞血管内皮钙黏蛋白和

增加血管通透性∗

张晔;张连阳;谭浩;李阳;孙士锦

【摘要】目的：：探讨脂多糖(LPS)诱导微囊胞吞血管内皮钙黏蛋白(VE-Cad)的可能机制。方法：培养人血管内皮细胞株CRL-2922,当其生长至融合状态时分为正

常对照组(不予再处理)、LPS处理组(采用10μg/ml LPS分别与CRL-2922再培养

1h、2h、4h和6h)、LPS+抑制剂组包括Toll样受体4(TLR4)抑制剂 CLI-095和Src 抑制剂SU6566[在 LPS培养细胞时分别加入CLI-095(5μg/ml)和

SU6566(2μmol/L)再培养4h]。采用 Western Blotting法检测各组 Src蛋白表达、Cav1磷酸化和 VE-Cad质膜蛋白表达,以及Cav1与 VE-Cad共沉淀水平；采用培养小室半透膜培养细胞,并检测相关各组细胞荧光透过率,以反映血管通透性。结果：LPS处理不同时间组 Src 蛋白表达均较正常对照组升高(P<0.05)；与正常对照组

比较,LPS处理4h组Cav1磷酸化增强(P<0.05)、VE-Cad质膜蛋白表达下调、Cav1与 VE-Cad共沉淀水平升高(P<0.05),单层细胞荧光透光率增加(P<0.05)；TLR4抑制剂和Src抑制剂可显著降低 LPS增高的 Src蛋白高表达和Cav1高度磷酸化(P<0.05),上调 VE-Cad质膜蛋白表达(P<0.05),下调Cav1与 VE-Cad共沉淀

水平(P<0.05),改善单层内皮细胞通透性(P<0.05)。结论：LPS可能通过TLR4-Src 信号途径诱导微囊胞吞 VE-Cad和增加血管通透性。%Objective:To observe the mechanism of caveolae-mediated endocytosis of VE-Cad after LPS treat-ment.Method:Human vascular endothelial cell line CRL-2922 was cultured.It was divided into normal control group (when it grew to confluence state),LPS-treated group (using 10μg/ml LPS to incubate with the CRL-2922 for 1h,2h,4h and 6h);and LPS+inhibitor group[adding CLI-

095 (5μg/ml)and SU6566 (2μmol/L)in the LPS cultured cells and then culturing for 4h].Western Blotting was used to detect the Src protein expression,Cav1 phosphorylation,plasma membrane protein expression of VE-Cad,phosphorylation of Cav1 and co-precipitation lev-els of Cav1 and VE-Cad;semi-permeable membrane was used to culture cells,and the relevant cells fluorescence transmittance was detected to reflect vascular permeability.Results:The protein expression of Src was gradually in-creased after LPS treatment,as well as the phosphorylation (Tyr14)of Cav1 and he monolayer cell permeability (P<0.05),and the membrane expression of VE-Cad decreased (P<0.05).The increased expression and phosphorylation could be decreased by the inhibitor of TLR4 CLI-095 and the inhibitor of Src SU6656 (P<0.05),and the inhibitors could increase the membrane expression of VE-Cad (P<0.05),and improve the monolayer cell permeability at 4h after LPS treatment (P<0.05).Conclusion:Caveolae-mediated endocytosis of VE-Cad was activated through LPS-TLR4-Src signal pathway.

【期刊名称】《微循环学杂志》

【年(卷),期】2015(000)002

【总页数】4页(P1-4)

【关键词】脂多糖;Toll样受体4;Src蛋白;微囊胞吞血管内皮钙黏蛋白;血管通透性【作者】张晔;张连阳;谭浩;李阳;孙士锦

【作者单位】第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤中心，创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室，重庆 400042;第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤中心，创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室，重庆 400042;第三军医大学大坪医院

野战外科研究所创伤中心，创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室，重庆 400042;

第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤中心，创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室，重庆 400042;第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤中心，创伤、烧

伤与复合伤国家重点实验室，重庆 400042

【正文语种】中文

【中图分类】R605.971

严重创伤、脓毒症患者存在血管通透性增高，脂多糖(Lipopolysaccharide, LPS)

是脓毒症的重要启动因子，阐明LPS诱导血管通透性增高的发生机制有重要意义。本实验室前期研究(待发表)发现，细胞质膜微囊(Caveolae，简称微囊)介导血管内皮钙黏蛋白(Vascular Endothelial Cadherin，VE-Cad)胞吞是LPS致血管通透性增高的重要原因；同时发现，微囊胞吞VE-Cad过程中，微囊重要结构蛋白小窝

蛋白(Caveolin-1，Cav1)磷酸化显著增高。但LPS磷酸化Cav1的信号途径目前

尚不清楚。

研究表明，人肺微血管内皮细胞原癌基因c-Src活化可加强Cav1磷酸化和微囊胞吞白蛋白和霍乱毒素B亚基 [1]，而LPS可活化Src[2]，且与Toll样受体4(Toll-like Receptor 4，TLR4)有关[3]。因此推测，LPS可能通过TLR4和Src途径磷酸化Cav1，进而调节微囊胞吞行为，增加内皮细胞和血管通透性。本实验采用LPS 处理人血管内皮细胞株CRL-2922，通过免疫印迹法检测其Src蛋白表达、Cav1

磷酸化、VE-Cad质膜表达，以及Cav1与VE-Cad共沉淀水平，同时采用生物半透膜检测单层内皮细胞的荧光透过率，探讨TLR4-Src途径是否参与LPS诱导微囊