人U87-MG脑胶质瘤细胞裸鼠原位移植模型的建立

脑内，因此与原位移植瘤在血管生成、浸润性、转移性、瘤细 胞生物活性物质的表达、瘤组织微环境渗透压等许多生物学 行为上存在明显 差 异 ［３－４］。 肿 瘤 的 原 位 移 植 动 物 模 型 与 临 床脑胶质瘤的发生情况最为接近，包括脑胶质瘤发生、发展 的各个环节，从临床模拟性来说，是目前研究脑胶质瘤最为 理想、可靠的肿瘤模型［３，５］。为此，我们应用脑立体定位仪， 将不同数量的人脑胶质瘤细胞 Ｕ８７ＭＧ单细胞悬液接种于 免疫缺陷裸鼠的脑内右侧尾状核区，建立人脑胶质瘤原位移 植裸鼠 模 型。采 用 核 磁 共 振 扫 描 （ｍａｇｎｅｔｉｃｒｅｓｏｎａｎｃｅｉｍａ ｇｉｎｇ，ＭＲＩ）方法，在 不 对 裸 鼠 造 成 伤 害 的 前 提 下，实 现 了 动 态监测造模后裸鼠颅内移植瘤的生长，同时结合 ＨＥ染色和 免疫组化等病理学检查分析结果，确立了造模后成模的最佳 时间。 １ 材料与方法 １．１ 细胞株与实验动物 人脑胶质瘤 Ｕ８７ＭＧ细胞系由西 京医院神经外科教研室惠赠。ＢＡＬＢ／ｃｎｕ／ｎｕ裸鼠 ２４只， ♂，６～８周龄，清 洁 级，购 于 上 海 斯 莱 克 实 验 动 物 有 限 责 任 公司，许可证号：ＦＣＸＫ（沪）２００３０００３，饲养于空军军医大学 实验动物中心［ＳＹＸＫ（军）２０１２００２３］。裸鼠随机分为 ４组， 正常对照组、Ａ组、Ｂ组、Ｃ组，每组 ６只。Ａ、Ｂ、Ｃ组接种细 胞数分别为 １５×１０５ 个、２０×１０５ 个、２５×１０５ 个（悬浮于 无血清 ＤＭＥＭ培养液），分别在接种后 ７、１４、２１、２８ｄ对每组 裸鼠进行核磁共振扫描，并在 ２８ｄ时取对照组鼠 １只、造模 组每组 １只（共 ３只）裸鼠行 ４％多聚甲醛心内灌注并固定， 对获取的全脑 标 本 进 行 切 片，并 进 行 病 理 学 观 察，取 其 心、 肝、脾、肺、肾、脊髓等主要脏器，检查有无转移灶，剩余裸鼠 正常饲养，观察生存期。 １．２ 试 剂 胎 牛 血 清 （西 安 沃 德 生 物 科 技 有 限 公 司）； ＤＭＥＭ高糖培养粉（美国 Ｇｉｂｃｏ公司）；胰蛋白酶（美国 Ｓｉｇｍａ 公司）；钆喷酸 葡 胺 注 射 液 （广 州 康 臣 药 业 有 限 公 司 ）；兔 抗 人胶质纤维酸性蛋白（ｇｌｉａｌｆｉｂｒｉｌｌａｒｙａｃｉｄｉｃｐｒｏｔｅｉｎ，ＧＦＡＰ）、 Ｓ１００蛋白多克隆抗体、ＳＡＢＣ试剂盒（武汉博士德公司）。 １．３ 仪器 ＳＷＣＪ２Ｆ超净工作台（苏州安泰空气技术有限 公司）；ＱＰ１６０型二氧化 碳 培 养 箱 （山 东 博 科 生 物 产 业 有 限 公司）；ＡＬＣＨ型动物脑立体定向仪、ＡＬＣＩＰ６００型微量注射 泵、ＡＬＣＣＥＤ９型 动 物 颅 骨 钻 （北 京 吉 安 得 尔 科 技 有 限 公 司）；３．０ＴＭＡＧＮＥＴＯＭ ＴｒｉｏＴｉｍ核磁共振成像系统（德国西 门子公司）；３Ｔ老鼠线圈（上海辰光医疗科技有限公司）；Ｏ ｌｙｍｐｕｓＩＸ７１倒置荧光显微镜（日本奥林巴斯公司）。 １４ 方法 １．４．１ 细胞培养 将人脑胶质瘤细胞 Ｕ８７ＭＧ分装于数只 底面积为 ７５ｃｍ２的培养瓶中，按常规方法培养，即用含 １０％
关键词：脑胶质瘤；原位移植；裸 鼠；动 物 模 型；Ｕ８７ＭＧ细 胞；ＨＥ染色；免疫组化
脑胶质瘤是由于大脑和脊髓胶质细胞癌变所产生的一 种最常见的原发性颅脑恶性肿瘤，约占颅内肿瘤的 ３５％ ～ ６１％。目前，虽然有手术、放疗、化疗、基因治疗及综合治疗 等多种治疗方法，但因其侵袭性强、复发率高、位置特殊、预 后差，具有很 高 的 病 死 率 和 致 残 率，严 重 威 胁 人 类 健 康［１］。 肿瘤细胞 所 处 的 微 生 态 环 境 是 其 生 长 不 容 忽 视 的 重 要 因 素［２］，建立一个可靠的能模拟人脑胶质瘤微环境以及生物学 特性的动物模型，是进一步了解和研究胶质瘤发病机制及治 疗方法的基础和前提。虽然异位（如皮下接种）移植简单方 便，易于观察，但越来越多的资料表明异位移植瘤并非长在
收稿日期：２０１８－０１－０７，修回日期：２０１８－０２－０４ 基金项目：国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ８１３０３２６４） 作者简介：王艳华（１９８７－），女，硕 士，主 管 药 师，研 究 方 向：心 脑 血
管及抗肿瘤药理学，Ｅｍａｉｌ：ｗａｎｇｙａｎｈｕａ８７０１０１＠１６３．ｃｏｍ； 翁 琰（１９８４－），女，博 士，主 管 药 师，研 究 方 向：心 脑 血 管及抗肿瘤药理学，通讯作者，Ｅｍａｉｌ：ｍｅｊｅａｎ１２０２１９８４＠ ａｌｉｙｕｎ．ｃｏｍ
人 Ｕ８７ＭＧ脑胶质瘤细胞裸鼠原位移植模型的建立
王艳华１，楚建杰１，李子敏１，胡娜平１，李会会１，郑建民２，张彩勤３，师长宏３，杨志福１，奚苗苗１，文爱东１，翁 琰１
（西京医院 １．药剂科、２．放射科；３．空军军医大学实验动物中心，陕西 西安 ７１００３２）
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ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１９７８．２０１８．０５．０２８ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００１－１９７８（２０１８）０５－０７３５－０５ 中国图书分类号：Ｒ３３２；Ｒ３６３３３２；Ｒ７３０２６４；Ｒ７３９４１０２２ 摘要：目的 应用不同数量 Ｕ８７ＭＧ细胞接种裸鼠脑内，建 立裸鼠脑胶质瘤模型，观察其生长特性。方法 采用立体定 向技术，分别将 ３０×１０１０·Ｌ－１、４０×１０１０·Ｌ－１、５０×１０１０ ·Ｌ－１浓度的人脑胶质瘤细胞 Ｕ８７ＭＧ单细胞悬液，接种于 １８只♂裸鼠的右侧尾状核区，每只接种体积为 ５μＬ，另取 ６ 只裸鼠作为对照，接种同体积 Ｈａｎｋｓ液。观察不同接种量实 验鼠的生存状态、成瘤情况及脏器转移灶、带瘤生存期，测量 肿瘤的最大径，计算肿瘤体积，将获取的全脑标本制作病理 切片，行 ＨＥ染色和免疫组化检查。结果 各接种量的实验 组成瘤率均为 １００％，未见颅外转移病灶，３组裸鼠的平均生 存时间分别为（４６５０±３２７）ｄ、（３８５０±３２８）ｄ、（３０６７ ±３５１）ｄ；病理学检查符合人脑胶质瘤细胞的形态学特征 和免疫表型；免疫组化 ＧＦＡＰ和 Ｓ１００蛋白呈阳性表达。结 论 立体定向脑内定量注射 Ｕ８７ＭＧ细胞制备的人脑胶质 瘤裸鼠原位移植模型成瘤率高、颅内生长稳定、颅外远隔部 位转移率低，与人脑胶质瘤病理学及形态学特征相似，能为 研究胶质瘤的发生、发病机制、生物学特性以及探寻有效的 治疗措施提供可靠的动物模型。
中国药理学通报 ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ ２０１８Ｍａｙ；３４（５）：７３５～９
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网络出版时间：２０１８－４－１２９：１３ 网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．Ｒ．２０１８０４１１．１０３３．０５６．ｈｔｍｌ