松茸多糖超声提取物抗氧化活性研究

２ ２ 对 超 氧 阴 离 子 自 由 基 的 清 除 作 用 ．
的吸光 度 。空 白 管 以 １ ０ ｍＬ缓 冲 溶 液 代 替 样 品 溶 ． 液 。按式 （ ） 算 超氧 阴离 子 自由基 清 除率 ： １计
清 除 率 一垡 — 鲎 ×ｌＯ Ａ Ｏ％
ｎ ０
松 茸 多糖对 光 照核 黄素 产生超 氧阴离 子 自由基 的
冲溶 液 ， 冰浴 振荡 ） 加 入 ｐ 值 ７ ４的 Ｐ Ｓ缓 冲溶 液 ， Ｈ ． Ｂ １ ０ｍＬ、 同浓度 的 松茸 多糖 溶 液 或 茶 多 酚溶 液 １ ０ ． 不 ．
ｍＬ ２ ５ｍｍｏ ・ Ｅ ＴＡ Ｆ （Ｉ ． 、 ． ｜ Ｌ Ｄ － ｅ Ｉ）１ ０ｍＬ， 匀 后 于 混
精 确 称取 ２ ． ， 蒸馏 水溶 解 ， 容 至 ５ ０ ０ｍＬ ０ ０ｍｇ 加 定 ０ ． ，
清除率 一
ｎ ，１
×１０ ０
（） ２
得葡 萄糖 标 准 溶 液 。分 别 吸取 ０ ０ｍＬ、 ． ． ０ ２ ｍＬ、 ． ０４
ｍ Ｌ、 ６ ｍ Ｉ ０ Ｌ 、 １ ０ ｍ Ｌ 、 １ ２ ｍ Ｌ 、 ．４ ｍ Ｌ 、 ． ０． … ８ ｍ ． ． １ １ ６
松 茸 多糖 超 声 提 取 物 抗 氧 化 活 性研 究
张 娅 ， 宝 才 项 朋 志 。 。李 。 高云 涛‘ （． １ 昆明理 工 大学生命 科 学与技 术 学 院 ， 南 昆 明 ６ ０ ９ ；． 南省 中 医中药研 究 院， 南 昆明 ６ ０ ２ ； 云 ５０ ３ ２ 云 云 ５ ２ ３
松茸 （ ｒｃ ｏｏ ｔｕａ ｅ 在 真 菌分 类 上 属 担 Ｔ ｉ ｌｍａｍａｓｔｋ ） ｈ
碎机 ； 照箱 （ ５ｃ 光 ３ ｍ×３ ｍ×２ ｍ， 源为纯 稀 土节 ０ｃ ５ｃ 光
子菌 亚 门 、 菌纲 、 菌 目、 菇 科 、 菇 属 ， 产 于 巴 层 伞 蘑 蘑 原 西， 又名 “ 巴西 蘑 菇 ”１。多 糖 是 松 茸 的 重 要 活 性 成 ［ ］
能灯 ， 功率 ２ ８ｗ） 自制 。 灯 ×１ ， １ ２ 松茸 多糖 的提 取 ． 采 用超 声 波辅 助水 提 、 级 醇沉 纯 化 的 方 法 提取 分
松茸 多糖 ， 流程 如 下 ：
分 ＿ ， 量 药理 及 临床 研 究 证 实 ， 糖 有 调 节 免疫 、 ２ 大 ］ 多
ａｎ迅 ｒｉ， 速冷 却 至 室 温 ， ４ ０ ｎ 处 测 吸 光 度 。 以蒸 于 ９ ｍ 馏水 为 空 白。以葡 萄糖 浓度 ｃ ｍｇ・ｍＬ ） 横 坐标 、 （ 为 吸光 度 （ 为纵坐 标 ， Ａ） 绘制 标 准 曲线 ， 合 线 性 回归 方 拟
程为 ： Ａ一 ７ ７ ９ ｃ ． ０ ９ Ｒ一０ ９ ９ ７ 。 ． ３ ｌ 一０ ０ ３ （ ． ９ ６ ）
取 １ ０ｍＬ多 糖 溶 液 ， 标 准 曲线 的 方 法 测 定 样 。 依 品 中多 糖含 量 。
１ ４ 抗 氧 化 活 性 的 测 定 ．
处测 定 吸光 度 （ ， Ｐ Ｓ缓 冲溶液 调零 ， 白管 用 Ａ样 ） 用 Ｂ 空 Ｐ Ｓ缓 冲溶液 代替 样 品溶液 测 吸光度 （ 。按式 （ ） Ｂ Ａ。 ） ３ 计 算脂 质过 氧化 抑制 率 ：
＾ ， ＾ ，
１ ４ １ 多糖溶 液 的配 制 ．．
称 取精 制 多糖 ， 临用 前 用蒸馏 水 配 制成 １ ０ｍｇ・ ０ ｍＩ 溶液 ， 稀 释至不 同浓度 进行 抗 氧化实 验 。 并 １ ４ ２ 超 氧 阴离子 自由基 的产 生及 清 除活性 测定 ．．
抑制率 一
向脱 蛋 白后 的 多糖 溶 液 中 加 人 ３ Ｂ ９ 乙醇 ， Ｖ ５
沉 淀用 乙醇 、 酮及 乙醚 反 复 洗 涤 ， 丙 经抽 滤 、 超低 温 在
司 ； ３ ２ Ａ 型超 声 波 清 洗 器 ， 津 奥 特 赛 恩 斯 仪 器 ＡＳ １ ０ 天 有 限公 司 ； 旋转 蒸发 仪 ， 海 亚 荣 生 化 仪 器 厂 ； 物 粉 上 植
羟 基 自由基 诱 发 卵磷 脂 脂 质 过 氧 化 损 伤 的 抑 制 作 用 。 结 果表 明 ， 茸 多糖 具 有 良好 的 抗 氧 化 活 性 ， 松 与茶 多 酚相 近 。
关键词 ： 茸 ； 松 多糖 ； 氧 化 抗 中图 分 类 号 ： ２ ．２ ０ ６ ９ １ 文 献标 识 码 ： Ａ 文章 编 号 ：６２ ５ ２ （ ０ １０ —０ ７ —０ １ ７ — ４ ５ ２ １） ９ ０ ５ ３
清除作 用 见 图 １ 。
（） １
式 中 ： 为 空 白管 的 吸光 度 ； Ａ。 Ａ样为 样 品管 的吸 光
１ ２ １ 样 品处 理 ．．
研 究表 明 ， 松茸 多糖 的抗 肿瘤 活性 远远 高 于灵芝 ， 被 在
研究的 １ ５种具 有抗 癌活 性 的食用 菌 中位 居首位 。 ］
作 者 采用超 声 波 辅 助 水 提 、 级 醇 沉 纯 化 嘲 的 ｊ分
方 法制 得松 茸 多糖 ， 松 茸 多糖 抗 氧化 活 性 进 行 测定 对
１ ４ ４ 脂质 过氧 化抑 制 活性 的测定 ．． 以 卵磷脂 脂 质 体 膜 细胞 的 脂 质口 测 定 脂 质 过 氧化 抑制 活性 。取 ０ ５ｍＬ卵磷 脂溶 液 （ ２ ０ｍｇ卵 ． 用 ０ 磷脂 溶解 于 ３ ０ ｍｍｏ ・Ｌ １ Ｈ 值 ７ ４Ｐ Ｓ缓 ０ｍＬ １ ｌ － ｐ ． Ｂ
为 ５．２ 。 ４ ３
用 ０ ０ ｏ ・Ｌ ｐ 值 ７ ４的 Ｐ Ｓ缓 冲 溶 液 ， ． ５ｔ ｌ Ｈ ｏ ． Ｂ 配制
１６ ． ７× １ ｔｏ ０ ｏ ｌ・Ｌ 核 黄 素 、 ． １ ｔｏ ・Ｌ 蛋 氨 ０ ０ ｌ ｏ 酸 、． ×１ ｔｏ ・ 松 茸 多 糖 提取 液 （ 品 ） 茶 ９２ ０ ｏ ｌ Ｌ 样 或 多酚溶 液 （ 照 ） １ ０ ｍＬ， 于 光 照 箱 中 光 照 ３ 对 各 ． 置 Ｏ ａ ｎ取 ｒｉ ， 出后 以缓 冲溶 液为 参 比于 ５ ０ｎ ｌ 测 定 溶 液 ６ ｌ 处 Ｔ
亿 与 生 物 Ｚ 程 ２１， １ ８ ｏ ０１ ｏ ２ Ｎ． Ｖ ． ９
Ｃ ｈ ｍ ｉｔｙ ＆ Ｂｉｅ ｇ ｎ ｒ ｇ ｅ ｓｒ ｏ ｎ ｉｅｅ ｉ ｎ
ｄ ｉ１ ． ９ ９ ｊ ｉｓ ． ６ ２ ５ ２ ． ０ １ ０ ． ２ ｏ ： ０ ３ ６ ／．ｓ ｎ １ ７ — ４ ５ ２ １ ． ９ ０ ０
红花红、 Ｄ Ｅ ＴＡ－ ｅ（ Ｉ） Ｈ。 样 品 溶 液 ， Ｆ Ｉ 、 Ｏ 、 用 １０ ．
多 糖含 量 的测定 采用 硫 酸 一苯 酚法Ｌ 。 ９ ］
ｍＩ Ｂ Ｓ缓 冲溶 液 调零 。按 式 （ ） Ｐ ２ 计算 羟基 自由基 清 除
率：
Ａ — Ａ
标 准 曲线 的绘制 ： 葡 萄糖 于 １ ５℃ 干燥 至恒 重 ， 取 ０
ｍＩ 的葡 萄糖 标 准溶 液 ， 于 １ ． 置 ０ ０ｍＬ试管 中 ， 加水 补
足 至 ２ ０ｍＬ， 入 ６ 苯 酚 １ ０ ｍＩ 摇 匀 ， 速 滴 加 ． 加 ． ， 迅
浓硫 酸 ５ ０ｍＬ， 温 放 置 ５ ｒｉ ， 沸 水 浴 中加 热 ２ ． 室 ｎ置 ａ Ｏ
粗 多 糖 加蒸 馏 水 复 溶后 用 Ｓ ｖ ｇ试 剂 （ 仿 ：正 ｅａ 氯 丁醇 一５： ） １ 除蛋 白 ， 续 操 作 多次 ， 到完 全 脱 除 蛋 连 直
白为 止［ 。 ６ ］
析纯 ， 验用水 为 二次蒸 馏 水 。 实
７０ ２ ０型 可见 分光 光度 计 ， 尼 柯 上 海仪 器 有 限 公 尤
抗癌 、 抗肥 胖 、 制 血 糖 、 胆 固醇 、 血 脂 等 生 理 功 控 降 降
能 ， 为绿 色 生 物 医药 产 品 具 有 广 阔 的 市 场 前 景 ］ 作 。
松 茸洗 净一 称 重一粉 碎一 超声 提 取一抽 滤 除渣一 减 压浓 缩一 乙醇 沉 淀一真 空 干燥一 粗 多糖一 复溶 一脱 蛋 白一 离心 分离 一 乙醇沉 淀一 真空 干燥 一精 制 多糖
并 与茶 多 酚进行 比较 ， 为松 茸 的开 发 利 用 提 供科 学 拟 依据。
松茸洗净 ， 晾干 ， 称重 ， 用植物粉碎机粉碎至匀浆状 。
１ ２ ２ 超声 提取 ．．
松 茸浆 置 于 ５０ ｍＬ锥 形 瓶 中加 入 ２ ０ｍＬ蒸 馏 ０ ５
水 ， 于超声 波清 洗器 中浸 提 ３ ｉ ， 置 ０ｒ ｎ 减压 抽 滤 ， 渣 ａ 滤
１２ ３ 多糖 精制 ．． 向浓 缩后 的 多 糖 溶 液 中 加 入 ３Ｂ ５ 乙 醇 ， Ｖ ９ 经
抽滤 、 空干燥 后 得粗 多糖 。 真
比妥 酸 （ Ｂ ， 氯 乙酸 （ Ｃ ， 酚 ， 萄糖 ， 酸 Ｔ Ａ） 三 Ｔ Ａ） 苯 葡 磷
盐 （ Ｂ ） 冲 溶 液 ， 多 酚 （７ ） Ｐ Ｓ缓 茶 ９ 。所 用 试 剂 均 为 分
收 稿 日期 ：０ ｌ Ｏ — ２ ２１— ６ ｌ
冰箱 中 ２次冻 干后 得 到精 制 松 茸 多 糖 提 取 物 ， 于棕 置
作 者 简 介 ： ．１ ８ 一） 女 ， 南 巧 家人 ， 士研 究 生 ， 验 师 ， 究方 向 ： 物 化 学 与 药物 分 析 ， － ｉ ３ ２０ ２ １ ｑ ．ｏ ｇ （９１ ， 云 ￣ 硕 检 研 药 Ｅ ｍａｌ ５ ５ ６ ２ ＠ ｑ ｃｍ ：
×１ ０ ０
（） ３
采 用 光照 核黄 素法 ［ １
产 生超 氧 阴离 子 自由基 。
２ 结 果 与讨 论
２ １ 松茸 多糖 的提 取率 ．
利 用超 声波 辅 助水提 及 醇沉法 从 松茸 中提 取可 溶
性 多糖 ， 糖 提 取 率 达 到 ５ １ ％， 取 物 中 多 糖 含 量 多 ．０ 提
３ ７℃ 水 浴 中反 应 ４ ｉ ， 加 入 ２ （ 量 浓 度 ） ５ｒ ｎ 再 ａ ８ 质 的 ＴＣ ． Ａ ２ ０ｍＬ、１ （ 质量 浓 度 ） Ｔ Ａ １ ０ ｍＩ， 匀 的 Ｂ ． 混 后 置于 １ ０℃ 沸水 浴 中加热 １ ｎ 冷却 后 于 ５ ２ｎ ０ ０ｍｉ ， ３ ｍ
ｌ 实 验
１ １ 材 料 、 剂 与仪 器 ． 试
在相 同条件 下重 复浸 提 ３次 ， 并滤 液 ， 合 在真 空旋转 蒸
发器 中浓 缩 。
松茸 为 鲜 品 ， 自云南 丽 江 。 采
核 黄素 （ 、 ＶＢ ） 氯化 硝 基 四氮唑 兰 （ Ｔ） Ｃ ｅ ＮＢ ， ｈ ｍ— Ｂｓ ａｅ公 司 ； 红花 红 （ ａｒｎｎ ， 氨 酸 ，一 代 巴 番 Ｓ ｆａ ｉｅＴ） 蛋 ２硫
张
娅 等 ： 茸 多糖 超 声 提 取 物 抗 氧 化 活 性 研 究 ／ ０ １年 １ 松 ２１ １ ９期 １
色 瓶 中 ， ４℃ 保 存 。 于 １ ３ 多 糖 含 量 的 测 定 ．
和 样 品 溶 液 测 定 吸 光 度 （ ， ３ ５ｍＬ蒸 馏 水 代 替 番 Ａ） 用 ．
３ 云 南国防 工业职 业技 术 学 院 ， 南 昆 明 ６ ０ ２ ； ． 云 ５ ２ ３ ４ 国家 民委 一教 育部 共 建 民族 药资 源化 学重 点 实验 室 ， 南 昆明 ６ ０ ０ ） ． 云 ５ ５ ０
摘 要 ： 用 超 声 波 辅 助 水 提 及 醇 沉 法 从 松 茸 中提 取 可溶 性 多糖 ， 糖 提 取 率 达 到 ５ １ ， 取 物 中 多糖 含 量 为 利 多 ．Ｏ 提 ５ ． ２ 。研 究 了松 茸 多糖 提 取 物 对 Ｆ ｎｏ ４ ３ ｅｔｎ反 应 产 生 羟 基 自由基 、 照 核 黄 素 产 生 超 氧 阴 离子 自 由基 的 清 除作 用 及 对 光