慢性铅中毒对大鼠脑神经细胞caspase家族的影响
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中（ 、低（ 剂 量组 。Ａ 组大 鼠 自由饮 用 双 蒸水 ， Ｃ） Ｄ）
女 日期】 ０ １１ —０ 稿 ２ １ －０２ ［ 基金项 目］ 湖北省 自然科学基金（０ ０ Ｄ ０ ０ ２１Ｃ Ｚ ３）
Ｂ、Ｃ、Ｄ 组 大 鼠分 别 自由饮用 ２ １ ． ｇＬ醋 、 、０５ ／ 酸 铅水溶 液 。染毒 ６ ０ｄ后， 脱 臼处死 所有 大 鼠， 颈椎 取 出脑 组 织 ，冷 生 理 盐水 洗 净 。高 渗裂 解 液 制 备
Ｆ ｂ２ １．２１ ｅ ． ２３ （） ０
实验动物与比较 医学 Ｌ ｂ ｒｔｒ ｉ ｌ ｎ ｏ ａａｖ ｄｃ ｅ ａ ｏａ ｙ ｍａａ ｄＣ ｍｐｒｔ ｅ ｏ Ａｎ ｉ Ｍｅ ｉｎ ｉ
１ ５
注： Ａ组 比较， ＜ 。５ ＜ ．１…Ｐ ００ １ 表 中数据均为每克脑组织 蛋白的含量 与 Ｐ ００ ， ００ ， ＜ ． ； Ｐ ０
前 ，就 表现 出行 为功 能 的障 碍 ，如 学 习 记忆 行 为
１ 材 料 与方 法
１１ 动物 ．
雄性 Ｓ Ｆ级 Ｗｉ ａ 大 鼠， ０ 龄 ， ０ Ｐ ｓｒ ｔ ｌ ２ ０± ２ ， ０ｇ
功 能损 害ｉ。因此 ，铅对 机 体神经 心理 及行 为 功能 １ 】
的损 害 越 来 越 引起 人 们 的关 注 。 大 量 研 究 表 明 ， 细 胞凋亡 的调控 机制 十分复 杂 。根据 引起细胞 死亡
ｃｓ ａｅ ａｐ ｓ 家族 的影 响
刁 波， 胡 戴， 周 芳， 张 宜
（ 广州军区武汉总医院医学实验科， 武汉 ４０ ７ ） ３ ００
【 摘要】 目的 研究不同浓度醋酸铅染毒对大鼠脑细胞 ｃｓａ 家族表达的影响，探讨铅中毒诱导 ａ ｓ ｐｅ 脑神经细胞凋亡的可能机制。方法 ４ 只 Ｗｉａ 大鼠随机分 为４ 正常组（ ０ ｓｒ ｔ 组： 双蒸水，Ａ组） ，高
１ ％ 脑组织 匀 浆液， ０ 离心 取上清 液 ， 检测 蛋 白浓度 。
［ 作者简介】刁波（９ ４）男， １８ 一， 研究生在读， 从事神经 生物学
研 究 。 － ｉ ｄｉ ｏ １３ ｏ Ｅｍａ ：ｐｔ ＠ ６ ． ｍ ｌ ａ ｃ ［ 讯作者】 通 张 宜 ， — ｉ ｈ ｐｚ ＠ｔｍ． ｍ Ｅ ｍａ ： ｂ ｉ ｌ ｙ ｏ ｃ ｏ
１４ 脑组 织 中铅水 平 的测 定 ． 取 部 分 脑 组 织 加 入 混合 酸 进 行湿 法 消 化 ，用 ０５ｍｏ／ ． ｌ ＨＮＯ 溶解 残渣 ，定容 ， 墨 炉原 子吸 收 Ｌ 石 分光光度法测铅 含量 。 １５ 脑组 织 中 ｃ ｓ ａ ｅ 家族 蛋 白含量 的测 定 ． ａｐ ｓｓ 检 测采 用 碧 云 天 试剂 盒 ，取 待 测 样 品 １ ｌ ０ｕ，
ｃｓａｅ９ 白的含量 。结果 与 Ａ组 大鼠比较 ，随染铅剂量增加 Ｂ、 Ｄ组 大鼠脑组织 中 ｃｓａ ． 、 ａｐｓ． 蛋 Ｃ、 ａｐｓ ３ ｅ
ｃｓａｅ８ ａｐ ｓ一蛋 白含量 显著增 高 （ ＜ ． １ ＜ ．１ Ｐ ００ ，并 出现一 定的 浓度依 赖 性 。 ａｐｓ．、ｃｓａｅ９ Ｐ ００ 、Ｐ ００ 、 ＜ ． ０ ５）
铅 浓度 组（ ／ ２ｇＬ，Ｂ组 ） 中铅 浓度 组（ ｇＬ，Ｃ组 ） 铅 浓度 组（．ｇＬ，Ｄ组） ， １／ ，低 ０５ ／ ，各组 大鼠分别 自 由饮 用不 同浓度 的 醋酸铅 水溶 液 ２ 月； 个 分光 光度 法检 测脑组 织 匀浆液 中 ｃｓａｅ３ ａｐ ｓ一、 ａｐ ｓ．、ｃ ｓａｅ８
醋 酸铅 （ ＡＲ） 为上 海 国药 集 团试 剂 有 限公 刊 生
产 ； ａｐ ｓ．、ｃｓａｅ８ ａｐ ｓ． ｃｓａｅ３ ａｐ ｓ一、ｃｓａｅ９活 性检 测试 剂盒 为碧 云天 生物 技 术研 究所 提供 。
１３ 实验动物 分组 及处 理 ．
４ 只大鼠随机分为 ４ 正常组（ ）染铅高（） ０ 组， Ａ， Ｂ、
结论
铅 中毒能明显增加 ｃｓａｅ ａｐｓ 家族蛋白的表达，诱导大鼠脑神经细胞凋亡。
【 关键词】 中毒； 铅 脑神经细胞；ａｐｓ 家族 ｃｓａ ｅ
［ 分类号 ］ ５３ 【 献标识码 ］ ［ 中图 Ｑ９．３ 文 Ａ 文章编 号］ ６４５ １（０ ２０ ．０ ４０ １７ —８７２ １）１０ １．３
由湖 北省 医 学实 验动 物 中心 提供 ｆＣｘＫ（ ）０ ８ Ｓ 鄂 ２０ ．
０ ０４ ห้องสมุดไป่ตู้ ０ ］
１２ 试剂 ．
的刺 激 不 同 ，有 多 种 途 径 导致 细 胞 凋 亡 。 目前 认 为成熟 神经细 胞凋亡 主要有 胞外死 亡受体 诱导和 胞 内线粒 体损伤 两条途 经 ，通过 相继激 活半胱氨 酸基 天 ｆ－氨 酸特 异 性 蛋 白酶 （ａｐ ｓｓ家族 ，并通 过 １． ｇ － － ｃ ｓａｅ） 它 们 之 间 的级联 作 用 调控 细 胞 凋亡 【扪 ｚ 。本 实验 应 ，
铅 是 一 种 用 途广 泛 的重 金 属 元 素 ，应 用 于 印 刷 、造 船 、汽 油 、油 漆 、蓄 电池 生产 等 工业 ，
用醋酸 铅复制 铅 中毒 动物模 型 ，通过 观察铅 中毒对 ｃ ｓａｅ 家族 的影 响 ，并对铅 中毒 损 害中枢 神经 细 ａｐ ｓｓ 胞 的机 制 进 行 探 讨 。
同时 也造 成 环 境 危 害 。 目前 严 重 铅 中 毒 已罕 见 ，
低 、 中度 铅 中毒 现 象 大 量 存 在 。而无 明显 临床 症
状 、 体 征 的 亚 临床 型 铅 中毒 现 象 最 为普 遍 。神 经 行 为毒理 学研究 证 明，人和 动物长 期接触低 剂量 的 环 境毒物 时 ，常在 出现 临床 症状和 生化指 标改变 之
１ ４
实验动物与 比较医学 Ｌ ｂ ｒｔ ｙＡ ｉ ｌ ｎ ｏ ａａｉｅ ｄ ｉｅ ａｏａ ｒ ｎｍａ ａｄＣ ｍｐｒｔ ｉ ｎ ｏ ｖ Ｍｅ ｃ
ｄ ｉ ０３ ６ ￣ｉ ｎ１７ －８ ７２ １ ．１ ０ ｏ： ．９ ９ ．ｓ ． ４５ １ ． ２０ ． ３ １ ｓ ６ ０ ０
慢性铅 中毒对大 鼠脑神经细胞
女 日期】 ０ １１ —０ 稿 ２ １ －０２ ［ 基金项 目］ 湖北省 自然科学基金（０ ０ Ｄ ０ ０ ２１Ｃ Ｚ ３）
Ｂ、Ｃ、Ｄ 组 大 鼠分 别 自由饮用 ２ １ ． ｇＬ醋 、 、０５ ／ 酸 铅水溶 液 。染毒 ６ ０ｄ后， 脱 臼处死 所有 大 鼠， 颈椎 取 出脑 组 织 ，冷 生 理 盐水 洗 净 。高 渗裂 解 液 制 备
Ｆ ｂ２ １．２１ ｅ ． ２３ （） ０
实验动物与比较 医学 Ｌ ｂ ｒｔｒ ｉ ｌ ｎ ｏ ａａｖ ｄｃ ｅ ａ ｏａ ｙ ｍａａ ｄＣ ｍｐｒｔ ｅ ｏ Ａｎ ｉ Ｍｅ ｉｎ ｉ
１ ５
注： Ａ组 比较， ＜ 。５ ＜ ．１…Ｐ ００ １ 表 中数据均为每克脑组织 蛋白的含量 与 Ｐ ００ ， ００ ， ＜ ． ； Ｐ ０
前 ，就 表现 出行 为功 能 的障 碍 ，如 学 习 记忆 行 为
１ 材 料 与方 法
１１ 动物 ．
雄性 Ｓ Ｆ级 Ｗｉ ａ 大 鼠， ０ 龄 ， ０ Ｐ ｓｒ ｔ ｌ ２ ０± ２ ， ０ｇ
功 能损 害ｉ。因此 ，铅对 机 体神经 心理 及行 为 功能 １ 】
的损 害 越 来 越 引起 人 们 的关 注 。 大 量 研 究 表 明 ， 细 胞凋亡 的调控 机制 十分复 杂 。根据 引起细胞 死亡
ｃｓ ａｅ ａｐ ｓ 家族 的影 响
刁 波， 胡 戴， 周 芳， 张 宜
（ 广州军区武汉总医院医学实验科， 武汉 ４０ ７ ） ３ ００
【 摘要】 目的 研究不同浓度醋酸铅染毒对大鼠脑细胞 ｃｓａ 家族表达的影响，探讨铅中毒诱导 ａ ｓ ｐｅ 脑神经细胞凋亡的可能机制。方法 ４ 只 Ｗｉａ 大鼠随机分 为４ 正常组（ ０ ｓｒ ｔ 组： 双蒸水，Ａ组） ，高
１ ％ 脑组织 匀 浆液， ０ 离心 取上清 液 ， 检测 蛋 白浓度 。
［ 作者简介】刁波（９ ４）男， １８ 一， 研究生在读， 从事神经 生物学
研 究 。 － ｉ ｄｉ ｏ １３ ｏ Ｅｍａ ：ｐｔ ＠ ６ ． ｍ ｌ ａ ｃ ［ 讯作者】 通 张 宜 ， — ｉ ｈ ｐｚ ＠ｔｍ． ｍ Ｅ ｍａ ： ｂ ｉ ｌ ｙ ｏ ｃ ｏ
１４ 脑组 织 中铅水 平 的测 定 ． 取 部 分 脑 组 织 加 入 混合 酸 进 行湿 法 消 化 ，用 ０５ｍｏ／ ． ｌ ＨＮＯ 溶解 残渣 ，定容 ， 墨 炉原 子吸 收 Ｌ 石 分光光度法测铅 含量 。 １５ 脑组 织 中 ｃ ｓ ａ ｅ 家族 蛋 白含量 的测 定 ． ａｐ ｓｓ 检 测采 用 碧 云 天 试剂 盒 ，取 待 测 样 品 １ ｌ ０ｕ，
ｃｓａｅ９ 白的含量 。结果 与 Ａ组 大鼠比较 ，随染铅剂量增加 Ｂ、 Ｄ组 大鼠脑组织 中 ｃｓａ ． 、 ａｐｓ． 蛋 Ｃ、 ａｐｓ ３ ｅ
ｃｓａｅ８ ａｐ ｓ一蛋 白含量 显著增 高 （ ＜ ． １ ＜ ．１ Ｐ ００ ，并 出现一 定的 浓度依 赖 性 。 ａｐｓ．、ｃｓａｅ９ Ｐ ００ 、Ｐ ００ 、 ＜ ． ０ ５）
铅 浓度 组（ ／ ２ｇＬ，Ｂ组 ） 中铅 浓度 组（ ｇＬ，Ｃ组 ） 铅 浓度 组（．ｇＬ，Ｄ组） ， １／ ，低 ０５ ／ ，各组 大鼠分别 自 由饮 用不 同浓度 的 醋酸铅 水溶 液 ２ 月； 个 分光 光度 法检 测脑组 织 匀浆液 中 ｃｓａｅ３ ａｐ ｓ一、 ａｐ ｓ．、ｃ ｓａｅ８
醋 酸铅 （ ＡＲ） 为上 海 国药 集 团试 剂 有 限公 刊 生
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１３ 实验动物 分组 及处 理 ．
４ 只大鼠随机分为 ４ 正常组（ ）染铅高（） ０ 组， Ａ， Ｂ、
结论
铅 中毒能明显增加 ｃｓａｅ ａｐｓ 家族蛋白的表达，诱导大鼠脑神经细胞凋亡。
【 关键词】 中毒； 铅 脑神经细胞；ａｐｓ 家族 ｃｓａ ｅ
［ 分类号 ］ ５３ 【 献标识码 ］ ［ 中图 Ｑ９．３ 文 Ａ 文章编 号］ ６４５ １（０ ２０ ．０ ４０ １７ —８７２ １）１０ １．３
由湖 北省 医 学实 验动 物 中心 提供 ｆＣｘＫ（ ）０ ８ Ｓ 鄂 ２０ ．
０ ０４ ห้องสมุดไป่ตู้ ０ ］
１２ 试剂 ．
的刺 激 不 同 ，有 多 种 途 径 导致 细 胞 凋 亡 。 目前 认 为成熟 神经细 胞凋亡 主要有 胞外死 亡受体 诱导和 胞 内线粒 体损伤 两条途 经 ，通过 相继激 活半胱氨 酸基 天 ｆ－氨 酸特 异 性 蛋 白酶 （ａｐ ｓｓ家族 ，并通 过 １． ｇ － － ｃ ｓａｅ） 它 们 之 间 的级联 作 用 调控 细 胞 凋亡 【扪 ｚ 。本 实验 应 ，
铅 是 一 种 用 途广 泛 的重 金 属 元 素 ，应 用 于 印 刷 、造 船 、汽 油 、油 漆 、蓄 电池 生产 等 工业 ，
用醋酸 铅复制 铅 中毒 动物模 型 ，通过 观察铅 中毒对 ｃ ｓａｅ 家族 的影 响 ，并对铅 中毒 损 害中枢 神经 细 ａｐ ｓｓ 胞 的机 制 进 行 探 讨 。
同时 也造 成 环 境 危 害 。 目前 严 重 铅 中 毒 已罕 见 ，
低 、 中度 铅 中毒 现 象 大 量 存 在 。而无 明显 临床 症
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实验动物与 比较医学 Ｌ ｂ ｒｔ ｙＡ ｉ ｌ ｎ ｏ ａａｉｅ ｄ ｉｅ ａｏａ ｒ ｎｍａ ａｄＣ ｍｐｒｔ ｉ ｎ ｏ ｖ Ｍｅ ｃ
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慢性铅 中毒对大 鼠脑神经细胞