组织培养实验设计-学生

组织培养大实验——实验设计

组织培养操作的一般流程为：

1）准备工作：玻璃器皿等组织培养所用的东西的洗涤

2）培养基母液的配制，培养基的配制和灭菌

3）接种室及用具消毒 4）材料灭菌：70％酒精、氯化汞

5）接种 6）无菌条件下进行培养

整个实验分三部分进行

实验一.组培诱导不同器官发生（一）

要求设计的实验内容：

1．检索并查阅资料，针对不同的外植体（不同植物的不同部位：根，茎，叶，种子或花药）设计选用不同的培养基。

2．设计能够诱导外植体产生愈伤组织的不同激素比例。

注意：设计时，请考虑植物材料是否较易获得，有无培养前例等，可提高实验的成功率。

实验二.组培诱导不同器官发生（二）

要求设计的实验内容：

1．检索并查阅资料，针对不同外植体，设计不同消毒灭菌的方法。不同的外植体应该选用哪一种或哪些消毒剂的组合，消毒处理时间，无菌水清洗次数等是这个实验成功的关键因素。因此要求学生设计针对不同外植体的不同消毒灭菌的方法。不同的消毒剂对植物不同的部位的影响也有一定的区别。因此根据外植体的不同选择使用适当的消毒剂。

（1）选用的消毒剂不应该对植物组织造成破坏，又能够使达到消毒的目的。

（2）消毒时间的控制：时间过长可能会导致植物外植体的损害，时间短可能会造成消毒处理不彻底而最终整个培养基污染，培养失败。因此学生针对不同的外植

体选择设计的不同的消毒剂和消毒处理时间对整个实验的成功也是一个重要的

环节。

2．在植物组织培养中温度、光照、湿度等各种环境条件， PH值、渗透压等各种化学环境条件都会影响组织培养育苗的生长和发育。因此针对不同或较特殊的植物需要设计培养条件。注意事项：

（1）对外植体的要求：用胡萝卜根作外植体时，多用其根部。用丽格海棠作外植体时，可取它的嫩叶和嫩茎。

（2）外植体的制备：在无菌条件下，将消毒过的实验材料切成小块，制备外植体。例如，胡萝卜根的制备方法是：用解剖刀将小段的胡萝卜根切去四周，留下中间带形成层的部分，切成1 cm×1 cm的小方片。又如，丽格海棠的制备方法是：切去叶柄，将叶片从叶脉处剪开，再切成3～4 mm2的小块；嫩茎需切取两个节之间的节间部分，长约1 cm。切取的外植体要放入无菌培养皿中。

实验三.组培诱导不同器官发生（三）

要求设计内容：

1、针对不同外植体的脱分化，再分化情况，设计更加合理的培养基激素配比以供继代培养。2．或针对不同外植体的脱分化，再分化情况，设计诱导器官发生的培养基。

脱分化培养基和分化培养基的主要区别在于激素的成分和含量上，说明各种激素的出现

和含量改变对于植物组织分化起着重要的作用。许多植物从脱分化到分化过程对培养基里激素成份要求严格、有的还要进行液体培养才能重新分化。例如，胡萝卜贮藏根组织，是最早用于研究植物细胞的全能性的材料，至今仍是研究脱分化的好材料，但当胡萝卜组织形成愈伤组织之后，若要它们重新分化，必须经过振荡培养和采用合适的培养基，条件较为复杂。另一些植物，例如烟草的根、茎、叶和甘蓝的花茎等容易进行脱分化和分化培养，不需液体振荡培养可以在固体培养基上直接完成。可根据这个原理和所观察的外植体脱分化的实际情况，可设计更加合理的培养基激素配比。

实验分配和安排：根据前期文献检索查阅，以格丽海棠叶片和胡萝卜根作为两种不同的外植体，按照学号每2人一组，依次取相应材料为外植体（即第一组所取外植体为叶片、第二组为根、第三组为叶片，第四组为根—-----依次类推，设计针对不同外植体为材料的表面消毒灭菌方法（2种）和诱导愈伤及分化的不同激素配比培养基（2种）。