基因工程ppt

单酶切
• 含目的基因的片段和质粒反向连接
1 2 1 1 2 2
结果：目的基因与载体的反向连接，目 的基因则无法表达
单酶切
总结
• 缺点： • 酶切后的载体与目的基因在DNA连接酶作用 下会发生自我连接，加大筛选的工作量。 • 目的基因与载体的反向连接，目的基因则 无法表达。
双酶切
限制酶BamHⅠ： 5’-GGATCC- 3’ 限制酶EcoRⅠ： 5’-GAATTC- 3’
黏性末端
黏性末端
单酶切
小组活动1 用剪刀代替Ecoli限制酶对DNA 片段进行切割 ： 小组活动2 用剪刀代替Ecoli限制酶对质粒 载体进行切割，并完成重组质 粒的连接。
单酶切
目的基因-目的基因连接物
同种限制 酶切割
（自身环化） 载体-载体连接物
一定能表达出 目的基因吗？
目的基因-载体连接物 （目标产物）
• （1）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用_____ 两种限制酶切割百度文库酶切后的载体和目的基因片段。 Bcl I 和Hind III
• 谢谢指导
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提出疑问
• 人教版选修III教科书第1 1页写到：用同一 种限制酶分别切割目的基因与载体。因为 质粒 DNA分子 切割后能产生相同的黏性末端，末端之间 同一种限制酶 能发生碱基互补配对而形成重组 DNA分子。
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DNA连接酶
最佳选择吗？
重组DNA（基因表 达载体）
EcoRⅠ限制酶 识别序列： 5’-GAATTC- 3’
优势：保证目的基因与质粒定向连接
知识点变式
• 限制酶BamHⅠ和BglⅡ是两种常见的工具 酶，它们的识别序列及切割位点依次为 G↓GATCC和A↓GATCT。研究中用BamHⅠ 和BglⅡ分别切割DNA获得目的基因和切割 质粒，并连接得到重组质粒。 试判断正误： • 用两种限制酶分别切割并连接，保证了目 的基因定向插入质粒
双酶切
• 优点：
总结
避免了载体与目的基因发生自我连接，目的
基因与载体的反向连接
课后思考
• 双酶切使用的两种不同的酶切出来的末端 是平末端，是否能保证目的基因与载体定 向连接？ • 即使双酶切能保证目的基因与载体定向连 接，实际操作过程中有什么缺点呢？
江苏高考.2016
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33.（9分）下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶 的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题：
基因工程步骤 的核心 • （1）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用______两种限制酶切割，酶切后 的载体和目的基因片段，通过__________酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质 粒，需将其转入处于__________________态的大肠杆菌。 酶切过程的分 （2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加 _______， 析 平板上长出的菌落，常用PCR鉴定，所用的引物组成为图2中_____________。 （3）若BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序 列为 ，对于该部位，这两种酶 （填“都能”、“都不能”或“只有一种 能”）切开。 （4）若用Sau3A I切图1质粒最多可能获得 种大小不同的DNA片段。
授课人：吴劲松
考纲要求
• 考纲要求： • 1.基因工程的步骤及应用（B）
2012（32），2016（33）
• 2.基因工程的的技术（含PCR技术）（B）
2013（22），2014（23）2011（33）
江苏高考.2016
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33.（9分）下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中标注了相关限制酶 的酶切位点，其中切割位点相同的酶不重复标注。请回答下列问题：