微生物发酵白酒糟的研究

547.43 万 t、2002 年为 543.42 万 t[1]。 2003 年以来年产量明 显增加，达到了 700 万 t 左右。 由于白酒发酵生醇过程中 加入一定比例的谷壳，导致了酒糟内粗纤维含量高、家畜 适口性差、消化率低，严重地影响了酒糟的饲用价值和饲 养效果。 加上酒糟水份大、酸度高、易腐烂变质，不易保管 和运输使酒糟的利用更受限制。 但是白酒糟中含有 7%~ 11%淀粉、5%糖分、8%蛋白质等[2]，营养成分丰富。 目前，酒 糟除极少部分被用于饲料外， 大多数被当作废物抛弃，形 成较大的环境污染压力。 利用微生物发酵的方法处理酒 糟，提高营养价值，发展生物饲料是酒糟利用的有效途径。 Ezeonu[3]曾 报 道 厌 氧 发 酵 的 酒 糟 纤 维 素 和 木 质 素 降 解 率 分 别接近 60％和 40％。 日本大阪市的田金公司在啤酒糟内 加 入 部 分 乳 酸 菌 ，发 酵 后 成 为 牛 的 “上 等 食 品 ”，吃 了 这 种 饲料，牛就可以长出脂肪均匀的“五花上等肉”[4]。 在国内， 蔡治华等[5]用微贮啤酒糟饲喂黑白花奶牛，经过 30 d 的试 验，结果表明：添加微贮啤酒糟的试验组奶牛比添加鲜啤
酒糟是传统的饲料原料，也是数量比较大、来源比较 集中的饲料资源。 一般每产 l kg 白酒将有 l kg 酒糟。 我国 2001—2002 年 期 间 全 国 白 酒 处 于 稳 定 状 态 ，2001 年 为
收 稿 日 期 ：2012-02-27 基 金 项 目 ：贵 州 省 重 大 科 技 专 项 （黔 科 合 重 大 专 项 字[2011]6021-4 号）；贵州省动物疫病与兽医公共卫生重点实验室培育项目（黔科合计 Z 字[2011]4008 号） 作 者 简 介 ：郭 素 环 （1986- ），女 ，在 读 硕 士 生 ，E-mail：susu.923126 @163.com 通 讯 作 者 ：王 开 功 （1959-），男 ，教 授 ，E-mail：kaigongwang@yahoo. com.cn
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酒糟的对照组的日均产乳量提高了 4.43％， 差异显著，乳 脂率提高了 2.34％。 本试验将班图酒香酵母（酵）、枯草芽 孢杆菌（枯）、绿色木霉（木）、嗜酸乳杆菌（乳）这 4 种菌进 行不同组合，发酵以新鲜酒糟、玉米粉及菜籽粕为基质的 原料，为生产酒糟生物饲料提供基础。
1 材料与方法
1.1 试验材料 供试菌种：枯草芽孢杆菌〔Bacillus subtilis (Ehrenberg)
孢杆菌发酵到第 6 d 活菌数最高，有氧发酵的乳+枯组最高，比厌氧发酵高 11.73%。 绿色木霉活菌数均为 0。 经过单因子对比试验
发现绿色木霉不适合发酵白酒糟。
关键词：微生物； 发酵； 白酒糟
中 图 分 类 号 ：TS261.9
文 献 标 识 码 ：A
文 章 编 号 ：1004-874X （2012 ）08-0114-03
十字交叉法进行拮抗试验，采用厌氧和有氧两种方式发酵，辅以单因子对比试验观察绿色木霉生长情况。 结果表明，4 种菌之间不
存在拮抗效应。 有氧发酵比厌氧发酵活菌数含量高，嗜酸乳杆菌和班图酒香酵母发酵第 9 d 的活菌数最高。 嗜酸乳杆菌为有氧发
酵的乳+酵+木组最高，比厌氧发酵高一个数量级。 班图酒香酵母为有氧发酵的乳+酵组最高，比厌氧发酵提高 47.95%。 各组枯草芽
(1.College of Animal Science，Guizhou University，Guiyang 550025， China； 2.Key Laboratory for Amimal Epidemic Disease of Guizhou ，Guiyang 550025， China)
Abstract：The experiment was conducted to get the optimum conditions and combination of the Brettanomyces custersianus, Bacillus subtilis (Ehrenberg) Cohn, Trichoderma viride and Lactobacillus acidophilus for fermentation distiller by using the antagonistic test of cross method under the anaerobic and aerobic fermentation condition. The growth of Trichoderma viride was observed by the single factor experiment. The results showed that there were no antagonist responses between the four kinds of bacteria. The number of living bacteria getting from the aerobic fermentation was higher than anaerobic fermentation, and it could get the highest number on the ninth day for Lactobacillus acidophilus and Brettanomyces custersianus fermentation. The aerobic fermentation group which the combination was Lactobacillus acidophilus with Brettanomyces custersianus and Trichoderma virides got the best result for Lactobacillus acidophilus, which was an order of magnitude higher than the anaerobic fermentation. The aerobic fermentation group which the combination was Lactobacillus acidophilus with Brettanomyces custersianus got the best result for Brettanomyces custersianus, Which was 47.95% higher than the anaerobic fermentation. Each group of Bacillus subtilis (Ehrenberg) Cohn fermentation got the highest number of living bacteria on the sixth day, and the aerobic fermentation group which the combination was Lactobacillus acidophilus with Bacillus subtilis (Ehrenberg) Cohn got the highest number, which was 11.73% higher than anaerobic fermentation. The number of living bacteria for Trichoderma viride was all zero. And we found that Trichoderma viride was not suitable for the fermentation of distiller by the the single factor experiment.
湿酒糟由贵州省青酒集团提供，玉米粉、菜籽粕购于 正大饲料公司。 1.2 试验方法 1.2.1 拮抗试验 将班图酒香酵母、枯草芽孢杆菌、绿色 木霉、嗜酸乳杆菌 4 种菌两两组合分组，将每组的其中一 种菌以 10 mm 的间隔划线接种于普通培养基上， 然后取 另外一种菌垂直划一条直线，30℃培养 24 h， 观察十字交 叉处是否有被抑制而发生菌落萎缩和消失的现象。 1.2.2 酒糟微生物发酵 将班图酒香酵母、枯草芽孢杆菌、 绿色木霉、 嗜酸乳杆菌 4 种菌分别接种一环斜面菌于 100 mL 液体培养基中，150 r/min、30℃摇菌。 摇菌后将 4 种菌搭
Study on microbial fermentation of distiller
GUO Su-huan1，ZHOU Bi-jun1，2，LIU Xin1，LI Xiao-dan1，WEN Ming1，2， CHENG Zhen-tao1，2，WANG Kai-gong1，2，XIA Xian-lin1，2
Key words: microbes；fermentation；distiller
微生物饲料是以微生物、 复合酶为生物饲料发酵剂 菌种，将饲料原料转化为微生物菌体蛋白、生物活性小肽 类氨基酸、微生物活性益生菌、复合酶制剂为一体的生物 发酵饲料。 该产品不但可以弥补常规饲料中容易缺乏的 氨基酸，而且能使其他粗饲料原料营养成分迅速转化，达 到增强消化吸收利用的效果。
Cohn〕、 绿 色 木 霉 （Trichoderma viride）、 嗜 酸 乳 杆 菌 （Lactobacillus acidophilus）、 班 图 酒 香 酵 母 菌 （Brettanomyces custersianus） 均为贵州大学动物科学学院 试验室保存菌种。
嗜酸乳杆菌培养基：MRS 培养基, 班图酒香酵母培养 基：YPD 培养基，绿色木霉培养基：综合马铃薯培养基，枯 草芽孢杆菌培养基：普通肉汤培养基[6]。 酒糟饲料发酵培 养基：湿酒糟 60%、玉米粉 10%、菜籽粕 10%、水 20%，另 每 100 g 培养基加硫酸亚铁 15 mg、硫酸锌 12 mg、硫酸锰 10 mg 、硫酸铜 15 mg、磷酸氢钙 2 g，pH 6.0，0.1 Mpa 条件 高温灭菌 30 min。
配分为 14 组，每组 3 个重复，按相等比例，接种量为 6%[7]的 比例接种到酒糟饲料发酵培养基中。 绿色木霉接种摇菌后 第 36 h 的菌种量达 7.0×1010 CFU/mL，酵母菌接种摇菌后第 32 h 的菌种量达 3.5×1011 CFU/mL，乳酸菌接种摇菌后第 16 h 的菌种量达 2.1×1010 CFU/mL， 枯草芽孢杆菌接种摇菌后 第 22 h 的菌种量达 1.33×1011 CFU/mL。 接种后分别用 2 种 方式发酵：一种完全厌氧，另一种为 1~4 d 有氧、4~12 d 厌 氧，温度都为 30℃。 分别于发酵后的 3、6、9、12 d 取样检测 活菌数，计数方法采用平板计数法[8]。 1.2.3 单因子试验 针对绿色木霉不生长的问题对培 养 基做了单因子对比试验， 变量为酒糟，2 种培养基除了一 个加酒糟另一个不加酒糟外，其他营养成分都相同。 对照 组培养基成分如下：20%马铃薯汁 1 000 mL、 玉米粉 100 g、菜籽粕 100 g、葡萄糖 20 g、磷酸氢二钾 3 g、硫酸镁 1.5 g、硫 胺 素 8 mg，pH6.0；试 验 组 培 养 基 在 对 照 组 的 基 础 上 加酒糟 200 g。 用这 2 种培养基培养绿色木霉， 观察其生 长情况，按 GB 4789.28-2010 采用平板稀释涂布法观察。
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广东农业科学 2012 年第 8 期
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微生物发酵白酒糟的研究
郭素环1， 周碧君1，2， 刘 鑫1， 李晓丹1， 文 明1，2， 程振涛1，2， 王开功1，2， 夏先林1，2 （1.贵州大学动物科学学院，贵州 贵阳 550025；2.贵州省动物疫病研究室，贵州 贵阳 550025）
摘 要：为探索班图酒香酵母（酵）、枯草芽孢杆菌（枯）、绿色木霉（木）、嗜酸乳杆菌（乳）发酵白酒糟的最佳条件及组合，通过