组织学技术(特殊染色)ppt课件
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组织学技术特殊染色
组织学技术特殊染色组织学技术是研究生物学和医学中的一门重要学科，它主要研究各种生物组织的结构、形态和功能。
组织学技术中的特殊染色技术是一种重要的方法，可以帮助科学家们更好地观察和分析组织中的微细结构。
本文将介绍几种常见的组织学技术特殊染色方法。
PAS染色PAS（Periodic Acid-Schiff）染色是一种广泛应用的组织学技术特殊染色方法。
通过对组织样本进行一系列处理，使得组织中的多糖物质、甘油脂和一些蛋白质能够被染色剂染色。
PAS染色对于检测肝细胞内糖原、胆囊内黏液和肾小管内基底膜等有重要意义。
Silver染色Silver染色是一种用于染色神经元轴突和树突的特殊染色方法。
Silver染色通过将组织中的银离子还原为固态银，使得神经元的轴突和树突得以显现。
这种染色方法在神经科学研究中有广泛的应用，可以帮助科学家们观察神经元的形态和连接方式。
Giemsa染色Giemsa染色是一种用于染色细胞核和染色体的特殊染色方法。
Giemsa染色可以使得染色体在显微镜下呈现出黑色、灰色和蓝色的带状条纹，有助于研究染色体的形态和结构。
这种染色方法也常用于检测血液细胞的形态和数量，是临床血液学和病理学中常用的染色方法之一。
Masson染色Masson染色是一种用于染色胶原纤维的特殊染色方法。
Masson染色通过在组织中染色三种颜色的染料，将组织中的胶原纤维、细胞核和细胞质进行区分染色。
这种染色方法在研究纤维组织中的胶原纤维含量和排列方式时，特别有用。
以上介绍了几种常见的组织学技术特殊染色方法，它们在生物学和医学研究中起着重要的作用。
通过这些特殊染色方法，科学家们可以更全面地了解组织结构和功能，为疾病诊断和治疗提供有力的支持。
免疫组织化学染色技术PPT课件
• 抗原（antigen）
1. 定义：是一类在适合条件下能激发机体免疫系 统发生免疫应答，并能与免疫应答产生的效应物 质（抗体和效应细胞）在体内或体外发生特异性 结合反应的物质。抗原具有两种性能：
（1）免疫原性（immunogenicity） 指抗原分子 具有诱导机体产生免疫应答的特性。
（ 2 ） 反 应 原 性 （ reactogenicity ） 指 抗 原 分 子 与 抗体或效应 T 细胞等免疫应答产物发生特异性反 应的特性。
6
2. 抗原的分类
免疫学分类
完全抗原、半抗原 胸腺依赖抗原与非依赖抗原
临床分类
外源性抗原：微生物、花粉等 内源性抗原：隐蔽的自身抗原、肿
瘤相关抗原等 同种异型抗原：人类白细胞抗原、
血型抗原 异嗜性抗原：人与其他动物、植物
等之间存在的共同抗原7
• 抗体（antibody）
1. 定义：机体受到抗原刺激后，通过体液免疫应答， B淋巴细胞活化、增殖，分化为浆细胞，由浆细胞 合成并分泌的仅与该抗原发生特异性反应的球蛋白， 称为抗体。
间接法：是将酶标记在第二抗体或与第二抗体具有亲和 性的某种分子上，检测组织或细胞内的特异性抗原物质。
间接法中所用的一抗是针对组织或细胞中某种抗原的特
异性抗体，多数抗体是由家兔制备的多克隆抗体或由小鼠
制备的单克隆抗体。
10
第二抗体是第一抗体的抗体，所以只要不同的 第一抗体均来自同一种属动物，与标记的第二抗 体结合就能用来显示不同特异性抗原的存在。这 样可避免直接法中标记每一种第一抗体的麻烦。 通过某种技术增加第二抗体上标记酶的含量， 可提高免疫组织化学染色的敏感度。
17
尸检组织 由于取材时一般均已超过死亡后2小时以上，组织有不同
1. 定义：是一类在适合条件下能激发机体免疫系 统发生免疫应答，并能与免疫应答产生的效应物 质（抗体和效应细胞）在体内或体外发生特异性 结合反应的物质。抗原具有两种性能：
（1）免疫原性（immunogenicity） 指抗原分子 具有诱导机体产生免疫应答的特性。
（ 2 ） 反 应 原 性 （ reactogenicity ） 指 抗 原 分 子 与 抗体或效应 T 细胞等免疫应答产物发生特异性反 应的特性。
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2. 抗原的分类
免疫学分类
完全抗原、半抗原 胸腺依赖抗原与非依赖抗原
临床分类
外源性抗原：微生物、花粉等 内源性抗原：隐蔽的自身抗原、肿
瘤相关抗原等 同种异型抗原：人类白细胞抗原、
血型抗原 异嗜性抗原：人与其他动物、植物
等之间存在的共同抗原7
• 抗体（antibody）
1. 定义：机体受到抗原刺激后，通过体液免疫应答， B淋巴细胞活化、增殖，分化为浆细胞，由浆细胞 合成并分泌的仅与该抗原发生特异性反应的球蛋白， 称为抗体。
间接法：是将酶标记在第二抗体或与第二抗体具有亲和 性的某种分子上，检测组织或细胞内的特异性抗原物质。
间接法中所用的一抗是针对组织或细胞中某种抗原的特
异性抗体，多数抗体是由家兔制备的多克隆抗体或由小鼠
制备的单克隆抗体。
10
第二抗体是第一抗体的抗体，所以只要不同的 第一抗体均来自同一种属动物，与标记的第二抗 体结合就能用来显示不同特异性抗原的存在。这 样可避免直接法中标记每一种第一抗体的麻烦。 通过某种技术增加第二抗体上标记酶的含量， 可提高免疫组织化学染色的敏感度。
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尸检组织 由于取材时一般均已超过死亡后2小时以上，组织有不同
组织切片染色技术培训课件
此种方法无需“分化”，例如，卡红染色。
退行性染色：是先把组织浓染过度，超过所需的 程度，然后再用某些溶液脱去多余的染色剂，以 达到适当的深度，并使不应着色的组织细胞脱色。
这个步骤称为“分化”。
组织切片染色技术
10
三、染色原理
直接染色，间接染色和媒染剂
直接染色：染色无需第三种物质参加，染色剂和组织 即可直接结合着色。
3．各种染料试剂一般选用化学纯。各种染料启用新品时 应先试染。配成的染液、试液应盛于有色试剂瓶内，瓶签 应写明名称、含量、配制年月日，顺序保存于避光橱中， 必要者放冰箱内。凡须临用时配制者，配量应适当。
4．染色各步骤所需的时间，常受温度、切片厚度等影响，
可根据镜下观察所见酌情予以调整。
组织切片染色技术
有橘黄G、刚果红、俾士麦棕和许多苏丹类的脂质染色剂。
（4）醌亚胺类：含有两个发色团，一个是印胺基（-N=）、一个 是醌型苯环，如硫堇、美蓝、甲苯胺蓝O、硫酸尼罗蓝、中性红和 碱性藏红花O、焦油紫等。
（5）苯甲烷染料：发色团是醌型苯环，如孔雀缘、浅绿、碱性品 红、酸性品红、结晶紫和甲基缘等。
（6）山叮染料：发色团是醌型苯环，如派罗宁和伊红Y等。
(2)吸收作用：又称溶解学说。
组织吸收染色剂，牢固的结合。 组织的着色与溶液的颜色相同。
组织切片染色技术
6
三、染色原理
(3)吸附作用
是固体物质的特性，即较大的物体能从周围溶液(染 液)中吸附一些小颗粒(化合物或离子)到自身的特性。
细胞中各种蛋白质或胶体有不同的吸附面，因此能选
择性地吸收不同的离子，即某种蛋白质对某种染色剂
3．流水冲洗还原组。织切片染色技术
33
二、苏木素-伊红染色液的配制
退行性染色：是先把组织浓染过度，超过所需的 程度，然后再用某些溶液脱去多余的染色剂，以 达到适当的深度，并使不应着色的组织细胞脱色。
这个步骤称为“分化”。
组织切片染色技术
10
三、染色原理
直接染色，间接染色和媒染剂
直接染色：染色无需第三种物质参加，染色剂和组织 即可直接结合着色。
3．各种染料试剂一般选用化学纯。各种染料启用新品时 应先试染。配成的染液、试液应盛于有色试剂瓶内，瓶签 应写明名称、含量、配制年月日，顺序保存于避光橱中， 必要者放冰箱内。凡须临用时配制者，配量应适当。
4．染色各步骤所需的时间，常受温度、切片厚度等影响，
可根据镜下观察所见酌情予以调整。
组织切片染色技术
有橘黄G、刚果红、俾士麦棕和许多苏丹类的脂质染色剂。
（4）醌亚胺类：含有两个发色团，一个是印胺基（-N=）、一个 是醌型苯环，如硫堇、美蓝、甲苯胺蓝O、硫酸尼罗蓝、中性红和 碱性藏红花O、焦油紫等。
（5）苯甲烷染料：发色团是醌型苯环，如孔雀缘、浅绿、碱性品 红、酸性品红、结晶紫和甲基缘等。
（6）山叮染料：发色团是醌型苯环，如派罗宁和伊红Y等。
(2)吸收作用：又称溶解学说。
组织吸收染色剂，牢固的结合。 组织的着色与溶液的颜色相同。
组织切片染色技术
6
三、染色原理
(3)吸附作用
是固体物质的特性，即较大的物体能从周围溶液(染 液)中吸附一些小颗粒(化合物或离子)到自身的特性。
细胞中各种蛋白质或胶体有不同的吸附面，因此能选
择性地吸收不同的离子，即某种蛋白质对某种染色剂
3．流水冲洗还原组。织切片染色技术
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二、苏木素-伊红染色液的配制
(上课用) 特殊染色和组织化学PPT课件
(二)特殊染色
1．定义 专门用于显示某些特定目的物的染色 方法称为“特殊染色”，它又可以理解为 “选择性染色”。
特殊染色对目的物的选择性是相对的。有 些方法具有相对的特异性，如油红O等脂质 染色，显阳性者可以肯定为脂质；有些则显 示的是一类物质，如PAS呈阳性反应者有糖 原、粘蛋白、网织纤维、软骨、阿米巴原虫、 霉菌等许多物质和组织结构，并不能确定是 哪一种具体成分。
2．Lillie固定液(AFF) 无水乙醇85ml，冰醋酸5ml，甲醛 (38%一40%)10ml。此液为优良的固定液。配制及使用方 法与Gendre固定液相同。固定后组织可直接用95％乙醇开 始脱水。
3．Rossman固定液 苦味酸无水乙醇饱和液90ml，甲醛 (38％一40％)10ml。临用前配制，取小块新鲜组织于4℃ 冰箱内固定1—2d，更换2—3次新液，然后在室温下用95 ％乙醇浸洗数次，经无水乙醇脱水。
3．生成的反应产物必须在原位沉淀，着色深， 且不溶，为细小沉淀或小结晶。能保证定位的 精确性及稳定性，便于反复观察。
1.虽然形成了许多显示细胞化学的方法及一 些特殊染色。但发展的速度比较缓馒。这是因 为每一种方法都有自己不相同的试剂、底物和 方法，在发展上既没有系统的经验可以遵循， 在学习使用上也比较困难。
二、染色目的
未加染色的任何组织切片在镜下只能辨 认细胞和胞核的轮廓，看不清楚其他任何 结构。染色的目的就是将组织切片浸入染 色剂内，经过一定的时间，将组织或细胞 及其他异常成分染上不同深浅的颜色，便 于在光学显微镜下进行观察。
三、染色原理
染色过程是染色剂和组织细胞相结合的过程。其 机理尚未完全清楚。
(三)糖原染色应用
1．细胞内泡状变性的鉴别 在常规石蜡切 片的HE染色中，如胞浆内出现大小不等的 空泡，应考虑可能是脂肪变性，经脂溶剂 的脱水透明过程溶解而形成的空泡；也可 能是糖原在经水溶液固定过程中的脱失所 致；或可能是单纯的水样变性。为了鉴别 其性质，则需要用显示糖原或脂质染色法 加以证明。
组织学技术(特殊染色)PPT医学课件
一、试剂配制 Gomori醛-复红染液： 70%乙醇100ml，碱性品红0.5g， 三聚乙醛1ml，浓盐酸1ml。
※注意：先将碱性品红溶于乙醇中， 然后加入三聚乙醛和浓盐酸，静置1-2d， 待溶液变为深紫色后，过滤置于冰箱待用。
32
二、取材 皮下组织
三、制作过程
1、取皮下组织铺于干净的载玻片上，自然晾干。 2、放在甲醛-乙醇固定液内固定5min； 3、水洗3min； 4、置于醛-复红染液中，室温下染色5min； 5、水洗5min； 6、置伊红染液中，染色30s； 7、常规脱水、透明、封片。
14
Gomoris镀银法显示网状纤维 1、取材：淋巴结 2、试剂配制 （1）硝酸银溶液：
硝酸银 10.2g，溶于100ml蒸馏水。 （2）氢氧化钠溶液：
氢氧化钠 3.1g，溶于100ml蒸馏水。
15
（3）银氨溶液的配置：
取5ml 硝酸银溶液， 缓慢滴加氨水至溶液变得清亮；
再加入5ml氢氧化钠溶液， 此时溶液变黑色再滴加氨水至溶液清亮后，
41
（6）入丽春红酸性品红液3-5min，蒸馏水速洗； （7）入1%磷酸钼水溶液5min； （8）倾去磷酸钼，直接用2%亮绿液染3-5min； （9）0.5%冰醋酸冲洗切片，将亮绿全部洗掉； （10）95%乙醇，无水酒精脱水，
二甲苯透明，树胶封固。
42
5、结果 A 细胞染成红色，位于胰岛周边； B细胞染成紫红色，位于胰岛中央； D细胞染成绿色，位于A 细胞与B细胞之间。
48
※ 苏木精本身不是染料，不能单独使用，
因为对组织的亲和力很小。
苏木精必须氧化成苏木红才能染色，
常用的氧化剂如：氧化汞、过锰酸钾、
碘酸钠、重铬酸钾。氧化的苏木精脱掉二个原子的氢。
※注意：先将碱性品红溶于乙醇中， 然后加入三聚乙醛和浓盐酸，静置1-2d， 待溶液变为深紫色后，过滤置于冰箱待用。
32
二、取材 皮下组织
三、制作过程
1、取皮下组织铺于干净的载玻片上，自然晾干。 2、放在甲醛-乙醇固定液内固定5min； 3、水洗3min； 4、置于醛-复红染液中，室温下染色5min； 5、水洗5min； 6、置伊红染液中，染色30s； 7、常规脱水、透明、封片。
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Gomoris镀银法显示网状纤维 1、取材：淋巴结 2、试剂配制 （1）硝酸银溶液：
硝酸银 10.2g，溶于100ml蒸馏水。 （2）氢氧化钠溶液：
氢氧化钠 3.1g，溶于100ml蒸馏水。
15
（3）银氨溶液的配置：
取5ml 硝酸银溶液， 缓慢滴加氨水至溶液变得清亮；
再加入5ml氢氧化钠溶液， 此时溶液变黑色再滴加氨水至溶液清亮后，
41
（6）入丽春红酸性品红液3-5min，蒸馏水速洗； （7）入1%磷酸钼水溶液5min； （8）倾去磷酸钼，直接用2%亮绿液染3-5min； （9）0.5%冰醋酸冲洗切片，将亮绿全部洗掉； （10）95%乙醇，无水酒精脱水，
二甲苯透明，树胶封固。
42
5、结果 A 细胞染成红色，位于胰岛周边； B细胞染成紫红色，位于胰岛中央； D细胞染成绿色，位于A 细胞与B细胞之间。
48
※ 苏木精本身不是染料，不能单独使用，
因为对组织的亲和力很小。
苏木精必须氧化成苏木红才能染色，
常用的氧化剂如：氧化汞、过锰酸钾、
碘酸钠、重铬酸钾。氧化的苏木精脱掉二个原子的氢。
特染PPT课件
物理机制： 毛细管渗透作用：染色剂沿组织间微孔渗透到组织中。 吸收或溶解作用：组织吸收或溶解染料而着色，如脂肪染
色 吸附作用：染料的色素粒子浸润组织中，因分子引力，色
素粒子被吸附而染色
.
6
• 例如脂肪染色:
苏丹类染色剂在脂质中的溶解度＞酒精中的 溶解度
溶解于酒精的苏丹类染色剂与组织中的脂质 接触时，染色剂就从溶液中“转移”到脂质中，
酸性粘蛋白（硫粘蛋白和唾液酸蛋白）： 蓝色 蛋白多糖和透明质酸： 蓝色 细胞核：红色
.
35
糖类物质染色——2、AB染色
应用
• 用于一般黏液性病变的观察。 • 在肿瘤诊断与研究中：
①用于肿瘤类型的鉴别，如黏液腺癌与未分化癌的鉴别， 黏液表皮样癌与鳞癌的鉴别； ②黏液染色还可以证明癌细胞是否浸润间质； ③观察胃黏膜腺体的肠上皮化生等
染色的方法和结果： Verhoeff铁苏木素染色 结果：弹力纤维呈黑色，细胞核蓝色，胶原
纤维呈红色
.
29
结缔组织染色——弹力纤维染色
应用：
（1）显示皮肤组织中弹刀纤维的变化：如硬皮病，皮肤松 解症等
（2）显示与判断心血管疾病： 鉴别心内膜弹力纤维症与心内膜心肌纤维化 动脉粥样硬化时粥样斑块低部弹力板的情况 高血压小动脉的改变 老年性动脉病变，动脉弹力板变性，增厚
特殊染色：除HE以外的所有染色，显示特定的组织结构 和成分。
单一染色：用一种染料进行的染色，如甲苯胺蓝染幽门螺 杆菌
多色染色：用两种以上染液染色的方法，如三色染色 对比染色：又称复染或衬染，先将某一成分或结构染色后，
再用另一种染料染其他成分，如苏木素衬染细胞核
.
9
染色的常用术语
进行性染色：渐进性染色，采用低浓度的染液，使 组织成分着色自浅入深，直到达到合适强度，
色 吸附作用：染料的色素粒子浸润组织中，因分子引力，色
素粒子被吸附而染色
.
6
• 例如脂肪染色:
苏丹类染色剂在脂质中的溶解度＞酒精中的 溶解度
溶解于酒精的苏丹类染色剂与组织中的脂质 接触时，染色剂就从溶液中“转移”到脂质中，
酸性粘蛋白（硫粘蛋白和唾液酸蛋白）： 蓝色 蛋白多糖和透明质酸： 蓝色 细胞核：红色
.
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糖类物质染色——2、AB染色
应用
• 用于一般黏液性病变的观察。 • 在肿瘤诊断与研究中：
①用于肿瘤类型的鉴别，如黏液腺癌与未分化癌的鉴别， 黏液表皮样癌与鳞癌的鉴别； ②黏液染色还可以证明癌细胞是否浸润间质； ③观察胃黏膜腺体的肠上皮化生等
染色的方法和结果： Verhoeff铁苏木素染色 结果：弹力纤维呈黑色，细胞核蓝色，胶原
纤维呈红色
.
29
结缔组织染色——弹力纤维染色
应用：
（1）显示皮肤组织中弹刀纤维的变化：如硬皮病，皮肤松 解症等
（2）显示与判断心血管疾病： 鉴别心内膜弹力纤维症与心内膜心肌纤维化 动脉粥样硬化时粥样斑块低部弹力板的情况 高血压小动脉的改变 老年性动脉病变，动脉弹力板变性，增厚
特殊染色：除HE以外的所有染色，显示特定的组织结构 和成分。
单一染色：用一种染料进行的染色，如甲苯胺蓝染幽门螺 杆菌
多色染色：用两种以上染液染色的方法，如三色染色 对比染色：又称复染或衬染，先将某一成分或结构染色后，
再用另一种染料染其他成分，如苏木素衬染细胞核
.
9
染色的常用术语
进行性染色：渐进性染色，采用低浓度的染液，使 组织成分着色自浅入深，直到达到合适强度，
组织切片染色技术ppt课件
2．特殊染色
特殊染色就是为了显示特定的组织结构或其他的特殊成分，是常 规染色的必要补充，也是染色技术中不可缺少的部分。它在病理 诊断中起到辅助作用。
3．单一染色
选用一种染料进行的染色，如用铁苏木素染睾丸生精细胞等。
4．复染色
用两种不同性质的染料进行染色的方法，如用苏木素和伊红分别 使细胞核及胞质染成两种颜色。
精选ppt课件2021
38
* 苏木素是碱性染料，蓝紫色，可以使细胞核等着色。被苏木 素着色的结构本身为酸性，具有嗜碱性。
有橘黄G、刚果红、俾士麦棕和许多苏丹类的脂质染色剂。
（4）醌亚胺类：含有两个发色团，一个是印胺基（-N=）、一个 是醌型苯环，如硫堇、美蓝、甲苯胺蓝O、硫酸尼罗蓝、中性红和 碱性藏红花O、焦油紫等。
（5）苯甲烷染料：发色团是醌型苯环，如孔雀缘、浅绿、碱性品 红、酸性品红、结晶紫和甲基缘等。
（6）山叮染料：发色团是醌型苯环，如派罗宁和伊红Y等。
精选ppt课件2021
25
六、染色前后处理
（二）染色后的处理
1．脱水 95%乙醇Ⅰ、Ⅱ各5min→100%乙醇Ⅰ、Ⅱ各5min。 2．透明 二甲苯Ⅰ、Ⅱ各5min透明。 3．封固 通常用中性树胶或加拿大树胶加盖玻片封固。
精选ppt课件2021
26
七、染色的注意事项
1．切片脱蜡应彻底。
2．常规染色、特殊染色等，组织要进行固定处理，做酶 反应的组织固定更应严格。凡用含升汞固定液固定的组织， 切片脱蜡后，应经脱汞处理，同时要慎防切片脱落。
5．多种染色
选用两种以上的染料的染色，如Mosson三色染色法。
精选ppt课件2021
21
六、染色前后处理
（一）染色前处理 1．脱蜡至水
特殊染色就是为了显示特定的组织结构或其他的特殊成分，是常 规染色的必要补充，也是染色技术中不可缺少的部分。它在病理 诊断中起到辅助作用。
3．单一染色
选用一种染料进行的染色，如用铁苏木素染睾丸生精细胞等。
4．复染色
用两种不同性质的染料进行染色的方法，如用苏木素和伊红分别 使细胞核及胞质染成两种颜色。
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38
* 苏木素是碱性染料，蓝紫色，可以使细胞核等着色。被苏木 素着色的结构本身为酸性，具有嗜碱性。
有橘黄G、刚果红、俾士麦棕和许多苏丹类的脂质染色剂。
（4）醌亚胺类：含有两个发色团，一个是印胺基（-N=）、一个 是醌型苯环，如硫堇、美蓝、甲苯胺蓝O、硫酸尼罗蓝、中性红和 碱性藏红花O、焦油紫等。
（5）苯甲烷染料：发色团是醌型苯环，如孔雀缘、浅绿、碱性品 红、酸性品红、结晶紫和甲基缘等。
（6）山叮染料：发色团是醌型苯环，如派罗宁和伊红Y等。
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六、染色前后处理
（二）染色后的处理
1．脱水 95%乙醇Ⅰ、Ⅱ各5min→100%乙醇Ⅰ、Ⅱ各5min。 2．透明 二甲苯Ⅰ、Ⅱ各5min透明。 3．封固 通常用中性树胶或加拿大树胶加盖玻片封固。
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七、染色的注意事项
1．切片脱蜡应彻底。
2．常规染色、特殊染色等，组织要进行固定处理，做酶 反应的组织固定更应严格。凡用含升汞固定液固定的组织， 切片脱蜡后，应经脱汞处理，同时要慎防切片脱落。
5．多种染色
选用两种以上的染料的染色，如Mosson三色染色法。
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六、染色前后处理
（一）染色前处理 1．脱蜡至水
组织学技术(特殊染色)
从而可证明多糖或粘多糖的存在。
整理ppt
4
1、试剂配制 （1）1%过碘酸水溶液：
过碘酸 1g 双蒸水 100ml 将过碘酸溶于双蒸水中
（2）Schiff试剂：
双蒸水
200ml
碱性品红
1g
1mol/L 盐酸
20ml
偏重亚硫酸钠
2g
（或亚硫酸氢钠）
活性炭
300mg
整理ppt
5
※ 双蒸水煮沸后离火，慢慢加入品红， 搅拌至完全溶解，冷却至50℃时过滤， 加入盐酸，冷却至25℃时加入偏重亚硫酸钠 摇荡，密封置于暗处或4℃冰箱内24h 。 溶液呈草黄色时，加入活性炭摇荡1min 快速过滤。避光4℃保存备用。
整理ppt
17
3、染色程序 （1）新鲜组织10%甲醛固定，石蜡切片，
常规脱蜡入水； （2）入高锰酸钾溶液中5min，水洗1min； （3）入草酸溶液中漂白2min，水洗2min； （4）硫酸铁中媒染2min，水洗1min；
整理ppt
18
（5）银氨溶液中处理1-5min（25 ℃）， 蒸馏水洗2次，各2min；
去除胶原纤维颜色。 （4）常规乙醇脱水，二甲苯透明，树胶封片。
4、结果 弹性纤维为棕红色，背景淡棕色。
整理ppt
23
整理ppt
24
三、胶原纤维
胶原纤维，粗细不等，直径0.5-10µm，波浪 状，有分支交织成网。胶原纤维由Ⅰ型胶原蛋 白组成。胶原纤维对酸性染料的亲和力强，
如常用的酸性复红及苯胺蓝等，对胶原纤维有 选染性，而其它组织不易着色，从而有利于其 他组织的复染。
整理ppt
22
地衣红染色显示弹性纤维
1、取材 皮下组织
2、染液配制 地衣红染液：
整理ppt
4
1、试剂配制 （1）1%过碘酸水溶液：
过碘酸 1g 双蒸水 100ml 将过碘酸溶于双蒸水中
（2）Schiff试剂：
双蒸水
200ml
碱性品红
1g
1mol/L 盐酸
20ml
偏重亚硫酸钠
2g
（或亚硫酸氢钠）
活性炭
300mg
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5
※ 双蒸水煮沸后离火，慢慢加入品红， 搅拌至完全溶解，冷却至50℃时过滤， 加入盐酸，冷却至25℃时加入偏重亚硫酸钠 摇荡，密封置于暗处或4℃冰箱内24h 。 溶液呈草黄色时，加入活性炭摇荡1min 快速过滤。避光4℃保存备用。
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3、染色程序 （1）新鲜组织10%甲醛固定，石蜡切片，
常规脱蜡入水； （2）入高锰酸钾溶液中5min，水洗1min； （3）入草酸溶液中漂白2min，水洗2min； （4）硫酸铁中媒染2min，水洗1min；
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（5）银氨溶液中处理1-5min（25 ℃）， 蒸馏水洗2次，各2min；
去除胶原纤维颜色。 （4）常规乙醇脱水，二甲苯透明，树胶封片。
4、结果 弹性纤维为棕红色，背景淡棕色。
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三、胶原纤维
胶原纤维，粗细不等，直径0.5-10µm，波浪 状，有分支交织成网。胶原纤维由Ⅰ型胶原蛋 白组成。胶原纤维对酸性染料的亲和力强，
如常用的酸性复红及苯胺蓝等，对胶原纤维有 选染性，而其它组织不易着色，从而有利于其 他组织的复染。
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地衣红染色显示弹性纤维
1、取材 皮下组织
2、染液配制 地衣红染液：
《组织学技术》课件
萌芽
19世纪中叶， 组织学技术逐
渐成熟
20世纪初，组 织学技术开始 应用于医学领
域
20世纪中叶， 组织学技术在 医学领域得到
广泛应用
21世纪初，组织 学技术在医学领 域得到进一步发 展，如免疫组织 化学、分子生物 学等新技术的应
用
材料科学领域：用于材料结 构分析、材料性能测试等
生物技术领域：用于基因克隆、 基因表达分析、蛋白质组学研 究等
PART FIVE
病理诊断：通过组织学技术对病变组织进行观察和分析，为疾病的诊断提供依据 肿瘤研究：通过组织学技术对肿瘤组织进行研究，了解肿瘤的发生、发展和转移机制 药物研发：通过组织学技术对药物作用机制进行研究，为药物的研发提供依据 疾病预防：通过组织学技术对疾病易感人群进行筛查，为疾病的预防提供依据
单细胞组 织学：研 究单个细 胞，揭示 细胞间的 相互作用 和功能
组织学大数 据：利用大 数据技术进 行组织学研 究，提高研 究效率和准 确性
组织学人工 智能：利用 人工智能技 术进行组织 学研究，提 高研究效率 和准确性
组织学与临 床医学的结 合：将组织 学研究与临 床医学相结 合，提高疾 病的诊断和 治疗水平
医学领域：用于病理诊断、肿 瘤诊断、细胞生物学研究等
环境科学领域：用于环境污 染物检测、环境监测等
农业科学领域：用于植物病 理学研究、植物育种等
食品科学领域：用于食品安 全检测、食品成分分析等
PART THREE
组织学技术的定义：研究组织结构 和功能的科学
组织学技术的应用：在医学、生物 学、病理学等领域有广泛应用
分析：根据观察结果进行分析和判断
样本采集：确保样本新鲜，避免污染
固定：选择合适的固定剂，避免组织变 形
19世纪中叶， 组织学技术逐
渐成熟
20世纪初，组 织学技术开始 应用于医学领
域
20世纪中叶， 组织学技术在 医学领域得到
广泛应用
21世纪初，组织 学技术在医学领 域得到进一步发 展，如免疫组织 化学、分子生物 学等新技术的应
用
材料科学领域：用于材料结 构分析、材料性能测试等
生物技术领域：用于基因克隆、 基因表达分析、蛋白质组学研 究等
PART FIVE
病理诊断：通过组织学技术对病变组织进行观察和分析，为疾病的诊断提供依据 肿瘤研究：通过组织学技术对肿瘤组织进行研究，了解肿瘤的发生、发展和转移机制 药物研发：通过组织学技术对药物作用机制进行研究，为药物的研发提供依据 疾病预防：通过组织学技术对疾病易感人群进行筛查，为疾病的预防提供依据
单细胞组 织学：研 究单个细 胞，揭示 细胞间的 相互作用 和功能
组织学大数 据：利用大 数据技术进 行组织学研 究，提高研 究效率和准 确性
组织学人工 智能：利用 人工智能技 术进行组织 学研究，提 高研究效率 和准确性
组织学与临 床医学的结 合：将组织 学研究与临 床医学相结 合，提高疾 病的诊断和 治疗水平
医学领域：用于病理诊断、肿 瘤诊断、细胞生物学研究等
环境科学领域：用于环境污 染物检测、环境监测等
农业科学领域：用于植物病 理学研究、植物育种等
食品科学领域：用于食品安 全检测、食品成分分析等
PART THREE
组织学技术的定义：研究组织结构 和功能的科学
组织学技术的应用：在医学、生物 学、病理学等领域有广泛应用
分析：根据观察结果进行分析和判断
样本采集：确保样本新鲜，避免污染
固定：选择合适的固定剂，避免组织变 形
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5、注意事项： （1）糖原易溶于水，要用冷Carnoy液固定
（2）配制Schiff试剂碱性品红杂质太多， 或亚硫酸氢纳潮解，都不能使碱性品红脱色； 盛Schiff试剂的瓶子不宜过大，以免SO2逸出； 若Schiff试剂变成粉红色即失效。
Carnoy固定液: 取纯乙醇、氯仿、冰醋酸，按6:3:1的比例配制， 现配现用。一般固定1-2 h。固定后的组织块 可直接入95%的乙醇脱水。
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疏松结缔组织各种成分显示方法：
疏松结缔组织中含有： 胶原纤维、弹性纤维、网状纤维； 巨噬细胞、肥大细胞。
ppt课件肾、脾、淋巴结等器官内。
纤维直径0.2-2.0µm，分支多，交织 成网。
网状纤维主要由Ⅲ型胶原蛋白组成，表 面被覆糖蛋白，在镀银切片呈黑色称为 嗜银纤维。
再加入5ml氢氧化钠溶液， 此时溶液变黑色再滴加氨水至溶液清亮后，
补加4滴氨水，加蒸馏水稀释至100ml， 保存于棕色瓶中备用。
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（4）高锰酸钾溶液：高锰酸钾0.5g， 蒸馏水95ml，3%硫酸5ml
（5）氯化金溶液：氯化金 0.2g， 蒸馏水100ml
（6）草酸溶液：草酸2ml，蒸馏水98ml
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(3)亚硫酸氢纳溶液 10%偏重亚硫酸氢纳 5ml
1mol/L盐酸
5ml
蒸馏水 用前配制
90ml
(4)1mol/L盐酸 36%盐酸 85.6ml
蒸馏水 914.4ml
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2、染色步骤
（1) 切片入1%过碘酸液 氧化2-5 min。 充分水洗后，过蒸馏水。
（2）入Schiff 液10-20 min（室温 暗处） （3）入亚硫酸氢纳液洗3次每次2min
5、注意事项 配制氨银时氨液不可过多。
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二、弹性纤维
分布广泛，弹性纤维较细，直径0.2-1.0µm， 交织成网。富有弹性，与胶原纤维交织在一起。 弹性纤维核心部分由均质的弹性蛋白组成； 外周覆盖微原纤维。
在皮肤学和检测幼年机体组织中的弹性结构。
常用的显示弹性纤维的染色有： 地衣红染色、 Gomoris醛品红染色、 Weigert染色等。
组织学技术
（特殊染色）
授课人：韩伊林
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特殊染色用于显示标本中的一些结构，
使其在显微镜下与其它组织或细胞区别.
单一特殊染色 一种染料对一种组织
特殊染色
结构或细胞进行染色
复合特殊染色 多种染料对多种组 织结构或细胞进行 染色
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2
糖原染色方法：
糖原为细胞内的多糖或粘多糖， 肝细胞和肌细胞内的糖原最多。 糖原的多少，可以反映机体糖代谢的情况。
从而可证明多糖或粘多糖的存在。
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1、试剂配制 （1）1%过碘酸水溶液：
过碘酸 1g 双蒸水 100ml 将过碘酸溶于双蒸水中
（2）Schiff试剂：
双蒸水
200ml
碱性品红
1g
1mol/L 盐酸
20ml
偏重亚硫酸钠
2g
（或亚硫酸氢钠）
活性炭
300mg
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※ 双蒸水煮沸后离火，慢慢加入品红， 搅拌至完全溶解，冷却至50℃时过滤， 加入盐酸，冷却至25℃时加入偏重亚硫酸钠 摇荡，密封置于暗处或4℃冰箱内24h 。 溶液呈草黄色时，加入活性炭摇荡1min 快速过滤。避光4℃保存备用。
（7）硫酸铁溶液：硫酸铁2g， 蒸馏水100ml
（8）甲醛溶液：甲醛20ml， 蒸馏水80ml
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3、染色程序 （1）新鲜组织10%甲醛固定，石蜡切片，
常规脱蜡入水； （2）入高锰酸钾溶液中5min，水洗1min； （3）入草酸溶液中漂白2min，水洗2min； （4）硫酸铁中媒染2min，水洗1min；
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Gomoris镀银法显示网状纤维
1、取材：淋巴结
2、试剂配制
（1）硝酸银溶液： 硝酸银 10.2g，溶于100ml蒸馏水。
（2）氢氧化钠溶液： 氢氧化钠 3.1g，溶于100ml蒸馏水。
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（3）银氨溶液的配置：
取5ml 硝酸银溶液， 缓慢滴加氨水至溶液变得清亮；
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（5）银氨溶液中处理1-5min（25 ℃）， 蒸馏水洗2次，各2min；
（6）甲醛溶液中还原5min， 蒸馏水洗2次，各2min；
（7）氯化金溶中调色1-3min，蒸馏水洗2次；
（8）95%及无水乙醇脱水， 二甲苯透明，中性树胶封片。
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4、结果 淋巴结内可见黑色网状纤维， 粗细不等，交织成网。
去除胶原纤维颜色。 （4）常规乙醇脱水，二甲苯透明，树胶封片。
4、结果 弹性纤维为棕红色，背景淡棕色。
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三、胶原纤维
胶原纤维，粗细不等，直径0.5-10µm，波浪 状，有分支交织成网。胶原纤维由Ⅰ型胶原蛋 白组成。胶原纤维对酸性染料的亲和力强，
如常用的酸性复红及苯胺蓝等，对胶原纤维有 选染性，而其它组织不易着色，从而有利于其 他组织的复染。
例如： 先天性糖代谢紊乱-葡萄糖-6-磷酸酶缺乏、 淋巴肉瘤、间皮瘤、肾上腺瘤，肝细胞内 都可聚集过多的糖原。
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★ 过碘酸-雪夫反应
（periodic acid Schiff reaction， PAS)
原理： 用过碘酸氧化多糖结构的碳键，
使其形成2-醛基，与无色的品红结合生成
紫红色品红复合物，沉淀于细胞内糖原分布部位，
（去非特异性染色）流水冲洗10min， 过蒸馏水。 （4)Mayer苏木精复染2-3min。流水冲洗， 过蒸馏水，吸干。 从95%乙醇开始脱水、透明、封片。
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3、对照
用1%淀粉糖化酶处理对照片20 min.或用唾液 （无气泡）消化对照片30 min 2次。
4、结果
细胞内糖原呈紫红色；对照片为阴性
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地衣红染色显示弹性纤维
1、取材 皮下组织
2、染液配制 地衣红染液：
地衣红0.1g ，70%乙醇100ml，硝酸2ml。 3、染色程序 （1）石蜡切片脱蜡下行至70%乙醇。 （2）地衣红染液，室温，12h或过夜，或37℃,15-30min. （3）70%乙醇分色，必要时可用0.5%-1%盐酸乙醇分色，