组织学技术(特殊染色).pptx
组织学技术特殊染色
组织学技术特殊染色组织学技术是研究生物学和医学中的一门重要学科，它主要研究各种生物组织的结构、形态和功能。
组织学技术中的特殊染色技术是一种重要的方法，可以帮助科学家们更好地观察和分析组织中的微细结构。
本文将介绍几种常见的组织学技术特殊染色方法。
PAS染色PAS（Periodic Acid-Schiff）染色是一种广泛应用的组织学技术特殊染色方法。
通过对组织样本进行一系列处理，使得组织中的多糖物质、甘油脂和一些蛋白质能够被染色剂染色。
PAS染色对于检测肝细胞内糖原、胆囊内黏液和肾小管内基底膜等有重要意义。
Silver染色Silver染色是一种用于染色神经元轴突和树突的特殊染色方法。
Silver染色通过将组织中的银离子还原为固态银，使得神经元的轴突和树突得以显现。
这种染色方法在神经科学研究中有广泛的应用，可以帮助科学家们观察神经元的形态和连接方式。
Giemsa染色Giemsa染色是一种用于染色细胞核和染色体的特殊染色方法。
Giemsa染色可以使得染色体在显微镜下呈现出黑色、灰色和蓝色的带状条纹，有助于研究染色体的形态和结构。
这种染色方法也常用于检测血液细胞的形态和数量，是临床血液学和病理学中常用的染色方法之一。
Masson染色Masson染色是一种用于染色胶原纤维的特殊染色方法。
Masson染色通过在组织中染色三种颜色的染料，将组织中的胶原纤维、细胞核和细胞质进行区分染色。
这种染色方法在研究纤维组织中的胶原纤维含量和排列方式时，特别有用。
以上介绍了几种常见的组织学技术特殊染色方法，它们在生物学和医学研究中起着重要的作用。
通过这些特殊染色方法，科学家们可以更全面地了解组织结构和功能，为疾病诊断和治疗提供有力的支持。
第九章 特殊染色ppt课件
精品课件
46
操作方法：
(1)切片常规脱蜡至水，蒸馏水洗； (2)Weigent氏苏木素液染核5分钟； (3)自来水洗； (4)1%盐酸分化 (5)自来水洗； (6)丽春红--酸性品红溶液染5-8分钟；
精品课件
47
(7)1%醋酸水溶液洗； (8)1%磷钼酸分化（1-3分钟）直到各种成分被
精品课件
20
（三）网状纤维纤维染色应用
判定病变组织支架的破坏情况，组织、 脏器网状支架的存在与塌陷、完整与破坏 、网状纤维的分布及走行，有多少、粗细 、疏密或有无断裂形态变化。
精品课件
21
⑴ 用于显示和鉴别肿瘤的性质和来源 显示和区分癌与肉瘤 来源于上皮组织的恶
性肿瘤（癌）仅癌巢周围有网状纤维包绕，巢内癌 细胞之间则没有网状纤维分部。来源于间叶组织的 恶性肿瘤（肉瘤），瘤细胞之间往往可见较多的网 状纤存在。
精品课件
7
2、使用后玻璃器皿的处理
每次使用后的玻璃器皿都必须及时彻底清洗 干净，以供下次实验之用，如轻视这一步骤 ，可用的玻璃器皿不够干净，则会影响染色 效果，甚至导致染色失败，特别在酶组化和 银离子反应操作过程中更有严格的要求，使 用后的玻璃器皿在一般清洗后，还要求用硫 酸清洗液浸泡。
精品课件
8
分钟，冷却后过滤倾去滤液，将滤纸及沉淀物置于温箱 中烘干。 而后将滤纸和干燥的沉淀物一并投入烧杯，加200ml 95% 酒精，小心隔水加热，徐徐搅拌使沉淀溶解，然后弃去 滤纸冷却后，补足因加热蒸发的酒精。 最后加入4ml的盐酸即可应用。（对苯二酚可代替间苯二 酚）。
精品课件
38
【注意事项】
Weigert氏弹力纤维染色的配制已有许多改变，盐 基性复红（碱性品红）可由其它盐基性染料取代，
《组织化学染色》课件
科学研究
通过染色技术，研究人员可 以观察和研究细胞的结构和 功能。
药物开发
染色技术也可以用于药物开 发过程中的药效评估和分析。
组织化学染色的原理
组织化学染色的原理是利用化学反应将染料分子与组织或细胞结构中的特定 成分结合，从而产生颜色反应。
组织化学染色的步骤
1
标本制备
将组织标本收集、固定和包埋，以便进行 Nhomakorabea一步的染色过程。
2
染料选择
根据需要染色的组织或细胞成分特点选择合适的染料。
3
固定和染色
将标本与染料处理，使染料与目标结合，并增强染色效果。
优点和限制
优点
组织化学染色可以提供直观的视觉信息，用 于研究和诊断。
限制
染色结果可能受到多种因素影响，例如标本 质量和染色剂的稳定性。
常见问题和解决方法
1 染色结果不明显
可能因为染料浓度不足，可以尝试增加染料浓度。
常用的染色方法
1 酸性染料
酸性染料常用于染色细胞核和某些细胞器，例如血液涂片中的噬菌体。
2 碱性染料
碱性染料主要用于染色胞浆和细胞骨架，如组织切片中的嗜酸性细胞。
3 特殊染料
特殊染料用于特定类型的细胞或组织元素，例如肿瘤标志物的染色。
染色技术的应用
医学诊断
组织化学染色在病理学中广 泛应用于疾病的诊断和鉴定。
《组织化学染色》PPT课 件
欢迎来到《组织化学染色》的课程！在本课程中，我们将深入探讨组织化学 染色的基本原理、常用方法以及应用领域。准备好扩展您的知识，并让我们 一起开始这个令人兴奋的旅程吧！
染色的定义和作用
染色是一种在组织学和生物学研究中常用的技术，通过使用染料将细胞和组织的特定结构染色，以显示 其形态、组织类型和功能特点。
病理学技术—特殊染色最最全总结(均配图)
病理学技术—特殊染色最最全总结(均配图)结缔组织染色法1.1 Mallory三色染色法Mallory三色染色法可用于胶原和网状纤维的染色，其中蓝色代表胶原和网状纤维，淡蓝色代表软骨、粘液和淀粉样变物质，红色代表神经胶原纤维、肌纤维和酸性颗粒，橘红色代表髓鞘和红细胞。
图表A1.1展示了Mallory三色染色法的效果，其中A组排列规则。
1.2 Masson三色染色法Masson三色染色法可用于胶原纤维和肌纤维的染色，其中绿色代表胶原纤维，红色代表肌纤维，橘红色代表红细胞。
图表B1.2和C1.2展示了Masson三色染色法在胃癌组织和血管平滑肌中的应用。
1.3 显示胶原、网状和弹性纤维的三联染色法三联染色法可用于显示胶原、网状和弹性纤维，其中红色代表胶原纤维，黑色代表网状纤维，绿色代表弹性纤维，淡黄色代表肌肉和红细胞。
图表D展示了Weigert间苯二酚法的效果。
胶原纤维染色法2.1 天狼星红苦味酸染色法天狼星红苦味酸染色法可用于胶原纤维的染色，其中红色代表胶原纤维，绿色代表细胞核，黄色代表其他物质。
天狼星红苦味酸染色法在偏光显微镜下观察，Ⅰ型呈强双折光性，呈黄色或红色纤维，Ⅱ型呈弱双折光，呈多种色彩疏网状分布，Ⅲ型呈弱双折光，呈绿色的细纤维，Ⅳ型呈弱双折光的基膜，呈淡黄色。
图表E展示了胶原纤维的染色效果，以及XXX.)苦味酸-酸性品红法在心肌梗塞后2个月的应用。
2.2 Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法可用于胶原纤维的染色，其中鲜红色代表胶原纤维，黄色代表肌纤维、细胞质和红细胞，蓝褐色代表胞核。
图表E展示了胶原纤维的染色效果，以及XXX.)苦味酸-酸性品红法在心肌梗塞后2个月的应用。
三、网状纤维染色3.1 XXX-Sweets银氨染色法XXX-Sweets银氨染色法可用于网状纤维的染色，其中黑色代表网状纤维，红色代表胞核（核固红复染），黄棕色代表胶原纤维，淡红色代表细胞质（红液复染）。
免疫组织化学染色技术PPT课件
1. 定义：是一类在适合条件下能激发机体免疫系 统发生免疫应答，并能与免疫应答产生的效应物 质（抗体和效应细胞）在体内或体外发生特异性 结合反应的物质。抗原具有两种性能：
（1）免疫原性（immunogenicity） 指抗原分子 具有诱导机体产生免疫应答的特性。
（ 2 ） 反 应 原 性 （ reactogenicity ） 指 抗 原 分 子 与 抗体或效应 T 细胞等免疫应答产物发生特异性反 应的特性。
6
2. 抗原的分类
免疫学分类
完全抗原、半抗原 胸腺依赖抗原与非依赖抗原
临床分类
外源性抗原：微生物、花粉等 内源性抗原：隐蔽的自身抗原、肿
瘤相关抗原等 同种异型抗原：人类白细胞抗原、
血型抗原 异嗜性抗原：人与其他动物、植物
等之间存在的共同抗原7
• 抗体（antibody）
1. 定义：机体受到抗原刺激后，通过体液免疫应答， B淋巴细胞活化、增殖，分化为浆细胞，由浆细胞 合成并分泌的仅与该抗原发生特异性反应的球蛋白， 称为抗体。
间接法：是将酶标记在第二抗体或与第二抗体具有亲和 性的某种分子上，检测组织或细胞内的特异性抗原物质。
间接法中所用的一抗是针对组织或细胞中某种抗原的特
异性抗体，多数抗体是由家兔制备的多克隆抗体或由小鼠
制备的单克隆抗体。
10
第二抗体是第一抗体的抗体，所以只要不同的 第一抗体均来自同一种属动物，与标记的第二抗 体结合就能用来显示不同特异性抗原的存在。这 样可避免直接法中标记每一种第一抗体的麻烦。 通过某种技术增加第二抗体上标记酶的含量， 可提高免疫组织化学染色的敏感度。
17
尸检组织 由于取材时一般均已超过死亡后2小时以上，组织有不同
病理学技术—特殊染色最最全总结(均配图)资料讲解
病理学技术—特殊染色最最全总结(均配图)结缔组织染色法1.1 Mallory三色染色法蓝色：胶原和网状纤维淡蓝色：软骨、粘液、淀粉样变物质红色：神经胶原纤维、肌纤维、酸性颗粒橘红色：髓鞘、红细胞图表 A 1.1.Mallory染色，显示胶原纤维，A组排列规则1.2. Masson三色染色法绿色：胶原纤维红色：肌纤维橘红色：红细胞图表 B 1.2 Mssson三色法图表 C 1.2.Masson三色染色胃癌组织中血管平滑肌1.3. 显示胶原、网状和弹性纤维的三联染色法红色：胶原纤维黑色：网状纤维绿色：弹性纤维淡黄色：肌肉、红细胞图表 D 4.Weigert间苯二酚法二、胶原纤维染色法2.2. Van Gieson（V.G）苦味酸-酸性品红法鲜红色：胶原纤维黄色：肌纤维、细胞质、红细胞蓝褐色：胞核图表 E 2.胶原纤维，Van Gieson(V.G.)苦味酸-酸性品红法图心肌梗塞 myocardial infarction：心肌梗塞后2个月，van Gieson 染色, 坏死心肌被染成红色的纤维组织所代替，黄色区域为残留的心肌纤维。
2.1 天狼星红（Sirius red）苦味酸染色法(参照上图)红色：胶原纤维绿色：细胞核黄色：其他三、网状纤维染色3.1 Gordon-Sweets银氨染色法（梅花开枝图，金色阳光伴树枝）黑色：网状纤维红色：胞核（核固红复染）黄棕色：胶原纤维淡红色：细胞质（红液复染）图表 F 3.Gordon-Sweets氢氧化银氨液浸染法3.2 Gomori氏银氨液配制法图表 G Gomori氏银氨液配制法四、弹性纤维染色Gomori醛复红染色法*甲醛生理盐水液固定的染色效果最佳图表 H 4.GOMORI醛复红染色法五、显示弹性、胶原纤维的双重组合染色法蓝绿色：弹性纤维红色：胶原纤维黄色：背景图表 I 4.Weigert间苯二酚法六、肌肉组织染色△横纹肌组织染色Mallory磷钨酸苏木精染色法（PTAH）蓝色：胞核、纤维、肌肉、神经胶质纤维、纤维蛋白、横纹肌黄色或枚红色：胶原纤维、网状纤维软骨基质、骨微紫色：粗弹性纤维（有时）紫蓝色或棕黄色：缺血缺氧早期病变的心肌图表 J 6.1.磷钨酸苏木素法图表 K 6.1.磷钨酸苏木素染色液△早期心肌病变组织染色1.Nagar-Olsen染色法（1974年）红色：缺氧心肌、红细胞黄色或黄棕色：正常心肌蓝色：细胞核图各组小鼠心肌组织Nagar-Olsen染色（光学显微镜, ×200）2.Poley显示缺氧心肌染色法（1964年）红色：缺氧心肌紫色：胞核绿色：其他组织七、糖类染色过碘酸-Schiff（PAS）染色法红色：糖原及其他PAS反应阳性物质蓝色：细胞核图表 L 7.胃贲门腺体胞浆呈PAS阳性八、黏液物质（黏多糖）染色1.Mowry阿尔辛蓝过碘酸雪夫（ABPAS）染色法（1956）红色：中性黏液物质蓝色：酸性黏液物质紫红色：混合性黏液物质图表 M 8.1.AB-PAS染色结肠粘膜图表 N 8.1.胃粘膜组织 AB-PAS染色 40×：2.爱先蓝（PH2.5）法蓝色：唾液酸、弱硫酸化黏液物质、一般粘液红色：胞核不着色：强硫酸化黏液物质图表 O 8.2.爱先蓝（PH2.5）染色液图表 P 8.2.爱先蓝法图表 Q 8.2.爱先蓝法—3、爱先蓝（PH1.0）法蓝色：含硫酸黏液物质不着色：非硫酸化酸性黏液物质红色：复染后的胞核九、黑色素染色1.Masson-Fontana黑色素银浸染色法黑色：黑色素及嗜银细胞颗粒红色：胶原纤维浅黄色：背景图表 R 9.1.Melanin pigment in cells of9.1. malignant melanoma, Fontana-Masson stain.2.Lillie亚铁染色法暗绿色：黑色素浅绿或不着色：背景黄色：肌纤维和背景十、含铁血黄素染色Perls blue（普鲁士蓝）反应显示三价铁蓝色：含铁血黄素浅红色：其他组织图表 S 10.普鲁士蓝染色肝脏普鲁士蓝染色呈蓝色的含铁血黄素颗粒大量沉着在肝实质细胞和库普弗细胞内。
免疫组化及特殊染色ppt课件
免疫组化及特殊染色
6
与人类有关的抗原
病原微生物 在医疗中将病原微生物制成疫苗进行 预防接种，可以提高人的免疫力。
嗜异性抗原 一类与种属特异性无关的、存在于人 以及某些动物、植物、微生物的性质相同的抗原。
肿瘤抗原 由物理的、化学的因素或某些病毒诱发 的实验动物肿瘤，其细胞中或细胞表面均出现特异性 抗原，称为肿瘤特异性抗原。已证实在某些人类肿瘤 中心存在着与病毒密切相关的抗原。
免疫组化及特殊染色
20
IHC技术的基本操作流程
EnliVision法的工作程序：
切片，烤片，脱蜡水化（使用防脱片处理的玻片：多聚赖氨酸， APES）
H2O2处理（—阻断内源性过氧化物酶），蒸馏水漂洗 组织切片的预处理（枸橼酸钠缓冲液中热修复，酶消化—暴露出
抗原决定簇），TBS漂洗
内源性过氧化物酶的阻断
将试剂抗原或试剂抗体用可以微量检测的标记物进行标记， 在与标本中的相应抗体或抗原反应后，可以不必测定抗原抗体 复合物本身，而测定复合物中的标记物，通过标记物的放大作 用，进一步提高了免疫技术的敏感性。
免疫组化及特殊染色
5
抗原是指能够刺激机体产生（特异性） 免疫应答，并能与免疫应答产物抗体和 致敏淋巴细胞在体内外结合，发生免疫 效应（特异性反应）的物质。抗原的基 本特性有两种，一是诱导免疫应答的能 力，也就是免疫原性，二是与免疫应答 的产物发生反应，也就是抗原性
70 、80年代多位科学家改良上述技术， 建立辣根过氧化物酶--抗过氧化物酶 （PAP）技术,抗生物素—生物素（ABC） 法使免疫组织化学进入了应用阶段。
免疫组化及特殊染色
3
2000年以后各种免疫组化技术更加成熟, 使免疫组化技术成为当今生物医学中形 态、功能代谢综合研究的一项有力工具。 其应用范围深达医学各个学科，是目前 生命科学工作者应该掌握的基本技术之 一。
(上课用) 特殊染色和组织化学PPT课件
(二)特殊染色
1．定义 专门用于显示某些特定目的物的染色 方法称为“特殊染色”，它又可以理解为 “选择性染色”。
特殊染色对目的物的选择性是相对的。有 些方法具有相对的特异性，如油红O等脂质 染色，显阳性者可以肯定为脂质；有些则显 示的是一类物质，如PAS呈阳性反应者有糖 原、粘蛋白、网织纤维、软骨、阿米巴原虫、 霉菌等许多物质和组织结构，并不能确定是 哪一种具体成分。
2．Lillie固定液(AFF) 无水乙醇85ml，冰醋酸5ml，甲醛 (38%一40%)10ml。此液为优良的固定液。配制及使用方 法与Gendre固定液相同。固定后组织可直接用95％乙醇开 始脱水。
3．Rossman固定液 苦味酸无水乙醇饱和液90ml，甲醛 (38％一40％)10ml。临用前配制，取小块新鲜组织于4℃ 冰箱内固定1—2d，更换2—3次新液，然后在室温下用95 ％乙醇浸洗数次，经无水乙醇脱水。
3．生成的反应产物必须在原位沉淀，着色深， 且不溶，为细小沉淀或小结晶。能保证定位的 精确性及稳定性，便于反复观察。
1.虽然形成了许多显示细胞化学的方法及一 些特殊染色。但发展的速度比较缓馒。这是因 为每一种方法都有自己不相同的试剂、底物和 方法，在发展上既没有系统的经验可以遵循， 在学习使用上也比较困难。
二、染色目的
未加染色的任何组织切片在镜下只能辨 认细胞和胞核的轮廓，看不清楚其他任何 结构。染色的目的就是将组织切片浸入染 色剂内，经过一定的时间，将组织或细胞 及其他异常成分染上不同深浅的颜色，便 于在光学显微镜下进行观察。
三、染色原理
染色过程是染色剂和组织细胞相结合的过程。其 机理尚未完全清楚。
(三)糖原染色应用
1．细胞内泡状变性的鉴别 在常规石蜡切 片的HE染色中，如胞浆内出现大小不等的 空泡，应考虑可能是脂肪变性，经脂溶剂 的脱水透明过程溶解而形成的空泡；也可 能是糖原在经水溶液固定过程中的脱失所 致；或可能是单纯的水样变性。为了鉴别 其性质，则需要用显示糖原或脂质染色法 加以证明。
特染PPT课件
色 吸附作用：染料的色素粒子浸润组织中，因分子引力，色
素粒子被吸附而染色
.
6
• 例如脂肪染色:
苏丹类染色剂在脂质中的溶解度＞酒精中的 溶解度
溶解于酒精的苏丹类染色剂与组织中的脂质 接触时，染色剂就从溶液中“转移”到脂质中，
酸性粘蛋白（硫粘蛋白和唾液酸蛋白）： 蓝色 蛋白多糖和透明质酸： 蓝色 细胞核：红色
.
35
糖类物质染色——2、AB染色
应用
• 用于一般黏液性病变的观察。 • 在肿瘤诊断与研究中：
①用于肿瘤类型的鉴别，如黏液腺癌与未分化癌的鉴别， 黏液表皮样癌与鳞癌的鉴别； ②黏液染色还可以证明癌细胞是否浸润间质； ③观察胃黏膜腺体的肠上皮化生等
染色的方法和结果： Verhoeff铁苏木素染色 结果：弹力纤维呈黑色，细胞核蓝色，胶原
纤维呈红色
.
29
结缔组织染色——弹力纤维染色
应用：
（1）显示皮肤组织中弹刀纤维的变化：如硬皮病，皮肤松 解症等
（2）显示与判断心血管疾病： 鉴别心内膜弹力纤维症与心内膜心肌纤维化 动脉粥样硬化时粥样斑块低部弹力板的情况 高血压小动脉的改变 老年性动脉病变，动脉弹力板变性，增厚
特殊染色：除HE以外的所有染色，显示特定的组织结构 和成分。
单一染色：用一种染料进行的染色，如甲苯胺蓝染幽门螺 杆菌
多色染色：用两种以上染液染色的方法，如三色染色 对比染色：又称复染或衬染，先将某一成分或结构染色后，
再用另一种染料染其他成分，如苏木素衬染细胞核
.
9
染色的常用术语
进行性染色：渐进性染色，采用低浓度的染液，使 组织成分着色自浅入深，直到达到合适强度，
病理学技术-特殊染色技术
结缔组织染色 肌肉组织染色 糖类染色 色素类染色 病理内源性沉着物染色 病原微生物染色 内分泌细胞染色
一、纤维素染色
纤维素 (fibrin) 又称为纤维蛋白， 它是存在于血液内的纤维蛋白原分子聚合 而形成的特殊蛋白质。 在病理状态下， 血管内和血管外以及其它组织中， 均可见到纤维素沉着物 。 常见于炎症渗出性改变， 弥漫性血管内凝血 、 高血压的小血管壁和一些胶原性疾病的疏松纤维，肾小球的毛细血管腔内和 基底膜等均有纤维素的存在。
.
抗酸杆菌 (acid fast bacteria) 体内含有脂质、蛋白质和多糖类并由糖脂形成一 个蜡质的外壳，能与苯酚碱性复红结合成复合物，这种复合物能抵抗酸的脱色， 所以称为抗酸杆菌。
病毒是最小的非细胞型微生物，当病毒引起疾病的时候，其感染 的细胞内可以形成包涵体，而存在于细胞浆和细胞核内，但有时 胞浆和胞核内同时可见到包涵体，在一般的情况下， RNA病毒形 成胞浆内包涵体，DNA病毒形成核内包涵体。
一、弥散神经内分泌细胞染色(diffuse neuroendocrine system， DNES) 弥散神经内分泌系统的细胞具有细胞化学、 病理和超微结构的形态特点 。 从生物
化学方面而言，这些内分泌细胞都能合成和分泌胺，而且细胞是通过摄取胺前体 (氨基酸) 经脱羧后产生胺的。随着对细胞研究的深入，发现其不仅产生胺，而且还 产生肽。 DNES 的组成至今已有40多种细胞，分为中枢和周围两大部分。中枢部分包括下丘 脑一垂体轴的细胞和松果体细胞。周围部分包括胃、肠、胰、呼吸道和泌尿生殖道 的内分泌细胞，以及甲状腺滤泡旁组胞，甲状旁腺细胞，嗜铬细胞，颈动脉体细胞 等。 日前证明这些细胞的染色方法较多，但常用的是使用亲银和嗜银反应来鉴别细胞浆 中的银颗粒。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
4、结果 弹性纤维为棕红色，背景淡棕色。
三、胶原纤维
胶原纤维，粗细不等，直径0.5-10µm，波浪 状，有分支交织成网。胶原纤维由Ⅰ型胶原蛋 白组成。胶原纤维对酸性染料的亲和力强，
如常用的酸性复红及苯胺蓝等，对胶原纤维有 选染性，而其它组织不易着色，从而有利于其 他组织的复染。
疏松结缔组织各种成分显示方法：
疏松结缔组织中含有： 胶原纤维、弹性纤维、网状纤维； 巨噬细胞、肥大细胞。
一、 网状纤维ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
分布：肝、肾、脾、淋巴结等器官内。
纤维直径0.2-2.0µm，分支多，交织 成网。
网状纤维主要由Ⅲ型胶原蛋白组成，表 面被覆糖蛋白，在镀银切片呈黑色称为 嗜银纤维。
Gomoris镀银法显示网状纤维
例如： 先天性糖代谢紊乱-葡萄糖-6-磷酸酶缺乏、 淋巴肉瘤、间皮瘤、肾上腺瘤，肝细胞内 都可聚集过多的糖原。
★ 过碘酸-雪夫反应
（periodic acid Schiff reaction， PAS)
原理： 用过碘酸氧化多糖结构的碳键，
使其形成2-醛基，与无色的品红结合生成
紫红色品红复合物，沉淀于细胞内糖原分布部位，
25%盐酸 1ml 蒸馏水 95ml 用时甲乙两液等份混合，只能用数天。
显示胶原纤维的主要方法： 如van Gieson法、 Mallory法、 Masson 法等。
Masson ′ s三色染色法显示胶原纤维
1、取材：皮下组织或肠系膜铺片
2、固定：Zenker\Bouin\ 10%中性福尔马林缓冲液
3、染液配制
（1）Weigert铁苏木精
A液：苏木精 10g, 95%乙醇100ml B液：29%三氯化铁水溶液 4ml
组织学技术
（特殊染色）
授课人：韩伊林
特殊染色用于显示标本中的一些结构，
使其在显微镜下与其它组织或细胞区别.
单一特殊染色 一种染料对一种组织
特殊染色
结构或细胞进行染色
复合特殊染色 多种染料对多种组 织结构或细胞进行 染色
糖原染色方法：
糖原为细胞内的多糖或粘多糖， 肝细胞和肌细胞内的糖原最多。 糖原的多少，可以反映机体糖代谢的情况。
1、取材：淋巴结
2、试剂配制
（1）硝酸银溶液： 硝酸银 10.2g，溶于100ml蒸馏水。
（2）氢氧化钠溶液： 氢氧化钠 3.1g，溶于100ml蒸馏水。
（3）银氨溶液的配置：
取5ml 硝酸银溶液， 缓慢滴加氨水至溶液变得清亮；
再加入5ml氢氧化钠溶液， 此时溶液变黑色再滴加氨水至溶液清亮后，
补加4滴氨水，加蒸馏水稀释至100ml， 保存于棕色瓶中备用。
（2）配制Schiff试剂碱性品红杂质太多， 或亚硫酸氢纳潮解，都不能使碱性品红脱色； 盛Schiff试剂的瓶子不宜过大，以免SO2逸出； 若Schiff试剂变成粉红色即失效。
Carnoy固定液: 取纯乙醇、氯仿、冰醋酸，按6:3:1的比例配制， 现配现用。一般固定1-2 h。固定后的组织块 可直接入95%的乙醇脱水。
（去非特异性染色）流水冲洗10min， 过蒸馏水。 （4)Mayer苏木精复染2-3min。流水冲洗， 过蒸馏水，吸干。 从95%乙醇开始脱水、透明、封片。
3、对照
用1%淀粉糖化酶处理对照片20 min.或用唾液 （无气泡）消化对照片30 min 2次。
4、结果
细胞内糖原呈紫红色；对照片为阴性
5、注意事项： （1）糖原易溶于水，要用冷Carnoy液固定
从而可证明多糖或粘多糖的存在。
1、试剂配制 （1）1%过碘酸水溶液：
过碘酸 1g 双蒸水 100ml 将过碘酸溶于双蒸水中
（2）Schiff试剂： 双蒸水 碱性品红 1mol/L 盐酸 偏重亚硫酸钠
（或亚硫酸氢钠） 活性炭
200ml 1g
20ml 2g
300mg
※ 双蒸水煮沸后离火，慢慢加入品红， 搅拌至完全溶解，冷却至50℃时过滤， 加入盐酸，冷却至25℃时加入偏重亚硫酸钠 摇荡，密封置于暗处或4℃冰箱内24h 。 溶液呈草黄色时，加入活性炭摇荡1min 快速过滤。避光4℃保存备用。
在皮肤学和检测幼年机体组织中的弹性结构。
常用的显示弹性纤维的染色有： 地衣红染色、 Gomoris醛品红染色、 Weigert染色等。
地衣红染色显示弹性纤维
1、取材 皮下组织
2、染液配制 地衣红染液：
地衣红0.1g ，70%乙醇100ml，硝酸2ml。 3、染色程序 （1）石蜡切片脱蜡下行至70%乙醇。 （2）地衣红染液，室温，12h或过夜，或37℃,15-30min. （3）70%乙醇分色，必要时可用0.5%-1%盐酸乙醇分色，
（4）高锰酸钾溶液：高锰酸钾0.5g， 蒸馏水95ml，3%硫酸5ml
（5）氯化金溶液：氯化金 0.2g， 蒸馏水100ml
（6）草酸溶液：草酸2ml，蒸馏水98ml
（7）硫酸铁溶液：硫酸铁2g， 蒸馏水100ml
（8）甲醛溶液：甲醛20ml， 蒸馏水80ml
3、染色程序 （1）新鲜组织10%甲醛固定，石蜡切片，
（8）95%及无水乙醇脱水， 二甲苯透明，中性树胶封片。
4、结果 淋巴结内可见黑色网状纤维， 粗细不等，交织成网。
5、注意事项 配制氨银时氨液不可过多。
二、弹性纤维
分布广泛，弹性纤维较细，直径0.2-1.0µm， 交织成网。富有弹性，与胶原纤维交织在一起。 弹性纤维核心部分由均质的弹性蛋白组成； 外周覆盖微原纤维。
(3)亚硫酸氢纳溶液 10%偏重亚硫酸氢纳 5ml
1mol/L盐酸
5ml
蒸馏水 用前配制
90ml
(4)1mol/L盐酸 36%盐酸 85.6ml
蒸馏水 914.4ml
2、染色步骤
（1) 切片入1%过碘酸液 氧化2-5 min。 充分水洗后，过蒸馏水。
（2）入Schiff 液10-20 min（室温 暗处） （3）入亚硫酸氢纳液洗3次每次2min
常规脱蜡入水；
（2）入高锰酸钾溶液中5min，水洗1min； （3）入草酸溶液中漂白2min，水洗2min； （4）硫酸铁中媒染2min，水洗1min；
（5）银氨溶液中处理1-5min（25 ℃）， 蒸馏水洗2次，各2min；
（6）甲醛溶液中还原5min， 蒸馏水洗2次，各2min；
（7）氯化金溶中调色1-3min，蒸馏水洗2次；