组织学技术(特殊染色).pptx
合集下载
相关主题
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
去除胶原纤维颜色。 （4）常规乙醇脱水，二甲苯透明，树胶封片。
4、结果 弹性纤维为棕红色，背景淡棕色。
三、胶原纤维
胶原纤维，粗细不等，直径0.5-10µm，波浪 状，有分支交织成网。胶原纤维由Ⅰ型胶原蛋 白组成。胶原纤维对酸性染料的亲和力强，
如常用的酸性复红及苯胺蓝等，对胶原纤维有 选染性，而其它组织不易着色，从而有利于其 他组织的复染。
疏松结缔组织各种成分显示方法：
疏松结缔组织中含有： 胶原纤维、弹性纤维、网状纤维； 巨噬细胞、肥大细胞。
一、 网状纤维ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
分布：肝、肾、脾、淋巴结等器官内。
纤维直径0.2-2.0µm，分支多，交织 成网。
网状纤维主要由Ⅲ型胶原蛋白组成，表 面被覆糖蛋白，在镀银切片呈黑色称为 嗜银纤维。
Gomoris镀银法显示网状纤维
例如： 先天性糖代谢紊乱-葡萄糖-6-磷酸酶缺乏、 淋巴肉瘤、间皮瘤、肾上腺瘤，肝细胞内 都可聚集过多的糖原。
★ 过碘酸-雪夫反应
（periodic acid Schiff reaction， PAS)
原理： 用过碘酸氧化多糖结构的碳键，
使其形成2-醛基，与无色的品红结合生成
紫红色品红复合物，沉淀于细胞内糖原分布部位，
25%盐酸 1ml 蒸馏水 95ml 用时甲乙两液等份混合，只能用数天。
显示胶原纤维的主要方法： 如van Gieson法、 Mallory法、 Masson 法等。
Masson ′ s三色染色法显示胶原纤维
1、取材：皮下组织或肠系膜铺片
2、固定：Zenker\Bouin\ 10%中性福尔马林缓冲液
3、染液配制
（1）Weigert铁苏木精
A液：苏木精 10g, 95%乙醇100ml B液：29%三氯化铁水溶液 4ml
组织学技术
（特殊染色）
授课人：韩伊林
特殊染色用于显示标本中的一些结构，
使其在显微镜下与其它组织或细胞区别.
单一特殊染色 一种染料对一种组织
特殊染色
结构或细胞进行染色
复合特殊染色 多种染料对多种组 织结构或细胞进行 染色
糖原染色方法：
糖原为细胞内的多糖或粘多糖， 肝细胞和肌细胞内的糖原最多。 糖原的多少，可以反映机体糖代谢的情况。
1、取材：淋巴结
2、试剂配制
（1）硝酸银溶液： 硝酸银 10.2g，溶于100ml蒸馏水。
（2）氢氧化钠溶液： 氢氧化钠 3.1g，溶于100ml蒸馏水。
（3）银氨溶液的配置：
取5ml 硝酸银溶液， 缓慢滴加氨水至溶液变得清亮；
再加入5ml氢氧化钠溶液， 此时溶液变黑色再滴加氨水至溶液清亮后，
补加4滴氨水，加蒸馏水稀释至100ml， 保存于棕色瓶中备用。
（2）配制Schiff试剂碱性品红杂质太多， 或亚硫酸氢纳潮解，都不能使碱性品红脱色； 盛Schiff试剂的瓶子不宜过大，以免SO2逸出； 若Schiff试剂变成粉红色即失效。
Carnoy固定液: 取纯乙醇、氯仿、冰醋酸，按6:3:1的比例配制， 现配现用。一般固定1-2 h。固定后的组织块 可直接入95%的乙醇脱水。
（去非特异性染色）流水冲洗10min， 过蒸馏水。 （4)Mayer苏木精复染2-3min。流水冲洗， 过蒸馏水，吸干。 从95%乙醇开始脱水、透明、封片。
3、对照
用1%淀粉糖化酶处理对照片20 min.或用唾液 （无气泡）消化对照片30 min 2次。
4、结果
细胞内糖原呈紫红色；对照片为阴性
5、注意事项： （1）糖原易溶于水，要用冷Carnoy液固定
从而可证明多糖或粘多糖的存在。
1、试剂配制 （1）1%过碘酸水溶液：
过碘酸 1g 双蒸水 100ml 将过碘酸溶于双蒸水中
（2）Schiff试剂： 双蒸水 碱性品红 1mol/L 盐酸 偏重亚硫酸钠
（或亚硫酸氢钠） 活性炭
200ml 1g
20ml 2g
300mg
※ 双蒸水煮沸后离火，慢慢加入品红， 搅拌至完全溶解，冷却至50℃时过滤， 加入盐酸，冷却至25℃时加入偏重亚硫酸钠 摇荡，密封置于暗处或4℃冰箱内24h 。 溶液呈草黄色时，加入活性炭摇荡1min 快速过滤。避光4℃保存备用。
在皮肤学和检测幼年机体组织中的弹性结构。
常用的显示弹性纤维的染色有： 地衣红染色、 Gomoris醛品红染色、 Weigert染色等。
地衣红染色显示弹性纤维
1、取材 皮下组织
2、染液配制 地衣红染液：
地衣红0.1g ，70%乙醇100ml，硝酸2ml。 3、染色程序 （1）石蜡切片脱蜡下行至70%乙醇。 （2）地衣红染液，室温，12h或过夜，或37℃,15-30min. （3）70%乙醇分色，必要时可用0.5%-1%盐酸乙醇分色，
（4）高锰酸钾溶液：高锰酸钾0.5g， 蒸馏水95ml，3%硫酸5ml
（5）氯化金溶液：氯化金 0.2g， 蒸馏水100ml
（6）草酸溶液：草酸2ml，蒸馏水98ml
（7）硫酸铁溶液：硫酸铁2g， 蒸馏水100ml
（8）甲醛溶液：甲醛20ml， 蒸馏水80ml
3、染色程序 （1）新鲜组织10%甲醛固定，石蜡切片，
（8）95%及无水乙醇脱水， 二甲苯透明，中性树胶封片。
4、结果 淋巴结内可见黑色网状纤维， 粗细不等，交织成网。
5、注意事项 配制氨银时氨液不可过多。
二、弹性纤维
分布广泛，弹性纤维较细，直径0.2-1.0µm， 交织成网。富有弹性，与胶原纤维交织在一起。 弹性纤维核心部分由均质的弹性蛋白组成； 外周覆盖微原纤维。
(3)亚硫酸氢纳溶液 10%偏重亚硫酸氢纳 5ml
1mol/L盐酸
5ml
蒸馏水 用前配制
90ml
(4)1mol/L盐酸 36%盐酸 85.6ml
蒸馏水 914.4ml
2、染色步骤
（1) 切片入1%过碘酸液 氧化2-5 min。 充分水洗后，过蒸馏水。
（2）入Schiff 液10-20 min（室温 暗处） （3）入亚硫酸氢纳液洗3次每次2min
常规脱蜡入水；
（2）入高锰酸钾溶液中5min，水洗1min； （3）入草酸溶液中漂白2min，水洗2min； （4）硫酸铁中媒染2min，水洗1min；
（5）银氨溶液中处理1-5min（25 ℃）， 蒸馏水洗2次，各2min；
（6）甲醛溶液中还原5min， 蒸馏水洗2次，各2min；
（7）氯化金溶中调色1-3min，蒸馏水洗2次；
4、结果 弹性纤维为棕红色，背景淡棕色。
三、胶原纤维
胶原纤维，粗细不等，直径0.5-10µm，波浪 状，有分支交织成网。胶原纤维由Ⅰ型胶原蛋 白组成。胶原纤维对酸性染料的亲和力强，
如常用的酸性复红及苯胺蓝等，对胶原纤维有 选染性，而其它组织不易着色，从而有利于其 他组织的复染。
疏松结缔组织各种成分显示方法：
疏松结缔组织中含有： 胶原纤维、弹性纤维、网状纤维； 巨噬细胞、肥大细胞。
一、 网状纤维ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
分布：肝、肾、脾、淋巴结等器官内。
纤维直径0.2-2.0µm，分支多，交织 成网。
网状纤维主要由Ⅲ型胶原蛋白组成，表 面被覆糖蛋白，在镀银切片呈黑色称为 嗜银纤维。
Gomoris镀银法显示网状纤维
例如： 先天性糖代谢紊乱-葡萄糖-6-磷酸酶缺乏、 淋巴肉瘤、间皮瘤、肾上腺瘤，肝细胞内 都可聚集过多的糖原。
★ 过碘酸-雪夫反应
（periodic acid Schiff reaction， PAS)
原理： 用过碘酸氧化多糖结构的碳键，
使其形成2-醛基，与无色的品红结合生成
紫红色品红复合物，沉淀于细胞内糖原分布部位，
25%盐酸 1ml 蒸馏水 95ml 用时甲乙两液等份混合，只能用数天。
显示胶原纤维的主要方法： 如van Gieson法、 Mallory法、 Masson 法等。
Masson ′ s三色染色法显示胶原纤维
1、取材：皮下组织或肠系膜铺片
2、固定：Zenker\Bouin\ 10%中性福尔马林缓冲液
3、染液配制
（1）Weigert铁苏木精
A液：苏木精 10g, 95%乙醇100ml B液：29%三氯化铁水溶液 4ml
组织学技术
（特殊染色）
授课人：韩伊林
特殊染色用于显示标本中的一些结构，
使其在显微镜下与其它组织或细胞区别.
单一特殊染色 一种染料对一种组织
特殊染色
结构或细胞进行染色
复合特殊染色 多种染料对多种组 织结构或细胞进行 染色
糖原染色方法：
糖原为细胞内的多糖或粘多糖， 肝细胞和肌细胞内的糖原最多。 糖原的多少，可以反映机体糖代谢的情况。
1、取材：淋巴结
2、试剂配制
（1）硝酸银溶液： 硝酸银 10.2g，溶于100ml蒸馏水。
（2）氢氧化钠溶液： 氢氧化钠 3.1g，溶于100ml蒸馏水。
（3）银氨溶液的配置：
取5ml 硝酸银溶液， 缓慢滴加氨水至溶液变得清亮；
再加入5ml氢氧化钠溶液， 此时溶液变黑色再滴加氨水至溶液清亮后，
补加4滴氨水，加蒸馏水稀释至100ml， 保存于棕色瓶中备用。
（2）配制Schiff试剂碱性品红杂质太多， 或亚硫酸氢纳潮解，都不能使碱性品红脱色； 盛Schiff试剂的瓶子不宜过大，以免SO2逸出； 若Schiff试剂变成粉红色即失效。
Carnoy固定液: 取纯乙醇、氯仿、冰醋酸，按6:3:1的比例配制， 现配现用。一般固定1-2 h。固定后的组织块 可直接入95%的乙醇脱水。
（去非特异性染色）流水冲洗10min， 过蒸馏水。 （4)Mayer苏木精复染2-3min。流水冲洗， 过蒸馏水，吸干。 从95%乙醇开始脱水、透明、封片。
3、对照
用1%淀粉糖化酶处理对照片20 min.或用唾液 （无气泡）消化对照片30 min 2次。
4、结果
细胞内糖原呈紫红色；对照片为阴性
5、注意事项： （1）糖原易溶于水，要用冷Carnoy液固定
从而可证明多糖或粘多糖的存在。
1、试剂配制 （1）1%过碘酸水溶液：
过碘酸 1g 双蒸水 100ml 将过碘酸溶于双蒸水中
（2）Schiff试剂： 双蒸水 碱性品红 1mol/L 盐酸 偏重亚硫酸钠
（或亚硫酸氢钠） 活性炭
200ml 1g
20ml 2g
300mg
※ 双蒸水煮沸后离火，慢慢加入品红， 搅拌至完全溶解，冷却至50℃时过滤， 加入盐酸，冷却至25℃时加入偏重亚硫酸钠 摇荡，密封置于暗处或4℃冰箱内24h 。 溶液呈草黄色时，加入活性炭摇荡1min 快速过滤。避光4℃保存备用。
在皮肤学和检测幼年机体组织中的弹性结构。
常用的显示弹性纤维的染色有： 地衣红染色、 Gomoris醛品红染色、 Weigert染色等。
地衣红染色显示弹性纤维
1、取材 皮下组织
2、染液配制 地衣红染液：
地衣红0.1g ，70%乙醇100ml，硝酸2ml。 3、染色程序 （1）石蜡切片脱蜡下行至70%乙醇。 （2）地衣红染液，室温，12h或过夜，或37℃,15-30min. （3）70%乙醇分色，必要时可用0.5%-1%盐酸乙醇分色，
（4）高锰酸钾溶液：高锰酸钾0.5g， 蒸馏水95ml，3%硫酸5ml
（5）氯化金溶液：氯化金 0.2g， 蒸馏水100ml
（6）草酸溶液：草酸2ml，蒸馏水98ml
（7）硫酸铁溶液：硫酸铁2g， 蒸馏水100ml
（8）甲醛溶液：甲醛20ml， 蒸馏水80ml
3、染色程序 （1）新鲜组织10%甲醛固定，石蜡切片，
（8）95%及无水乙醇脱水， 二甲苯透明，中性树胶封片。
4、结果 淋巴结内可见黑色网状纤维， 粗细不等，交织成网。
5、注意事项 配制氨银时氨液不可过多。
二、弹性纤维
分布广泛，弹性纤维较细，直径0.2-1.0µm， 交织成网。富有弹性，与胶原纤维交织在一起。 弹性纤维核心部分由均质的弹性蛋白组成； 外周覆盖微原纤维。
(3)亚硫酸氢纳溶液 10%偏重亚硫酸氢纳 5ml
1mol/L盐酸
5ml
蒸馏水 用前配制
90ml
(4)1mol/L盐酸 36%盐酸 85.6ml
蒸馏水 914.4ml
2、染色步骤
（1) 切片入1%过碘酸液 氧化2-5 min。 充分水洗后，过蒸馏水。
（2）入Schiff 液10-20 min（室温 暗处） （3）入亚硫酸氢纳液洗3次每次2min
常规脱蜡入水；
（2）入高锰酸钾溶液中5min，水洗1min； （3）入草酸溶液中漂白2min，水洗2min； （4）硫酸铁中媒染2min，水洗1min；
（5）银氨溶液中处理1-5min（25 ℃）， 蒸馏水洗2次，各2min；
（6）甲醛溶液中还原5min， 蒸馏水洗2次，各2min；
（7）氯化金溶中调色1-3min，蒸馏水洗2次；