口服重组鸡α干扰素对鸡新城疫病毒感染和疫苗免疫的影响

万方数据
中国畜牧兽医 ２０１０年第３７卷第１２期
疾病防治
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与干扰素的使用次数和剂量直接相关。连续用药５ ｄ的试验组较只用药１ ｄ试验组的ＨＩ抗体滴度明 显下降，４周后其抗体滴度较对照组相差近５０％，而 只用药１ ｄ的试验组与不用干扰素对照组则无明显 差异。在本试验中使用干扰素剂量较大，主要是考 虑干扰素在环境中受到不同因素的影响而失活问 题。通过本研究可初步证实，口服重组ａ一千扰素对 鸡病毒病的防治同样有效，但在临床应用中应注意 饮水中需含有足够剂量的干扰素，且应保证鸡群用 药程度均一。
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最佳，气管上皮可见完整的具纤毛的杯状细胞，无淋 巴细胞浸润（图１Ｂ），与正常的气管组织（图１Ｃ）相
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似。试验证明，口服一定剂量ｒＣｈｌＦＮ—ａ可愈合新 城疫病毒造成的病理损伤。
图１气管组织切片（苏木精～曙红染色，４００×） 注；Ａ，攻毒对照组鸡的气管组织切片；Ｂ，连续３ ｄ Ｉ＝ｌ服ｒＣｈｌＦＮ—ａ鸡的气管组织切片ＩＣ，空白对照组鸡的气管组织切片。
７ Ｍｏ Ｃ Ｗ，Ｃａｏ Ｙ Ｃ，Ｌｉｍ Ｂ Ｌ．Ｔｈｅ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｎｄ ｉｎ ｖ＇ｉｔｒｏ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｃｈｉｃｋｅｎ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａ ｏｎ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｂｕｒｓａｌ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ ａｎｄ Ｎｅｗ— ｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ ｖｉｒｕｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ［Ｊ３．Ａｖｉａｎ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，２００１，４５（２）： ３８９～３９９．
ＩＦＮ在临床应用中通常采用注射的方式，不仅 对机体产生不良影响，增加养殖户的工作量，而且易 导致传染性疾病的进一步传播，造成不必要的损失。 饮水给药是一种较为便捷的投药方式，可避免注射 给药的某些弊端，但其疗效能否达到注射给药的水 平，至今尚无相关报道。本试验以ＳＰＦ鸡为研究对 象，探讨了口服重组鸡ａ一干扰素对新城疫病毒感染 的治疗效果及疫苗免疫的影响，为重组鸡ＩＦＮ的进 一步应用提供一定的理论依据。
参考文献
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２李风华。林云圣。崔丽，等．家禽基因工程干扰素生物学作用及其 在禽病防治中的应用［Ｊ］．山东家禽，２００４，７；４３～４５．
３侯云德．干扰素研究现状和展望［Ｊ］．国外医学微生物学分册， 】９８５，６：２４卜一２４４．
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口服重组鸡仅一干扰素对鸡新城疫病毒感染 和疫苗免疫的影响
吴静，李玉峰，马秀丽，林树乾，宋敏训
（山东省农业科学院家禽研究所，济南２５００２３）
摘要：通过点跟、滴鼻的方式使ＳＰＦ鸡感染新城疫Ｌａ Ｓｏｔａ株，感染８ ｈ后在饮水中添加１０００ Ｕ／ｍＬ重组鸡口－干扰素，每
９ Ｐｌａｃｈｙ Ｊ，Ｗｅｉｎｉｎｇ Ｋ Ｃ，Ｋｒｅｍｍｅｒ Ｅ，ｅｔ ａ１．Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｙｐｅ Ｉ ａｎｄ ｔｙｐｅ Ｈ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｓ ｔｏｗａｒｄ Ｒｏｕｓ ｓａｒｃｏｍａ Ｖｉｒｕｓ－ｉｎ— ｄｕｃｅｄ ｔｕｍｏｒｓ ｉｎ ｃｈｉｃｋｅｎｓ［Ｊ］．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ。１９９９，２５６（１）：８５～９１．
收稿日期：２０１０－０６—２４ 作者简介：吴静（１９７８一）。女。山东人，助理研究员，博士生，主要
从事家禽天然免疫相关分子的研究。 基金项目：山东省农科院青年科研基金项目（２００７ＹＱＮ０２４）．
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微量细胞病变抑制法（ＣＥＦ—ＶＳＶ系统）测定其活性 为５．７×１０６ Ｕ／ｍＬ。 １．４ 口服ｒＣｈｌＦＮ—ｄ对鸡新城疫弱毒株感染的治 疗 取４５日龄ＳＰＦ鸡６０只，随机分成６组，每组 １０只，第１至４组为试验组，第５组为病毒对照组， 第６组为空白对照组。第１至５组通过点眼、滴鼻 方式感染新城疫弱毒Ｌａ Ｓｏｔａ株，每只鸡感染量为１ ×１０６ ＥＩＤ。。。第１至４组分别于攻毒后８ ｈ左右， 开始饮用含ｒＣｈｌＦＮ—ａ（１０００ Ｕ／ｍＬ）的纯净水，分别 饮用１、２、３、５ ｄ，其他组饮用纯净水，每组２００ ｍＬ， 每只鸡每天饮用干扰素总量为２００００ Ｕ。感染后７ ｄ各试验组随机抽取４只鸡，采集气管组织，４％多 聚甲醛固定，制备组织病理切片，确定口服治疗 效果。 １．５ 口服ｒＣｈｌＦＮ—ａ对新城疫ＨＩ抗体滴度的影响
４吴静，李玉峰。宋敏训．等．禽类干扰素及其基因工程研究进展 口］．中国畜牧兽医，２００６，３３（７）：Ｇ１５～１８．
５ Ｌｅｖｙ Ａ Ｍ。Ｈｅｌｌｅｒ Ｅ Ｄ，Ｌｅｉｍｅｒ Ｇ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｎａｔｉｖｅ ｃｈｉｃｋｅｎ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ｏｎ ＭＤＶ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ａｅｔａ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，１９９９，４３：１２１～ １２７．
只鸡每天饮用干扰素剂量为２００００ Ｕ，分别饮用不同时间。于感染后第７天采集气管组织，制备病理切片。结果显示，连续
３ ｄ以上饮用重组鸡旷干扰素的试验鸡，其气管的病理损伤可得到明显改善；检测饮用重组鸡口－干扰索后试验鸡的新城疫抗体
效价，结果表明口服高剂量的干扰素可明显下调新城疫抗体的滴度。
关键词：重组鸡矿干扰索；新城疫；口服；组织病理变化；Ｈｌ抗体滴度
６ Ｍａｒｃｕｓ Ｐ Ｉ，Ｈｅｉｄｅ Ｌ ｖａｎ Ｄ，Ｓｅｋｅｌｌｉｃｋ Ｍ Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｃｔｉｏｎ ｏｎ ａ— ｖｉａｎ ｖｉｒｕｓｅｓ Ｉ ｏｒａｌ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｉｃｋｅｎ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ—ａ ａｍｅｌｉｏ— ｒａｔｅｓ Ｎｅｗｃａｓｔｌｅ ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ＆Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅ— ｓｅａｒｃｈ。１９９９。１９（８）：８８１～８８５．
于攻毒前将各组试验鸡随机抽取１只采血，自第 １次饮用ｒＣｈＩＦＮ—ａ后，每周采血１次，直至感染后 第４周，分离血清，按常规方法进行ＨＩ试验，测定 血清中新城疫抗体效价，研究口服ｒＣｈＩＦＮ—ａ对鸡 群新城疫抗体滴度的影响。 ２ 结果 ２．１ 口服ｒＣｈｌＦＮ—ａ对新城疫感染的疗效 气管 的组织病理切片显示，感染新城疫Ｌａ Ｓｏｔａ株７ ｄ 后，试验组鸡未出现明显的临床症状，但病毒对照组 鸡的气管组织已发生了明显的病理变化，如气管环 出血，纤毛脱落，气管上皮明显增厚。有大量的淋巴 细胞浸润（图１Ａ）。但攻毒后饮水中含ｒＣｈｌＦＮ—ａ （１０００ Ｕ／ｍＬ）的试验鸡，炎症反应得到明显改善， 其中，连续３ ｄ以上饮用重组干扰素的试验组效果
表１ 口服ｒＣｈｌＦＮ－ａ对新城疫抗体滴度的影响
３讨论 干扰素是一类具有广泛生物学活性的蛋白质，
具有调节机体免疫功能、抗病毒、抗肿瘤等多种作 用，是机体防御系统的重要组成部分。近年来，各国 学者广泛开展了禽类重组干扰素抗病毒的研究。 Ｐｌａｃｈｙ等（１９９９）进行了鸡重组干扰素防治劳斯肉 瘤病毒（ＲＳＶ）肿瘤的研究，取得了显著效果。Ｍａｒ－ ＣＵＳ等（１９９９）以１日龄雏鸡为试验对象，在攻毒前 一天即开始饮用不同剂量的干扰素制剂，连续饮用 儿ｄ，证明饮水中含２０００ Ｕ／ｍＬ干扰素能减轻新城
８ Ｐｅｉ Ｊ，Ｓｅｋｅｌｌｉｅｋ Ｍ Ｊ，Ｍａｒｃｕｓ Ｐ Ｉ，ｅｔ ａ１．Ｃｈｉｃｋｅｎ ｉｎｔｅｒｆｅｔｏｎ ｔｙｐｅ Ｉ ｉｎｈｉｂｉｔｓ ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ ｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓ ｖｉｒｕｓ ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｒｅ— ｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｉｌｌｎｅｓｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ＆Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ， ２００１，２１（１２）：１０７１～１０７７．
中图分类号：￥８５２．４
文献标识码：Ａ
文章编号：１６７１—７２３６（２０１０）１２－０１８３—０３
干扰素（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ，ＩＦＮ）是在一定的干扰素诱 导剂作用下，由特定细胞的基因控制所产生的，具有 抗病毒、抗肿瘤和调节免疫等作用的一类高活性、多 功能糖蛋白（侯云德，１９８５）。ＩＦＮ是最早发现于禽 类的一类重要的细胞因子，它通过诱生多种抗病毒 蛋白，抑制病毒在细胞内的复制，具有抑制病毒和免 疫调节等多种生物学活性，能有效地遏制病毒侵袭 和感染的发生，抑制肿瘤细胞生长，清除早期恶变细 胞。由于ＩＦＮ具有广谱、高效抗病毒功能，且对机 体免疫系统起关键调节作用，成为当今免疫学、遗传 学和分子生物学研究最为活跃的领域之一。目前， 在兽医临床上，ＩＦＮ已广泛应用于多种疾病的预防 和治疗。本试验利用毕赤酵母表达系统表达，且证 实在细胞上具有较好抗病毒效果的重组鸡ＩＦＮ—ａ， 进行了口服重组鸡ＩＦＮ一０ｔ对鸡新城疫人工感染的 治疗试验和对疫苗免疫的影响试验以检验其在鸡体 内的抗病毒能力和免疫调节能力。 １材料与方法 １．１试验动物 ４５日龄ＳＰＦ鸡，由山东省农业科 学院家禽研究所ＳＰＦ鸡场提供。 １．２病毒毒株鸡新城疫病毒疫苗株Ｌａ Ｓｏｔａ，由 山东省禽病诊断与免疫重点实验室保存。 １．３ 重组鸡ａ一干扰素 ｒＣｈｌＦＮ—ａ由山东省农业科 学院家禽研究所禽病检测中心制备，为重组毕赤酵 母表达产物，经离子交换、凝胶过滤层析纯化制得，
十第１组 ＋第２组１－ 第３组
仉０
第６组
＾ Ｎ
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较
蛙
蝠
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谶
鳟
墒
乞０
ｍＯ 免疫前
第１周
第２周
第３周
免疫时间
第４周
图２ 接种新城疫弱毒苗后鸡体内ＨＩ抗体滴度的动态变化
疫病毒Ｌａ Ｓｏｔａ株所造成的病理损伤。大量研究结 果表明，重组鸡ａ一干扰素对马立克氏病（Ｌｅｖｙ等， １９９９）、传染性法氏囊病（Ｍｏ等，２００１）、传染性支气 管炎（Ｐｅｉ等，２００１）、禽流感（Ｓｅｋｅｌｌｉｃｋ等，２０００；Ｘｉａ 等，２００４）等病毒性疾病也具有良好效果，展现出广 阔的应用前景。王玉东等（２００３）研究了鸡干扰素对 新城疫弱毒苗的干扰作用，发现干扰素用量越多对 疫苗产生抗体的干扰作用越大，抗体水平与干扰素 剂量呈负相关。李风华等（２００４）报道，鸡基因工程 干扰素对新城疫、传染性法氏囊病、传染性支气管 炎、马立克氏病等病毒病均有显著疗效。
２．２ 口服ｒＣｈｌＦＮ—ａ对鸡新城疫疫苗免疫的影响 经弱毒苗Ｌａ Ｓｏｔａ株免疫后，各组鸡血清ＨＩ抗体
滴度在１周内开始升高，至第３周达到最高，此后呈 下降趋势。ｒＣｈＩＦＮ—ａ的免疫调节作用在饮用后１ 周即明显表现出来。与对照组（第５组）相比，连续 ２ ｄ以上饮用含ｒＣｈＩＦＮ—ａ（１０００ Ｕ／ｍＬ）的试验鸡， 新城疫抗体滴度均有所下降，而且饮用天数越多，抗 体滴度下降越明显，这一现象在第４组表现最为明 显，到４周时，其抗体滴度与对照组相差达３个滴 度，而只饮用１ ｄ的第１组，其抗体水平在４周后与 对照组相差无几。结果见表１和图２。试验结果表 明，口服ｒＣｈＩＦＮ—ａ同样能对活病毒有干扰和抑制 作用，引起抗体滴度的下降。
干扰素的使用途径影响ＩＦＮ的抗病毒效果， Ｍｏ等（２００１）认为ＩＦＮ点眼方法的效果优于肌注， 这是由于当用点眼、滴鼻黏膜途径攻毒时，病毒黏附 到黏膜表面，通过淋巴或循环系统侵害靶器官。如 果治疗时用静脉注射方法，ＩＦＮ进入鸡体内，血浆中 ＩＦＮ在注射１ ｈ后达到高峰，８ ｈ后，水平下降，ＩＦＮ 在血液中可阻止病毒的复制，但不能消除黏膜表面 原有的病毒，因此这些黏膜表面的病毒就可在血清 中ＩＦＮ浓度降低后进行繁殖，并感染家禽。
１０ Ｓｅｋｅｌｌｉｃｋ Ｍ Ｊ。Ｃａｒｒａ Ｓ Ａ，Ｂｏｗｍａｎ Ａ，ｅｔ ａ１．Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｏｆ ｉｎｆｌｕｅｎｚａ ｖｉｒｕｓ ｔｏ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ａｃｔｉｏｎ ａｔｔｒｉｂｕｔｅｄ ｔｏ ｒａｎｄｏｍ ｍｕｌｔｉ－ ｐｉｅ ｐａｃｋａｇｉｎｇ ａｎｄ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＮＳ ｇｅｎｅｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ ＆Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０００，２０（１１）：９６３～９７０．
在本研究中，以新城疫弱毒Ｌａ Ｓｏｔａ株感染试 验鸡群，鸡群于感染后口服重组鸡ａ一干扰素 （ｒＣｈｌＦＮ—ａ），根据服用时间不同进行分组，感染１ 周后制备气管组织切片。结果表明，连续３ ｄ口服 一定剂量的ｒＣｈｌＦＮ－ａ即可显著改善新城疫病毒造 成的病理损伤。口服干扰素同样能具有免疫调节作 用，在一定时间内下调新城疫抗体滴度，且这种效应