几种特殊显微镜的使用解析

由于工作距离的限制，倒置显微镜物镜 的最大放大率为60X。一般研究用倒 置显微镜都配置有4X、10X、20X、 及40X相差物镜，因为倒置显微镜多 用于无色透明的活体观察。如果用户 有特殊需要，也可以选配其它附件， 用来完成微分干涉、荧光及简易偏光 等观察。
相差显微镜 相差显微镜是利用被检物的光程之差进
实验作业
1．比较倒置显微镜、相差显微 镜和荧光显微镜的工作原理。 2．概述荧光显微镜的使用操作 过程。 3．为什么相差显微镜可以直接 观察活体样品。
行镜检的。在显微镜下镜检时，视场中的 样品只有在反射光的波长（颜色）和振幅 （亮度）与周围介质有变化时，方能窥见 被检样品。活的样品多为无色透明，照明 光线通过这种物体时，透过或反射光的波 长和振幅都不变，所以用普通光学显微镜 难以辨清活体的结构。必需借助于固定和 染色等理化方法，使样品和背景的反射或 透明光在波长和振幅上发生变化，即在颜 色和亮度上有所差异，以供识别。
实验 十一 几种特殊显微镜的使用
一.实验原理
1．掌握倒置显微镜的结构，工作原理 和使用。 2．掌握相差显微镜的结构，工作原理 和使用价值。 3．掌握荧光显微镜的结构，工作原理 及其荧光显微术。
倒置显微镜
倒置显微镜的组成和普通显微镜一样，物 镜与照明系统颠倒，前者在载物台之下，后 者在载物台之上，用于观察培养的活细胞， 具有相差物镜。
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相差方法应用于生物学上的主要价值， 在于它能对透明的活体进行直接观察， 无需采用使细胞致死的固定和染色的 方法。染色给活体以有害的影响，甚 至失真。由此，才使相差法显得异常 重要。
荧光显微镜
荧光显微镜是荧光显微术的基本装置。 荧光显微术是利用一定波长的光（通常是 波长短的紫外光和蓝紫光）照射被检样品， 激发荧光物质发出可见的荧光。通过物镜 和目镜的成像，放大，以供检视和拍摄。 荧光显微镜具有特殊光源，提供足够强度 和波长的激发光，诱发荧光物质发出荧光。 视场中所见的像，主要是样品的荧光映像。
相差是指同一光线经过折射率不同的介质 其相位发生变化并产生差异。相位是指在 某一时间上，光的波动所达到的位置。一 般由于被检物体（如不染色的细胞）所能 产生的相差的差别太小，我们的眼睛是很 难分辨出这种差别的。只有在相位差变化 为振幅差（明暗之差）之后，才能被分辨。 相差决定于光波所通过介质的折射率之差 及其厚度，等于折射率与厚度的乘积之差 （即光程之差），介质越厚或折射率越大， 光波减速也越大。
某些物质经波长较短的光线照射后，分子 被激活，吸收能量后呈激发态。其能量部 分转化为热量或用于光化学反应外，相当 一部分则以波长较长的光能形式辐射出来， 这种波长长于激发光的可见光称作荧光。
细胞内大部分物质经短光波照射后，可发 出较弱的自发性荧光。有些细胞成分与能 发出荧光的有机化合物——萤光染料结合。 激发后呈现一定颜色的荧光，借以对组织 进行细胞化学的观察和研究。
倒置显微镜是为了适应生物学、医学等领 域中的组织培养、细胞离体培养、浮游生物、 环境保护、食品检验等显微观察。由于上述 样品特点的限制，被检物体均放置在培养皿 （或培养瓶）中，这样就要求倒置显微镜的 物镜和聚光镜的工作距离很长，能直接对培 养皿中的被检物体进行显微观察和研究。因 此，物镜、聚光镜和光源的位置都颠倒过来， 故称为倒置显微镜.