制备冷沉淀方法的比较汇总

制备冷沉淀方法的比较

冷沉淀是一种特殊的成份血液制品,含有第Ⅷ、XIII因子、纤维蛋白原、纤维结合蛋白、血管性血友病因子,主要用于血友病及凝血因子减少的出血性疾病。冷沉淀是由新鲜冰冻血浆融化、分离,再次提取而制备的。目前国内各大血液中心在制备过程中普遍采用传统的4℃恒温冰箱自然解冻离心法、普通容器水浴人工摇动解冻离心法或比较先进的数控水浴融化虹吸法。我血液中心在以上3种方法的基础之上,经过实践总结出了一套制备方法-数控水浴融化离心法。此方法制备冷沉淀简便、快速,FⅧ回收率高,明显优于其他方法,值得推广应用。

1 制备方法

原料血液采集全雪后6小时内,5000g,4℃,10min,离心分离制品新鲜冰冻血浆,放入-50℃冰箱快速速冻后,置于-20℃以下的冰箱保存。冷冻24h以上新鲜冰冻血浆用于制备冷沉淀[1]。

1.1数控水浴融化离心法运用数字控制水浴式血浆融化箱融化新鲜冰冻血浆,待融化到保留少量冰渣时取出,配平,离心(2℃±2℃5000×g9/620分钟)分离出上层血浆,下层(25±5)ml血浆和白色沉淀物即为冷沉淀,将其快速置于低温速度冰箱中冻结。

1.2 数控水浴融化虹吸法同样运用数字控制水浴式血浆融化箱融化新鲜冰冻血浆,在融化过程中利用虹吸原理的作用使血浆流到另一转移空袋中,待原袋容量达到25ml±5ml标量时,即制成了冷沉淀,将其快速置于低温速度冰箱中冻结。

1.34℃恒温冰箱自然解冻离心法应用4℃恒温冰箱缓慢融化新鲜冰冻血浆(约需15小时)后,配平,离心(2℃±2℃2000×g 9/6 10分钟)后分离即制成了冷沉淀,将其快速置于低温速度冰箱中冻结。

1.4 普通容器水浴人工摇动解冻离心法采用较传统的容器(如大盆)由工作人员自行控制水温、融化时间、摇动待血浆融化后,配平,离心(2℃±2℃2000×g

9/6 10分钟)后分离即制成了冷沉淀,将其快速置于低温速度冰箱中冻结[3]。

2 结果

四种方法制备冷沉淀比较将随机抽取的40袋200 ml FFP,随机分成四组,用上述四种方法分别进行检测,见表1

3 讨论

传统的制备方法中4℃恒温冰箱解冻存在所需时间长(15小时),融化不均匀,影响凝血因子的回收。普通容器水浴融化的方法,其水温、时间都是由工作人员控制,没有客观的量化标准,水温控制恒温难度大,摇动不均匀等,会影响到产品最

终质量且存在着一次融化量少,工作效率低。由于上述因素的影响,两种制备方法均有20%由于外观检测不合格被废弃,影响了制备的成功率。

数控水浴融化离心法和数控水浴融化虹吸法运用数字控制水浴式血浆融化箱,其利用恒温解冻,产生循环水流按摩血袋,以加速血浆融化的原理融化原料血浆,使融化过程更加规范化、科学化。在提高了产品质量的同时节约了时间及人力资源,提高了工作效率。这两种制备方法的主要区别在于是否离心,通过以上结果我们可以看到离心法制备的冷沉淀的Ⅷ因子含量远高于虹吸法, 冷沉淀的Ⅷ因子含量差异有显著性可能是虹吸法在新鲜冰冻血浆溶解的过程中,冷沉淀有时不能形成大的凝聚团块,或成絮状,不能聚集吸附在中央未新鲜冰冻血浆融化的冰块上或袋壁上,有部分往往由于虹吸作用而流到另一转移空袋中,降低了FⅧ含量。在制备的时间上,由于数控水浴融化离心法,加入了新鲜冰冻血浆融化到一半多时取出血浆袋,将还未融化的血浆块捏散成碎冰块的步骤,缩短了融化过程,抵消了离心增加的时间,故而与虹吸方法时间相差不大。

4 结论

综上所述,四种方法都能制备出符合GB18469-2001《全血及成分血质量要求》

的冷沉淀。冷沉淀的制备受到采集、分离、制备环境和保存等多个环节的影响,由于FⅧ是不稳定因子,随着时间的延长或制备期间温度的升高,FⅦ的活性降低,极易衰减,半衰期为12h～24h[2,3]。

冷沉淀的质量好坏在临床疗效中取到了至关重要的作用,因此选择好的制备方法也是非常关键的。数控水浴融化离心法制备的冷沉淀FⅧ含量要优于其他方法,其融化速度快,温度控制准确,在不增加原有耗材的基础上,同时大大地提高了产品质量,提高了工作效率,以其纯度高,止血效果好的特点深受临床医生的认可并在各类疾病中得到大量应用,抢救了大批危重患者的生命。

【参考文献】

[1] 中华人民共和国卫生部.中国输血技术操作规程(血站部分)[M].天津:天津科学技术出版社,1997:44.

[2] 苗翠英,李蓬,孙波,等.新鲜冰冻血浆中FⅦ:C检测结果分析[J].中国输血杂志,2002,15(1):34.

[3] 王军,李平,刘焕亮,等.冷沉淀因子Ⅷ生物半衰期的测定及意义[J].血栓与止血杂志,1977,4:125-126.