冬虫夏草提取物延缓衰老实验研究

试。
物在被动逃避反应中 ,出现明显的学习记忆障碍。
2. 2. 1 跳台实验 实验时将小鼠放入跳台实验仪 而 2. 0 ,4. 0 g·kg - 1CSE 组使衰老小鼠的潜伏期延长 ,
中 ,训练小鼠受到电击跳上平台来躲避伤害性刺激 , 错误次数减少 ( P < 0. 05 和 P < 0. 01) ,提示 CSE 可改
第 29 卷第 8 期 中 国 中 药 杂 志
Vol. 29 , Issue 8
2004 年 8 月
China Journal of Chinese Materia Medica
August , 2004
[9 ] Ziyadeh F N , Han D C. Involvement of transformation growth factorb and its receptor in the pathogenesis of diabetic neபைடு நூலகம்hropathy. Kidney Int , 1997 ,52 :S7.
[10 ] Tomooka S , Border W A , Marshall B C , et al . Glomerular ma2trix accumulation is linked to inhibition of the plasmin proteasesystem. Kidney Int , 1992 ,42 :1462.
[ Abstract] Objective : To explore curative machanism of Shenle capsule on the 5/ 6 nephrectomy rats. Method : Fibrin plate method was applied to examine activity of urinary plasminogen activator(PA) . Semi2quantitative analysis was used to observe stained intensity and area of tissue2type plasminogen activator , urokinas2type plasminogen activator/ plasminogen activator inhibitor(tPA , uPA/ PAI21) in remnant renal tissue. Northern blot was employed to analyze the expression of transforming growth factor (TGF2β) mRNA. Result : In model control group ,the urinary PA activity and protein expression of tPA , uPA were down2regulated , but protein expression of PAI21 , TGF2βmRNA was up2regulated in remnant renal tissue. In each treated group , the urinary PA activity and protein expression of tPA/ uPA were enhanced ,but the protein ex2 pression of PAI21 , TGF2βmRNA decreased simultaneously. Conclusion : Shenle capsule can delay glomerulosclersis and tubulointerstitial fi2 broticlesions of remnant kidney by improving the activity of urinary PA and modulating the expression of tPA ,uPA/ PA2I1 and TGF2βmRNA.
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第 29 卷第 8 期 中 国 中 药 杂 志
Vol. 29 , Issue 8
2004 年 8 月
[ 关键词 ] 冬虫夏草 ; D2半乳糖 ;抗衰老 ;抗氧化酶 [ 中图分类号 ] R 285. 5 [ 文献标识码 ] A [ 文章编号 ] 100125302 (2004) 0820773204
冬 虫 夏 草 为 麦 角 菌 科 冬 虫 夏 草 菌 Cordyceps sinensis (Berk. ) Sacc. 寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的 子座及幼虫尸体的复合体 ,是一种名贵传统滋补强 身的 中 药 , 产 于 四 川 、云 南 、西 藏 等 地 。冬 虫 夏 草
[ 收稿日期 ] 2004203206 [ 基金项目 ] 国家自然科学基金资助项目 (393000173 ;39470058) [ 通讯作者 ] 3 李长龄 ,Tel : (010) 82801703 , (010) 82802653
味甘 ,性平 ,归肺 、肾经 ,具有秘精益气 、滋肺补肾 、止 血化痰等功效[1] 。冬虫夏草中含有粗蛋白 、D2甘露 醇 、冬虫夏草素 、虫草多糖等成分 。现代研究表明冬 虫夏草具有免疫功能正向调节作用 ,抗心律失常 、降 血脂 、镇静 、促进造血功能等作用 ,但对其抗衰老作 用的研究较少且不够深入 ,本实验通过观察 D2半乳 糖所致亚急性衰老小鼠的多项指标 ,探讨其延缓衰
物酶 、Na +2K+2ATP 酶试剂盒均由北京吉泰科联生物 谷胱甘肽过氧化物酶试剂盒的说明测定全血 GSH2Px
试剂有限公司提供 。其余试剂均为分析纯 。UV29100 活性 ,以过氧化氢法[4]测定全血 CAT 活性 。
紫外2可见分光光度计 ,深圳爱克分析仪器有限公司 。 2. 4 脑中 Na +2K+2ATP 酶 、MAO 活性的测定 小鼠
1. 2 药品与仪器 冬虫夏草提取物 ( CSE) ,由日本 盲端到终点区台阶的时间 ,检测以 300 s 为限 。
株式会 NOEVIR (NOEVIR Co. ,LTD) 提供 。维生素 E2 2. 3 红细胞 、肝脏 、脑中 SOD , GSH2Px ,CAT 的活性测
C 复合剂 ,哈药集团三精制药厂 ,批号 0305473 。D2半 定 小鼠末次给药后第 2 天 ,眼眶取血后立即处死 ,
治疗组 、阳性对照组 。模型对照组 、CSE 治疗组 、阳性 蛋白含量 。
对照组每天皮下注射 D2半乳糖 1. 25 g·kg - 1 ,正常对 2. 6 数据处理 各组数据采用 t 检验统计处理 。
照组皮下注射同体积的生理盐水 。同时治疗组灌胃 3 结果
CSE 水溶液 1. 0 ,2. 0 ,4. 0 g·kg - 1 (按生药计) ,阳性对 3. 1 CSE 对衰老小鼠学习记忆能力的影响
[ Key words] Shenle capsule ; plasminogen activator(PA) ; I2type plasminogen activator inhibitor( PAI21) ; transforming growth factor ( TGF2β)
[ 责任编辑 方文贤 ]
China Journal of Chinese Materia Medica
August , 2004
老的作用及机制 ,以期为冬虫夏草抗衰老研究提供 和 3 min 内的错误次数 。比较不同组间小鼠记忆成
一定的实验依据 。
绩的差异 。
1 实验材料
2. 2. 2 水迷宫实验 水迷宫由黑色塑料板制成 ,水
乳糖 ,上海恒信化学试剂有限公司 ,批号 20000825 。 取全脑和肝脏 ,用冰冷的生理盐水制成 10 %的脑匀
连苯三酚 ,瓯海化工试剂厂 ,批号 971108 。硫代巴比 浆液和肝匀浆液 ,以连苯三酚自氧化法[3] 测定红细
妥酸 ,上海试剂二厂 ,批号 930411 。谷胱甘肽过氧化 胞 、10 %肝匀浆液 、10 %脑匀浆液的 SOD 活性 ,按照
1. 1 动物 ICR 小鼠 , ♀♂各半 ,体重 18～22 g ,北 温 (24 ±1) ℃,有 4 个盲端 ,先从一个盲端开始训练 ,
京大学医学部实验动物中心 ,合格证号 : SCXK112002 连续训练 2 d ,依次 2 个盲端训练 2 d ,3 个盲端训练 2
0004 。
d 后 ,第 7 天从第 4 个盲端开始测试 ,记录小鼠从四
SHW2420 三用电热恒温水箱 ,北京长安科学仪器厂 。 处死后 ,立即取脑 ,按 Na +2K+2ATP 酶试剂盒的说明
800B 型台式离心机 ,上海安亭科学仪器厂 。小鼠水 制备酶液并测定 Na + 2K+2ATP 酶活性 ;按文献 [ 5 ]方
迷宫实验仪 ,中国医学科学院药物所制造 。跳台实 法制备酶液并测定 MAO 活性 。以考马斯亮兰法测定
照组灌胃 VE2C 复合剂 50 mg·kg - 1 ,正常对照组和模 3. 1. 1 跳台实验 如表 1 所示 ,在跳台实验学习记
型组给予蒸馏水 ,按体重调整给药剂量 ,连续 6 周 。 忆测试中 ,模型对照组与正常对照组比较 ,跳台潜伏
2. 2 学习记忆测试 给药 6 周后开始进行行为学测 期明显缩短 、错误次数明显增多 ( P < 0. 01) ,提示动
冬虫夏草提取物延缓衰老实验研究
王玉华1 , 叶 加1 , 李长龄1 3 , 蔡少青1 , 石崎雅敏2 , 片田顺规2
(1. 北京大学 药学院 ,北京 100083 ; 2. NOEVIR 株式会社 神户研究所 ,日本 神户 65028521 )
[摘要 ] 目的 :观察冬虫夏草提取物 (CSE) 对实验性衰老小鼠的抗衰老作用及机制 。方法 :以 D2半乳糖致亚 急性衰老小鼠为模型 ,同时给予 CSE 1 ,2 ,4 g·kg - 1治疗 ,6 周后 ,以学习记忆成绩 、超氧化物歧化酶 (SOD) 、谷胱甘肽 过氧化物酶 ( GSH2Px) 、过氧化氢酶 (CAT) 、脑中单胺氧化酶 (MAO) 、Na + 2K+ 2ATP 酶 、过氧化脂质为指标 ,观察 CSE 延 缓衰老作用 。结果 :表明 CSE 能有效提高衰老小鼠的学习记忆成绩 ,不同程度提高衰老小鼠肝 、脑 、红细胞 SOD 及 全血 GSH2Px ,CAT 活性 ,提高脑中 Na + 2K+ 2ATP 酶活性 ,降低脑中 MAO 活性 ,降低肝 、脑 MDA 含量 。结论 :CSE 能有 效防止 D2半乳糖致衰老小鼠的多项衰老体征的出现 ,具有明显的延缓衰老作用 ,其作用机理可能与其提高抗氧化 酶活性 、清除自由基 、减少过氧化脂质的生成有关 。
验仪 ,北京医科大学仪器厂制造 。
蛋白含量[6 ] 。
2 方法
2. 5 脑 、肝脏中 LPO 的分解产物 MDA 含量的测定
2. 1 动物分组和衰老模型的建立[2] 动物随机分为 同 2. 2 方法制备 10 %脑 、肝脏匀浆液 ,以硫代巴比
6 组 ,正常对照组 、模型对照组 、3 种不同剂量的 CSE 妥酸比色法[7]测定 MDA 含量 。以考马斯亮蓝法测定
Curative machanism of Shenle capsule on 5/ 6 nephrectomy rats
WEI Ri2bao , ZHANG Wu2xing , CHEN Xiang2mei ( Division of Nephrology , Kidney Center & Key Lab of Chinese PLA , General Hospital of Chinese PLA , Beijing 100853 , China)