穆士杰-输血新进展

real-time polymerase chain reaction platform. Transfusion. 2010
Jan;50(1):40-6.
血型系统的基因分型
红细胞
RHD
2
等位基因特异的寡核苷酸PCR (ASO-PCR)测定
地中海贫血病人的Rh C/c 和 Rh E/e抗原
Hojjati MT, Einollahi N, Nabatchian F, Pourfathollah AA, Mahdavi MR. Allele-specific oligonucleotide polymerase chain
杀灭病毒
保存细胞
Kchir MM, Rheumatol Int. 2010 May;30(7):933-9
血小板
1.人类血小板抗原HPA-1～-17bw
申卫东, 临床血液学杂志，2010，23(12)：705-709
2.HPA单核苷酸多态性的筛选
Shehata N, Transfusion. 2011.10（1111）:1537-2995
灭活红细胞病毒
硫代吡唑 光敏剂
RBC结合抑 制剂潘生丁
Wagner SJ等研究发现，该法能有效
降低红细胞中病原水平，而且能保持大 多数红细胞特性。
Wagner SJ,].Transfusion,2005,May;45(5):752-60.
Βιβλιοθήκη Baidu
与实际还存在 一定的差距
实验室内有一定 杀灭微生物的效 果
NET
美国NAT检测结果
-16人份或24人份混合 -1999.03-2002.03
NAT+,抗体阴性 HCV HIV 170/39,721,404 12/37,164,054
NAT检出率 1/23万 1/310万
—Susan et al,N Eng J Med 2004,351:760-768
法国NAT检测结果
-Chiron Procleix TMA HIV-1/HCV； -Roche Cobas Ampliscreen HIV-1 and HCV， combined with the Organon Nuclisens extractor -8或16人份
NAT+,血清学阴性 HCV HIV 3/614万 2/614万 NAT检出率 1/205万 1/307万
能灭活病毒外，还能灭活白细胞， 有利于清除亲白细胞病毒及减少白细胞 输注后所导致的输血副反应。
•氧化补骨脂素（8-MOP） •甲基补骨脂素（AMT） •氨甲基-三甲基补骨脂素（S-59）
补骨脂素光化学法:
300 mg/ml 的8MOP
鼠巨噬细胞 病毒(MCMV) 人的血小板 成分
病毒滴度为 病毒滴度为 106pfu/ml 106pfu/ml
thermus aquaticus
PCR反应过程： ①94℃变性
20-40个
循环 1个PCR
② 50-65℃退火
PCR循环
③72℃延伸
PCR-SSO探针法
主是利用PCR技术扩增靶基因的适当片段,然后用 人工合成的含特定位点的标记寡核苷酸探针杂交 A C
T
G
探针
NC膜
探针
探针杂交
PCR-SSP
红细胞病毒灭活
酞菁光化学法(phthalocynines,pcs):
酞菁是一种类卟啉合成染料。在远红线区 (650～700nm)有较强的光吸收,其复合物
如ALPC及其磺化物能有效灭活红细胞中的
VSV 和细胞内及游离于细胞外的HIV，且 处理的红细胞溶血低、损伤小。
噻唑橙
酞菁染料的一种。与红细胞结合后,能 灵敏的插入病毒核酸,阻止其复制。
2010年血站核酸检测试点工作
2010年血站核酸检测试点工作
2010年3月13日-19日对试点血站的80余名管理和技术人员 进行现场培训。 2010年4月23－29日卫生部临床检验中心对试点血站的相关 人员59人进行技术培训。
培训
督导
2010年9月13-16日，卫生部临床检验中心组织对山东省血 液中心、青岛市中心血站、辽宁省血液中心和河北 省血液中心实验室进行现场评估和督导。
Skripchenko A等研究发现 • 约21%噻唑橙能与红细胞结合 • 使5种检测病毒滴度下降5.4-7.1log • 8种被检测的细菌滴度下降2.3-7.0log • 与未经光化学处理的RBC相比溶血仅有轻度的增加 • 钾外流中度增加，但ATP水平相似
噻唑橙光化学法能灭活多种病毒和细菌
Skripchenko A, Transfusion,2006,Feb;46(2):213-9.
检 测 情 况
常州市中心血站 江苏省血液中心 河北省血液中心 辽宁省血液中心 深圳市血液中心 上海市血液中心 云南省血液中心 江西省血液中心 浙江省血液中心 四川省血液中心 广东省血液中心 北京市红十字血液中心 合计
2011年血站核酸检测工组部署
《血站核酸检测项目管理方案》（卫办医政函 ﹝2010﹞1118号）
—Euro Surveill.2005 Feb 1；10(2)[Epub ahead of prient]
血液有形成分病毒 灭活的研究
以核酸为靶点的光化学技术 原 理 用核酸特异性的加合物形成联合 光照来介导病毒灭活
血小板病毒灭活
是一种有效的病毒灭活光敏物质。它无需氧激活， 在UVA光照下，能与嘧啶反应形成环状复合物， 从而能有效的抑制病毒复制，转录和翻译。
可将滴度为7.65log TCID50的HCMV灭活 至<0.5logTCID50
核黄素浓度 （umol/L）
杨鹏，安徽医科大学学报，2008,43(4):402-405.
可见该方法能有效灭活红细胞悬液中的HCMV 然而其对保存期内红细胞溶血率，携氧能力及 免疫原性等是否有改变，仍需进一步研究。
硫代吡唑（TP）光化学法
其他血型
PCR-SSP法用于Dombrock血型Doa／Dob的基因 分型Click to add title
3
刘衍春,许剑锋,吴敏慧.PCR-SSP法用于Dombrock血型Doa／ Dob的基因分型, 临床血液学杂志2009,22(6):300-301
白细胞
罕见HLA-B*2730等位基因的扩展单倍体型的研究
A3表型的泰国献血者ABO血型基因的突变
Pipatvanichkul A, J Med Assoc Thai. 2011 Mar;94(3):379-85.
血小板糖蛋白基因的新突变
Xu X,Transfus Med. 2011 Jun 9. doi:10.1111/j.1365-3148.
核酸技术在血液传播疾病 检测中的应用
陶苏丹,和艳敏,应燕玲等, ABO血型新等位基因O61的 分子生物学研究, 中国实验血液学杂志, 2010, 18(5)
基因突变的检测
类孟买血型个体Fut1基因突变
黄豪博,中国实验血液学杂志,2010;18(5):1338-1340
类孟买血型家系的α1,2岩藻糖基转移酶基因突变分析
许先国,中华医学遗传学杂志,2010,27(3):250-254
Grubić Z, Tissue Antigens. 2008 Jun;71(6):514-9
中国武汉人群强直性脊柱炎与HLA-B*27亚型的关系
Liu X, Rheumatol Int. 2010 Mar;30(5):587-90
突尼斯强直性脊柱炎患者的HLA-B,DR和DQ抗原多 态性研究（病例对照研究）
S-59介导的光化学法：
病毒复制
Roback JD等用150mmol/L S-59和3J/cm2UVA照射处理PLT， 可使PLT中CMV病毒滴度下降5.9log，降低输血传播CMV感染 的发生。 Sawyer L等也指出该方法能有效地灭活血小板中的B19病毒
，减少输血感染的风险。
Roback JD, Transfus Med Rev,2006,20(1):45-56. Sawyer Transfusion,2007,47(6):1062-70.
交流
2010年10月22日，卫生部临床检验中心在青岛组织召开 核酸检测试点工作经验交流会。
2010年血站核酸检测试点工作
试点单位名称 山东省血液中心 青岛市中心血站 6月 5171 7586 3174 3519 4440 7803 5297 1532 7月 7169 7584 2634 4022 6437 8201 4523 1889 8月 5235 7945 3812 3981 9833 7537 7032 1648 3512 3442 8095 9月 5330 7653 3312 4675 9727 8083 5065 22982 7656 3153 6714 153 10 月 6238 9553 4282 6521 11712 7897 5707 27250 7056 4732 7653 2568 2558 11 月 6769 8835 4266 8291 12775 9157 5951 33377 8652 4742 14308 9075 26349 28976 38522 42459 62072 84503 103727 181523 12 月 7024 8428 4122 6681 10491 7578 5414 0 8548 5687 10409 3631 19246 23682 120941 合计 42936 57584 25602 37690 65415 56256 38989 88678 35424 21756 47179 15427 48153 52658 633747
30min紫外线强度
为 315～418uWcm2 血小板成分中 未检出MCMV
标准血小板悬液经300 mg/ml的氧化补骨
脂素（8-MOP）和340～380nm紫外线
(强度为 315～418uWcm2 )处理6h
PLT数量, 形态,PH值 无明显变化
细胞外乳酸 脱氢酶含量, 凝聚反应和 前列腺素的 产生等与对 照组相似
（序列特异性引物-PCR技术 ） 1 2 3
引物特异性
4 5 6 7 8
PCR
1 2 3 4 5 6 7 8
生物芯片
固相芯片
液相芯片
液相芯片
荧光微球 捕获分子 待检分子 报告分子
液相芯片
定 性
定 量
液相芯片
Sensitivity
Reliability
Cost
Specificity
Simplicity
reaction for the determination of Rh C/c and Rh E/e antigens in
thalassaemic patients. Blood Transfus. 2011 Jan 13. doi: 10.2450/2011.0055-10.
血型系统的基因分型
有较好的发展前景，但需要优选辐射剂 量适合的光源，以减轻对红细胞的损害
核黄素光化学法
可见光
氧化鸟嘌呤残基
介导核酸链断裂
• 杨鹏等对核黄素光化学法灭活红细胞悬液中巨细胞病毒的研究
结合照度为40000Lux的可见光 照射时间（min)
45 40 35 30 25 20 15 10 5 0 50 100 150 200
Multiplicity
Time
血型系统的基因分型
红细胞
ABO
1 用纳流体RT-PCR平台进行高流量红细胞基因分型
Hopp K, Weber K, Bellissimo D, Johnson ST, Pietz B. Highthroughput red blood cell antigen genotyping using a nanofluidic
输血医学新动态
第四军医大学西京医院 穆士杰
1
分子生物学技术在血型研究中的应用
2
3 4 5 6 7
核酸技术在血液传播疾病检测中的应用
血液有形成分病毒灭活的研究 血液保存技术的研究 血型与疾病发生相关性的研究 细胞治疗技术的研究
IPS细胞相关的研究
分子生物学技术在 血型研究中的应用
Taq DNA多聚酶的发现
新基因的发现
ABO血型新等位基因(B112, CisAB06 和 O61)
Zhu F, Tao S, Xu X,et al. Distribution of ABO blood group allele and identification of three novel alleles in the Chinese Han population. Vox Sang. 2010 May;98(4):554-9.