浓缩水解胶原蛋白

含量,即可得到平均分子量.
法
COOCH2 NH3+
HCHO
COOCH2
HCHO
NHCH2OH
COOCH2 N(CH2OH)2
二 实验准备
仪 器：中空纤维超滤膜组件(截流分子量:6000; 膜面积:0.5M2)
可见分光光度计
超滤料液：蛋白质浓度为30%的水解明胶100mL，用纯净水稀释至
3500mL-5000mL，搅拌均匀后用少量硅藻土助滤剂做滤 层进行真空抽滤，收集滤液备用.
2、测 定
10mL待测液 蒸馏水定容50mL
0.01mol/L 氢氧化钠溶液
pH 8～9
中性甲醛10mL
搅拌 30min
氢氧化钠滴定 记录VNaOH
三 实验过程
B 平均分子量测定
3、计 算
M平均=M×1.174×S×1000/(C×V)
M——样品质量 S——蛋白质含量 C——氢氧化钠浓度 V——氢氧化钠体积
500mL
3
稀释至1000mL
蒸馏水
三 实验过程
A 蛋白质含量测定
2、标准曲线制备
3、样品测定
+ 1 mL 样品
4 mL双缩脲试剂
+ 1 mL 蒸馏水
4 mL双缩脲试剂
静置30min 540nm 比色
三 实验过程
B 平均分子量测定
1、中性甲醛配制
甲醛(分析纯)10mL,用0.01mol/L氢氧化钠溶液调pH 8～9.
中空纤维超滤膜 浓缩水解胶原蛋白
张 杰
知识链接
超滤膜
材料
无机膜 有机膜
几何形状
陶瓷膜 金属膜
芳香聚酰胺、纤维素酯 聚丙烯、聚丙烯氰、聚砜
亲水性好 成孔性好 材料易得
耐酸碱性差 不适于酮、酯类
中空纤维膜
卷式膜
管式膜
平面膜
一原理
分离原理
小于截流分子量可以透过 大于截流分子量被截留
一原理
中空纤维膜开放式的流道结构
三 实验过程
检漏 加料 清洗
2
1
测定 蛋白质含量 平均分子量
分离过程
膜分离 注意流量及 压强的变化
3
4
15min后 收集滤过液
超滤截留液
防止纤维膜 被细菌“吞食”
注:结束后,清洗系统,加甲醛保护液.
三 实验过程
A 蛋白质含量测定
1、配制双缩脲试剂
1.5g 硫酸铜
1
6.0g 酒石酸钾钠
2
搅拌下加入300mL 10%氢氧化钠溶液
一原理
蛋白质含量测定
双 缩 脲 法
双缩脲
紫红色
A 540nm最大吸收
B 颜色深浅与蛋白 质浓度成正比
C 与蛋白质的分子 量及氨基酸的组 成无关
பைடு நூலகம்
一原理
平均分子量测定
室温、近中性,甲醛与氨基酸上的-NH3+结合,形成
甲
羟甲基衍生物,使-NH3+的H+游离出来,就可以用碱
醛
滴定放出的H+,从而根据消耗的碱量算出氨基酸的
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