高效液相色谱法测定抗氧化剂乙氧基喹啉含量_杨海锋

图２ 流动相中乙腈比例对 ＥＱ 保留因子的影响
２．３ 流 速 采 用 Ｓｙｍｍｅｔｒｙ Ｃ１８ 柱 （２５０ ｍｍ ×４．６ ｍｍ，
５μｍ），检测波长为 ２２８ｎｍ，流 动 相 为 乙 腈 ＋２％ 乙 酸 溶 液 （体 积 比 为 ８０ ∶ ２０）， 标 准 溶 液
（ＥＱ：１μｇ／ｍｌ），进 样 量 为 １０μｌ，比 较 了 不 同 流 速 （０．５、０．６、０．８、１．０ｍｌ／ｍｉｎ）对 ＥＱ 的色谱峰容量因
基喹啉含量的检测方法。
１ 材 料 与 方 法 １．１ 试 样 溶 液 制 备
称取试样 ０．１ｇ，置 于 ５０ ｍｌ容 量 瓶 中，用 乙 腈 定容，摇匀，置超声波清 洗 器 中 提 取 ４０ ｍｉｎ，在 提 取 过程中 振 摇 ２～３ 次。 冷 却 至 室 温，摇 匀，静 置。 用 ５ｍｌ移液管量取５．０ ｍｌ上 清 液 于 ５０ ｍｌ容 量 瓶 中 用乙腈定容。取上述部 分 上 清 液 过 ０．２２μｍ 滤 膜， 滤液作为试样溶液。 １．２ 标 准 溶 液 制 备
分别选择柱温为１５、２０、２５、３０、３５ 和 ４０℃ 进 行 试验，考察环境温度对 ＥＱ 测定的影响，实验结果见 表１。实验结果 表 明，在 上 述 温 度 下，ＥＱ 测 得 峰 面 积的相对标准 偏 差 （ＲＳＤ）均 小 于 １．０％；在 上 述 温 度下，柱 温 对 ＥＱ 分 离 度 （Ｒ）也 无 明 显 影 响。 根 据 ＥＱ 在不 同 温 度 下 的 分 离 效 果 及 峰 面 积 的 变 化 情 况 ，为 了 统 一 故 确 定 柱 温 为 ３０℃ 。
随 着 乙 氧 基 喹 啉 （Ｅｔｈｏｘｙｑｕｉｎ，ＥＱ）市 场 需 求 的 不断扩大，经常发生乙氧基喹啉产品的贸易 纠 纷 。 ［１］ 国内目前尚没有制定饲料添加剂乙氧基喹啉的质量 标准和统一的检测技术。广大生产企业和用户都希 望对乙氧基喹啉中的主成分进行检验和检测。国内 外研究报道的乙氧基喹啉的检测方法主要有滴定法 （电位差法、指示剂 法）、气 相 色 谱 法、高 效 液 相 色 谱 法等［２－３］。滴定法操作繁琐、耗时、灵敏度不 高，由 于 存在干扰误差较大而主要用于原油含量的分析。高 效 色 相 色 谱 法 以 其 高 效 、高 灵 敏 度 、系 统 封 闭 避 免 不 饱 和 键 氧 化 等 优 点 ，受 到 普 遍 关 注 ，因 此 乙 氧 基 喹 啉 粉剂 （３０％ 粉 剂、６０％ 粉 剂 ）的 检 测 方 法 研 究 以 ＨＰＬＣ 确证方法为首选。然而由于研究者应用的前 处理 技 术、检 测 方 法 都 不 相 同，即 使 都 使 用 ＨＰＬＣ 技 术 ，但 分 离 柱 、填 料 、流 动 相 也 存 在 差 异 ，缺 乏 一 个 统一的标准。而不同的前处理方法和检测技术会对 检测结果产生一定 的 影 响，如 果 贸 易 中 的 供 需 双 方 采 用 不 同 的 检 测 方 法 ，必 然 会 导 致 一 定 的 差 异 ，从 而 引发贸易纠纷，因此 迫 切 需 要 统 一 饲 料 添 加 剂 乙 氧
中 图 分 类 号 ：ＴＳ２１０．７ 文 献 标 志 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：１００３－６２０２（２０１３）０２－００５９－０４
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ｅｔｈｏｘｙｑｕｉｎ ｂｙ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ｙａｎｇ Ｈａｉｆｅｎｇ，Ｚｈａｏ Ｚｈｉｈｕｉ，Ｚｈｏｕ Ｃｈａｎｇｙａｎ，Ｄｏｎｇ Ｍａｏｆｅｎｇ （Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ａｇｒｉ－ｆｏｏｄ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ ａｎｄ Ｔｅｓｔｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓｈａｎｇｈａｉ Ｓｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎ ａｎｄ Ｔｅｓｔｉｎｇ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｆｅｅｄ Ｑｕａｌｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ ２０１４０３，Ｃｈｉｎａ） ＡＢＳＴＲＡＣＴ：Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｅｅｄ ａｄｄｉｔｉｖｅ ｅｔｈｏｘｙｑｕｉｎ ｂｙ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ （ＨＰＬＣ） ｗａｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｔｏ ａｓｓｅｓｓ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ ｅｔｈｏｘｙｑｕｉｎ ｑｕｉｃｋｌｙ ａｎｄ ａｃｃｕｒａｔｅｌｙ．Ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅｓ（ｍａｉｎｌｙ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ９５％ ｅｔｈｏｘｙｑｕｉｎ ｏｉｌ， ６０％ ｅｔｈｏｘｙｑｕｉｎ ｄｒｙ ｐｏｗｄｅｒ ａｎｄ ３０％ ｅｔｈｏｘｙｑｕｉｎ ｄｒｙ ｐｏｗｄｅｒ）ｗｅｒｅ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ ｂｙ ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ．Ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅ ｗａｓ １０～１００ ｍｇ／Ｌ，ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｗａｓ ０．９９９ ６．Ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ ｔｅｓｔ，ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｄｅｖｉａｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｌｅｓｓ ｔｈａｎ ２％ ．Ｔｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｆｅｅｄ ａｄｄｉｔｉｖｅ ｅｔｈｏｘｙｑｕｉｎ． ＫＥＹＷＯＲＤＳ：ｅｔｈｏｘｙｑｕｉｎ；ｆｅｅｄ ａｄｄｉｔｉｖｅ；ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ （ＨＰＬＣ）
标 准 储 备 液：准 确 称 取 ＥＱ 标 准 品 （纯 度 ９９．０％）０．１ｇ，置 于 １００ ｍｌ棕 色 容 量 瓶 中，用 乙 腈 定容至刻度，摇 匀，ＥＱ 质 量 浓 度 为 １ ｍｇ／ｍｌ，贮 存 于４℃冰箱 中。 标 准 工 作 液：准 确 量 取 标 准 储 备 液 １０ ｍｌ于１００ ｍｌ棕 色 容 量 瓶 中 ，用 乙 腈 溶 解 ，定 容 至 刻度，摇 匀，ＥＱ 浓 度 为 ０．１ ｍｇ／ｍｌ，贮 存 于 ４℃ 冰 箱 ，有 效 期 ２ 周 。 标 准 系 列 溶 液 ：准 确 量 取 标 准 工 作 液２．５、５．０、１０．０、２０．０、２５．０ ｍｌ置 ２５ ｍｌ棕 色 容 量
的 考 虑 ，选 择 乙 腈 ＋２％ 乙 酸 溶 液 （体 积 比 为８０∶２０）
图３ 流速对 ＥＱ 保留因子的影响
实验结果表明，当 流 速 为 １ ｍｌ／ｍｉｎ 时，ＥＱ 保 留时间适中，ＥＱ 的色谱峰容量因子在 １＜ｋ＜２０ 范 围 内 。 故 选 择 流 速 为 １ ｍｌ／ｍｉｎ 是 较 为 适 宜 的 。 ２．４ 柱 温
为流动相。
２ 色 谱 条 件 的 确 定 ２．１ 检 测 波 长
用乙腈 配 制 成 一 定 浓 度 的 ＥＱ 标 准 溶 液，在 ２００～４００ｎｍ 波 长 范 围 内 进 行 扫 描，并 提 取 相 应 波 长比较色谱图，结果见图 １。实 验 结 果 表 明，乙 氧 基 喹啉（ＥＱ）在２２７．１ｎｍ 及３５９．７ｎｍ 波长处有最大 吸收，２２８ｎｍ 处 ＥＱ 响 应 值 更 大，故 选 择 ２２８ｎｍ 作为检测波长。
２０１３，Ｎｏ．２
百度文库９
高效液相色谱法测定抗氧化剂乙氧基喹啉含量
杨 海 锋 ，赵 志 辉 ，周 昌 艳 ，董 茂 锋
（上 海 市 农 业 科 学 院 农 产 品 质 量 标 准 与 检 测 技 术 研 究 所 ，上 海 市 饲 料 监 督 检 测 站 ，上 海 ２０１４０３）
摘 要：通过用高效液相色谱法测定饲料添加剂乙氧基喹啉含量，建立了一种简 单、快 速、准 确 评 价 饲 料 添 加 剂 乙 氧基喹啉品质的方法。选取典型乙氧基喹啉产品（主要包括９５％原 油、６０％ 粉 剂 和 ３０％ 粉 剂），用 乙 腈 超 声 提 取， 外标法定量。在 １０～１００μｇ／ｍｌ范 围 内，乙 氧 喹 的 峰 面 积 与 其 质 量 浓 度 间 有 良 好 的 线 性 关 系，相 关 系 数 为 ０．９９９ ６。精 密 度 实 验 ，相 对 标 准 偏 差 均 小 于 ２％ ，能 够 满 足 饲 料 添 加 剂 乙 氧 基 喹 啉 检 测 的 要 求 。 关 键 词 ：乙 氧 基 喹 啉 ；饲 料 添 加 剂 ；高 效 液 相 色 谱 法
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杨海锋等：高效液相色谱法测定抗氧化剂乙氧基喹啉含量／２０１３年第２期
瓶中，用乙腈定容，摇匀，配制成 ＥＱ 为 １０．０、２０．０、 ４０．０、８０．０、１００．０μｇ／ｍｌ标 准 工 作 液 ，临 用 现 配 。 １．３ 色 谱 条 件
色谱柱：Ｃ１８柱，长 ２５０ ｍｍ，内 径 ４．６ ｍｍ，粒 径 ５μｍ，或 性 能 相 当 者；柱 温：３０℃；流 动 相：乙 腈 ＋ ２％乙酸溶液，体积比 为 ８０∶２０；流 速：１ｍｌ／ｍｉｎ；检 测 波 长 ：２２８ｎｍ；进 样 量 ：１０μｌ。
收 稿 日 期 ：２０１２－１２－０６；修 回 日 期 ：２０１３－０１－１２ 基 金 项 目 ：公 益 性 行 业 （农 业 ）科 研 专 项 资 助 （项 目 编 号 ２０１２０３０１５） 作 者 简 介 ：杨 海 锋 （１９８１－），男 ，硕 士 ，助 理 研 究 员 ，主 要 从 事 饲 料 及 农 产 品 质 量 安 全 研 究 。 通 讯 作 者 ：董 茂 锋 （１９８３－），男 ，硕 士 ，助 理 研 究 员 ，主 要 从 事 农 产 品 质 量 安 全 及 技 术 标 准 研 究 。
子 的 影 响 ，结 果 见 图 ３。
图１ ＥＱ 在波长２００～４００ｎｍ 内光谱扫描图
２．２ 流 动 相 组 成 采用乙腈与 乙 酸 溶 液 为 流 动 相，Ｓｙｍｍｅｔｒｙ Ｃ１８
柱（２５０ｍｍ×４．６ｍｍ，５μｍ），流速为 １ ｍｌ／ｍｉｎ，检 测 波 长 为 ２２８ｎｍ，标 准 溶 液 （ＥＱ：０．１ ｍｇ／ｍｌ），进 样 量 为 １０μｌ，进 行 优 化 选 择 。 比 较 了 不 同 比 例 的 乙 腈 （体 积 分 数 ９０％、８５％、８０％、７５％、６５％、６０％）对 ＥＱ 的色谱峰容量因子的影响，见图２。以及不同含 量的乙酸溶液（体 积 分 数 ０．５％、１％、２％、３％、４％） 对 ＥＱ 色谱性能 的 影 响。 实 验 结 果 表 明，试 样 溶 液 中 ＥＱ 色谱峰容量因子随流动相中乙腈比例的增大 而减小。 当 乙 酸 溶 液 体 积 分 数 为２％～３％ 时，ＥＱ 色谱性能较好，乙 酸 溶 液 体 积 分 数 为 ２％ 时，ＥＱ 色 谱性能最好。根据上述优化实验结果以及保留时间
表１ 柱温对 ＥＱ 峰面积的影响
柱 温／℃ 峰面积
１５ ５２２ ４６５
２０ ５１４ ５０２
２５ ５１５ ４９２
３０ ５２３ ４２７
３５ ５１４ ５０４
４０ ５１３ ４９２
ＲＳＤ／％ ０．９
２．５ 色 谱 柱
有普适性，在上述确 定 优 化 条 件 下 对 性 能 相 当 的 不
保 留 时 间／ｍｉｎ ５．８２６ ４．５２８ ５．１９２ ５．０９２
理论板数 ５ ８０３ ５ ９７７ ４ ８６６ ６ ７５１
拖尾因子 １．１１ １．０７ １．０９ １．０６
由于上 述 色 谱 优 化 条 件 均 采 用 Ｓｙｍｍｅｔｒｙ Ｃ１８ 同品牌规格色谱柱对 ＥＱ 色谱系统适用性 进 行 了 测 柱（２５０ｍｍ×４．６ ｍｍ，５μｍ）进 行 的。 为 使 方 法 具 试比较，结果见表２。
表２ 性能相当的不同品牌色谱柱对 ＥＱ 色谱系统适用性测试结果
色 谱 柱 规 格 （柱 长 × 内 径 ，粒 径 ）
ＧＬ Ｉｎｔｅｒｓｉｌ ＯＤＳ－３（２５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ，５μｍ） Ａｇｉｌｅｎｔ ＺＯＲＢＡＸＳＢ－Ｃ１８（２５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ，５μｍ） Ａｇｅｌａ Ｖｅｎｕｓｉｌ ＭＰ Ｃ１８（２５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ，５μｍ） Ｗａｔｅｒｓ Ｘｂｒｉｄｇｅ－Ｃ１８（２５０ ｍｍ×４．６ ｍｍ，５μｍ）