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GST•Bind™树脂层析纯化
为了获得好的纯化结果，建议采用载量超出抽提样本中目的蛋白约10-20%的GST•Bind™树脂。 Novagen提供的GST•Bind树脂的载量是5–8mg/ml。而以pET系统每100ml发酵液中目的蛋白的产量约为 20mg。当然每一种目的蛋白的实际产量会因为基因序列，载体结构，宿主菌品种以及生长、诱导条件等 因素的影响而差异很大。SDS-PAGE或Western blotting可以用于粗提物中的目的蛋白粗定量分析。如果 目的蛋白含有S•Tag，用Novagen提供的S•Tag快速分析试剂盒（货号69212-3）和FRETWorks S•Tag分 析试剂盒 （货号70724-3）可以实现准确定量。如果目的蛋白带有GST•Tag则可以用GST•Tag分析试剂 盒（货号70532-3）获得粗提物中GST的准确数据。
GST•Bind树脂用量的建议。 蛋白酶抑制剂 加入蛋白酶抑制剂可以防止蛋白酶水解。可以选用各种蛋白酶抑制剂或其混合物（cocktail），详见 Calbiochem目录。 无活性GST 没有活性的GST是不会与GST•Bind™树脂结合的。只有正确折叠的功能性GST才能用于纯化。如果目的 蛋白的GST没有活性就不能用谷胱甘肽亲和纯化法纯化。因此GST•Tag™融合的包涵体蛋白必须在纯化 前进行重折叠。建议采用Novagen的蛋白重折叠试剂盒（货号70123-3）。用这种快速有效的方法得到的 重折叠蛋白中的GST也不是全部为活性GST，可以用GST•Tag分析试剂盒（货号70532-3）定量任何样 品中功能性GST的量，从而计算理论目的蛋白产量。如果融合表达蛋白中也有His•Tag®，则可以用 His•Bind®试剂盒进行变性条件纯化。
细胞抽提物的制备
操作前的考虑
• BugBuster蛋白抽提试剂，以及Benzonase®核酸酶、rLysozyme™溶菌酶等能极大地方便可溶蛋白 及包涵体的制备，从而完全替代机械法操作，尽可能地保全蛋白。
• BugBuster，Benzonase核酸酶，rLysozyme溶菌酶及GST•Bind系统均可与蛋白酶抑制剂兼容。 • GST•Bind纯化系统可以与2-巯基乙醇，二硫苏糖醇以及EDTA等兼容。 • 本手册中的操作均可按实际表达水平和目的蛋白的量适当加以调整，特别是关于“柱层析”部分中的
பைடு நூலகம்机械破碎法
可溶组分 这部分操作用于分离大肠杆菌可溶组分中的蛋白。用去离子水稀释试剂盒中的10×浓缩液制备1X GST Bind/Wash Buffer。 1. 10,000g离心5分钟收集细胞。倾去上清，尽量控干细胞沉淀。每100ml培养液的细胞用4ml冰冷的1X GST Bind/Wash Buffer重悬。可以加入终浓度为0.1%的NP-40或其它非离子去污剂以减少非特异性结 合。可以用Dounce匀浆器，搅拌器或超声波仪打散细胞沉淀。 2. 在冰浴或盐冰浴中超声波处理样本。根据厂家说明操作，避免长时间超声处理。如果样本已经不再粘 稠即可停止超声。如果DNA没有剪切好会因样品粘稠而堵住柱子。大的细胞块可以在1×GST Bind/Wash buffer中用弗氏压榨法处理。 或者：在细胞糊中加入终浓度为45–60KU/g细胞糊的溶菌酶溶液，吸打混合。30℃孵育15分钟。再进行 超声。将裂解液10,000g离心20分钟。用0.45um膜（滤器）过滤上清。
BugBuster Master Mix 蛋白抽提方法 BugBuster Master Mix（货号71456）是将BugBuster蛋白抽提试剂，Benzonase核酸酶和rLysozyme™ 溶菌酶溶液按最优化配比混合好的一种非常方便使用的蛋白抽提试剂，有助于在最优化条件下获得可溶 活性蛋白。这种预混形式的试剂减少了稀释试剂、计算各种试剂使用量和分别添加的麻烦。100ml和 500ml包装分别足够用于20g和100g细胞沉淀的可溶蛋白抽提。
可溶蛋白制备 采用此操作抽提到的蛋白包括来自细胞周质和细胞质的可溶蛋白。如果欲仅收集周质部分蛋白，可以参 考Novagen的TB055“PET系统操作手册”中提到的渗压休克方法或其它合适的方法。渗透休克方法中 得到的沉淀也可以用于以下操作以获得细胞质中的可溶蛋白。 1. 用经预先称重的离心管10,000g离心10分钟从液体培养体系收集细胞。如果是小规模培养（如1.5ml或
默克生命科学服务热线：400 820 8872 bioteam@merck-china.com
缓冲液的制备 1. 用去离子水稀释试剂盒中提供的10×GST Bind/Wash Buffer至1×。柱 层析约需要15倍体积GST Bind/Wash Buffer，而批次纯化约需要26倍体 积。1倍体积是指柱床体积（如100µl树脂浆的柱床体积为50µl）。 2. 制备含有100mM还原型谷胱甘肽的10×GST Elution Buffer是将1g还原型谷胱甘肽溶于32.5ml 10× Glutathione Reconstitution Buffer。10×GST Elution Buffer制备好后应该以操作需要量分装存放于-20 ℃，以免谷胱甘肽被氧化。10X GST Elution Buffer在–20℃下可以稳定6个月，耐受5次以下的冻融。每 次使用前用去离子水将10×GST Elution Buffer稀释成1X。柱层析和批次纯化约需要3倍体积1×GST Elution Buffer。 注意：1×GST Elution Buffer每次必须在使用前新鲜制备，以免谷胱甘肽氧化。
BugBuster® GST•Bind™纯化试剂盒 BugBuster® GST•Bind纯化试剂盒提供了抽提细胞可溶蛋白和纯化GST•Tag融合蛋白所需的各种试剂， 包括GST•Bind树脂，GST•Bind缓冲液试剂盒，Benzonase®核酸酶和BugBuster蛋白抽提试剂，使用方 便。BugBuster温和破坏大肠杆菌细胞壁释放可溶蛋白，是比弗式压榨法或超声波法等机械处理方法更好 的选择，简单、快速且成本低廉。这种非离子配方的去污剂混合物能非常高效地抽提蛋白并保证可溶蛋 白不变性。 注意：BugBuster是以Tris-HCl-based缓冲液提供，如果需要使用别的缓冲体系，Novagen提供的 BugBuster无伯胺型（为PIPPS缓冲）或10×BugBuster（无缓冲液）形式都是很好的选择。 BugBuster® GST•Bind纯化试剂盒包括： • 2×100ml BugBuster®蛋白抽提试剂 • 10,000U Benzonase®核酸酶，纯度>90% • 10ml GST•Bind树脂，以20ml 50% v/v悬浊液形式提供 • 4个色谱柱 • GST•Bind缓冲液试剂盒（即：100ml 10×GST Bind/Wash Buffer，40ml 10×Glutathione Reconstitution Buffer，1g Glutathione，Reduced，Free Acid）
产品使用说明书
GST•Bind™ 纯化试剂盒
试剂盒简介
以下货号试剂和试剂盒均可参照此说明书操作：建议同时参考本说明书英文原文（说明书编号 TB235）。 GST•Bind树脂：10ml 货号70541-3，50ml 货号70541-4，25ml 货号70541-5 GST•Bind™缓冲液试剂盒：货号70534-3 BugBuster® GST•Bind纯化试剂盒：货号70794-3
GST•Bind™树脂
GST•Bind™树脂用于一步法亲和层析纯化融合表达谷胱甘肽S转移酶（GST）的目的蛋白或天然GST或 谷胱甘肽结合蛋白，操作方便快捷。GST•Tag™融合表达蛋白带有220个氨基酸的GST标签（如表达自 Novagen的编号为pET-41，-42，或-49的载体的蛋白），能够用GST树脂非常方便地得到干净一致的纯 化蛋白。采用10mM还原型谷胱甘肽的温和洗脱，也使目的蛋白的活性受到了很好的保护。GST•Bind树 脂采用11个原子的间隔臂（约16 Å），通过硫键共价结合还原型谷胱甘肽。这种特别设计的树脂使纯化 效率得到提高，因此Novagen的GST树脂载量达到每ml树脂结合载量为5–8mg目的蛋白。
储存
要求4℃存放的包括：10X GST Bind/Wash Buffer；10X Glutathione Reconstitution Buffer； Glutathione，Reduced，Free Acid；GST•Bind树脂（树脂千万不能冻） 要求-20℃存放的包括：Benzonase核酸酶 常温存放的包括：BugBuster，色谱柱
更少），可以用1.5ml离心管14,000–16,000g离心。尽量倾去液体，称量细胞沉淀湿重。 2. 室温下用吸打或温和涡旋使BugBuster Master Mix与细胞沉淀混匀，每克细胞糊需要5ml抽提试剂。
这相当于50ml培养液采用2.5ml抽提试剂。如果是小规模培养，则采用约1/5培养体积的抽提试剂重悬 沉淀（例如，1.5ml培养液采用300µl抽提试剂）。如果抽提试剂过量也没有什么副作用。 选做：加蛋白酶抑制剂。BugBuster Master Mix与蛋白酶抑制剂兼容。如果目的蛋白后续要用凝血酶 （货号69671），Xa因子（货号69036）或重组肠激酶（货号69066）处理，就应该避免使用丝氨酸蛋白 酶抑制剂。尽管纯化过程可能去除活性抑制剂，建议在酶切前最好做透析或凝胶过滤。 3. 室温下将重悬的细胞液在摇板或低速搅拌器上孵育10-20分钟。 注意：孵育后获得的抽提物不是粘稠的。 4. 4℃下16,000g离心20分钟以去除不溶的细胞碎片。如果需要，沉淀可以留作“包涵体纯化”（见以 下说明）的材料。
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5. 将上清转入另一个新试管。这样抽提得到的可溶蛋白溶液可以直接上 样于Novagen的纯化树脂（以及其它很多类似纯化系统）。蛋白溶液 在冰上可以短时存放（2-3小时），也可在-20℃长时间存放直至下步 分析。蛋白抽提液应该根据目的蛋白的活性要求的温度存放，有些蛋 白经冻融会失活。
包涵体的纯化 除了细胞质中的可溶目的蛋白以外，包涵体中也有大量目的蛋白。经包涵体纯化去杂质、包涵体溶解， 包涵体中的目的蛋白重折叠后可以用于GST•Bind™纯化。 1. 10,000g离心5分钟收集细胞。倾去上清，尽量控干细胞沉淀。用40ml 1×GST Bind/Wash Buffer重悬 细胞。 2. 像前述“可溶组分”操作步骤2中那样超声处理，将沉淀充分重悬并切割DNA。 3. 5,000g离心15分钟收集包涵体和细胞碎片。 4. 去除上清，每100ml培养液以20ml 1×GST Bind/Wash Buffer重悬沉淀。重复步骤3操作。或许需要超 声处理才能重悬沉淀。但要注意，多次重复这个步骤会释放出更多结合的污染蛋白。 注意：为了提高纯度，步骤4的1×GST Bind/Wash Buffer中可加入rLysozyme™溶菌酶溶液（终浓度为 1KU/ml）。短时涡旋，孵育5–10分钟再离心。 5. 溶解洗涤后的包涵体，重折叠后用于谷胱甘肽亲和纯化。
GST•Bind™ 缓冲液试剂盒
GST•Bind缓冲液试剂盒包括了从GST•Bind树脂和GST•Mag™磁性琼脂糖树脂纯化目的蛋白所需的结 合，冲洗和洗脱所需的缓冲液。试剂盒所含成分足够用于10个2.5ml柱的纯化。具体包括： • 2×100ml 10×GST Bind/Wash Buffer （43mM Na2HPO4，14.7mM KH2PO4，1.37M NaCl，27mM KCl，pH7.3） • 40ml 10×Glutathione Reconstitution Buffer (500mM Tris-HCl，pH8.0) • 1g Glutathione，Reduced，Free Acid
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注意：BugBuster在4℃以下存放时会有去污剂成分析出，在室温下温和 摇晃即可重溶，试剂功能不受影响。
总述 本操作说明用于从大肠杆菌制备的蛋白抽提物（机械法破碎或BugBuster®蛋白抽提试剂制备）、用 GST•Bind™树脂进行带GST•Tag™的目的蛋白的纯化。目的蛋白所带的必须是具有正确折叠的220个氨 基酸的GST（GST•Tag序列）sequence)，能够与固定化的还原型谷胱甘肽互作因而被亲和纯化。关于 克隆表达、诱导发酵的详细介绍请参考“pET系统操作手册”。
为了获得好的纯化结果，建议采用载量超出抽提样本中目的蛋白约10-20%的GST•Bind™树脂。 Novagen提供的GST•Bind树脂的载量是5–8mg/ml。而以pET系统每100ml发酵液中目的蛋白的产量约为 20mg。当然每一种目的蛋白的实际产量会因为基因序列，载体结构，宿主菌品种以及生长、诱导条件等 因素的影响而差异很大。SDS-PAGE或Western blotting可以用于粗提物中的目的蛋白粗定量分析。如果 目的蛋白含有S•Tag，用Novagen提供的S•Tag快速分析试剂盒（货号69212-3）和FRETWorks S•Tag分 析试剂盒 （货号70724-3）可以实现准确定量。如果目的蛋白带有GST•Tag则可以用GST•Tag分析试剂 盒（货号70532-3）获得粗提物中GST的准确数据。
GST•Bind树脂用量的建议。 蛋白酶抑制剂 加入蛋白酶抑制剂可以防止蛋白酶水解。可以选用各种蛋白酶抑制剂或其混合物（cocktail），详见 Calbiochem目录。 无活性GST 没有活性的GST是不会与GST•Bind™树脂结合的。只有正确折叠的功能性GST才能用于纯化。如果目的 蛋白的GST没有活性就不能用谷胱甘肽亲和纯化法纯化。因此GST•Tag™融合的包涵体蛋白必须在纯化 前进行重折叠。建议采用Novagen的蛋白重折叠试剂盒（货号70123-3）。用这种快速有效的方法得到的 重折叠蛋白中的GST也不是全部为活性GST，可以用GST•Tag分析试剂盒（货号70532-3）定量任何样 品中功能性GST的量，从而计算理论目的蛋白产量。如果融合表达蛋白中也有His•Tag®，则可以用 His•Bind®试剂盒进行变性条件纯化。
细胞抽提物的制备
操作前的考虑
• BugBuster蛋白抽提试剂，以及Benzonase®核酸酶、rLysozyme™溶菌酶等能极大地方便可溶蛋白 及包涵体的制备，从而完全替代机械法操作，尽可能地保全蛋白。
• BugBuster，Benzonase核酸酶，rLysozyme溶菌酶及GST•Bind系统均可与蛋白酶抑制剂兼容。 • GST•Bind纯化系统可以与2-巯基乙醇，二硫苏糖醇以及EDTA等兼容。 • 本手册中的操作均可按实际表达水平和目的蛋白的量适当加以调整，特别是关于“柱层析”部分中的
பைடு நூலகம்机械破碎法
可溶组分 这部分操作用于分离大肠杆菌可溶组分中的蛋白。用去离子水稀释试剂盒中的10×浓缩液制备1X GST Bind/Wash Buffer。 1. 10,000g离心5分钟收集细胞。倾去上清，尽量控干细胞沉淀。每100ml培养液的细胞用4ml冰冷的1X GST Bind/Wash Buffer重悬。可以加入终浓度为0.1%的NP-40或其它非离子去污剂以减少非特异性结 合。可以用Dounce匀浆器，搅拌器或超声波仪打散细胞沉淀。 2. 在冰浴或盐冰浴中超声波处理样本。根据厂家说明操作，避免长时间超声处理。如果样本已经不再粘 稠即可停止超声。如果DNA没有剪切好会因样品粘稠而堵住柱子。大的细胞块可以在1×GST Bind/Wash buffer中用弗氏压榨法处理。 或者：在细胞糊中加入终浓度为45–60KU/g细胞糊的溶菌酶溶液，吸打混合。30℃孵育15分钟。再进行 超声。将裂解液10,000g离心20分钟。用0.45um膜（滤器）过滤上清。
BugBuster Master Mix 蛋白抽提方法 BugBuster Master Mix（货号71456）是将BugBuster蛋白抽提试剂，Benzonase核酸酶和rLysozyme™ 溶菌酶溶液按最优化配比混合好的一种非常方便使用的蛋白抽提试剂，有助于在最优化条件下获得可溶 活性蛋白。这种预混形式的试剂减少了稀释试剂、计算各种试剂使用量和分别添加的麻烦。100ml和 500ml包装分别足够用于20g和100g细胞沉淀的可溶蛋白抽提。
可溶蛋白制备 采用此操作抽提到的蛋白包括来自细胞周质和细胞质的可溶蛋白。如果欲仅收集周质部分蛋白，可以参 考Novagen的TB055“PET系统操作手册”中提到的渗压休克方法或其它合适的方法。渗透休克方法中 得到的沉淀也可以用于以下操作以获得细胞质中的可溶蛋白。 1. 用经预先称重的离心管10,000g离心10分钟从液体培养体系收集细胞。如果是小规模培养（如1.5ml或
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缓冲液的制备 1. 用去离子水稀释试剂盒中提供的10×GST Bind/Wash Buffer至1×。柱 层析约需要15倍体积GST Bind/Wash Buffer，而批次纯化约需要26倍体 积。1倍体积是指柱床体积（如100µl树脂浆的柱床体积为50µl）。 2. 制备含有100mM还原型谷胱甘肽的10×GST Elution Buffer是将1g还原型谷胱甘肽溶于32.5ml 10× Glutathione Reconstitution Buffer。10×GST Elution Buffer制备好后应该以操作需要量分装存放于-20 ℃，以免谷胱甘肽被氧化。10X GST Elution Buffer在–20℃下可以稳定6个月，耐受5次以下的冻融。每 次使用前用去离子水将10×GST Elution Buffer稀释成1X。柱层析和批次纯化约需要3倍体积1×GST Elution Buffer。 注意：1×GST Elution Buffer每次必须在使用前新鲜制备，以免谷胱甘肽氧化。
BugBuster® GST•Bind™纯化试剂盒 BugBuster® GST•Bind纯化试剂盒提供了抽提细胞可溶蛋白和纯化GST•Tag融合蛋白所需的各种试剂， 包括GST•Bind树脂，GST•Bind缓冲液试剂盒，Benzonase®核酸酶和BugBuster蛋白抽提试剂，使用方 便。BugBuster温和破坏大肠杆菌细胞壁释放可溶蛋白，是比弗式压榨法或超声波法等机械处理方法更好 的选择，简单、快速且成本低廉。这种非离子配方的去污剂混合物能非常高效地抽提蛋白并保证可溶蛋 白不变性。 注意：BugBuster是以Tris-HCl-based缓冲液提供，如果需要使用别的缓冲体系，Novagen提供的 BugBuster无伯胺型（为PIPPS缓冲）或10×BugBuster（无缓冲液）形式都是很好的选择。 BugBuster® GST•Bind纯化试剂盒包括： • 2×100ml BugBuster®蛋白抽提试剂 • 10,000U Benzonase®核酸酶，纯度>90% • 10ml GST•Bind树脂，以20ml 50% v/v悬浊液形式提供 • 4个色谱柱 • GST•Bind缓冲液试剂盒（即：100ml 10×GST Bind/Wash Buffer，40ml 10×Glutathione Reconstitution Buffer，1g Glutathione，Reduced，Free Acid）
产品使用说明书
GST•Bind™ 纯化试剂盒
试剂盒简介
以下货号试剂和试剂盒均可参照此说明书操作：建议同时参考本说明书英文原文（说明书编号 TB235）。 GST•Bind树脂：10ml 货号70541-3，50ml 货号70541-4，25ml 货号70541-5 GST•Bind™缓冲液试剂盒：货号70534-3 BugBuster® GST•Bind纯化试剂盒：货号70794-3
GST•Bind™树脂
GST•Bind™树脂用于一步法亲和层析纯化融合表达谷胱甘肽S转移酶（GST）的目的蛋白或天然GST或 谷胱甘肽结合蛋白，操作方便快捷。GST•Tag™融合表达蛋白带有220个氨基酸的GST标签（如表达自 Novagen的编号为pET-41，-42，或-49的载体的蛋白），能够用GST树脂非常方便地得到干净一致的纯 化蛋白。采用10mM还原型谷胱甘肽的温和洗脱，也使目的蛋白的活性受到了很好的保护。GST•Bind树 脂采用11个原子的间隔臂（约16 Å），通过硫键共价结合还原型谷胱甘肽。这种特别设计的树脂使纯化 效率得到提高，因此Novagen的GST树脂载量达到每ml树脂结合载量为5–8mg目的蛋白。
储存
要求4℃存放的包括：10X GST Bind/Wash Buffer；10X Glutathione Reconstitution Buffer； Glutathione，Reduced，Free Acid；GST•Bind树脂（树脂千万不能冻） 要求-20℃存放的包括：Benzonase核酸酶 常温存放的包括：BugBuster，色谱柱
更少），可以用1.5ml离心管14,000–16,000g离心。尽量倾去液体，称量细胞沉淀湿重。 2. 室温下用吸打或温和涡旋使BugBuster Master Mix与细胞沉淀混匀，每克细胞糊需要5ml抽提试剂。
这相当于50ml培养液采用2.5ml抽提试剂。如果是小规模培养，则采用约1/5培养体积的抽提试剂重悬 沉淀（例如，1.5ml培养液采用300µl抽提试剂）。如果抽提试剂过量也没有什么副作用。 选做：加蛋白酶抑制剂。BugBuster Master Mix与蛋白酶抑制剂兼容。如果目的蛋白后续要用凝血酶 （货号69671），Xa因子（货号69036）或重组肠激酶（货号69066）处理，就应该避免使用丝氨酸蛋白 酶抑制剂。尽管纯化过程可能去除活性抑制剂，建议在酶切前最好做透析或凝胶过滤。 3. 室温下将重悬的细胞液在摇板或低速搅拌器上孵育10-20分钟。 注意：孵育后获得的抽提物不是粘稠的。 4. 4℃下16,000g离心20分钟以去除不溶的细胞碎片。如果需要，沉淀可以留作“包涵体纯化”（见以 下说明）的材料。
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5. 将上清转入另一个新试管。这样抽提得到的可溶蛋白溶液可以直接上 样于Novagen的纯化树脂（以及其它很多类似纯化系统）。蛋白溶液 在冰上可以短时存放（2-3小时），也可在-20℃长时间存放直至下步 分析。蛋白抽提液应该根据目的蛋白的活性要求的温度存放，有些蛋 白经冻融会失活。
包涵体的纯化 除了细胞质中的可溶目的蛋白以外，包涵体中也有大量目的蛋白。经包涵体纯化去杂质、包涵体溶解， 包涵体中的目的蛋白重折叠后可以用于GST•Bind™纯化。 1. 10,000g离心5分钟收集细胞。倾去上清，尽量控干细胞沉淀。用40ml 1×GST Bind/Wash Buffer重悬 细胞。 2. 像前述“可溶组分”操作步骤2中那样超声处理，将沉淀充分重悬并切割DNA。 3. 5,000g离心15分钟收集包涵体和细胞碎片。 4. 去除上清，每100ml培养液以20ml 1×GST Bind/Wash Buffer重悬沉淀。重复步骤3操作。或许需要超 声处理才能重悬沉淀。但要注意，多次重复这个步骤会释放出更多结合的污染蛋白。 注意：为了提高纯度，步骤4的1×GST Bind/Wash Buffer中可加入rLysozyme™溶菌酶溶液（终浓度为 1KU/ml）。短时涡旋，孵育5–10分钟再离心。 5. 溶解洗涤后的包涵体，重折叠后用于谷胱甘肽亲和纯化。
GST•Bind™ 缓冲液试剂盒
GST•Bind缓冲液试剂盒包括了从GST•Bind树脂和GST•Mag™磁性琼脂糖树脂纯化目的蛋白所需的结 合，冲洗和洗脱所需的缓冲液。试剂盒所含成分足够用于10个2.5ml柱的纯化。具体包括： • 2×100ml 10×GST Bind/Wash Buffer （43mM Na2HPO4，14.7mM KH2PO4，1.37M NaCl，27mM KCl，pH7.3） • 40ml 10×Glutathione Reconstitution Buffer (500mM Tris-HCl，pH8.0) • 1g Glutathione，Reduced，Free Acid
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注意：BugBuster在4℃以下存放时会有去污剂成分析出，在室温下温和 摇晃即可重溶，试剂功能不受影响。
总述 本操作说明用于从大肠杆菌制备的蛋白抽提物（机械法破碎或BugBuster®蛋白抽提试剂制备）、用 GST•Bind™树脂进行带GST•Tag™的目的蛋白的纯化。目的蛋白所带的必须是具有正确折叠的220个氨 基酸的GST（GST•Tag序列）sequence)，能够与固定化的还原型谷胱甘肽互作因而被亲和纯化。关于 克隆表达、诱导发酵的详细介绍请参考“pET系统操作手册”。