液质操作说明
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样品标记
所有的参数 (Display all params)
校正曲线参数 (line fitting)
定性确认离子参数 (confirmatory ions)
54
第八部份:处理数据
使用QuanLynx
化合物按键 Import Add Delete
55
第八部份:处理数据
使用QuanLynx
MassLynx主窗口 和样品表 方法编辑器对话框
— 内标Internal Standard (294.1 > 64.0) — 分析物１Analyte 1 - Parent Drug (288.1 > 58.0) — 分析物２Analyte 2 - Metabolite (274.1 > 182.1)
46
第八部份:处理数据
步骤
— 在样品表中输入样品类型和浓度 — 设正确的积分参数创建定量方法 — 处理样品 — 检查结果 — 打印结果
色谱图 (选择中间浓度 标样的色谱图)
按下图排好
56
第八部份:处理数据
使用QuanLynx
先点击,新建一个处理方法 再点击,
点击
34
第六部份:建立液相方法
35
第六部份:建立液相方法
点击inlet method，编辑BSM梯度表
36
第六部份:建立液相方法
点击Quaternary Solvent Manager，编辑on line SPE溶剂处理程序（如从右边进样口 直接进样做LC-MS分析，QSM梯度表只留第一行，流速设为0）
37
第六部份:建立液相方法
点击Autosampler出现2777自动进样器方法编辑窗口。Online SPE情况下的设置
Injection=3代表，共取三次样进样分析。如进样体积15ml，此处injection=3， 同时进样列表inject volume=5000
38
第六部份:建立液相方法
如从右边进样口直接进样做LC-MS分析，进样器方法为install OpenArchitecture， inject to设为LC Vlv1
调出目标化合物的最佳MRM质谱参数
选择Sample Tune and Develop Method
点击start
选择
23
第四部份:ESI调谐
调出目标化合物的最佳MRM质谱参数
输入化合物的名称
输入化合物的 分子式或分子量
流路模式,一般选combined 选择调谐液所在的位置
如自动创建新的调谐方法则 选左边的,如调用现有的调谐 方法,则选右边的,此时要在 下边选择想调用的调谐方法 选择此项自动调谐MRM方法
Open Architecture UPLC 在线SPE操作指南
系统原理 示例分析事件 以下所示为典型的分析示例，包括色谱、梯度曲线、时间线和并行 事件。
详细流路状态请参考《Open Architecture UPLC在线SPE系统指南》
2
仪器开关机顺序
开机： 按照以下顺序 确定MS及其它仪器电源电缆已连接. 打开PC电源-打开2777控制电源-打开CM电源-打开BSM电源-打开 QSM电源-打开Detector电源-打开MS电源-等待5min-打开 Masslynx, pumping,等1晚上，开氮气、开高压、准备液相色谱 关机：清洗色谱柱、仪器系统，停流速，关高压，关氮气，venting, 退出软件，关电脑，关仪器, MS断开电源电缆. (详见用户说明书.)
— 有机相要使用原装进口的色谱纯。
准备样品
— 测试样品溶于水，并用0.22um的膜过滤。
5
第一部份:准备液相
推荐溶剂： QSM online SPE用溶剂如下,体积为4L A: 2%NH4OH in Water B: 2%Formic acid in Water C: MeOH D: MeOH:acetone:hexane=1:1:1 Seal wash: 10%MeOH in Water BSM UPLC分析梯度用溶剂,体积为1L A1: 0.5%formic acid in water B1: 0.5%formic acid in ACN/MeOH(9/1) A2: 0.5%NH4OH in water B2: 0.5%NH4OH in ACN/MeOH(9/1) Seal wash: 10%MeOH in Water 2777自动进样器洗针溶液 Wash1:10%MeOH in Water Wash2: MeOH 注:以上溶剂可根据实际应用进行更改.
52
第八部份:处理数据
使用QuanLynx
选取左边的QuanLynx, 再选取Edit Method,出现以下的画面.
53
第八部份:处理数据 使用QuanLynx
化合物参数 (e.g.Name, m/z trace)
积分参数 (e.g. smoothing, peak detect)
计算因子 (e.g. S/N)
ASSAY07 100
%
数据类型及离子化模式
MRM of 3 Channels AP+
2.81
TIC
2.09e4
色谱类型 强度
Relative Intensity
保留时间
0
Time
1.00 2.00 3.00 4.00
Time (minutes)
50
第八部份:处理数据
51
第八部份:处理数据
Ch 1 Ch 2 Ch 3 TIC
— Desolvation (L/hr): 800
— Cone (L/Hr): 50
以下参数最好直接使用intellistart 自动校正仪器质量数时自动生的参数
— LM Resolution 1: 15
— HM Resolution 1: 15
— Ion Energy 1: 0.5
— Entrance: 50
26
第五部份:建立质谱的MRM方法
27
第五部份:建立质谱的MRM方法
点击新建质谱方法
再点击MRM
28
第五部份:建立质谱的MRM方法
29
第五部份:建立质谱的MRM方法
按调谐结果输入下列参数
离子模式
化合物名称
子离子质量数
锥孔电压
母离子质量数
离子驻留时间 碰撞能量
MRM的运行时间，通用性OA-SPE方法为11min
8
第一部份:准备液相
初始化QSM泵 湿灌注QSM泵
— 点击左边Quaternary Solvent Manager ,选择 CONTROL>Prime solvents
— 选择A,B,C,D,时间为3min，按start
9
第一部份:准备液相 2777自动进样器样品注射器灌注
用2777操作小键盘执行以下步骤: 1. 选择 F1 Menu（菜单）> F2 Clean Syr（清洁注射器）。将显示 Select Wash Station消息。 2. 选择 Wash1 或 Wash2，然后按 Enter。将显示 Wash1 或 Wash2 Clean Count （清洗计数）消息。 3. 选择注射器的灌注输送次数（1 到 9，或 Abort（中断）），然后 按 Enter。将执行灌注。建议5次以上。
12
第二部份:建立新的Project
当出现以下窗口时，选择使用一个已经存在的项目作为模板来创建新 项 目 ， 点 击 “ browse” ， 选 择 Online SPE System Installation Test.pro，点击“Finish”即可。
13
第三部份:准备质谱
点击MS Tune
6
第一部份:准备液相
初始化UPLC泵
初始化UPLC泵
— 在Masslynx主页面上点击
将出现UPLC和质谱控制台。
湿灌注BSM泵
— 点击左边Binary Solvent Manager ,选择CONTROL>Prime A/B solvent
7
第一部份:准备液相
初始化BSM泵 选择A1/B1或A2/B2 输入时间3min,按start.
3
总论
开发新的LC/MS方法，建新的项目时的步骤：
准备液相
准备质谱
建新的Project
调谐
建样品序列表，运行样品
编辑液相方法
编辑MRM的方法
处理数据
打印报告
日常运行时的步骤：
准备液相
准备质谱
建样品序列表，运行样品
打印报告
处理数据
4
第一部份:准备液相
准备流动相和清洗液
— 用0.22um的膜过滤缓冲液，所有的缓冲液和超纯水都要新配制，超纯水 和缓冲液使用不得超过二天。缓冲盐一定要是可挥发的，而且浓度不要 大于10mM。
Start infusing 开始进样
Refill the syringe 重新灌满注射器
Purge syringe 灌注注射器
21
第四部份:ESI调谐
调出目标化合物的最佳MRM质谱参数
点击Tune界面下的Fluidics，出现如下窗口
直接进样
液相和样品混合进样
液相进样
废液
22
第四部份:ESI调谐
首先打开去溶剂气-氮 气(绿色显示为打开)
再点击打开高压 (绿色显示为打开)
19
第四部份:ESI调谐
调出目标化合物的最佳MRM质谱参数
把调谐液放入B号位(注:浓度在0.1-1ppm之间，根据实际的灵敏度 调整样品浓度)
A
B
20
第四部份:ESI调谐
调出目标化合物的最佳MRM质谱参数
点击Tune界面下的Fluidics，出现如下窗口
每个化合物调谐几个子 离子,一般选2
选择标样所放的位置
点击此处,质谱开始自动调谐
选择进样方式，一般选择 combined
24
第四部份:ESI调谐
调出目标化合物的最佳MRM质谱参数
仪器正在自动调谐
25
第四部份:ESI调谐
调出目标化合物的最佳MRM质谱参数
自动生成的调谐的报告 注:自动生成的仪器MRM的方法保存在当前project 内,例如alprazolam可在样品序 列表内直接调用.
10
第二部份:建立新的Project
从Masslynx主窗口选择File>Project Wizard
11
第二部份:建立新的Project
当出现以下窗口时，点击Yes
输入Project Name,以及项目所在的目录,点击Next. (建议:在C盘下 建massdata文件夹,再把新建的project放到此目录下)
47
第八部份:处理数据
使用QuanLynx 在样品表中把样品的类型和标准品的浓度输入:
— Sample Type — Concentration A (B, C, D….)
48
第八部份:处理数据
首先点黑想看的数据,再 点击Chromatogram
49
第八部份:处理数据
文本注释
文件名
5pg/ml std
— Collision: 2
— Exit:
50
— LM Resolution 2Fra Baidu bibliotek 15
— HM Resolution 2: 15
— Ion Energy 2: 0.5
16
第三部份:准备质谱
点击File>Save As,输入文件名,把此调谐文件保存
17
第三部份:准备质谱
点击质谱控制台
18
第三部份:准备质谱 要先开氮气,再打开高压
14
第三部份:准备质谱
去溶剂气开关
氩气开关
开,关高压键
(红色表示高压已关，绿色表示高压已开)
15
第三部份:准备质谱
点击 ES+ Source. 输入以下各参数:
— Capillary (kV): 3
— Cone (V): 30
— Source Temp (°C): 140
— Desolvation Temp (°C): 380
30
第五部份:建立质谱的MRM方法
Dwell时间会直接影响色谱图的点数，所以建议Auto Dwell
色谱峰宽，一般6s 设定所需的色谱点数，一般设定15
31
第五部份:建立质谱的MRM方法
保存质谱方法
32
第五部份:建立质谱的MRM方法
选择质谱方法 *
33
第六部份:建立液相方法 从以下几处可以进入LC的编辑页面
39
第六部份:建立液相方法
把液相方法命名保存
40
第六部份:建立液相方法
选择液相方法
*
41
第七部份:建立样品序列表,运行采集数据
新建序列表
42
第七部份:建立样品序列表,运行采集数据
新建序列表 输入文件名,注释,质谱方法,液相方法,瓶号,进样体积
43
第七部份:建立样品序列表,运行采集数据
Bottle为1:1到1:18,(标配VT18-20盘，可装18个20ml进样小瓶) Inject volume不可大于5000
44
第七部份:建立样品序列表,运行采集数据
45
第八部份:处理数据 QuanLynx 打开masslynx 自带的数据实例
— 在masslynx主画面上点击File>change Project选取masslynx目录内 的 Quantify.pro, 选择quantity 样品表.
样品表内的实验数据是用内标法检测二个化合物，三个MRM数据
所有的参数 (Display all params)
校正曲线参数 (line fitting)
定性确认离子参数 (confirmatory ions)
54
第八部份:处理数据
使用QuanLynx
化合物按键 Import Add Delete
55
第八部份:处理数据
使用QuanLynx
MassLynx主窗口 和样品表 方法编辑器对话框
— 内标Internal Standard (294.1 > 64.0) — 分析物１Analyte 1 - Parent Drug (288.1 > 58.0) — 分析物２Analyte 2 - Metabolite (274.1 > 182.1)
46
第八部份:处理数据
步骤
— 在样品表中输入样品类型和浓度 — 设正确的积分参数创建定量方法 — 处理样品 — 检查结果 — 打印结果
色谱图 (选择中间浓度 标样的色谱图)
按下图排好
56
第八部份:处理数据
使用QuanLynx
先点击,新建一个处理方法 再点击,
点击
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第六部份:建立液相方法
35
第六部份:建立液相方法
点击inlet method，编辑BSM梯度表
36
第六部份:建立液相方法
点击Quaternary Solvent Manager，编辑on line SPE溶剂处理程序（如从右边进样口 直接进样做LC-MS分析，QSM梯度表只留第一行，流速设为0）
37
第六部份:建立液相方法
点击Autosampler出现2777自动进样器方法编辑窗口。Online SPE情况下的设置
Injection=3代表，共取三次样进样分析。如进样体积15ml，此处injection=3， 同时进样列表inject volume=5000
38
第六部份:建立液相方法
如从右边进样口直接进样做LC-MS分析，进样器方法为install OpenArchitecture， inject to设为LC Vlv1
调出目标化合物的最佳MRM质谱参数
选择Sample Tune and Develop Method
点击start
选择
23
第四部份:ESI调谐
调出目标化合物的最佳MRM质谱参数
输入化合物的名称
输入化合物的 分子式或分子量
流路模式,一般选combined 选择调谐液所在的位置
如自动创建新的调谐方法则 选左边的,如调用现有的调谐 方法,则选右边的,此时要在 下边选择想调用的调谐方法 选择此项自动调谐MRM方法
Open Architecture UPLC 在线SPE操作指南
系统原理 示例分析事件 以下所示为典型的分析示例，包括色谱、梯度曲线、时间线和并行 事件。
详细流路状态请参考《Open Architecture UPLC在线SPE系统指南》
2
仪器开关机顺序
开机： 按照以下顺序 确定MS及其它仪器电源电缆已连接. 打开PC电源-打开2777控制电源-打开CM电源-打开BSM电源-打开 QSM电源-打开Detector电源-打开MS电源-等待5min-打开 Masslynx, pumping,等1晚上，开氮气、开高压、准备液相色谱 关机：清洗色谱柱、仪器系统，停流速，关高压，关氮气，venting, 退出软件，关电脑，关仪器, MS断开电源电缆. (详见用户说明书.)
— 有机相要使用原装进口的色谱纯。
准备样品
— 测试样品溶于水，并用0.22um的膜过滤。
5
第一部份:准备液相
推荐溶剂： QSM online SPE用溶剂如下,体积为4L A: 2%NH4OH in Water B: 2%Formic acid in Water C: MeOH D: MeOH:acetone:hexane=1:1:1 Seal wash: 10%MeOH in Water BSM UPLC分析梯度用溶剂,体积为1L A1: 0.5%formic acid in water B1: 0.5%formic acid in ACN/MeOH(9/1) A2: 0.5%NH4OH in water B2: 0.5%NH4OH in ACN/MeOH(9/1) Seal wash: 10%MeOH in Water 2777自动进样器洗针溶液 Wash1:10%MeOH in Water Wash2: MeOH 注:以上溶剂可根据实际应用进行更改.
52
第八部份:处理数据
使用QuanLynx
选取左边的QuanLynx, 再选取Edit Method,出现以下的画面.
53
第八部份:处理数据 使用QuanLynx
化合物参数 (e.g.Name, m/z trace)
积分参数 (e.g. smoothing, peak detect)
计算因子 (e.g. S/N)
ASSAY07 100
%
数据类型及离子化模式
MRM of 3 Channels AP+
2.81
TIC
2.09e4
色谱类型 强度
Relative Intensity
保留时间
0
Time
1.00 2.00 3.00 4.00
Time (minutes)
50
第八部份:处理数据
51
第八部份:处理数据
Ch 1 Ch 2 Ch 3 TIC
— Desolvation (L/hr): 800
— Cone (L/Hr): 50
以下参数最好直接使用intellistart 自动校正仪器质量数时自动生的参数
— LM Resolution 1: 15
— HM Resolution 1: 15
— Ion Energy 1: 0.5
— Entrance: 50
26
第五部份:建立质谱的MRM方法
27
第五部份:建立质谱的MRM方法
点击新建质谱方法
再点击MRM
28
第五部份:建立质谱的MRM方法
29
第五部份:建立质谱的MRM方法
按调谐结果输入下列参数
离子模式
化合物名称
子离子质量数
锥孔电压
母离子质量数
离子驻留时间 碰撞能量
MRM的运行时间，通用性OA-SPE方法为11min
8
第一部份:准备液相
初始化QSM泵 湿灌注QSM泵
— 点击左边Quaternary Solvent Manager ,选择 CONTROL>Prime solvents
— 选择A,B,C,D,时间为3min，按start
9
第一部份:准备液相 2777自动进样器样品注射器灌注
用2777操作小键盘执行以下步骤: 1. 选择 F1 Menu（菜单）> F2 Clean Syr（清洁注射器）。将显示 Select Wash Station消息。 2. 选择 Wash1 或 Wash2，然后按 Enter。将显示 Wash1 或 Wash2 Clean Count （清洗计数）消息。 3. 选择注射器的灌注输送次数（1 到 9，或 Abort（中断）），然后 按 Enter。将执行灌注。建议5次以上。
12
第二部份:建立新的Project
当出现以下窗口时，选择使用一个已经存在的项目作为模板来创建新 项 目 ， 点 击 “ browse” ， 选 择 Online SPE System Installation Test.pro，点击“Finish”即可。
13
第三部份:准备质谱
点击MS Tune
6
第一部份:准备液相
初始化UPLC泵
初始化UPLC泵
— 在Masslynx主页面上点击
将出现UPLC和质谱控制台。
湿灌注BSM泵
— 点击左边Binary Solvent Manager ,选择CONTROL>Prime A/B solvent
7
第一部份:准备液相
初始化BSM泵 选择A1/B1或A2/B2 输入时间3min,按start.
3
总论
开发新的LC/MS方法，建新的项目时的步骤：
准备液相
准备质谱
建新的Project
调谐
建样品序列表，运行样品
编辑液相方法
编辑MRM的方法
处理数据
打印报告
日常运行时的步骤：
准备液相
准备质谱
建样品序列表，运行样品
打印报告
处理数据
4
第一部份:准备液相
准备流动相和清洗液
— 用0.22um的膜过滤缓冲液，所有的缓冲液和超纯水都要新配制，超纯水 和缓冲液使用不得超过二天。缓冲盐一定要是可挥发的，而且浓度不要 大于10mM。
Start infusing 开始进样
Refill the syringe 重新灌满注射器
Purge syringe 灌注注射器
21
第四部份:ESI调谐
调出目标化合物的最佳MRM质谱参数
点击Tune界面下的Fluidics，出现如下窗口
直接进样
液相和样品混合进样
液相进样
废液
22
第四部份:ESI调谐
首先打开去溶剂气-氮 气(绿色显示为打开)
再点击打开高压 (绿色显示为打开)
19
第四部份:ESI调谐
调出目标化合物的最佳MRM质谱参数
把调谐液放入B号位(注:浓度在0.1-1ppm之间，根据实际的灵敏度 调整样品浓度)
A
B
20
第四部份:ESI调谐
调出目标化合物的最佳MRM质谱参数
点击Tune界面下的Fluidics，出现如下窗口
每个化合物调谐几个子 离子,一般选2
选择标样所放的位置
点击此处,质谱开始自动调谐
选择进样方式，一般选择 combined
24
第四部份:ESI调谐
调出目标化合物的最佳MRM质谱参数
仪器正在自动调谐
25
第四部份:ESI调谐
调出目标化合物的最佳MRM质谱参数
自动生成的调谐的报告 注:自动生成的仪器MRM的方法保存在当前project 内,例如alprazolam可在样品序 列表内直接调用.
10
第二部份:建立新的Project
从Masslynx主窗口选择File>Project Wizard
11
第二部份:建立新的Project
当出现以下窗口时，点击Yes
输入Project Name,以及项目所在的目录,点击Next. (建议:在C盘下 建massdata文件夹,再把新建的project放到此目录下)
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第八部份:处理数据
使用QuanLynx 在样品表中把样品的类型和标准品的浓度输入:
— Sample Type — Concentration A (B, C, D….)
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第八部份:处理数据
首先点黑想看的数据,再 点击Chromatogram
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第八部份:处理数据
文本注释
文件名
5pg/ml std
— Collision: 2
— Exit:
50
— LM Resolution 2Fra Baidu bibliotek 15
— HM Resolution 2: 15
— Ion Energy 2: 0.5
16
第三部份:准备质谱
点击File>Save As,输入文件名,把此调谐文件保存
17
第三部份:准备质谱
点击质谱控制台
18
第三部份:准备质谱 要先开氮气,再打开高压
14
第三部份:准备质谱
去溶剂气开关
氩气开关
开,关高压键
(红色表示高压已关，绿色表示高压已开)
15
第三部份:准备质谱
点击 ES+ Source. 输入以下各参数:
— Capillary (kV): 3
— Cone (V): 30
— Source Temp (°C): 140
— Desolvation Temp (°C): 380
30
第五部份:建立质谱的MRM方法
Dwell时间会直接影响色谱图的点数，所以建议Auto Dwell
色谱峰宽，一般6s 设定所需的色谱点数，一般设定15
31
第五部份:建立质谱的MRM方法
保存质谱方法
32
第五部份:建立质谱的MRM方法
选择质谱方法 *
33
第六部份:建立液相方法 从以下几处可以进入LC的编辑页面
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第六部份:建立液相方法
把液相方法命名保存
40
第六部份:建立液相方法
选择液相方法
*
41
第七部份:建立样品序列表,运行采集数据
新建序列表
42
第七部份:建立样品序列表,运行采集数据
新建序列表 输入文件名,注释,质谱方法,液相方法,瓶号,进样体积
43
第七部份:建立样品序列表,运行采集数据
Bottle为1:1到1:18,(标配VT18-20盘，可装18个20ml进样小瓶) Inject volume不可大于5000
44
第七部份:建立样品序列表,运行采集数据
45
第八部份:处理数据 QuanLynx 打开masslynx 自带的数据实例
— 在masslynx主画面上点击File>change Project选取masslynx目录内 的 Quantify.pro, 选择quantity 样品表.
样品表内的实验数据是用内标法检测二个化合物，三个MRM数据