高等植物基因工程

高等植物基因工程
HEWenxingUNIVERSITYOFJinan第二节植物基因工程方法一、植物遗传转化的方法
植物遗传转化技术可分为两大类：（一）生物介导的转化方法主要有农杆菌介导和病毒介导两种转化方法其中农杆菌介导的转化方法操作简便、成本低、转化率高广泛应用于双子叶植物的遗传转化。

（二）直接基因转移技术包括基因枪法、原生质体法、脂质体法、花粉管通道法、电激转化法、PEG介导转化方法等其中基因枪转化法是代表。

第二节植物基因工程方法一植物遗传转化的方法
植物遗传转化技术可分为两大类：（一）生物介导的转化方法主要有农杆菌介导和病毒介导两种转化方法其中农杆菌介导的转化方法操作简便、成本低、转化率高广泛应用于双子叶植物的遗传转化。

（二）直接基因转移技术包括基因枪法、原生质体法、脂质体法、花粉管通道法、电激转化法、PEG介导转化方法等其中基因枪转化法是代表。

HEWenxingUNIVERSITYOFJinan、农杆菌的Ti质粒与TDNA的整合机制几乎所有双子叶植物都容易受到土壤农杆菌感染而产生根瘤。

它是一种革兰氏阴性土壤杆菌（Atumefaciens）。

其致瘤特性是由Ti（tumor－inducing）质粒介导的。

（一）生物介导的转化（一）生物介导的转化农杆菌的Ti质粒与
TDNA的整合机制几乎所有双子叶植物都容易受到土壤农杆菌感染而产生根瘤。

它是一种革兰氏阴性土壤杆菌（Atumefaciens）。

其致瘤特性是由Ti（tumor－inducing）质粒介导的。

农杆根瘤菌之所以会感染植物根部是因为植物根部损伤部位分泌出酚类物质乙酰丁香酮和羟基乙酰丁香酮这些酚类物质可以诱导Vir （Virulenceregion)基因的启动表达Vir基因的产物将Ti质粒上的一段T－DNA单链切下而位于根瘤染色体上的操纵子基因产物则与单链T －DNA结合形成复合物转化植物根部细胞。

HEWenxingUNIVERSITYOFJinanTi质粒（Tumorinducedplasmid）Ti质粒（Tumorinducedplasmid）环状dsDNA,kb具六个功能区致瘤区：合成植物生长素和细胞分裂素冠瘿碱合成区：参与冠瘿碱合成冠瘿碱分解区：参与冠瘿碱分解Ti质粒转移区(tra)：参与在不同农杆菌中的接合转移毒性区（Vir）（Virulenceregion)：直接参与TDNA的转移和插入植物染色体DNA复制区（Re织、细胞、细胞器内完成整合并表达的基因转化的方法。

最早是由Cornell大学研制的火药基因枪。

年美国杜邦公司推出了商品基因枪PDS系统。

基因枪的组成部分由点火装置、发射装置、挡板、样品室、真空系统组成。

基因枪法基因枪法（particlegun）又称微弹轰击法（microprojectilebombardment,particlebombardment,biolistic)。

它是把遗传物质或其它物质附着于高速微弹上直接射入组织、细胞、细胞器内完成整合并表达的基因转化的方法。

最早是由Cornell大学研制的火药基因枪。

年美国杜邦公司推出了商品基因枪PDS系统。

基因枪的组成部分由点火装置、发射装置、挡板、样品室、真空系统组成。

基因枪转化的基本步骤如下：
DNA微弹的制备
DNA微弹载体的制备
靶外植体准备
DNA微弹轰击
轰击后外植体的培养HEWenxingUNIVERSITYOFJinan（）动力系统炸药爆破力gunpower高压气体（highpressuregas）高压放电（）DNA颗粒载体的制备利用CaCl对DNA沉淀作用亚精氨、PEG的粘附等作用将DNA固定在颗粒表面。

（）动力系统炸药爆破力gunpower高压气体（highpressuregas）高压放电（）DNA颗粒载体的制备利用CaCl对DNA沉淀作用亚精氨、PEG的粘附等作用将DNA固定在颗粒表面。

HEWenxingUNIVERSITYOFJinan（）金属颗粒金粉：规则的球形比表面积大DNA吸附力强钨粉：廉价易得但易在细胞表面形成有害的氧化物（）金属颗粒金粉：规则的球形比表面积大DNA吸附力强钨粉：廉价易得但易在细胞表面形成有害的氧化物
HEWenxingUNIVERSITYOFJinan基因枪转化率
基因枪转化率差异很大一般在~之间。

McCabe在大豆上高达而有的报道仅有。

相对于农杆菌介导的转化率要低得多而且基因枪转化成本高嵌合体比率大、遗传稳定性差。

基因枪转化率基因枪转化率差异很大一般在~之间。

McCabe在大豆上高达而有的报道仅有。

相对于农杆菌介导的转化率要低得多而且基因枪转化成本高嵌合体比率大、遗传稳定性差。

HEWenxingUNIVERSITYOFJinan尽管基因枪法有很多缺陷但在单子叶植物上也有广泛应用优点有：
a)无宿主限制无论是单子叶植物和双子叶植物都可以应用。

b)受体类型广泛原生质体、叶圆片、悬浮培养细胞、茎、根、以及种子的胚、分省组织、愈伤组织、花粉细胞、子房等几乎所有具有分生潜力的组织或细胞都可以用基因枪进行轰击。

c)可控度高商品化的基因枪都可以根据实验需要调控微弹的速度和射入浓度命中特定层次的细胞。

d)操作简便迅速。

正因为基因枪这些优点使基因枪成功的应用于：植物基因转化特别是单子叶植物的转化外源基因导入植物细胞器种质转化（茎尖分生组织、配子体、胚胎细胞）植物基因表达调控研究。

基因枪法优点：尽管基因枪法有很多缺陷但在单子叶植物上也有
广泛应用优点有：
a)无宿主限制无论是单子叶植物和双子叶植物都可以应用。

b)受体类型广泛原生质体、叶圆片、悬浮培养细胞、茎、根、以及种子的胚、分省组织、愈伤组织、花粉细胞、子房等几乎所有具有分生潜力的组织或细胞都可以用基因枪进行轰击。

c)可控度高商品化的基因枪都可以根据实验需要调控微弹的速度和射入浓度命中特定层次的细胞。

d)操作简便迅速。

正因为基因枪这些优点使基因枪成功的应用于：植物基因转化特别是单子叶植物的转化外源基因导入植物细胞器种质转化（茎尖分生组织、配子体、胚胎细胞）植物基因表达调控研究。

HEWenxingUNIVERSITYOFJinan多聚物介导转化：利用多聚物PEG、多聚赖氨酸、多聚鸟氨酸等在二价阳离子作用下促进DNA在原生质体表面形成沉淀继而通过原生质体的内吞噬作用而被吸收进入细胞内。

多聚物促进细胞融合的原理：多聚物使细胞膜之间或DNA与膜之间形成分子桥促进相互间的接触和粘连在细胞融合的过程中DNA 进入细胞。

多聚物介导转化：利用多聚物PEG、多聚赖氨酸、多聚鸟氨酸等在二价阳离子作用下促进DNA在原生质体表面形成沉淀继而通过原生质体的内吞噬作用而被吸收进入细胞内。

多聚物促进细胞融合的原理：多聚物使细胞膜之间或DNA与膜
之间形成分子桥促进相互间的接触和粘连在细胞融合的过程中DNA 进入细胞。

HEWenxingUNIVERSITYOFJinan磷脂介导（Phospholipidsasgenedeliveryvehicles）脂质体(liposomes)是一种人造的脂质小泡外周是脂双层内部是水腔。

HEWenxingUNIVERSITYOFJinan电穿孔法将高浓度的质粒DNA 加入到植物细胞的原生质体悬浮液中混合物在Vcm的电场中处理若干秒钟然后将原生质体在组织培养基中生长周再生出整株植物。

电穿孔法将高浓度的质粒DNA加入到植物细胞的原生质体悬浮液中混合物在Vcm的电场中处理若干秒钟然后将原生质体在组织培养基中生长周再生出整株植物。

HEWenxingUNIVERSITYOFJinan（）定义：利用显微注射仪通过机械方法将DNA注入细胞质或核内。

显微注射法（microinjection):显微注射法（microinjection):（）定义：利用显微注射仪通过机械方法将DNA注入细胞质或核内。

HEWenxingUNIVERSITYOFJinan（）细胞固定（对植物来言）：琼脂糖包埋法多聚赖氨酸粘连吸管支持法（）优缺点：转化率高甚至繁琐耗时需要专门的显微注射仪要求精密操作技术和低密度培养技术。

（）细胞固定（对植物来言）：琼脂糖包埋法多聚赖氨酸粘连吸管支持法（）优缺点：转化率高甚至繁琐耗时需要专门的显微注射仪要求精密操作技术和低密度培养技术。

HEWenxingUNIVERSITYOFJinan、花粉管通道法在授粉后向子房注射含目的基因的DNA溶液利用植物在开花、受精过程中形成的花粉管通道将外源DNA导入受精卵细胞并被整合到受体细胞的基因组中随着受精卵的发育而成为带转基因的新个体。

该方法于年代初期由我国学者周光宇提出我国目前推广面积最大的转基因抗虫棉就是用花粉管通道法培育出来的。

该法的最大优点是不依赖组织培养人工再生植株技术简单不需要装备精良的实验室常规育种工作者易于掌握。

利用花粉管通道将DNA转移至胚囊转化尚不具正常细胞壁的卵、合子及早期的胚胎组织。

目前已应用于水稻、小麦、棉花、大豆、花生、蔬菜等作物的转基因研究。

、花粉管通道法在授粉后向子房注射含目的基因的DNA溶液利用植物在开花、受精过程中形成的花粉管通道将外源DNA导入受精卵细胞并被整合到受体细胞的基因组中随着受精卵的发育而成为带转基因的新个体。

该方法于年代初期由我国学者周光宇提出我国目前推广面积最大的转基因抗虫棉就是用花粉管通道法培育出来的。

该法的最大优点是不依赖组织培养人工再生植株技术简单不需要装备精良的实验室常规育种工作者易于掌握。

利用花粉管通道将DNA转移至胚囊转化尚不具正常细胞壁的卵、合子及早期的胚胎组织。

目前已应用于水稻、小麦、棉花、大豆、花生、蔬菜等作物的转基因研究。

HEWenxingUNIVERSITYOFJinan采用某种转基因方法处理外植体后通常外植体中仅有少数细胞获得转化。

只有采取有效的筛选方法才能高效准确地选择到转化细胞。

筛选方法主要有两种：解毒基因筛选选择基因为一解毒基因可以消除培养基中有害物质（如抗生素、除草剂等）对细胞生长的抑制作用而非转化细胞不能在含有有害物质的培养基中生长。

营养缺陷型筛选受体细胞为营养缺陷型细胞不能在选择性培养基中增殖而选择基因可以补偿这种缺陷使转化细胞在选择性培养基上正常生长。

第三节转化子细胞的筛选第三节转化子细胞的筛选采用某种转基因方法处理外植体后通常外植体中仅有少数细胞获得转化。

只有采取有效的筛选方法才能高效准确地选择到转化细胞。

筛选方法主要有两种：解毒基因筛选选择基因为一解毒基因可以消除培养基中有害物质（如抗生素、除草剂等）对细胞生长的抑制作用而非转化细胞不能在含有有害物质的培养基中生长。

营养缺陷型筛选受体细胞为营养缺陷型细胞不能在选择性培养基中增殖而选择基因可以补偿这种缺陷使转化细胞在选择性培养基上正常生长。

HEWenxingUNIVERSITYOFJinan一、植物基因工程中的选择基因植物基因工程中的选择标记基因主要是一类编码可使抗生素或除草
剂失活的蛋白酶基因。

、新霉素抗性基因（neor）、庆大霉素抗性基因（gentr）、潮霉素磷酸转移酶基因（hpt）、膦丝菌素乙酰转移酶基因（bar）一、植物基因工程中的选择基因植物基因工程中的选择标记基因主要是一类编码可使抗生素或除草剂失活的蛋白酶基因。

、新霉素抗性基因（neor）、庆大霉素抗性基因（gentr）、潮霉素磷酸转移酶基因（hpt）、膦丝菌素乙酰转移酶基因（bar）HEWenxingUNIVERSITYOFJinan、新霉素抗性基因（Neomycinephosphotransferase–II,NPTIIneor）由大肠杆菌转座子Tn 中分离。

选择试剂：卡那霉素、新霉素、G（氨基糖苷类抗生素）。

neor可使选择试剂磷酸化而失效（即催化ATP上的γ磷酸转移到诸如新霉素、卡那霉素、庆大霉素和G等抗生素分子的某些基团上。

）。

该类抗生素通过干扰s核糖体的功能抑制蛋白质合成阻碍了原核生物蛋白质的合成。

对植物细胞的毒性机理是通过干扰植物细胞叶绿体、线粒体中核糖体的功能而抑制叶绿体和线粒体蛋白质的合成。

该基因广泛应用于双子叶植物单子叶中也有成功应用。

、新霉素抗性基因（neor）neor就是‘磷酸转移酶的基因Geneticin(AntibioticG) 。

由大肠杆菌转座子Tn中分离。

选择试剂：卡那霉素、新霉素、G。

卡那霉素、新霉素与核糖体小亚基结合抑制蛋白质合成G抑制S 核糖体功能而阻断真核细胞中蛋白质合成。

neor可使选择试剂磷酸化而失效（即催化ATP上的γ磷酸转移到诸如新霉素、卡那霉素、庆大霉素和G等抗生素分子的某些基团上。

）。

该基因广泛应用于双子叶植物单子叶中也有成功应用。

HEWenxingUNIVERSITYOFJinan、庆大霉素抗性基因（gentr）gentr 编码乙酰转移酶。

选择试剂：庆大霉素。

gentr编码乙酰转移酶可使庆大霉素乙酰化而失活。

该基因在矮牵牛、烟草和番茄转基因筛选中有较广泛应用。

、庆大霉素抗性基因（gentr）gentr编码乙酰转移酶。

选择试剂：庆大霉素。

gentr编码乙酰转移酶可使庆大霉素乙酰化而失活。

该基因在矮牵牛、烟草和番茄转基因筛选中有较广泛应用。

HEWenxingUNIVERSITYOFJinan、潮霉素磷酸转移酶基因（hpt）潮霉素是一种很强的细胞生长抑制剂对许多植物都有毒性。

选择试剂：潮霉素。

hpt可使选择试剂磷酸化而失活。

该基因广泛应用于单子叶植物特别是水稻的转基因研究是一种选择效率很高的选择基因。

、潮霉素磷酸转移酶基因（hpt）潮霉素是一种很强的细胞生长抑制剂对许多植物都有毒性。

选择试剂：潮霉素。

hpt可使选择试剂磷酸化而失活。

该基因广泛应用于单子叶植物特别是水稻的转基因研究是一种选择效率很高的选择基因。

HEWenxingUNIVERSITYOFJinan、膦丝菌素乙酰转移酶基因（bar）由吸水链霉菌中克隆。

选择试剂：膦丝菌素（basta)。

膦丝菌素可抑制谷氨酰胺合成酶活性从而导致非转化细胞氨的致死性积累。

Bar编码的膦丝菌素乙酰转移酶可使膦丝菌素乙酰化而失活。

该基因广泛应用于禾谷类作物以及大豆、油菜等油料作物的转基因研究。

、膦丝菌素乙酰转移酶基因（bar）由吸水链霉菌中克隆。

选择试剂：膦丝菌素（basta)。

膦丝菌素可抑制谷氨酰胺合成酶活性从而导致非转化细胞氨的致死性积累。

Bar编码的膦丝菌素乙酰转移酶可使膦丝菌素乙酰化而失活。

该基因广泛应用于禾谷类作物以及大豆、油菜等油料作物的转基因研究。

HEWenxingUNIVERSITYOFJinan二、植物基因工程中的报告基因
报告基因是指其编码产物能够被快速测定、常用于盘底外源基因是否成功地导入受体细胞（器官或组织）是否启动表达的一类特殊用途基因。

报告基因与选择基因的区别在于：选择基因往往需要与外界的筛选压力如抗生素等相互作用以筛选转化细胞二报告基因的应用不需要外界选择压力的存在。

二、植物基因工程中的报告基因报告基因是指其编码产物能够被快速测定、常用于盘底外源基因是否成功地导入受体细胞（器官或组织）是否启动表达的一类特殊用途基因。

报告基因与选择基因的区别在于：选择基因往往需要与外界的筛选压力如抗生素等相互作用以筛选转化细胞二报告基因的应用不需要外界选择压力的存在。

HEWenxingUNIVERSITYOFJinan理想报告基因应具备的条件、受体细胞不存在相应的内源等位基因活性、它的产物是唯一的且不会损害受体细胞、具有检测快速、灵敏、价廉且可定量、重复测定特性。

理想报告基因应具备的条件、受体细胞不存在相应的内源等位基因活性、它的产物是唯一的且不会损害受体细胞、具有检测快速、灵敏、价廉且可定量、重复测定特性。

HEWenxingUNIVERSITYOFJinan目前常用报告基因、β葡萄糖苷酸酶基因（gus）、氯霉素乙酰转移酶基因（cat）、荧光素酶基因（luc）、绿色荧光蛋白基因（gfp）目前常用报告基因、β葡萄糖苷酸酶基因（gus）、胭脂碱和章鱼碱、氯霉素乙酰转移酶基因（cat）、荧光素酶
基因（luc）、绿色荧光蛋白基因（gfp）HEWenxingUNIVERSITYOFJinan、β葡萄糖苷酸酶基因（gus）gus 基因存在于某些细菌体内。

编码β葡萄糖苷酸酶。

检测的底物有种）Xgluc溴氯吲哚葡萄糖苷、BromoChloroIndolylbDglucuronide）PNPG对硝基苯βD吡喃半乳糖苷、pNitrophenylβDgalactopyranoside。

）MUG甲基伞形酮酰βD葡萄糖醛酸、methylumbelliferylßDglucuronide、β葡萄糖苷酸酶基因（gus）gus基因存在于某些细菌体内。

编码β葡萄糖苷酸酶。

检测的底物有种）Xgluc溴氯吲哚葡萄糖苷、BromoChloroIndolylbDglucuronide）PNPG对硝基苯βD吡喃半乳糖苷、pNitrophenylβDgalactopyranoside。

）MUG甲基伞形酮酰βD葡萄糖醛酸、methylumbelliferylßDglucuronideXgluc’二溴’二氯靛蓝（蓝色显色）(溴氯吲哆葡萄糖醛苷酸)MUG甲基伞形酮（荧光物质）＋βD葡萄糖醛酸（甲基伞形酮酰βD葡萄糖醛酸）荧光荧光分光光度计PNPG 对硝基苯酚（溶液呈黄色PH=~nm）（甲基伞形酮酰βD葡萄糖醛酸）分光光度计GUSGUS（）GUS基因的检测十分简单、方便和灵敏。

（）绝大多数植物中没有检测到该酶的背景活性。

（）GUS基因还可用来进行嵌合基因的构建和分析。

优点：GUS优点：（）GUS基因的检测十分简单、方便和灵敏。

（）绝大多数植物中没有检测到该酶的背景活性。

（）GUS基因还可用来进行嵌合基因的构建和分析。

、氯霉素乙酰转移酶（CAT）基因cat基因是由大肠杆菌易位子Tn所编码的它可以催化乙酰CoA转乙酰基到氯霉素分子,导致氯霉素分子发生乙酰化作用从而失去活性。

真核生物无该基因无该酶内源活性。

该酶活性可以通过反应底物乙酰CoA的减少或反应产物还原型乙酰CoA的生成来测定目前常用的方法有硅胶G薄层层析法及DTNB 分光光度法。

CAT乙酰氯霉素CoA＋氯霉素乙酰氯霉素（氯霉素失效）乙酰氯霉素优点：克服了受体细胞非特异性酶本底较高的缺点且CAT酶定量分析准确。

、氯霉素乙酰转移酶（CAT）基因cat基因是由大肠杆菌易位子Tn所编码的它可以催化乙酰CoA转乙酰基到氯霉素分子,导致氯霉素分子发生乙酰化作用从而失去活性。

真核生物无该基因无该酶内源活性。

该酶活性可以通过反应底物乙酰CoA的减少或反应产物还原型乙酰CoA的生成来测定目前常用的方法有硅胶G薄层层析法及DTNB 分光光度法。

优点：克服了受体细胞非特异性酶本底较高的缺点且CAT酶定量
分析准确。

DTNB分光光度法原理：巯基基团与’二硫代双硝基苯甲酸(DTNB)反应形成黄色化合物。

血清中的蛋白用甲醇沉淀离心后的上清液于nm波长处比色测定用半胱氨酸作标准系列定量为总巯基含量。

如先用甲醇将血清蛋白沉淀再与DTNB反应比色测定则为非蛋白巯基的含量。

硅胶G薄层层析法：【原理】薄层层析是一种广泛应用于氨基酸、多肽、核苷酸、脂肪类、糖脂和生物碱等多种物质的分离和鉴定的层析方法。

由于层析是在吸附剂或支持介质均匀涂布的薄层上进行的所以称之为薄层层析。

薄层层析的主要原理是根据样品组分与吸附剂的吸附力及其在展层溶剂中的分配系数的不同而使混合物分离。

当展层溶剂移动时会带着混合样品中的各组分一起移动并不断发生吸附与解吸作用以及反复分配作用。

根据各组分在溶剂中溶解度不同和吸附剂对样品各组分的吸附能力的差异最终将混合物分离成一系列的斑点。

如果把标准样品在同一层析薄板上一起展开便可通过在同一薄板上的已知标准样品的Rf值和未知样品各组分的Rf值进行对照就可初步鉴定未知样品各组分的成分。

薄层层析根据所支持物的性质和分离机制的不同包括吸附层析、
离子交换层析和凝胶过滤等。

糖的分离鉴定可用吸附剂或支持剂中添加适宜的黏合剂后再涂布于支持板上可使薄层粘牢在玻璃板（或涤沦片基）这类基底上。

硅胶G是一种已添加了黏合剂石膏（CaSO）的硅胶粉糖在硅胶G 薄层上的移动速度与糖的相对分子质量和羟基数等有关经适当的溶剂展开后糖在硅胶G薄析上的移动距离为戊糖已糖双糖三糖。

若采用硼酸溶液代替水调制硅胶G制成的薄板可提高高糖的分离效果。

如对已分开的斑点显色而将与它位置相当的另一个未显色的斑点从薄层上与硅胶G一起刮下以适当的溶液将糖从硅胶G上洗脱下来就可用糖的定量测定方法测出样品中各组分的糖含量。

薄层层析的展层方式有上行、下行和近水平等。

一般常采用上行法即在具有密闭盖子的玻璃缸（即层析缸）中进行将适量的展层溶液倒于缸底把点有样品的薄层板放入缸中即可（如图所示）。

保证层析缸内有充分展层溶剂的饱和蒸气是实验成功的关键。

与纸层析、柱层析等方法比较薄层层析有明显的优点：操作方便层析时间短可分离各种化合物样品用量少（至几十向微克的样品均可分离）比纸层析灵敏度高～倍显色和观察结果方便如薄层由无机物制成可用浓硫酸、浓盐酸等腐蚀性显色剂。

因此薄层层析是一项实验常用的分离技术其应用范围主要在生物化学、医药卫生、化学工业、家业生产、食品和毒理分析等领域对于
天然化合物的分离和鉴定也已广泛应用。

、荧光素酶（LUC）基因来源：从北美荧光虫和叩头虫的cDNA 文库中克隆出来的。

功能：luc基因所编码的荧光素酶是生物体催化自身发光的一种蛋白。

该酶在有ATP、Mg、O和荧光素存在的条件下可发射出荧光荧光持续数秒到数分钟即消失可用微光测定仪检测到非常微弱的荧光素酶分子。

荧光光度计（）LUC测定灵敏度非常高（）LUC检测法成本低（）免于放射性同位素检测对人体健康和生态环境所造成的危害。

（）该酶的活性不需要转录后修饰可以在几乎所有的宿主细胞中表达。

优点：、荧光素酶（LUC）基因来源：从北美荧光虫和叩头虫的cDNA文库中克隆出来的。

功能：luc基因所编码的荧光素酶是生物体催化自身发光的一种蛋白。

该酶在有ATP、Mg、O和荧光素存在的条件下可发射出荧光荧光持续数秒到数分钟即消失可用微光测定仪检测到非常微弱的荧光素酶分子。

优点：（）LUC测定灵敏度非常高（）LUC检测法成本低（）免于放射性同位素检测对人体健康和生态环境所造成的危害。

（）该酶的活性不需要转录后修饰可以在几乎所有的宿主细胞中
表达。

、绿色荧光蛋白（GFP）基因来源：海洋生物水母其基因可在异源组织中表达并产生荧光。

功能：gfp开放阅读框架长度约bp编码个氨基酸残基其肽链内部第～位丝氨酸脱氢酪氨酸甘氨酸通过自身环化和氧化形成一个发色基团在长紫外波或蓝光照射下发出绿色荧光。

检测：可在荧光显微镜或流式细胞仪中直接观察基因的表达。

GreenFluorescentProtein(GFP)、绿色荧光蛋白（GFP）基因来源：海洋生物水母其基因可在异源组织中表达并产生荧光。

功能：gfp开放阅读框架长度约bp编码个氨基酸残基其肽链内部第～位丝氨酸脱氢酪氨酸甘氨酸通过自身环化和氧化形成一个发色基团在长紫外波或蓝光照射下发出绿色荧光。

检测：可在荧光显微镜或流式细胞仪中直接观察基因的表达。

HEWenxingUNIVERSITYOFJinan外源基因是否整合到染色体上？整合方式如何？整合到染色体上的外源基因是否表达？基因表达是否产生了完整的蛋白质？是否产生了目的性状？需要通过以下鉴定与证实分子生物学鉴定表型鉴定遗传学鉴定第四节转化体的鉴定与证实第四节转化体的鉴定与证实外源基因是否整合到染色体上？整合方式如何？整合到染色体上的外源基因是否表达？基因表达是否产生了完整的蛋白质？是否产生了目的形状？需要通过以下鉴定与证实分子生物学鉴定表型鉴定遗传学鉴定HEWenxingUNIVERSITYOFJinan外源基因转化验证内容和技术外源。