HPLC测定盐酸奥洛他定滴眼液中苯扎氯铵的含量

食品与药品Food and Drug 2010年第12卷第11期425

胞三羧酸循环的强弱。

本研究表明，PFOA 组小鼠肝脏明显肿大，部分肝细胞变性、坏死，肝细胞索排列紊乱，肝细胞浆中可见较多大小不等空泡，少量炎性细胞浸润，汇管区纤维组织增生不明显，肝小叶结构基本正常，肝脏Hyp 和LN 含量与空白组无显著差异，ROS 含量较空白组显著升高，SDH 活性较空白组显著降低；造模后PFOA 组病理组织学观察纤维化程度与造模组无显著差异，但出现大量肝细胞变性、坏死，肝脏Hyp 和LN 含量与造模组无显著差异，ROS 含量较造模组显著升高，SDH 活性较造模组显著降低。

结果表明，PFOA 能造成雄性小鼠严重肝损伤，甚至导致死亡，但其损伤肝脏的途径并不通过肝纤维化阶段，而是急性肝损伤导致大量肝细胞坏死。其作用机制与氧化应激有关，导致ROS 大量生成，线粒体内膜结合酶SD 活性降低，引起线粒体能量代谢障

碍，供能不足最终造成严重肝损伤。参考文献

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[6]程明亮，杨长青肝纤维化的基础研究及临床[M]第版北

京：人民卫生出版社，：

HPLC 测定盐酸奥洛他定滴眼液中苯扎氯铵的含量

韩文芳，韩保萍，朱启登，李晓强，邢贞琦

（山东博士伦福瑞达制药有限公司，山东济南250101）

摘要：目的

建立HPLC 测定盐酸奥洛他定滴眼液中苯扎氯铵含量的方法。方法以氰基键合硅胶为填充剂；乙腈-水-三

乙胺为440∶560∶1，用磷酸调pH 3.4为流动相，流速1.0mL/min ；检测波长210nm 。结果苯扎氯铵在0.05～0.15mg/mL 范围内呈良好的线性关系（r =0.9998）；平均回收率99.7%（n =9，RSD =0.69%）。结论此方法简便灵敏准确，重复性好，可用于测定盐酸奥洛他定滴眼液中苯扎氯铵的含量。

关键词：盐酸奥洛他定滴眼液；苯扎氯铵；高效液相色谱法；含量测定中图分类号：R988.1

文献标识码：A

文章编号：1672-979X(2010)11-0425-03

收稿日期：2010-05-27

作者简介：韩文芳（1978-），女，硕士，主要从事药品分析工作T el ：0531-********E-mail ：wenfang.han@https://www.360docs.net/doc/ef6438463.html,

Deter mination of Benzalkonium Chlor ide in Olopa tadine Hydrochlor ide E ye Drops by

HPLC

HAN Wen-fang,HAN Bao-ping,ZHU Qi-deng,LI Xiao-qiang,XING Zhen-qi

(Shandong Bausch &Lomb Freda Phar.Co.,Ltd.,Jinan 250101,China)

Abst ract :Object ive To establish an HPLC method for the determination of benzalkonium chloride in olopatadine hydrochloride eye drops.Met hods A CN column was used with the mobile phase of acetoni tri le -water -triethylamine(440:560:1).The phosphoric acid was used to adjust pH to 3.4.The flow rate was 1.0mL/min.The detection wavelength was 210nm.Result s The calibration curve was linear in the range of 0.05～0.15mg/mL for benzalkonium chloride （r =0.9998）.The average recovery was 99.7%(n =9,RSD =0.69%)for benzalkonium

技术交流

H ..2.200220-72.

426食品与药品Food and Drug 2010年第12卷第11期

t/min

图2样品HPLC 图谱

t/min

图1对照品HPLC 图谱

盐酸奥洛他定滴眼液治疗过敏性结膜炎临床效果好，安全性高

[1]

。该滴眼液用苯扎氯铵

（benzalkonium chloride ）做防腐剂。苯扎氯铵是由3种正烷烃基（n-C 12H 25﹑n-C 14H 29和n-C 16H 33）取代二甲基苄基氯化铵组成的同系物混合物[2,3]，3种同系物的杀菌特性不同。美国药典[4]规定了配方中3种同系物的含量，中国药典未规定烷基组成，仅规定用滴定法测定烷基总含量。本研究用HPLC 法，以氰基键合硅胶为填充剂，可检测盐酸奥洛他定滴眼液中苯扎氯铵3种同系物的单组分含量及总量。此方法快速﹑准确，重现性好，灵敏度高。1仪器与试剂1.1仪器

Waters 2695系列高效液相色谱仪，包括2996P AD 检测器与Empower 色谱工作站（W aters ）；CP225D 电子分析天平（Sartorius ）。1.2试剂

苯扎氯铵对照品（百利威公司，100.0%）；盐酸奥洛他定滴眼液及苯扎氯铵空白基质（本公司自制，样品批号20081023，20081024，20081025；空白基质批号20081026）；苯扎氯铵（上海经纬公司）；乙腈（色谱纯，Dikma Technology Inc.）；超纯水；其他试剂均为分析纯。2方法与结果2.1色谱条件

色谱柱：W ate rsSpher isorbCNR P （4.6mm ×150mm ，5μm ）；流动相：乙腈-水-三乙胺440∶560∶1，用磷酸调pH 3.4，检测波长210nm ，进样体积10μL 。2.2溶液配制

2.2.1对照品溶液制备称取苯扎氯铵对照品约25mg ，置入25mL 量瓶，用水溶解并稀释至刻度，摇匀。再吸取1mL 置入10mL 量瓶，用水稀释至刻度，摇匀，图谱见图1。

2.2.2供试品溶液制备样品直接进样，图谱见图2。2.2.3以同系物C 12﹑C 14和C 16峰面积的总和按外标法计算，即得。3绘制标准曲线

称取苯扎氯铵对照品约25mg ，置入25mL 量瓶，用水溶解并稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取0.5，0.8，1，1.2，1.5mL ，置入10mL 量瓶，用水稀释至刻度，摇匀。分别取不同浓度的对照品溶液自动进样，记录色谱峰面积。以峰面积A 为纵坐标，浓度C （m g/m L ）为横坐标，绘制标准曲线。苯扎氯铵在0.05～0.15mg/mL 范围内与峰面积呈良好的线性关系，回归方程：A=9910149C －24887，r =0.9998。2.4系统精密度

取0.1mg/mL 苯扎氯铵对照品溶液，连续进样6次，苯扎氯铵峰面积的相对标准偏差（R S D ）为0.43%，表明方法有较好的系统精密度。2.5重复性

按2.2项配制对照品溶液，由同一批样品配制6份供试品溶液。取以上溶液进样，记录色谱峰面积，按2.2项方法计算含量，平均标示含量99.1%，RSD =0.73%。2.6回收率

称取苯扎氯铵对照品约12.5，25，37.5m g 各3份，分别置入25mL 量瓶，加适量空白基质，振摇溶解，再用空白基质稀释至刻度，摇匀。再取1mL 置入10mL 量瓶，用水稀释至刻度，摇匀，配制成3个水平9份供试品溶液。按2.2项配制对照品溶液。取以上溶液自动进样，记录色谱峰面积，按项方法计算平均回收率为%，RSD ＝6%，结果见表。

chloride.Conclusion This method is simple,sensitive and accurate with a good repeatability for the determination of benzalkonium chloride in olopatadine hydrochloride eye drops.

Key Words:olopatadine hydrochloride eye drops;benzalkonium chloride;HPLC;assay

2. 2.299.70.91

食品与药品Food and Drug 2010年第12卷第11期427

2.7溶液稳定性

按2.2项配制对照品溶液和供试品溶液，取20μL 自动进样，记录色谱峰面积。将供试品溶液置于室温下，取8，24h 新配制的对照品溶液和供试品溶液自动进样，计算24h 内苯扎氯铵含量的相对变化为0.29%，表明供试品溶液在24h 内稳定，结果见表2。

2.8样品含量测定

分别取3批盐酸奥洛他定滴眼液，按2.2项配制对照品溶液和供试品溶液，测定苯扎氯铵含量分别为100.0%，102.2%，101.3%。3讨论

本方法简便易行，重复性及灵敏度均较高，可用以测定盐酸奥洛他定滴眼液中苯扎氯铵的含量。本法测定中对照品显示3个峰即同系物C 12﹑C 14和C 16峰，而样品只出现1个峰即同系物C 12，这与国产原料有关且与文献报道[5]一致。参考文献

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中国医药工业杂志，2005，36（9）：564-566.

表2供试品稳定性实验测定结果

表1回收率实验测定结果

加入量/mg 测得量/mg 回收率/%11.4511.46100.113.2813.1999.312.6912.5598.924.2224.24100.123.6023.5399.725.3825.51100.536.8536.6399.437.3536.7998.539.34

39.50

100.4

时间/h 含量/%相对变化率/%

0102.28101.6－0.0124

102.5

0.29《生物医学工程研究》征订启事

《生物医学工程研究》（CN —1413/R ），是中国科技核心期刊。本刊立足于生物医学工程研究前沿，

主要栏目有：论著、科研简讯、新技术与新方法、专题讲座、新产品评价等。主要刊登人工器官、生物材料、生物力学、组织工程等领域的新理论、新方法、新技术，读者对象主要为大专院校、医疗、科研院所从事生物医学工程研究、教学的师生、临床医生、工程技术人员及有关人员,具有可读性和实用性。

《生物医学工程研究》为季刊大16开，季末25日出版。定价每期10.00元（包括邮费），全年4期共40.00元。需订阅者可直接与《生物医学工程研究》编辑部联系，同时请汇款。银行汇款寄山东生物医学工程学会，帐号：000000131003800000290，开户行：济南齐鲁银行燕山支行。

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