落叶松中二氢槲皮素提取工艺优化及其纯化的研究

的质量浓度 × 平衡溶液体积） １０ × ０％
１２ １中的回归方程 ，计算二氢槲皮素含量。 ．． １２３ 二氢槲 皮 素 的提 取 ．．
将落 叶松木 屑粉 碎 ，取 ２ ０目以上作 为实 验原 料 ，以不 同料 液 比在 水 浴条 件 下 加 热 原料 ，提取
一
２ 结 果 与 分 析
ａ ｌ ｗ ｘ ａ ｔ ｎ ｔ ｐ ｒ ｕｅｗ ｓ ０ ，ｓｌ —ｌ ｕｄ ｒ ｉ ｗ ｓ１： （ ／ ） ｘ ａｔ ｎ ｔ ｅｗ ｓ ０ ｉ ，ｅ — ｓ ｌ ：ｅ ｔ ｃ ｏ ｍ ｅａ ｒ ａ ９ ％ ｏ ｆ ｏ ｒ ｉ ｅ ｔ ｏｄ ｉ ｉ ａｏ ａ ｉ ｑ ｔ １ ｇ ｍＬ ，ｅ ｔ ｃ ｏ ｍ ａ ４ ｍ ｎ ｘ ２ ｒ ｉ ｉ
１２ １ 标 准 曲线 的绘 制 ．． 采用 Ｒ Ｐ—Ｈ Ｌ Ｐ Ｃ法 ，以二 氢 槲皮 素 标 准
品在 ２ ８ ｍ下 测 定 峰 面积 ， 以质 量浓 度 Ｙ （ ｇ ８ｎ ｍ／
ｍ ）对 峰 面积 ｘ绘 制标 准 曲 。 Ｌ １２２ 样 品溶液 中二氢 槲皮 素含 量 的测定 ．． 对 样 品 提 取 液 定 容 ，测 定 峰 面 积 ，代 人
量 。沉 淀部 分烘 干后 称重 。 １ ２ ４ ２ 树脂 纯化 法 ．． ． 取 等量 预处 理好 的树脂 于
制 备分 离液 相 ，但 纯 化 成 本 高 。 国 内外 也有 报 道
用 聚 酰胺 吸附 法 纯 化二 氢 槲 皮 素 。本 实 验 研
锥 形 瓶 中 ，分 别 准 确 加 入 等 量 落 叶 松 水 提 浓 缩 液 ，置 于恒 温 摇 床 中速 振 荡 ２ ｈ ４ ，取 样 测 定 平 衡 溶 液 中 二 氢 槲 皮 素 含 量 ，得 到 吸 附 量 和 吸 附
究 了落 叶松 中二 氢槲 皮 素 的水 提 工 艺 以及 乙醇 沉 淀 、大孔 吸附树脂 、聚 酰胺 树 脂 等 纯 化 方法 的初
步 比较 ，寻求新的纯化方法 ，力求降低成本 。
率¨ 。将吸附平衡的树脂 以蒸馏水 冲洗后置于锥
形 瓶 中 ，并 准确加 入 ４ ％ 乙醇 ，聚 酰胺树 脂 中加 ０ 入 等量 乙 酸 乙 酯 ，恒 温 摇 床 振 荡 ２ｈ ４ ，测 定 洗 脱 液 二氢槲 皮 素浓度 ，并 得到 解 吸量 和解 吸率 ¨ 。 吸附量 （ ｇｇ ｍ ／ ）＝（ 提 浓 缩 液 中二 氢 槲 皮 素 水 的质量浓 度 ×浓缩 液 体 积 一平 衡 溶 液 中二 氢 槲 皮
１２ 实验 方法 ．
质量浓度 × 浓缩液体积 一 平衡溶液 中二氢槲皮素 的质 量浓 度 ×平衡 溶 液 体积 ）水 提 浓缩 液 中二氢 ／
槲皮 素 的质量 浓度 ×浓缩 液 的体积 ×１０ ０％ 解 吸量 （ ／ ）＝ 脱液 中二 氢槲 皮 素 的质量 ｍｇｇ 洗 浓度 × 脱液 的体 积／ 脂 的质量 洗 树 解 吸率 （ ）＝ 脱液 中二氢 槲 皮 素 的质 量浓 ％ 洗 度 ×洗脱 液 的体积／ 水提 浓 缩液 中二 氢槲 皮 素 的 （ 质量 浓度 × 缩液 体 积 一平 衡 溶 液 中二 氢 槲 皮 素 浓
段 时 间后 ，过滤提 取 液 ，定 容 ，用 色谱 法 测定
得 率 。分别考察 提取温度 ５℃ 、６℃ 、７℃ 、８℃ 、 ０ ０ ０ Ｏ
９ｑ ０￣ ０Ｃ、１０Ｃ，料液 比 １： 、１： ２ ９ １ 、１： ５ １ 、１： ８ １、
１： １ ２ ，提 取 时 间 ２ ｒ ｎ ０ ｉ 、６ ｍ ｎ ０ ｉ 、 ０ ｉ、４ ｍ ｎ ０ ｉ 、８ ｍ ｎ ａ
其价格颇高， （９ ６一） １５ ，男 ，博士生导师 ，研究方向 ：食 品营养 与添加剂。
的价格 超过 千元 ，使 其 不 能 得 到广 泛 的应 用 。经
调 查 ，现有 的工业 纯 化 二 氢槲 皮 素 的方 法有 采 用
清液 旋 蒸 除 去 乙醇 ，定 容 后 测 定 二 氢 槲 皮 素 含
生物类 黄酮 ，但 在油 脂抗 氧 化 试验 中 ，二 氢 槲 皮素 的抗 氧 化作用 稍逊 于槲皮 素 。 目前 ，市场 对 二氢 槲 皮 素 的需 求 量可 观 ，但
重要 的生物学活性
，特别是其 ４、 ，７一Ｏ Ｈ及
３ ４ 邻位二羟基的存在使其抗氧化能力优于一般 、
收稿 日期 ：２ １ 一 ８ １ ０】 ０ —５ 通讯作者
ｔ ｃ ｉｎ ｔｒ ｅ ｔ ｓ Ｔ ｒｅ ｋ ｎ ｓ ｏ ｕ ｉ ｃ ｔｏ ｔ ｏ ｓ ｉ ｃｕ ｉ ｇ ａｃ ｈ ｌｐ ｅ ｉ ｉ ｔ ｎ， ｍａ ｒ ｐ ｒｕ ｅ ｉ ｎ ｏ ｙ ｒ ｔ ｈ ｅ ｉ ａ ｏ ｍｅ ． ｈ ｅ ｉ ｄ ｆｐ ｒ ａｉｎ ｍｅｈ ｄ ｎ ｌ ｄｎ ｌｏ ｏ ｒｃ ｐｔ ｉ ｉ ｆ ａｏ ｃ ｏ ｏ ｏ ｓ ｒｓｎ ａ ｄ ｐ ｌ — ａ ｄ ｂ ｏ ｐ ｉｎ ｗｅｅ ｕ ｅ ｏ ｐ ｒｆ ｉｙ ｒｑ ｅ ｃ ｔｎ Ａ ｃ ｍｐ ｒ ｔ ｅ ｓｕ ｙ ｓ ｏ ｅ ｈ ｔ ｌ ｔ ｒｅ ｍｅ ｈ ｄ ａ ｅｃ ｒ ｉ ｍｉ ｅ ａ ｓ ｒ ｔ ｒ ｓ ｄ ｔ ｕ ｉ ｄ ｈ ｄ ｏ ｕ ｒ ｅｉ ． ｏ ａ ａｉ ｔｄ ｈ ｗ ｄ ｔ ａ ｌ ｈ ｅ ｔ ｏ ｓ ｈ ｖ ｅ ｔ ｎ ｏ ｙ ｖ ａ ａ ｐ ｒ ｃ ｔ ｎ ｅ ｆｃ ． Ｐ ｌａ ｄ ｂ ｏ ｐ ｉｎ ｗａ ｈ ｅ ｔ ｗ ｉ ｌｏ ｏ ｒ ｃｐｔｔｏ ｏ ｉ ｅ ｉ ｃ ｏ ｏ ｏ ｓｒ ｓｎ ａ — ｕ ｉ ａｉ ｆ ｔ ｎｙ ｍｉ ｅ ａ ｓ ｒ ｔ ｓｔ ｅｂ ｓ ， ｈ ｌ ａｃ ｈ ｌ ｅ ｉ ｉ ｉｎ ｃ ｍｂ ｎ ｄ ｗ ｔ ｍａ ｒｐ ｒｕ ｅ ｉ ｂ ｉ ｆ ｏ ｅ ｏ ｅ ｐ ａ ｈ ｓ ｒ ｔ ｎ ｉ ａ ｎ ｗ ｍｅｈ ｄ ｆｒｐ ｒ ｃ ｔ ｎ ｏ ｉ ｙ ｒ ｍｙ ｉｅｉ ． ｏ ｉ ｓ ｅ ｔ ｏ ｏ ｕ ｉ ａｉ ｆｄｈ ｄ ｏ ｒ ｔ ｐ ｏ ｉ ｆ ｏ ｃ ｎ
率的影 响，以 ｉ 单因素设计正交实验 ，实验表明 ，温度具有 显著性 （ ０ ０ ） 种 ｐ＜ ．５ ，最终确立提取 工艺的最佳 条件足 ：以水加热 回流提取 ，温度为 ９ ％ ，时间 ４ ｍｉ，料液 比为 １： ２ ０ ０ ｎ １ ，提 取 ３次 ，提取率达到 ８ ％ 以 卜。 ５ 探讨 乙醇沉淀法 、大孔树脂吸附法 、聚酰胺树脂 吸附法三种纯化方 法对二氢槲皮素粗提 物纯化 的效 果。由结 果 町知，一种方法均能达到一定 的纯化效果 ，其 中聚酰胺树脂 的纯 化效果最佳 ，将醇沉 与大孔吸附树脂 相结 合，可以作 为一种新 的纯化二氢槲皮素 的方法进行深人研究。
ｗａ ｎ ｅ ｔｇ ｔ ｄ Ｔｈ ｐ ｉ ｕ ｅ ｔａ ｔｎ ｏ ｄ ｔｏ ｓｏ ｔ ｉｅ ｈ ｏ ｇ ｈ ｒｈ ｇ ｎ ｌｅ ｐ ｒｍ ｅ ｔ ａ ｄ ｔｅ ｒ ｓ ｌ ｓ ｓ ｉ ｖ ｓｉ ａｅ ． ｅ ｏ ｔｍ ｍ ｘｒ ｃｉ ｇ ｃ ｎ ｉｉｎ ｗａ ｂ ａｎ ｄ ｔ ｒ ｕ ｈ ｔ ｅ ｏ ｔｏ ｏ ａ ｘ ｅ ｉ ｎ ， ｎ ｈ ｅ ｕ ｔｗａ
１ 材 料 与 方 法
１ １ 材料 与 仪器 ．
落 叶松 木屑 ，内蒙 古 呼 伦 贝尔 市 ；二 氢 槲 皮 素 标准 品 ，天 津 尖 峰 天然 产 物 公 司 ；树 脂 ＡＢ一
８ Ｄ２ ０１ Ｄ１ ０１ ＡＤＳ 一 ２１ Ｈ１ ＨＰＤ — ０３
素的质量浓度 × 平衡溶液体积）树脂的质量 ／
Ｕ ｉ ｒ ｔ ｏ Ｓ ｉ ｃ ｎ ｅｈ ｏｏｙ ｉ Ｊ ０ ４ ７ ｎｖ ｓｙ ｆ ｃ ｎ ｅａｄＴ ｃｎ ｌ ，Ｔａ ｉ ３ ０ ５ ） ｅ ｉ ｅ ｇ ｎｎ
Ａｂ ｔａ ｔ Ｄ ｈ ｄ ｏ ｕ ｒ ｅ ｉ ａ ｘｒ ｃｅ ｒ ｍ ｌｒ ｈ ｂ ａ ｅ ． Ｔ ｅ ｉ ｆ ｅ ｃ ｆ ｔ ｒｅ ｃ ｎ ｉ ｏ ｓ ｏ ｘｒ ｃｉｎ ｙｅｄ ｓｒ ｃ ： ｉ ｙ ｒ ｑ ｅ ｃ ｔ ｗ ｓｅ ｔ ｔｄ ｆｏ ａ ｃ ｙ ｗ ｔ ｒ ｎ ａ ｈ ｎ ｕ ｎ ｅ ｏ ｈ ｅ ｏ ｄ ｔ ｎ ｎ ｅ ｔ ｔ ｉｌ ｌ ｉ ａ ｏ
ＺＨＡＮＧ －ｈｅ Ｚｅ ｓ ｎｇ， ＣＨＥＮ Ｙｕｅ ｚ ｕ ， Ｗ ＡＮＧ －ｉ －ｈｏ Ｌｉｔｎｇ
（ ｅ ａ ｏａ ｒ ｏ ｕｒｉｎａｄＳｆｔ，Ｍｉｉｒ ｄ ｃｔ ｎｏ ｈ ａ ｉ Ｊ Ｋ ｙＬ ｂ ｒ ｏｙ ｆ ｔｔ ｎ ａｅ ｔ Ｎ ｉｏ ｙ ｎｓ ｙＥ ｕ ａ ｏ ｆ ｉ ，Ｔａ ｉ ｔ ｉ Ｃ ｎ ｎｎ
１２４ 二氢槲皮素初步纯化方法 ．．
１２４ １ 乙 醇 沉 淀 法 将 落 叶松 水 提 液 真 空 浓 ．．． 缩 ，取 一定 浓度 的提 取 液 ，在 搅 拌 状 态下 向浓 缩
吸附率 （ ）＝（ 提 浓 缩 液 中二 氢槲 皮 素 的 ％ 水
ＢＲ Ｊ Ｈ、聚 酰胺 ，河北 宝恩 树脂 有 限公 司。
高效液相色谱系统 ，日本岛津公 司；Ｌ １ 一 Ｇ６
ｗ 离心 机 ，北 京 医用 离 心 机 厂 ；Ｒ Ｅ一３０ ００旋 转 蒸发 器 ，上海 亚荣生 化仪 器厂 。
Ｋｅ ｒ ｙ ｗｏ ｄｓ： ｌ ｒｈ； ｄ ｈ ｄ ｏ ｕ ｒ ｅ ｉ ｅ ｔａ ｔｏ ａｃ ｉ ｙ ｒ ｑ ｅ ｃ ｔｎ； ｘｒ ｃ ｉｎ； ｐｕ ｉ ｃ ｔｏ ｔ ｏ ｒｆ ａｉ ｎ ｍｅ ｈ ｄ ｉ
二氢槲 皮素 （ 。 ，又名 紫杉 叶素 ，双 Ｃ Ｏ ） Ｈ， 氧栎 精 。 由于 含有 较 多 的酚 羟 基 ，故 其 具有 许 多
史
Ｃｈｎ ｄＡ ｄ ｔ ｅ ｉ Ｆｏ ｄ ｉ ｖ ｓ ａ ｏ ｉ
： ！
落叶松中二氢槲皮素提取工艺优化 及其 纯 化 的研 究
张泽 生 陈明 舟 ，王利 婷 ，
（ 天津科 技大 学食 品工程 与生 物技术 学 院 ，天津
摘
３０ ５ ） ０ ４ ７
要 ：本实验 以水为溶剂提落叶松 中的二氢槲皮 素，主要 考察提取温度 、时 间 、料液 比等 凶素对 提取
关 键 词 ：落 叶松 ； ：氢 槲 皮 素 ；提 取 ；纯 化 方 法 二 中 图 分 类 号 ：Ｔ ２ １２ Ｓ０ ． 文 献标 识 码 ：Ａ 文 章 编 号 ：１０ ２ １ （０ １ ０ ０ ５ ０ ０ ６— ５ ３ ２ １ ）５— ０ ４— ５
Ｏｐ ｉ ｚ ｔ ｎ ｏ ｘ ｒ ｃ ｉｎ ａ ｄ ｐ ｒ ｉａ ｉ ｎ ｏ ｔ ｍｉａ ｉ ｆｅ ｔ ｔ ｎ ｕ ｉｃ ｔｏ ｆ ｏ ａ ｏ ｆ ｉ ｄ ｈ ｄ Ｏ ｕ ｒ ｅ ｉ ｒ ｍ ａ ｃ ｉｙ ｒ ｑ ｅ ｃ ｔ ｆ ｎ Ｏ ｌｒ ｈ
００ ．２～ ０ １ｍ ／ ．６ ｇｍＬ内呈 良好 线性 。
１０ ｎ ２ｍｉ，提 取 次 数 １次 、２次 、３次 、４ ０ ｍｉ、１０ ｎ 次对 浸提效 果 的影 响 ，并设 计 正交试 验 。 提取率 （ ） ％ ＝二 氢槲皮 素提 取量 （ ）原 料 中 ｇ／ 二氢槲 皮 素总含 量 （ ）×１０ ｇ ０ ％
２ １ 标 准 曲线 的绘 制 ．
测定 不 同浓 度 二 氢 槲 皮 素标 准 品 溶 液 在
２ ８ｍ 下 的峰 面积 ，以质 量 浓 度 Ｙ （ ｇｍ ８ｎ ｍ ／ Ｌ）对
峰 面积 Ｘ绘 制 标 准 曲 （ １ ，得 到 回归 方程 为 ： 图 ） Ｙ Ｅ一 ８ ＝２ ０ ｘ＋０ ０ ０ ，Ｒ ． ０ ３ ＝０ ９ ９ ，在 质 量浓 度 ．９ ３