不同地区取样点土壤中木质素降解优势菌株的筛选及
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２ ］ 的消化酶对植物体成分的消化 ［ 。白腐菌能够分 ［ １ ］
的生长特性， 探讨植被类型、 土壤成分对木质素降 解菌生长特 性 的 影 响， 拟为后续从土壤中筛选高 效木质素降解菌提供研究依据。
１ ㊀ 材料与方法
１ ． １ ㊀ 培养基 ㊀㊀ 马铃薯葡萄 糖 琼 脂 （ Ｐ Ｄ Ａ） 综 合 培 养 基： Ｐ Ｄ Ａ ３ ７ｇ 、 Ｋ Ｈ Ｐ Ｏ ． ０ｇ 、 Ｍｇ Ｓ Ｏ Ｏ１ ． ５ｇ 、 尿素 ２ ４３ ４· Ｈ ２ ０ ． ０ １ｇ 、 维生素 Ｂ 初始 ｐ Ｈ７ ． ０ ， 加蒸馏水至 １ 微量，
［ ７ ］ １０ ０ ０ｍ Ｌ 。
泌胞外木质素过氧化物酶（ ｌ ｉ ｇ ｎ ｉ ｎｐ ｅ ｒ ｏ ｘ ｉ ｄ ａ ｓ ｅ ， Ｌ ｉ Ｐ ） 、 锰过 氧 化 物 酶 （ ｍ ａ ｎ ｇ ａ ｎ ｅ ｓ ｅ ｄ ｅ ｐ ｅ ｎ ｄ ｅ ｎ ｔ ｐ ｅ ｒ ｏ ｘ ｉ
［ ３－ ４ ］ ｄ ａ ｓ ｅ ， Ｍｎ Ｐ ） 、 漆酶（ ｌ ａ ｃ ｃ ａ ｓ ｅ ） ， 具有降解木质素
动物营养学报 ２ ０ １ ３ ， ２ ５ （ ７ ） ： １ ６ ５ ６ １ ６ ６ ２ Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅＪ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ａ ｎ ｉ ｍ ａ ｌ Ｎ ｕ ｔ ｒ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ６ ２ ６ ７ ｘ ． ２ ０ １ ３ ． ０ ７ ． ０ ３ ３
５ － 密度［ （ ５ ． ６ ７ʃ ０ ． ５ ８ ）１ ０ ｇ １］ 极显著高于另外 ４个取样点（ Ｐ＜ ０ ． ０ １ ） ， 所获得的木质素降解菌
的产酶特性亦优于其他取样点。可知， ５个取样点土壤中木质素降解菌密度存在明显差异， 并与 土壤中总有机碳含量呈强正相关（ ｒ ＝ ０ ． ８ ４ ， Ｐ＜ ０ ． ０ １ ） 。 关键词： 木质素； 降解菌； 土壤； 有机碳 中图分类号： Ｓ ８ １ ６ ． ７ ㊀㊀㊀㊀ 文献标识码： Ａ ㊀㊀㊀㊀ 文章编号： １ ０ ０ ６ ２ ６ ７ Ｘ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ７ １ ６ ５ ６ ０ ７ ㊀㊀ 农作物秸秆是人类从事作物栽培生产过程中 大量产生的一类含有一定数量木质素的纤维类可 再生 资 源。 据 统 计， １ ９ ９ ８年 我 国 秸 秆 总 产 量 为 ７ ． ９亿 ｔ 。通过对秸秆 中 木 质 素 的 降 解， 提高农 作物秸秆的 饲 用 率， 对畜禽养殖中饲料资源的开 发具有重要意义。秸秆中的木质素和植物细胞壁 中的纤维素、 半纤维素紧密结合在一起， 使纤维素 降解酶不易 与 纤 维 素 分 子 接 触， 限制了各种来源
㊀㊀ 选择培养基： 愈创木酚 １ ． ０ｇ 、 尿素 ０ ． ０ ２ｇ 、 酒 石酸 ０ ． ０ ５ｇ 、 蛋白胨 ２ ． ６ｇ 、 Ｋ Ｈ Ｐ Ｏ ． ０ｇ 、 ２ ４ １ Ｍｇ Ｓ Ｏ ·７ Ｈ Ｏ０ ． ５ｇ 、 Ｎ ａ Ｈ Ｐ Ｏ ． ２ｇ 、 琼脂 １ ８ｇ ， ４ ２ ２ ４０
［ ８ ］ Ｈ７ ． ０ ， 加蒸馏水至 １０ ０ ０ｍ Ｌ 。 初始 ｐ
㊀
不同地区取样点土壤中木质素降解优势菌株的 筛选及生长特性比较
别春雨 ㊀ 姜 ㊀ 涛 ㊀ 蒋晓云 ㊀ 章世元
（ 扬州大学动物科学与技术学院， 扬州 ２ ２ ５ ０ ０ ９ ）
摘 ㊀ 要： 本试验旨在研究基于不同地区取样点土壤成分条件下， 木质素降解菌的生长特性， 并 为筛选出降解农作物秸秆中木质素的优势菌奠定基础。通过对扬州、 南京、 临沂、 潍坊和连云港 地区 ５个取样点的土壤成分测定， 并利用选择培养基和马铃薯葡萄糖琼脂（ Ｐ Ｄ Ａ ） Ｒ Ｂ亮蓝与 Ｐ Ｄ Ａ Ｂ ａ ｖ ｅ ｎ ｄ ａ ｍ ｍ 平板显色反应鉴定不同土壤中木质素降解菌生长量及其木质素降解酶特性， 依据各取样点菌株的生长特性最终选择优势菌株。结果表明， 扬州取样点土壤中木质素降解菌
㊀㊀ Ｐ Ｄ Ａ Ｒ Ｂ亮 蓝 培 养 基 （ 过氧化酶鉴定培养 Ｂ亮蓝单独灭菌后按 ６ ２ ５μ ｇ ／ ｍ Ｌ的浓度 基） ： 将Ｒ 加入到 Ｐ Ｄ Ａ培养基中。
收稿日期： ２ ０ １ ３－ ０ １－ ２ ２ 基金项目： 江苏高校优势学科建设工程资助项目； 江苏省普通高校研究生科研创新计划项目（ Ｃ Ｘ Ｌ Ｘ １ ２ ＿ ０ ９ ３ １ ） 作者简介： 别春雨（ １ ９ ８ ７ —） ， 男， 山东潍坊人， 硕士研究生， 从事动物营养与饲料科学专业研究。 Ｅ ｍ ａ ｉ ｌ ：３ １ ６ ３ ０ ７ ５ ５ ３ ＠ｑ ｑ ． ｃ ｏ ｍ 章世元， 教授， 硕士生导师， Ｅ ｍ ａ ｉ ｌ ：ｙ ｚ ｚ ｓ ｙ ＠１ ２ ６ ． ｃ ｏ ｍ 通讯作者：
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
的特性， 且被 认 为 是 目 前 主 要 的 木 质 素 降 解 微 生
５－ ６ ］ 物［ 。而不同地区的气候类型、 植被种类和土壤
成分等因素 都 会 影 响 到 土 壤 中 微 生 物 的 种 类、 数 量、 群系结构和产酶性能。为此， 本文旨在通过探 讨不同取样点土壤中的真菌密度及木质素降解菌
７期
别春雨等： 不同地区取样点土壤中木质素降解优势菌株的筛选及生长特性比较
１ ６ ５ ７
㊀㊀Ｐ Ｄ Ａ Ｂ ａ ｖ ｅ ｎ ｄ ａ ｍ ｍ 培养基（ 漆酶鉴定培养基） ： 在Ｐ Ｄ Ａ培养基中加入鞣酸至终浓度为０ ． ０ ０ １ｇ ／ Ｌ 。 １ ． ２ ㊀ 土壤主要成分测定 ㊀㊀ 在扬州 大 学 文 汇 路 校 区 农 学 院 实 验 基 地、 南 京师范大 学 仙 林 校 区、 临 沂 市 兰 山 区、 潍 坊 市、 连 云港市选定 ５个采样点， 采集枯枝败叶下 １ ０ｃ ｍ左 ０份土样， 共５ ０份 右的深层土壤， 每个取样点取 １ 土壤样品。测 定 土 壤 中 的 总 有 机 碳 （ ｔ ｏ ｔ ａ ｌ ｏ ｒ ｇ ａ ｎ ｉ ｃ ， Ｔ Ｏ Ｃ ） 和氮、 磷、 钾等主 要 成 分 的 含 量。土 ｃ ａ ｒ ｂ ｏ ｎ 壤中 Ｔ Ｏ Ｃ含 量 的 测 定 采 用 Ｋ Ｃ ｒ Ｏ Ｈ Ｓ Ｏ ２ ２ ７ ２ ４氧化 法， 总磷含量的测定采用分光光度计法， 总氮含量 的测定采用 凯 氏 定 氮 法， 全钾含量的测定则采用 火焰光度计法。 １ ． ３ ㊀ 菌落总数测定及菌株初选 ㊀㊀ 在取得的土壤样品中各取 １ｇ 土壤， 分别用无 菌水按倍比稀释的方法稀释为 １ ０
的生长特性， 探讨植被类型、 土壤成分对木质素降 解菌生长特 性 的 影 响， 拟为后续从土壤中筛选高 效木质素降解菌提供研究依据。
１ ㊀ 材料与方法
１ ． １ ㊀ 培养基 ㊀㊀ 马铃薯葡萄 糖 琼 脂 （ Ｐ Ｄ Ａ） 综 合 培 养 基： Ｐ Ｄ Ａ ３ ７ｇ 、 Ｋ Ｈ Ｐ Ｏ ． ０ｇ 、 Ｍｇ Ｓ Ｏ Ｏ１ ． ５ｇ 、 尿素 ２ ４３ ４· Ｈ ２ ０ ． ０ １ｇ 、 维生素 Ｂ 初始 ｐ Ｈ７ ． ０ ， 加蒸馏水至 １ 微量，
［ ７ ］ １０ ０ ０ｍ Ｌ 。
泌胞外木质素过氧化物酶（ ｌ ｉ ｇ ｎ ｉ ｎｐ ｅ ｒ ｏ ｘ ｉ ｄ ａ ｓ ｅ ， Ｌ ｉ Ｐ ） 、 锰过 氧 化 物 酶 （ ｍ ａ ｎ ｇ ａ ｎ ｅ ｓ ｅ ｄ ｅ ｐ ｅ ｎ ｄ ｅ ｎ ｔ ｐ ｅ ｒ ｏ ｘ ｉ
［ ３－ ４ ］ ｄ ａ ｓ ｅ ， Ｍｎ Ｐ ） 、 漆酶（ ｌ ａ ｃ ｃ ａ ｓ ｅ ） ， 具有降解木质素
动物营养学报 ２ ０ １ ３ ， ２ ５ （ ７ ） ： １ ６ ５ ６ １ ６ ６ ２ Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅＪ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ａ ｎ ｉ ｍ ａ ｌ Ｎ ｕ ｔ ｒ ｉ ｔ ｉ ｏ ｎ ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ６ ２ ６ ７ ｘ ． ２ ０ １ ３ ． ０ ７ ． ０ ３ ３
５ － 密度［ （ ５ ． ６ ７ʃ ０ ． ５ ８ ）１ ０ ｇ １］ 极显著高于另外 ４个取样点（ Ｐ＜ ０ ． ０ １ ） ， 所获得的木质素降解菌
的产酶特性亦优于其他取样点。可知， ５个取样点土壤中木质素降解菌密度存在明显差异， 并与 土壤中总有机碳含量呈强正相关（ ｒ ＝ ０ ． ８ ４ ， Ｐ＜ ０ ． ０ １ ） 。 关键词： 木质素； 降解菌； 土壤； 有机碳 中图分类号： Ｓ ８ １ ６ ． ７ ㊀㊀㊀㊀ 文献标识码： Ａ ㊀㊀㊀㊀ 文章编号： １ ０ ０ ６ ２ ６ ７ Ｘ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ７ １ ６ ５ ６ ０ ７ ㊀㊀ 农作物秸秆是人类从事作物栽培生产过程中 大量产生的一类含有一定数量木质素的纤维类可 再生 资 源。 据 统 计， １ ９ ９ ８年 我 国 秸 秆 总 产 量 为 ７ ． ９亿 ｔ 。通过对秸秆 中 木 质 素 的 降 解， 提高农 作物秸秆的 饲 用 率， 对畜禽养殖中饲料资源的开 发具有重要意义。秸秆中的木质素和植物细胞壁 中的纤维素、 半纤维素紧密结合在一起， 使纤维素 降解酶不易 与 纤 维 素 分 子 接 触， 限制了各种来源
㊀㊀ 选择培养基： 愈创木酚 １ ． ０ｇ 、 尿素 ０ ． ０ ２ｇ 、 酒 石酸 ０ ． ０ ５ｇ 、 蛋白胨 ２ ． ６ｇ 、 Ｋ Ｈ Ｐ Ｏ ． ０ｇ 、 ２ ４ １ Ｍｇ Ｓ Ｏ ·７ Ｈ Ｏ０ ． ５ｇ 、 Ｎ ａ Ｈ Ｐ Ｏ ． ２ｇ 、 琼脂 １ ８ｇ ， ４ ２ ２ ４０
［ ８ ］ Ｈ７ ． ０ ， 加蒸馏水至 １０ ０ ０ｍ Ｌ 。 初始 ｐ
㊀
不同地区取样点土壤中木质素降解优势菌株的 筛选及生长特性比较
别春雨 ㊀ 姜 ㊀ 涛 ㊀ 蒋晓云 ㊀ 章世元
（ 扬州大学动物科学与技术学院， 扬州 ２ ２ ５ ０ ０ ９ ）
摘 ㊀ 要： 本试验旨在研究基于不同地区取样点土壤成分条件下， 木质素降解菌的生长特性， 并 为筛选出降解农作物秸秆中木质素的优势菌奠定基础。通过对扬州、 南京、 临沂、 潍坊和连云港 地区 ５个取样点的土壤成分测定， 并利用选择培养基和马铃薯葡萄糖琼脂（ Ｐ Ｄ Ａ ） Ｒ Ｂ亮蓝与 Ｐ Ｄ Ａ Ｂ ａ ｖ ｅ ｎ ｄ ａ ｍ ｍ 平板显色反应鉴定不同土壤中木质素降解菌生长量及其木质素降解酶特性， 依据各取样点菌株的生长特性最终选择优势菌株。结果表明， 扬州取样点土壤中木质素降解菌
㊀㊀ Ｐ Ｄ Ａ Ｒ Ｂ亮 蓝 培 养 基 （ 过氧化酶鉴定培养 Ｂ亮蓝单独灭菌后按 ６ ２ ５μ ｇ ／ ｍ Ｌ的浓度 基） ： 将Ｒ 加入到 Ｐ Ｄ Ａ培养基中。
收稿日期： ２ ０ １ ３－ ０ １－ ２ ２ 基金项目： 江苏高校优势学科建设工程资助项目； 江苏省普通高校研究生科研创新计划项目（ Ｃ Ｘ Ｌ Ｘ １ ２ ＿ ０ ９ ３ １ ） 作者简介： 别春雨（ １ ９ ８ ７ —） ， 男， 山东潍坊人， 硕士研究生， 从事动物营养与饲料科学专业研究。 Ｅ ｍ ａ ｉ ｌ ：３ １ ６ ３ ０ ７ ５ ５ ３ ＠ｑ ｑ ． ｃ ｏ ｍ 章世元， 教授， 硕士生导师， Ｅ ｍ ａ ｉ ｌ ：ｙ ｚ ｚ ｓ ｙ ＠１ ２ ６ ． ｃ ｏ ｍ 通讯作者：
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
的特性， 且被 认 为 是 目 前 主 要 的 木 质 素 降 解 微 生
５－ ６ ］ 物［ 。而不同地区的气候类型、 植被种类和土壤
成分等因素 都 会 影 响 到 土 壤 中 微 生 物 的 种 类、 数 量、 群系结构和产酶性能。为此， 本文旨在通过探 讨不同取样点土壤中的真菌密度及木质素降解菌
７期
别春雨等： 不同地区取样点土壤中木质素降解优势菌株的筛选及生长特性比较
１ ６ ５ ７
㊀㊀Ｐ Ｄ Ａ Ｂ ａ ｖ ｅ ｎ ｄ ａ ｍ ｍ 培养基（ 漆酶鉴定培养基） ： 在Ｐ Ｄ Ａ培养基中加入鞣酸至终浓度为０ ． ０ ０ １ｇ ／ Ｌ 。 １ ． ２ ㊀ 土壤主要成分测定 ㊀㊀ 在扬州 大 学 文 汇 路 校 区 农 学 院 实 验 基 地、 南 京师范大 学 仙 林 校 区、 临 沂 市 兰 山 区、 潍 坊 市、 连 云港市选定 ５个采样点， 采集枯枝败叶下 １ ０ｃ ｍ左 ０份土样， 共５ ０份 右的深层土壤， 每个取样点取 １ 土壤样品。测 定 土 壤 中 的 总 有 机 碳 （ ｔ ｏ ｔ ａ ｌ ｏ ｒ ｇ ａ ｎ ｉ ｃ ， Ｔ Ｏ Ｃ ） 和氮、 磷、 钾等主 要 成 分 的 含 量。土 ｃ ａ ｒ ｂ ｏ ｎ 壤中 Ｔ Ｏ Ｃ含 量 的 测 定 采 用 Ｋ Ｃ ｒ Ｏ Ｈ Ｓ Ｏ ２ ２ ７ ２ ４氧化 法， 总磷含量的测定采用分光光度计法， 总氮含量 的测定采用 凯 氏 定 氮 法， 全钾含量的测定则采用 火焰光度计法。 １ ． ３ ㊀ 菌落总数测定及菌株初选 ㊀㊀ 在取得的土壤样品中各取 １ｇ 土壤， 分别用无 菌水按倍比稀释的方法稀释为 １ ０