临床酶学检验技术
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16
三 酶促反应动力学
（四）酶偶联反应
A Ex B EaC Ei D
Ex：待测酶 Ea：辅助酶 Ei：指示酶
17
三 酶促反应动力学
图4-2 IFCC推荐法测定ALT的时间进程曲线
图4-2 IFCC推荐法测定ALT的时间进程曲线
18
三 酶促反应动力学
酶偶联反应进程
1.预孵育期
2.延滞期
[Va] K[B] eff
第四章 临床酶学检验技术
目录
1 酶学基本知识 2 血清酶变化的生理病理机制 3 酶含量的表示方法 4 酶催化活性浓度测定的理论基础 5 酶活性测定的影响因素与最适条件的确定 6 目前常用诊断酶的酶活性测定
2
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第一节 酶学基本知识
一 酶的结构和分类 二 酶的特性和应用 三 酶促反应动力学
3
基本概念 酶（enzyme）是由活细胞合成的、 对其特异底物起高效催化作用的蛋白质， 是机体内催化各种代谢反应最主要的生 物催化剂(biocatalyst)其本质是蛋白质或 核酸。
4
酶促反应表示为：
S E K1 ES KP E P K2 底物：Subestrate：S 产物：Product：P 酶 ：Enzyme：E
ICD、ICDH
G6PDH GLD、 GLDH MOD OCT
γ-GT、GGT
GP GST
AST、GOT
3.1.1.8 3.1.3.1 3.1.3.2 3.1.3.5 3.2.1.1 3.2.1.30 3.2.1.51 3.4.23.1 4.1.2.13
胆碱酯酶
碱性磷酸酶
酸性磷酸酶
5'-核苷酸酶 α-淀粉酶
CK-MB质量、前列腺特异抗原
己糖激酶法测定血糖 葡萄糖氧化酶膜电极测血糖 抗病毒疫苗 ALT、CK POD、ALP
10
EC编号 1.1.1.27 1.1.1.37
1.1.1.41 1.1.1.49 1.4.1.3 1.4.3.4 2.1.3.3 2.3.2.2 2.4.1.1 2.5.1.18 2.6.1.1
[Vi
] eff
K[C ]
3.线性期
Vx
[Va] eff
[Vi
] eff
4.非线性期
19
返回章目录
第二节 血清酶变化的生理病理机制
一 血清酶的来源与去路 二 血清酶变化的生理机制 三 血清酶变化的病理机制
20
一 血清酶的来源与去路
（一）按血清酶的来源分
1.血浆固有酶 2.非血浆固有酶 ①外分泌酶 ②细胞酶 注：除凝血酶和纤溶酶外，血清酶与血浆酶基本一致
（一）米氏方程 （二）酶促反应进程 （三）动力学参数 （四）酶偶联反应
12
三 酶促反应动力学
（一）米氏方程
➢ 1913年，德国化学家Michaelis和Menten根据中间产 物学说对酶促反映的动力学进行研究，推导出了表示 整个反应中底物浓度和反应速度关系的著名公式，称 为米氏方程。
Vmax [S] V= Km + [S]
单体酶：只有单一的三级结构蛋白质构成
（monomeric enzyme)
寡聚酶：由两个以上具有三级结构的亚基聚合而成
(oligomeric enzyme)
多酶复合体：由几个功能相关的酶嵌合而成的复合体
(multienzyme system)
7
二 酶的特性和应用
酶的特性
（一）化学本质：除核酶、脱氧核酶以外，为蛋白质 （二）高效催化性 （三）高度特异性 （四）可调节性 （五）不稳定性
2.6.1.2
补充 酶的命名、分类及编号
习惯用名 乳酸脱氢酶
苹果酸脱氢酶
临床应用酶
英语缩写 LD、LDH
EC编号 2.7.3.2
MD、MDH
3.1.1.3
习惯用名 肌酸激酶
脂肪酶
异柠檬酸脱氢酶 6-磷酸葡萄糖脱氢酶
谷氨酸脱氢酶 单氨氧化酶 鸟氨酸氨甲酰基转移酶 γ-谷氨酰基转移酶 糖原磷酸化酶 谷胱甘肽转移酶 门冬氨酸氨基转移酶
13
三 酶促反应动力学
（二）酶促反应进程 1.延滞期 是指酶促反应开始至达到最大反应速度所需要 的时间 2.线性期 是指酶促反应速度保持恒定的时期，不受底物 浓度的影响 3.非线性期 随着反应时间的延长，底物消耗越来越明显， 酶促反应速度明显下降，偏离线性而进入非线性期
14
三 酶促反应动力学
浓 度 (C)
8
二 酶的特性——高效催化性
9
二 酶的特性和应用
Fra Baidu bibliotek
表4-1 酶在医学检验中的应用举例
主要特性
应用技术
举例
化学本质是蛋白质 高效催化性、高度特异性、 反应条件温和 催化剂反应前后没有变化 形成中间络合物 酶催化活性与酶量成正比 高效催化性
酶蛋白定量
酶法测定代谢物 固相酶技术 抗体酶 诊断酶学 ELISA
β-N-乙酰(基)D氨基葡萄糖苷酶 α-L-岩藻糖苷酶 亮氨酸氨基肽酶
果糖二磷酸醛缩酶
丙氨酸氨基转移酶
ALT、GPT
英语缩写 CK、CPK
LPS
CHE ALP、AKP
ACP 5'-NT AMY、AMS NAG α-FU、AFU LAP ALD
11
三
酶促反应动力学
（Kinetics of Enzyme-Catalyzed Reaction ）
5
一 酶的结构和分类
（一）
酶 的 组 成
单纯酶：脲酶、蛋白酶、淀粉酶、核糖核酸酶等
酶蛋白（apoenzyme）
结合酶
辅酶（coenzyme)
辅因子
全 酶
（cofacter) 辅基(prosthetic group)
全酶(holoenzyme）= 酶蛋白 + 辅因子
6
一 酶的结构和分类
（二）
酶 的 分 子 形 式
（二）按诊断特异性分
①非器官特异酶 ②器官特异酶
21
一 血清酶的来源与去路
（三）血清酶的去路
1.肾小球滤过从尿液中排出 2.网状内皮系统清除 3.血管内失活或灭活
22
二 血清酶变化的生理变异
1.性别 2.年龄 3.饮食 4.运动 5.妊娠
23
三 血清酶变化的病理机制
1.酶合成异常 2.细胞内酶的渗漏 3.酶进入血液的方式 4.其他
图4-1 酶促反应时间进程曲线
15
三 酶促反应动力学
（三）动力学参数
1.初速度(initial velocity)指在反应最初阶段底物的消耗量很 小（一般在5﹪以内）时的反应速度，用v0来表示 2.最大反应速度(maximum velocity)指当酶的结合位点与底 物结合饱和时的反应速度，通常用V或Vmax来表示 3.米氏常数（Michaelis constant，Km）指酶促反应速度为 最大反应速度一半时的底物浓度，单位同底物浓度
三 酶促反应动力学
（四）酶偶联反应
A Ex B EaC Ei D
Ex：待测酶 Ea：辅助酶 Ei：指示酶
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三 酶促反应动力学
图4-2 IFCC推荐法测定ALT的时间进程曲线
图4-2 IFCC推荐法测定ALT的时间进程曲线
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三 酶促反应动力学
酶偶联反应进程
1.预孵育期
2.延滞期
[Va] K[B] eff
第四章 临床酶学检验技术
目录
1 酶学基本知识 2 血清酶变化的生理病理机制 3 酶含量的表示方法 4 酶催化活性浓度测定的理论基础 5 酶活性测定的影响因素与最适条件的确定 6 目前常用诊断酶的酶活性测定
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第一节 酶学基本知识
一 酶的结构和分类 二 酶的特性和应用 三 酶促反应动力学
3
基本概念 酶（enzyme）是由活细胞合成的、 对其特异底物起高效催化作用的蛋白质， 是机体内催化各种代谢反应最主要的生 物催化剂(biocatalyst)其本质是蛋白质或 核酸。
4
酶促反应表示为：
S E K1 ES KP E P K2 底物：Subestrate：S 产物：Product：P 酶 ：Enzyme：E
ICD、ICDH
G6PDH GLD、 GLDH MOD OCT
γ-GT、GGT
GP GST
AST、GOT
3.1.1.8 3.1.3.1 3.1.3.2 3.1.3.5 3.2.1.1 3.2.1.30 3.2.1.51 3.4.23.1 4.1.2.13
胆碱酯酶
碱性磷酸酶
酸性磷酸酶
5'-核苷酸酶 α-淀粉酶
CK-MB质量、前列腺特异抗原
己糖激酶法测定血糖 葡萄糖氧化酶膜电极测血糖 抗病毒疫苗 ALT、CK POD、ALP
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EC编号 1.1.1.27 1.1.1.37
1.1.1.41 1.1.1.49 1.4.1.3 1.4.3.4 2.1.3.3 2.3.2.2 2.4.1.1 2.5.1.18 2.6.1.1
[Vi
] eff
K[C ]
3.线性期
Vx
[Va] eff
[Vi
] eff
4.非线性期
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第二节 血清酶变化的生理病理机制
一 血清酶的来源与去路 二 血清酶变化的生理机制 三 血清酶变化的病理机制
20
一 血清酶的来源与去路
（一）按血清酶的来源分
1.血浆固有酶 2.非血浆固有酶 ①外分泌酶 ②细胞酶 注：除凝血酶和纤溶酶外，血清酶与血浆酶基本一致
（一）米氏方程 （二）酶促反应进程 （三）动力学参数 （四）酶偶联反应
12
三 酶促反应动力学
（一）米氏方程
➢ 1913年，德国化学家Michaelis和Menten根据中间产 物学说对酶促反映的动力学进行研究，推导出了表示 整个反应中底物浓度和反应速度关系的著名公式，称 为米氏方程。
Vmax [S] V= Km + [S]
单体酶：只有单一的三级结构蛋白质构成
（monomeric enzyme)
寡聚酶：由两个以上具有三级结构的亚基聚合而成
(oligomeric enzyme)
多酶复合体：由几个功能相关的酶嵌合而成的复合体
(multienzyme system)
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二 酶的特性和应用
酶的特性
（一）化学本质：除核酶、脱氧核酶以外，为蛋白质 （二）高效催化性 （三）高度特异性 （四）可调节性 （五）不稳定性
2.6.1.2
补充 酶的命名、分类及编号
习惯用名 乳酸脱氢酶
苹果酸脱氢酶
临床应用酶
英语缩写 LD、LDH
EC编号 2.7.3.2
MD、MDH
3.1.1.3
习惯用名 肌酸激酶
脂肪酶
异柠檬酸脱氢酶 6-磷酸葡萄糖脱氢酶
谷氨酸脱氢酶 单氨氧化酶 鸟氨酸氨甲酰基转移酶 γ-谷氨酰基转移酶 糖原磷酸化酶 谷胱甘肽转移酶 门冬氨酸氨基转移酶
13
三 酶促反应动力学
（二）酶促反应进程 1.延滞期 是指酶促反应开始至达到最大反应速度所需要 的时间 2.线性期 是指酶促反应速度保持恒定的时期，不受底物 浓度的影响 3.非线性期 随着反应时间的延长，底物消耗越来越明显， 酶促反应速度明显下降，偏离线性而进入非线性期
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三 酶促反应动力学
浓 度 (C)
8
二 酶的特性——高效催化性
9
二 酶的特性和应用
Fra Baidu bibliotek
表4-1 酶在医学检验中的应用举例
主要特性
应用技术
举例
化学本质是蛋白质 高效催化性、高度特异性、 反应条件温和 催化剂反应前后没有变化 形成中间络合物 酶催化活性与酶量成正比 高效催化性
酶蛋白定量
酶法测定代谢物 固相酶技术 抗体酶 诊断酶学 ELISA
β-N-乙酰(基)D氨基葡萄糖苷酶 α-L-岩藻糖苷酶 亮氨酸氨基肽酶
果糖二磷酸醛缩酶
丙氨酸氨基转移酶
ALT、GPT
英语缩写 CK、CPK
LPS
CHE ALP、AKP
ACP 5'-NT AMY、AMS NAG α-FU、AFU LAP ALD
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三
酶促反应动力学
（Kinetics of Enzyme-Catalyzed Reaction ）
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一 酶的结构和分类
（一）
酶 的 组 成
单纯酶：脲酶、蛋白酶、淀粉酶、核糖核酸酶等
酶蛋白（apoenzyme）
结合酶
辅酶（coenzyme)
辅因子
全 酶
（cofacter) 辅基(prosthetic group)
全酶(holoenzyme）= 酶蛋白 + 辅因子
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一 酶的结构和分类
（二）
酶 的 分 子 形 式
（二）按诊断特异性分
①非器官特异酶 ②器官特异酶
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一 血清酶的来源与去路
（三）血清酶的去路
1.肾小球滤过从尿液中排出 2.网状内皮系统清除 3.血管内失活或灭活
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二 血清酶变化的生理变异
1.性别 2.年龄 3.饮食 4.运动 5.妊娠
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三 血清酶变化的病理机制
1.酶合成异常 2.细胞内酶的渗漏 3.酶进入血液的方式 4.其他
图4-1 酶促反应时间进程曲线
15
三 酶促反应动力学
（三）动力学参数
1.初速度(initial velocity)指在反应最初阶段底物的消耗量很 小（一般在5﹪以内）时的反应速度，用v0来表示 2.最大反应速度(maximum velocity)指当酶的结合位点与底 物结合饱和时的反应速度，通常用V或Vmax来表示 3.米氏常数（Michaelis constant，Km）指酶促反应速度为 最大反应速度一半时的底物浓度，单位同底物浓度