碧云天退火实验说明
碧云天生物技术 PreScission Protease 产品说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology订货热线：400-168-3301或800-8283301订货e-mail：******************技术咨询：*****************碧云天网站微信公众号网址：PreScission Protease产品编号产品名称包装P2302 PreScission Protease 100U产品简介：PreScission Protease是一种大肠杆菌中重组表达的带GST标签的人鼻病毒14型的3C蛋白酶(human rhinovirus (HRV) type14 3C protease)，也称HRV 3C Protease或HRV3C Protease，能在低温条件下(4°C)特异性地识别八肽序列Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln-Gly-Pro或核心五肽序列Leu-Phe-Gln-Gly-Pro，并在Gln和Gly氨基酸残基之间进行酶切，常用于去除融合蛋白的Glutathione S-transferase (GST)、His或者其它标签的蛋白酶。
建议把GST或His等标签设计在融合蛋白的N 端，在GST或His等标签与目的蛋白之间设计加入PreScission Protease 专一性识别与酶切的上述八肽序列，这样在GST或His标签被酶切后，在目的蛋白的N端仅有两个额外的Gly-Pro氨基酸残基，从而最大限度地减少了对其结构和功能的影响。
本PreScission Protease带有GST标签，特别适合用于GST标签蛋白的在柱酶切。
在切割GST标签蛋白的时候，切下的GST标签和PreScission Protease可结合于GST纯化柱(GST-tag Purification Resin)上，而目的蛋白在穿透液中，这样洗脱下来的蛋白中就不会含有GST标签和PreScission Protease，从而极大地方便了目的蛋白的纯化。
Annealing Buffer
Annealing Buffer for DNA Oligos(5X)产品简介：碧云天生产的Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)，即DNA寡核苷酸退火缓冲液，是一种经过我们多次实验证实、可以用于DNA oligo退火的缓冲液。
该退火缓冲液不仅可以用于常规的DNA oligo的退火，而且特别适合于较难退火的用于RNAi (也称siRNA)质粒构建的DNA oligo的退火。
用于RNAi质粒构建的DNA oligo通常由于含有约20个左右的互补序列，极易自身形成发夹结构，从而影响两条DNA oligo的正确退火。
使用碧云天生产的Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)，可以有效避免DNA oligo自身形成发夹结构，并且两条oligo退火后可以直接和经酶切、纯化的质粒连接。
通常转化后可以得到大量的阳性克隆。
使用本试剂盒操作非常简单，只需把待退火的DNA oligo和Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)按照一定比例混合后，置于PCR仪上，约90分钟即可完成。
如果一次退火反应体积为100微升，一个包装的退火缓冲液可以进行50次退火反应。
保存条件：-20℃保存，一年有效。
注意事项：Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) 只适合于DNA oligo的退火，不能用于RNA oligo 的退火。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：1. 把待退火的DNA oligo用经灭菌的MiliQ水或重蒸水配制成50μM。
溶解Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)，混匀备用。
2. 如下设置退火反应体系：Nuclease-Free Water 40µlAnnealing Buffer for DNA Oligos (5X) 20µlDNA oligo A (50µM) 20µlDNA oligo B (50µM) 20µl总体积 100µl按照上述顺序依次加入各种试剂，混匀。
pcr中退火的作用及实例说明
pcr中退火的作用及实例说明我来为你详细介绍PCR中退火的作用，并结合实例进行说明。
1.PCR中退火的意义与作用PCR（聚合酶链式反应）是分子生物学中一项基础且强大的技术，用于体外扩增特定的DNA片段。
其中，退火是PCR循环中的一个关键步骤，对于整个反应的成功至关重要。
2.退火的定义退火是指在PCR反应中，将反应体系的温度降低到一个特定的温度范围（通常为50-65℃），使设计好的引物与变性后的单链DNA模板按碱基互补配对的原则结合的过程。
3.退火的作用•引物与模板的结合：退火过程为引物与模板的结合提供了必要的条件。
当温度降低时，引物与模板之间的氢键形成，从而使引物牢固地结合在模板上。
•确定扩增的特异性：引物的序列是根据目标基因设计的，只有完全互补的引物才能与模板结合。
通过控制退火温度，可以提高引物与模板的结合特异性，减少非特异性扩增产物的产生。
•为DNA聚合酶提供起始位点：引物与模板的结合为DNA聚合酶提供了起始位点，使得DNA聚合酶能够从引物的3'端开始沿着模板链延伸，合成新的DNA链。
4.退火温度的确定退火温度是影响PCR反应特异性的重要因素。
一般来说，退火温度应略低于引物的Tm值（即引物完全解链所需的温度）。
Tm值可以通过引物序列和碱基组成来计算。
•Tm值的影响：Tm值过高，引物与模板结合不牢固，影响扩增效率；Tm 值过低，非特异性结合增加，影响扩增特异性。
•经验公式：常用的Tm值计算公式为：Tm = 4(G+C) + 2(A+T)。
•实际操作：在实际实验中，退火温度通常在Tm值的基础上下调3-5℃。
5.退火过程中的注意事项•退火时间：退火时间一般为30秒-1分钟，足够引物与模板充分结合。
•退火温度的精确控制：PCR仪的温度控制精度直接影响退火效果，因此选择性能稳定的PCR仪非常重要。
•引物设计：引物的设计是影响退火效率的关键因素。
引物长度、GC含量、碱基组成等因素都会影响引物的Tm值和特异性。
碧云天生物技术 DEPC水(DNase、RNase free) 说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-1683301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号DEPC 水(DNase 、RNase free)产品编号 产品名称包装 R0022DEPC 水(DNase 、RNase free)500ml产品简介：碧云天生产的DEPC 水，即DEPC-treated Water ，是用DEPC(diethypyrocarbonate ，焦碳酸二乙酯)处理过并经高温高压消毒的Milli-Q 纯水。
经检测不含RNase 、DNase 和proteinase 。
DEPC 水可以用于RNA 沉淀的溶解，含有RNA 的各种反应体系如反转录、siRNA 的退火等，以及其它各种要求无RNase 、DNase 和proteinase 的反应体系。
DEPC 水不同于DEPC 。
DEPC 水是使用DEPC 处理过的水，基本上不含DEPC ，99.99%以上是水。
如需购买用于去除RNA 酶的DEPC ，可以选购碧云天的DEPC(ST036)。
包装清单：产品编号 产品名称包装 R0022 DEPC 水(DNase 、RNase free)500ml —说明书1份保存条件：室温保存，一年有效。
注意事项：如果每次的使用量很小，可以适当分装后再使用。
手上通常有RNase ，必须戴一次性手套操作，以防RNase 污染。
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
相关产品：产品编号 产品名称包装 R0021 DEPC 水(DNase 、RNase free) 100ml R0022 DEPC 水(DNase 、RNase free)500ml ST036DEPC10g使用本产品的文献：1. Xu F, Yang T, Chen Y . Quantification of microRNA by DNA–Peptide Probe and Liquid Chromatography–Tandem Mass Spectrometry-Based Quasi-TargetedProteomics. Anal Chem. 2016 Jan 5;88(1):754-63. 2. Zheng Y , Liang W, Yuan Y , Xiong C, Xie S, Wang H, Chai Y , Yuan R. Wavelength-resolved simultaneous photoelectrochemical bifunctional sensor on singleinterface: A newly invitro approach for multiplexed DNA monitoring in cancer cells. Biosens Bioelectron. 2016 Jul 15;81:423-30.3. Zheng X, Pang X, Yang P, Wan X, Wei Y , Guo Q, Zhang Q, Jiang X. A hybrid siRNA delivery complex for enhanced brain penetration and precise amyloidplaque targeting inAlzheimer's disease mice. Acta Biomater. 2017 Feb;49:388-401.4. Liu L, Xu Q, Hao S, Chen Y .A Quasi-direct LC-MS/MS-based Targeted Proteomics Approach for miRNA Quantification via a Covalently ImmobilizedDNA-peptide Probe.Sci Rep-Uk . 2017 Jul 18;7(1):5669. 5. Xu F, Zhou W, Cao J, Xu Q, Jiang D, Chen Y .A Combination of DNA-peptide Probes and Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry (LC-MS/MS):A Quasi-Targeted Proteomics Approach for Multiplexed MicroRNA Quantification.Theranostics . 2017 Jul 8;7(11):2849-2862. 6. Zheng X, Pang X, Yang P, Wan X, Wei Y , Guo Q, Zhang Q, Jiang X.A hybrid siRNA delivery complex for enhanced brain penetration and precise amyloidplaquetargeting in Alzheimer's disease mice.Acta Biomater . 2017 Feb;49:388-401. 7. Guo S, Meng XW, Yang XS, Liu XF, Ou-Yang CH, Liu C.Curcumin administration suppresses collagen synthesis inthe hearts of rats withexperimentaldiabetes.Acta Pharmacol Sin . 2018 Feb;39(2):195-204. 8. Han B,Zhang Y ,Zhang Y ,Bai Y ,Chen X,Huang R,Wu F,Leng S,Chao J,Zhang JH,Hu G,Yao H.Novel insight into circular RNA HECTD1 in astrocyteactivation via autophagy by targeting MIR142-TIPARP: implications for cerebral ischemic stroke.Autophagy . 2018;14(7):1164-1184. 9. Xu L,Yu QW,Fang SQ,Zheng YK,Qi JC.MiR-650 inhibits the progression of glioma by targeting FAM83F.Eur Rev Med Pharmaco . 2018 Dec;22(23):8391-8398. 10. Yu C,Zhang X,Sun X,Long C,Sun F,Liu J,Li X,Lee RJ,Liu N,Li Y ,Teng LKetoprofen and MicroRNA-124 Co-loaded poly (lactic-co-glycolic acid)microspheres inhibit progression of Adjuvant-induced arthritis in rats.Int J Pharmacol . 2018 Dec 1;552(1-2):148-153. 11. Guo S,Meng XW,Yang XS,Liu XF,Ou-Yang CH,Liu CCurcumin administration suppresses collagen synthesis in the hearts of rats with experimentaldiabetes.Acta Pharmacol Sin . 2018 Feb;39(2):195-204.12.Xie Y,Hu JZ,Shi ZYMiR-181d promotes steroid-induced osteonecrosis of the femoral head by targeting SMAD3 to inhibit osteogenic differentiation ofhBMSCs.Eur Rev Med Pharmaco . 2018 Jul;22(13):4053-4062.13.Kang Q,Zou H,Zhou L,Liu LX,Cai JB,Xie N,Li WH,Zhang C,Shi WH,Wang LM,Zhang WH,Zhu H,Wang SF,Zhang XWRole of the overexpression ofTRAF4 in predicting the prognosis of intrahepatic cholangiocarcinoma.Int J Oncol . 2018 Jul;53(1):286-296.14.Wang P,Chen Y,Wang L,Wu Y,Wang L,Wu Y,Gong Z.The intervention mechanism of folic acid for benzo(a)pyrene toxic effects in vitro and in vivo.Eur JCancer Prev . 2018 Jul 16.15.Cai Y,Dong ZY,Wang JY.MiR-520b inhibited metastasis and proliferation of non-small cell lung cancer by targeting CHAF1A.Eur Rev Med Pharmaco . 2018Nov;22(22):7742-7749.16.Pan SC,Cui HH,Qiu CGHOTAIR promotes myocardial fibrosis through regulating URI1 expression via Wnt pathway.Eur Rev Med Pharmaco . 2018Oct;22(20):6983-6990.17.Protective effect of cyclosporine on inflammatory injury of renal tubular epithelial cells.Eur Rev Med Pharmaco. 2018 Oct;22(19):6551-6559.Version 2020.03.232 / 2 R0022DEPC水(DNase、RNase free) 400-1683301/800-8283301 碧云天/Beyotime。
凝胶迁移实验 碧云天
EMSA探针生物素标记试剂盒产品编号产品名称包装GS008 EMSA探针生物素标记试剂盒 20次产品简介：¾EMSA探针生物素标记试剂盒(EMSA Probe Biotin Labeling Kit)是一种通过Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (TdT)把生物素标记的dUTP添加到单链DNA 3’末端，然后通过退火产生生物素标记的EMSA探针的试剂盒。
通常DNA的3’末端被标记后不会干扰基于序列特异性蛋白结合的EMSA检测。
¾Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (TdT)可以在不依赖于模板的情况下催化在DNA的3’-OH端加上dNTP的反应。
关于TdT催化双链DNA末端加dNTP的反应效率，3’端突出的双链DNA要比平端或3’端缩进的双链DNA高很多。
TdT催化单链DNA末端加dNTP的反应效率要比双链DNA高很多。
在适当的条件下，TdT也可以催化RNA 3’末端加NTP的反应。
¾本试剂盒适合标记纯化的单链DNA，如果用于标记EMSA探针，可以在单链标记后再进行退火。
¾本试剂盒中提供了已经用生物素标记好的Biotin-Control Oligo，可以用作检测DNA标记效率的对照。
¾如果每个标记反应的探针量为5pmol，本试剂盒可以用于20个标记反应。
包装清单：产品编号产品名称包装GS008-1 TdT Buffer (5X) 250µlGS008-2TdT (10U/µl)20µlGS008-3Biotin-11-dUTP (5µM)100µlGS008-4Biotin-Control Oligo (0.4µM)100µlGS008-5 Ultrapure water 1mlGS008-6 探针标记终止液200µlGS008-7 TE 15mlGS008-8 退火缓冲液(10X) 150µl—说明书1份保存条件：-20℃保存。
碧云天 基因组编辑突变检测试剂盒 说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-1683301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号基因组编辑突变检测试剂盒产品编号 产品名称包装 D0508S 基因组编辑突变检测试剂盒 25次 D0508M基因组编辑突变检测试剂盒100次产品简介：碧云天生产的基因组编辑突变检测试剂盒(Genome-Editing Mutation Detection Kit)，也称基因编辑突变检测试剂盒(Gene-Editing Mutation Detection Kit)，是一种简单、可靠、快速的基于T7 Endonuclease I (T7EI)的用于检测基因组DNA 在基因编辑后发生突变的试剂盒。
本试剂盒主要利用了T7 Endonuclease I (T7EI)能识别并酶切不完全配对的DNA 双链(也称异源双链DNA ，heteroduplex DNA)的特性。
本试剂盒组分特别齐全。
提供了包括一步法基因组DNA 提取、高保真PCR 扩增、变性退火和T7EI 酶切的全套试剂，并且还提供了阳性对照。
本试剂盒使用特别便捷。
一步法基因组DNA 提取非常快速便捷，并且提取后可以直接用于高保真PCR 扩增，PCR 扩增产物也可以直接用于后续的变性退火和T7EI 酶切。
无需额外的分离纯化步骤。
本试剂盒检测基因组编辑突变的原理如下。
首先需要编辑的细胞、组织或器官通过转染、病毒感染等技术手段表达CRISPR/Cas9 (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/Cas9 nucleases)、TALEN (Transcription activator-like effector nucleases)或ZFN (Zinc-finger nucleases)等核酸酶。
碧云天的突变试剂盒说明书
基因定点突变试剂盒产品简介：碧云天生产的基因定点突变试剂盒(Site-directed Gene Mutagenesis Kit)可以用于点突变，多个邻近密码子的突变，单个或多个邻近密码子的缺失(deletion)或插入(insertion)。
本试剂盒是一个利用目前最新的基因点突变技术设计而成的试剂盒。
只需通过基于PCR的突变质粒的合成，和基于Dpn I的模板质粒的消化，转化培养以及后续的酶切或测序鉴定，即可得到预期的突变质粒(参考图1)。
累计操作时间不足2小时即可完成基因的定点突变。
参考图1，使用本试剂盒时需要先设计长度通常为30个碱基以上的互补的两个引物，在引物中含有预期的突变位点。
然后以待突变的质粒为模板，用这两个引物进行PCR扩增反应。
这样可以产生含有预期的突变位点的双链质粒，但这个双链质粒中有两个nick位点。
待突变的质粒通常来源于大肠杆菌等细菌，在细菌中会被甲基化修饰，而在体外通过PCR扩增得到的质粒不会被甲基化。
这样用甲基化酶Dpn I处理，可以消化掉待突变的质粒模板，而使通过PCR扩增出来的含有突变位点的质粒被选择性地保留下来。
这样把Dpn I处理过的产物转化细菌后，质粒中有两个nick位点可以被大肠杆菌修复，得到的克隆就会含有预期的突变质粒了。
本试剂盒提供了DH5α甘油菌，可用于感受态细菌的制备。
本试剂盒共可以进行十次基因定点突变反应。
图1. 基因定点突变试剂盒原理图保存条件：-20℃保存，一年有效。
注意事项：需自行配制LB液体培养基和LB平板以用于细菌的培养。
需自行设计和合成用于基因定点突变的引物。
需自备用于细菌转化的试剂。
使用本试剂盒前请先阅读后面的常见问题。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：1. 引物设计：用于特定基因突变的引物需要单独设计，请参考如下一些基本原则进行设计：(1) 共需设计两条互补的引物。
可以先集中设计一条，然后就可以得到互补的另一条引物。
碧云天生物技术碱性磷酸酶检测试剂盒产品说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-1683301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号碱性磷酸酶检测试剂盒产品编号 产品名称包装 P0321S 碱性磷酸酶检测试剂盒 100次 P0321M碱性磷酸酶检测试剂盒500次产品简介：碧云天生产的碱性磷酸酶检测试剂盒(Alkaline Phosphatase Assay Kit)是一种用于快速、便捷地检测细胞或组织样品的裂解或匀浆产物的上清液、血清、血浆、尿液等样品中内源性的碱性磷酸酶活性的试剂盒。
碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase, AP/ALP/AKP/ALKP/ALPase/Alk Phos)也称碱性磷酸酯酶(EC 3.1.3.1)，可以在碱性条件下催化磷酸酯键的水解。
哺乳动物中，肝脏、胆管、肾脏、骨头和胎盘中的碱性磷酸酶活性比较高。
常见的碱性磷酸酶包括肠道碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, intestinal, ALPI)、非组织特异性碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, tissue-nonspecific isozyme, ALPL)和胎盘碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, placental type, 也称placental alkaline phosphatase, PLAP)。
常见的小牛肠碱性磷酸酶(Calf Intestinal Alkaline Phosphatase, CIAP/CIP)被广泛用于二抗等的标记最终用于蛋白和核酸等的检测，也常用于DNA 或RNA 5´和3´末端的去磷酸化(去单磷酸化)，特别是质粒的5´末端去磷酸化以避免质粒自连等。
干细胞，如iPS 中，碱性磷酸酶的活性很高，常被用作iPS 成功诱导的标志。
碧云天 EMSA Gel-Shift 试剂盒说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology订货热线：400-168-3301或800-8283301订货e-mail：******************技术咨询：*****************碧云天网站微信公众号网址：EMSA/Gel-Shift 试剂盒产品编号产品名称包装GS002 EMSA/Gel-Shift 试剂盒100次产品简介：EMSA/Gel-Shift试剂盒(EMSA/Gel-Shift Kit)是用于EMSA(也称gel shift)研究的一个试剂盒。
通过EMSA可以研究目的蛋白和特定的DNA序列的结合情况，从而可以研究细胞内一些转录因子的激活水平。
本试剂盒提供了进行EMSA实验的探针标记、蛋白和DNA结合以及EMSA上样等的主要试剂，使EMSA实验变得简单方便。
EMSA/Gel-Shift 结合缓冲液(5X)中含有poly(dI-dC)等有效成分。
其中poly(dI-dC)的浓度经过优化，可以很好的消除蛋白和标记探针间的非特异性结合，同时又不会减弱目的转录因子和标记探针间的结合。
每个EMSA/Gel-Shift试剂盒足够标记10-20次探针，足够进行100个蛋白和探针的结合反应。
包装清单：产品编号产品名称包装GS002-1 T4 Polynucleotide Kinase 100UGS002-2 T4 Polynucleotide Kinase Buffer (10X) 100µlGS002-3 Nuclease-Free Water 1mlGS002-4 探针标记终止液100µlGS002-5 5M 醋酸铵600µlGS002-6 EMSA/Gel-Shift结合缓冲液(5X) 200µlGS002-7 EMSA/Gel-Shift上样缓冲液(蓝色，10X) 200µlGS002-8 EMSA/Gel-Shift上样缓冲液(无色，10X) 200µlGS002-9 TE 1ml/管，共2管—说明书1份保存条件：-20ºC保存，一年有效。
pcr的原理及应用实验报告总结
PCR的原理及应用实验报告总结引言聚合酶链反应（PCR）是一种在生物学实验中广泛使用的技术，可以扩增特定DNA 序列。
本实验报告总结了PCR的原理和应用。
原理PCR利用了DNA的双链结构和DNA聚合酶的催化活性。
它通过反复进行一系列温度变化的循环，以在每个循环中将DNA的目标区域复制数百万次。
PCR的原理主要分为三个步骤：变性、退火和延伸。
1.变性（Denaturation）：在高温下（通常为94-98°C），通过打破DNA的双链结构，使其变成两条单链DNA。
这是通过提供足够的热能来克服DNA的氢键和茎-环结构来实现的。
2.退火（Annealing）：在较低温度（通常为50-65°C），引入一组匹配目标序列的两个DNA引物。
这些引物是短DNA片段，其序列与需要扩增的目标序列的两端相互补充。
引物结合到DNA上，形成稳定的引物-目标复合物。
3.延伸（Extension）：在适宜的温度（通常为68-72°C），DNA聚合酶开始在目标序列的引物上合成新的DNA链。
这意味着引物作为DNA聚合酶的起始点，延伸形成一条新的DNA链。
通过多次循环这个过程，从而可以扩增DNA的目标区域，从而得到大量的特定DNA序列。
应用PCR技术在许多生物学领域中都有广泛的应用。
下面介绍PCR在基因分型、病原体检测和基因工程等方面的应用。
基因分型PCR可以用于基因分型，例如DNA指纹图谱的生成和遗传病等基因突变的检测。
通过扩增特定的基因区域，可以获得个体之间的DNA差异，以区分个体之间的遗传差异。
病原体检测PCR可以用于病原体的快速检测。
通过扩增特定的病原体DNA或RNA序列，PCR 可以确定患者是否感染了病原体。
此外，PCR还可以在医学实验室中用于鉴定和检测病原体的抗药性。
基因工程PCR在基因工程中有重要的应用。
PCR可以扩增特定的基因片段，从而提供了DNA 重组的材料。
这些扩增片段可以用于构建基因表达载体、制备基因库以及进行定点突变等。
碧云天BCA Kit manual
14.Wang Yichao, Zou Quanming, Ren Jianmin, Liu Jian,Wang Xiaoqin. Preparation and character of microspheres of Helicobacter pylori whole cell protein encapsulated by chitosan - alginate. West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 2005,20(5):375-7.
2. Wu RC, Chen DF, Liu MJ, Wang Z. Dual effects of cycloheximide on U937 apoptosis induced by its combination with VP-16. Biol Pharm Bull. 2004 Jul;27(7):1075-80.
3. 根据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液，充分混匀。例如5ml BCA试剂A加 100µlBCA试剂B，混匀，配制成5.1ml BCA工作液。 BCA工作液室温24小时内稳定。
4. 将标准品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20µl加到96孔板的标准品孔中，加标准品稀释液补足到20µl。 5. 加适当体积样品到96孔板的样品孔中，加标准品稀释液到20µl。 6. 各孔加入200µl BCA工作液，37℃放置20-30分钟。
碧云天BeyoFast Probe qPCR Mix (2X, Low ROX)说明书
BeyoFast™ Probe qPCR Mix (2X, Low ROX)产品编号产品名称包装 D7272-1ml BeyoFast™ Probe qPCR Mix (2X, Low ROX) 1ml D7272-5mlBeyoFast™ Probe qPCR Mix (2X, Low ROX) 5ml D7272-25ml BeyoFast™ Probe qPCR Mix (2X, Low ROX)25ml产品简介：碧云天的BeyoFast™ Probe qPCR Mix (2X, Low ROX)是一种基于TaqMan等探针的用于实时荧光定量PCR，即探针法qPCR(Quantitative PCR)或real-time PCR的高品质预混液，主要用于cDNA和基因组DNA等的特异性超高灵敏度定量检测。
由于使用的探针一般是TaqMan探针，所以本方法也常称作TaqMan探针法。
本产品特别适合用于低丰度或高特异性的目的基因的定量或定性检测。
例如一些低丰度的mRNA、lncRNA、小RNA、微生物RNA反转录后的高灵敏度检测，一些相似度较高的常规染料法难以区分的同源基因或者基因的SNP检测。
检测原理：探针法qPCR不使用荧光染料如SYBR Green等对PCR产物进行荧光染色，而是采用了荧光基团和淬灭基团(quencher)标记的DNA探针靶向拟通过PCR检测的目标序列(设计的探针结合位点通常位于两条引物结合位点之间)。
正常情况下，探针上的淬灭基团由于空间上的荧光共振能力转移(FRET)而导致荧光基团淬灭。
在PCR反应扩增目标序列时，引物和探针都会退火到目标基因上，随着引物的延伸，Taq酶的5'→3'外切酶活性会导致结合在目标序列上的探针从5’端开始逐渐被降解。
探针的荧光基团和淬灭基团被Taq酶切开后，淬灭基团的作用消失，荧光基团就能正常地被激发光所激发而产生荧光了。
每经过一个PCR循环，就会有更多的荧光基团被释放，荧光强度与新合成的目标片段数量成正比，从而就可以实现定量检测了。
碧云天elisa试剂盒说明书
碧云天elisa试剂盒说明书实验原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被人热休克蛋白70（HSP-70）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的人热休克蛋白70（HSP-70）呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样本处理及要求1、血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000g离心20分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2、血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃1000g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3、组织匀浆：用预冷的PBS (0。
01M, pH=7。
4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。
将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。
推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。
为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。
最后将匀浆液于5000g离心5，10分钟，取上清检测。
4、细胞培养物上清或其它生物标本：请1000g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
需要而未提供的试剂和器材酶标仪（450nm）高精度加样器及枪头：0。
5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL37℃恒温箱蒸馏水或去离子水试剂盒组成备注：1、标准品浓度依次为：160、80、40、20、10、5pg、mL2、经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。
分子生物学退火名词解释
分子生物学退火名词解释
在分子生物学中，退火是一种重要的实验技术，通常用于DNA和RNA的检测和分析。
下面是关于退火的一些重要术语和概念的名词解释：
1.温度控制：退火过程中的温度控制是非常重要的。
它决定了DNA或RNA链的结合程度。
通常，退火温度要高于DNA或RNA的解链温度，以确保双链的分离。
2.降温速率：退火过程中，降温速率也会影响结果。
快速的降温速率可以减少双链解离的时间，从而降低形成错配的可能性。
3.序列互补：在退火过程中，两条DNA或RNA链的互补序列会相互结合，形成双链。
这种互补序列可以是完全互补或部分互补。
4.引物结合：在DNA或RNA扩增过程中，引物是用来引导DNA或RNA聚合酶合成与模板互补的DNA或RNA链。
引物在退火过程中会与模板DNA或RNA链结合。
5.检测方法：在退火完成后，需要对结果进行检测。
常见的检测方法包括凝胶电泳、荧光定量PCR等。
这些方法可以用来检测DNA或RNA的长度、浓度和纯度等信息。
总之，分子生物学退火是一种基于温度控制的实验技术，它涉及到降温速率、序列互补、引物结合和检测方法等多个方面。
理解这些概念对于理解和应用退火技术至关重要。
碧云天 BeyoFusion PCR Master Mix 产品说明书
碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订货热线：400-1683301或800-8283301 订货e-mail ：******************技术咨询：*****************网址：碧云天网站 微信公众号BeyoFusion™ PCR Master Mix (2X)产品编号 产品名称包装 D7250-1ml BeyoFusion™ PCR Master Mix (2X) 100次 D7250-5mlBeyoFusion™ PCR Master Mix (2X)500次产品简介：BeyoFusion™ PCR Master Mix (2X)是一种使用了高保真、扩增速度可以达到15秒/kb 的BeyoFusion™ DNA Polymerase 的高保真PCR 扩增用的2X 预混液。
本产品中含有2X BeyoFusion™ DNA Polymerase ，2X BeyoFusion™ Buffer (with Mg 2+)，2X dNTP ，只需加入适量引物、模板和水即可进行高保真PCR 扩增。
大大简化了PCR 操作，使操作更加快捷，也减少了PCR 操作过程中可能导致的污染，使PCR 的重复性更好。
利用BeyoFusion™ PCR Master Mix (2X)可以进行各种常规的PCR 扩增，特别适合用于高保真和快速的定性和半定量的PCR 扩增，以及长片段DNA(长度最长可以超过12kb 的)的基因扩增和克隆。
扩增速度极快，扩增小于6kb 的DNA 片段时，延伸1kb 只需要15秒。
普通的DNA 聚合酶延伸1kb 通常需要1-2分钟。
BeyoFusion™ DNA polymerase 由于其超快的扩增速度，可以显著缩短PCR 扩增所需的时间。
BeyoFusion™ DNA Polymerase 是一种高保真DNA 聚合酶，不仅可以非常高效地催化5’至3’方向的依赖于DNA 模板的脱氧核苷酸的聚合反应，它同时还具有3’至5’的外切酶活性(proofreading activity)，它的错误发生概率比Taq 酶要低52倍，比pfu 酶要约低6倍。
生物素标记探针退火反应
生物素标记探针退火反应引言生物素标记探针退火反应是一种常用的实验技术，用于检测和定量分析生物学样本中的特定分子。
本文将介绍生物素标记探针退火反应的原理、步骤和应用。
一、原理生物素标记探针退火反应是一种基于亲和配对原理的实验技术。
生物素是一种小分子化合物，具有与亲和素相结合的能力。
在该实验中，探针分子通过与目标分子的亲和反应结合，进而标记目标分子。
二、步骤生物素标记探针退火反应一般包括以下步骤：1. 选择合适的探针分子：根据实验目的选择合适的探针分子，可以是DNA、RNA或蛋白质等。
2. 生物素标记：将探针分子与生物素结合，通常采用化学交联或酶促反应的方法。
这样可以在探针分子上引入生物素分子，从而实现标记。
3. 目标分子结合：将标记后的探针分子与待检测的目标分子进行结合反应。
目标分子可以是DNA、RNA或蛋白质等，具体根据实验需要而定。
4. 退火反应：将探针分子和目标分子进行退火反应，使其形成稳定的亲和配对。
退火反应的条件包括温度、时间和缓冲液等，需要根据实验需求进行优化。
5. 检测分析：通过合适的检测方法，如荧光染料或酶标记等，对探针分子和目标分子的结合情况进行分析和定量。
常用的检测方法包括荧光检测、酶标记检测和放射性测定等。
三、应用生物素标记探针退火反应在生物学研究中具有广泛的应用。
以下列举几个常见的应用领域：1. 基因表达分析：通过标记与目标基因匹配的探针分子，可以研究基因的表达水平和调控机制。
常见的应用包括DNA微阵列分析和实时荧光定量PCR等。
2. 蛋白质相互作用研究：通过标记蛋白质的探针分子，可以研究蛋白质之间的相互作用及其调控网络。
常用的应用包括蛋白质亲和纯化和蛋白质相互作用分析等。
3. 细胞信号传导研究：通过标记与目标信号分子结合的探针分子，可以研究细胞信号传导通路及其调控机制。
常见的应用包括免疫组化和荧光共振能量转移等。
4. 病原体检测和诊断：通过标记与目标病原体相关基因或蛋白质的探针分子，可以进行病原体的检测和诊断。
碧云天BeyoNGS
BeyoNGS™ pA-Tn5 Transposase产品编号 产品名称包装 D7110S BeyoNGS™ pA-Tn5 Transposase 800pmol D7110MBeyoNGS™ pA-Tn5 Transposase4000pmol产品简介：碧云天生产的BeyoNGS™ pA-Tn5 Transposase ，中文名为BeyoNGS™ pA-Tn5转座酶，是一种来源于E.coli ，经过改造的具有极高活性Tn5转座酶突变体和Protein A 的融合蛋白。
pA-Tn5转座酶在和适当测序接头(Adapters)组装后成为pA-Tn5 Transposome (pA-Tn5转座体)，可用于CUT&Tag 实验。
CUT&Tag (Cleavage Under Targets and Tagmentation)，即靶向剪切及标记，是一种新兴的蛋白质与DNA 相互作用的研究方法，具有特异性强、背景噪音较低、灵敏度高、重复性较好、成本低等优点，被用来替代传统的ChIP-Seq (Chromatin Immunoprecipitation-sequencing)方法。
CUT&Tag 技术的核心是利用pA/G-Tn5 Transposome 上的Protein A 或Protein G 具有与靶蛋白上结合的抗体特异性结合的能力，使Tn5转座体能通过Protein A/G 及抗体与靶蛋白形成复合物，随后加入Mg 2+激活Tn5转座体的酶活性对靶蛋白结合的DNA 进行切割实现靶向的DNA 片段化(DNA Fragmentation)，同时将其携带的测序接头连接到片段两端从而实现标记，后续通过PCR 反应进行缺口填补，并借助双端标记PCR 引物(Dual-indexed PCR primers)扩增后，制备成适用于二代测序(Next generation sequencing, NGS)平台的DNA 文库 [1]。
碧云天核浆分离说明书
碧云天核浆分离说明书使用说明：1. 准备溶液：室温融解试剂盒中的三种试剂，溶解后立即放置在冰上，混匀。
取适当量的细胞浆蛋白抽提试剂A备用，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
取适当量的细胞核蛋白抽提试剂备用，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。
2. 对于贴壁细胞：用PBS洗一遍，用细胞刮子刮下细胞，或用EDTA溶液处理细胞使细胞不再贴壁很紧，并用移液器吹打下细胞。
离心收集细胞，尽最大努力吸尽上清，留下细胞沉淀备用。
尽量避免用胰酶消化细胞，以免胰酶降解需抽提的目的蛋白。
3. 对于悬浮细胞：用PBS洗一遍，离心收集细胞，尽最大努力吸尽上清，留下细胞沉淀备用。
4. 每20微升细胞沉淀加入200微升添加了PMSF的细胞浆蛋白抽提试剂A。
(对于二百万HeLa细胞，其细胞沉淀的体积大约为20微升或40毫克。
)5. 最高速剧烈Vortex 5秒，把细胞沉淀完全悬浮并分散开。
(如果细胞沉淀没有完全悬浮并分散开，可以适当延长vortex时间。
)6. 冰浴10-15分钟。
7. 加入细胞浆蛋白抽提试剂B 10微升。
最高速剧烈Vortex 5秒，冰浴1分钟。
. 最高速剧烈Vortex 5秒，4℃ 12,000-16,000g离心5分钟。
9.立即吸取上清至一预冷的塑料管中，即为抽提得到的细胞浆蛋白。
可以立即使用，也可以冻存。
(千万不要触及沉淀，可以在沉淀上方保留极小体积的上清，以免触及沉淀。
每200万细胞用200微升本产品中的细胞浆蛋白抽提试剂A裂解后可获得的上清，其细胞浆蛋白浓度约为2-5mg/ml，不同细胞有所不同。
)10. 对于沉淀，完全吸尽残余的上清，加入50微升添加了PMSF的细胞核蛋白抽提试剂。
(不吸尽上清会带来细胞浆蛋白的污染。
)11. 最高速剧烈Vortex 10秒，把细胞沉淀完全悬浮并分散开。
然后放回冰浴中，每隔1-2分钟再高速剧烈Vortex 10秒，共30分钟。
DRR390A
Premix Ex Taq TM
(Probe qPCR) （200 次量）
说明书
宝生物工程(大连)有限公司
目录
内容
页码
● 制品说明
1
● 制品内容
1
● 适用的 Real Time PCR 扩增仪
1
●保 存
1
● 试剂盒原理
1
● 试剂盒特长
2
● 操作注意
2
● 操作方法
11
●问 答
11
● 制品说明
本制品是采用探针法（TaqMan®，Molecular Beacon等）进行Real Time PCR（qPCR）反应的专用试剂。 是一种 2×浓度的Premix Type试剂，进行实验时，PCR反应液的配制十分方便简单。Mix中添加了Tli RNaseH（耐热性RNaseH），以cDNA作为模板进行PCR反应时，可以最大限度抑制由于cDNA中残存 mRNA对PCR反应造成的阻害作用。制品中的DNA聚合酶使用了改良后的Hot Start法用 DNA聚合酶 TaKaRa Ex Taq HS，与Takara精心研制的Real Time PCR用Buffer组合使用，可以有效抑制非特异性的 PCR扩增，大大提高PCR的扩增效率，进行高灵敏度的Real Time PCR扩增反应。 本制品可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线，对靶基因进行准确定量、检测，重复性好，可信度高。
请按照各种仪器使用说明书要求进行实验操作。 1） 按下列组份配制 PCR 反应液（反应液配制请在冰上进行）。
试剂 Premix Ex Taq （Probe qPCR）（2×） PCR Forward Primer（10 μM） PCR Reverse Primer（10 μM） 荧光探针溶液 ROX Reference Dye（50×）*4 DNA 模板 dH2O（灭菌蒸馏水） Total
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DNA oligo A (50µM)
20µl
DNA oligo B (50µM)
20µl
总体积
100µl
按照上述顺序依次加入各种试剂，混匀。如果所用的PCR仪没有热盖，滴加矿物油(mineral oil)以防止蒸发。
3. 如下设置PCR仪进行退火反应：
步骤
温度
时间
说明
1
95℃
2分钟
让oligo充分变性
2Leabharlann 每8秒下降0.1℃，降至25℃(注1)
约90分钟
退火
3
4℃
长时间保持
暂时存放
注1：如果所用的PCR仪不具备下降0.1℃的功能，也可以设置为每90秒下降1℃。
4. 退火结束后可以直接用于连接反应，也可以-20℃冻存备用。如果退火结束后打算进行酶切等其它反应，最好用纯化试剂 盒进行纯化，或者确保退火产物在反应体系中体积不超过5%，以避免Annealing Buffer对后续的酶反应体系的干扰。
¾ 使用本试剂盒操作非常简单，只需把待退火的DNA oligo和Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)按照一定比例混合后，置 于PCR仪上，约90分钟即可完成。。
¾ 如果一次退火反应体积为100微升，一个包装的退火缓冲液可以进行50次退火反应。
包装清单：
产品编号
产品名称
Annealing Buffer for DNA Oligos(5X)
产品编号 D0251
产品名称 Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)
包装 1ml
产品简介：
¾ 碧云天生产的Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)，即DNA寡核苷酸退火缓冲液，是一种经过我们多次实验证实、可以 用于DNA oligo退火的缓冲液。该退火缓冲液不仅可以用于常规的DNA oligo的退火，而且特别适合于较难退火的用于 RNAi (也称siRNA)质粒构建的DNA oligo的退火。用于RNAi质粒构建的DNA oligo通常由于含有约20个左右的互补序列， 极易自身形成发夹结构，从而影响两条DNA oligo的正确退火。使用碧云天生产的Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)， 可以有效避免DNA oligo自身形成发夹结构，并且两条oligo退火后可以直接和经酶切、纯化的质粒连接。通常转化后可以 得到大量的阳性克隆。
包装
D0251
Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)
1ml
—
说明书
1份
保存条件：
-20℃保存，一年有效。
注意事项：
¾ Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) 只适合于DNA oligo的退火，不能用于RNA oligo 的退火。 ¾ 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. 把待退火的DNA oligo用经灭菌的MiliQ水或重蒸水配制成50µM。溶解Annealing Buffer for DNA Oligos (5X)，混匀备用。 2. 如下设置退火反应体系：
Nuclease-Free Water
40µl
Annealing Buffer for DNA Oligos (5X) 20µl