建立双抗原夹心酶免疫试验对人畜布鲁氏菌抗体检测的研究

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布鲁氏菌病鉴定方法

布鲁氏菌病鉴定方法
布鲁氏菌病的鉴定方法主要包括以下几种：
1. 血常规检查：布鲁氏杆菌病患者进行血常规检查时，通常会提示白细胞计数正常或者偏低，以及淋巴细胞相对或绝对增加的情况，还可能出现少数异型淋巴细胞。

2. 细菌培养：在对血液和骨髓进行细菌培养时，如果能从血液、骨髓中分离到布鲁氏杆菌，可以帮助明确诊断。

3. 初期平板凝集试验：如果在初期平板凝集试验中，化验结果为阳性，可作为布鲁氏杆菌病初期筛选的依据。

4. 其他：若存在接触家畜、家禽的情况，或者为生活在疫区的居民，出现持续数日乃至数周发热、多汗、肌肉肿痛、关节肿痛等症状，并且伴有肝、脾、淋巴结肿大、睾丸肿大等情况，应该高度怀疑布鲁氏杆菌病。

5. 标记抗体技术：包括间接ELISA、竞争性ELISA、双抗原夹心酶联免疫试验、斑点ELISA、免疫荧光抗体试验等。

标记抗体技术具有良好的特异性，较高的敏感性。

以上是布鲁氏菌病的鉴定方法，如果您有不适症状，建议及时就医并告知医生您的接触史和暴露史，以便医生更好地为您制定诊疗方案。

动物布鲁氏菌病快速诊断方法研究进展

动物布鲁氏菌病快速诊断方法研究进展吴彤;王慧煜;吴绍亮;崔金磊;杨晓野;吴绍强【摘要】布鲁氏菌病是一种流行范围广、危害严重的人畜共患传染病.近年来,布鲁氏菌病的人畜疫情在国内外均出现回升势头,严重影响了流行地区的养殖产业发展,并引发严重的公共卫生问题.因此,该病的快速准确检测能为预防、治疗提供早期、有效的疫病信息.鉴于布鲁氏菌病危害的严重性,建立快速有效的检测方法是十分必要的,是布鲁氏菌病早期诊断和疾病控制的关键.本文将对多重PCR、实时定量荧光PCR、LAMP等分子生物学检测方法以及ELISA、胶体金试纸条等免疫学检测方法两个方面对布鲁氏菌病快速检测方法的研究进展进行综述.其中LAMP方法和胶体金免疫层析法对布病的检测更加适合在基层的推广和使用,并且免疫层析技术正朝着定量、高灵敏度、多标记检测等方向发展.【期刊名称】《中国人兽共患病学报》【年(卷),期】2016(032)008【总页数】6页(P746-750,759)【关键词】布鲁氏菌病;多重PCR;荧光PCR;环介导等温扩增反应;酶联免疫吸附试验;胶体金试纸条;诊断【作者】吴彤;王慧煜;吴绍亮;崔金磊;杨晓野;吴绍强【作者单位】内蒙古农业大学兽医学院,呼和浩特010000;中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所,北京100029;中国检验检疫科学研究院动物检疫研究所,北京100029;山东省临沭县人民医院,临沭 276700;内蒙古农业大学兽医学院,呼和浩特010000;内蒙古农业大学兽医学院,呼和浩特010000;内蒙古农业大学兽医学院,呼和浩特010000【正文语种】中文【中图分类】R378布鲁氏菌病，简称布病，是由布鲁氏菌属细菌引起的重大人兽共患疾病。

该病是OIE法定上报动物疫病，我国将其列为二类动物疫病。

布鲁氏菌病严重影响着家畜的生产力和动物性产品的生物安全，给畜牧业发展造成严重的经济损失, 而且严重危害人类的健康。

进入21世纪，布病疫情日趋加重，呈现从牧区、半牧区向农区甚至城市蔓延的趋势，被WHO称为“再度肆虐”的传染病。

免疫奶牛群布鲁氏菌病的实验室诊断经验分析

免疫奶牛群布鲁氏菌病的实验室诊断经验分析布鲁氏菌病是一种由布氏菌属细菌引起的人畜共患病，其主要病原体为布氏菌（Brucella），可以感染多种动物，包括奶牛。

布鲁氏菌病的发病率较高，不仅对畜牧业造成了严重的经济损失，同时也对人类健康构成了严重威胁。

免疫奶牛群的布鲁氏菌病的实验室诊断对于防控该疾病具有重要意义。

本文将从实验室诊断的角度分享免疫奶牛群布鲁氏菌病的诊断经验分析。

一、免疫学检测免疫学试验是布鲁氏菌病诊断中的重要手段之一。

免疫学检测主要包括凝集试验、ELISA（酶联免疫吸附试验）、补体结合试验等。

这些方法可以快速、准确地检测动物体内是否存在布氏菌属细菌，并且可以进行大规模筛查。

ELISA是一种广泛应用的方法，它能够检测宿主体液中的抗体水平。

通过检测牛奶或血清中的布氏菌抗体水平，可以确定免疫奶牛是否感染了布鲁氏菌。

值得注意的是，需要进行不同种类的ELISA检测，以便准确诊断。

凝集试验也是一种常用的检测方法，它通过在布氏菌抗原与牛奶中的抗体反应时形成凝集现象来进行检测。

这种方法对于快速筛查免疫奶牛群非常有效，可以帮助兽医及时发现可能存在的感染动物。

补体结合试验则是一种特异性较高的检测方法，其原理是通过观察血清中的抗体是否与布氏菌结合，从而判断动物是否感染了布鲁氏菌。

这种方法的准确性较高，能够帮助兽医及时发现免疫奶牛群中的感染动物。

二、细菌学检测细菌学检测是布鲁氏菌病诊断的金标准，通过分离和鉴定布氏菌属细菌，可以直接确定动物是否感染了该病原体。

常用的细菌学检测方法包括培养法、PCR检测法和快速凝集试验。

培养法是最常用的细菌学检测方法之一，它能够在不同培养基上培养出布氏菌属细菌，并通过形态学、生理生化检测等方法对其进行鉴定。

虽然培养法需要一定的培养时间，但其准确性较高，是诊断布鲁氏菌病的关键方法之一。

PCR检测法是一种快速、准确的分子生物学检测方法，它通过扩增目标DNA序列，可以在短时间内确定牛奶中是否存在布氏菌属细菌。

双抗体夹心ELISA检测方法的建立

1.材料与方法1.1检测样品的制备2C3株抗牛安氏隐孢子虫卵囊壁特异性单抗，其制备和纯化方法参照文献。

标准阳性粪便，采自粪栓阳性牛粪；标准阴性粪便，为经3次不同时间采粪便集虫后，抗酸染色卵囊均为阴性的牛粪，交叉反应粪便，为集虫粪检仅球虫或结肠小袋纤毛虫感染而无隐袍子虫感染的牛粪。

1.2. 酶标单克隆抗体的制备，参照文献[2：进行，其克分子比为1．96。

1.3. 被险粪便处理方法：取粪2克加入含0.1％聚山梨酸20及2mmol/L乙二胺四乙酸的磷酸缓冲盐溶液5m1碾碎后过滤备用。

1.4.双抗夹心ＥＬＩＳＡ法工作程序聚乙烯反应板经0.0025％的戊二醛溶液等处理后，使其更易与抗原或抗体结合．置4℃冰箱备用。

包被液适当稀释兔抗体(ＩｇＧ),于微量酶标板每孔加100μｌ,置4℃过夜后,用洗涤液洗3次。

每孔加待测样品100μｌ,同时设阴性和试剂空白对照,放置37℃反应2ｈ,用洗涤液洗3次。

每孔加适当稀释的酶标抗体100μ1置37℃反应2ｈ,用洗涤液洗涤3次。

每孔加底物溶液100μｌ,室温暗处放置20ｍｉｎ显色,每孔加中止反应液50μｌ。

然后在酶标测定仪上测定490ｎｍ处的ＯＤ值。

以样品孔的ＯＤ值(Ｐ)与阴性对照孔的ＯＤ值(Ｎ)之比大于2(即Ｐ/Ｎ>2)时定为阳性。

1.5.双抗夹心ＥＬＩＳＡ法工作浓度的确定通过交叉连续稀释分析法确定用于检测一定浓度抗原所需兔抗体(ＩｇＧ)和酶标抗体的工作浓度。

兔抗体(ＩｇＧ)浓度分别为25ｎｇ/ｍｌ、50ｎｇ/ｍｌ、75ｎｇ/ｍｌ、100ｎｇ/ｍｌ;虫卵浓度分别为107、106、105、104、103和102个/ｍｌ。

酶标抗体的稀释度分别为1：50、1:100、1:200、1:400、1:800。

在工作浓度选择中,以Ｐ/Ｎ>2时,兔抗体(ＩｇＧ)浓度最低、酶标抗体稀释度最高为最适条件。

1.6.最佳反应条件确定经方阵滴定，确定单抗和酶标单抗的员适工作浓度分别为1：400和1280倍比稀释。

免疫学实验二 ELISA(双抗夹心法)

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ELISA的测定方法包括：
双抗体夹心法：检测抗原最常用的方法
间接法：检测抗体最常用的方法
竞争法：既可检测抗原，亦可检测抗体生物素－亲和素系统ELISA法：是在ELISA中引入生物素或亲和素放大系统，检测极微量的抗原或抗体的方法。
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直接法
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间接法
7. 终止反应：各孔. 比色：将反应板以酶标仪450nm处用空白孔调零，测各孔OD值。
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6.显色各孔（包括空白对照）加底物A 液50μl（1滴），底物B液50μl （1滴），置37℃避光温育 15min
7.终止反应各孔加终止液50μl
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4. 加酶标记的抗HBsAb抗体：除空白对照外各孔50μl，充分混匀。将即时帖覆盖于反应板上，37℃孵育30min。
5. 弃去反应孔内液体，拍干，用洗涤液注满各孔、静置30秒、再拍干，重复洗涤5 次。(操作同2)
6. 显色：各孔（包括空白对照）加底物A液50μl（1滴），底物B 液50μl（1滴），置37℃避光温育15min。
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THANKS
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2009级医疗专科复习题
一、名词解释2.5*8,共20分
免疫、抗原、抗原决定基(表位)、异嗜性抗原、白细胞分化抗原、TD-Ag、 TI-Ag、抗体、免疫球蛋白、单（多）克隆抗体、补体、经典途径、旁路途径、细胞因子、IL、IFN、CSF、TNF、 MHC、MHC限制性、TCR、BCR、模式识别受体（PRR）、抗原提呈细胞（ APC）、适应性免疫应答、免疫耐受、免疫调节、超敏反应、人工主动免疫、人工被动免疫、计划免疫注：红色标记为要求掌握英文

布鲁氏菌病检测和防治方法研究

布鲁氏菌是一类革兰氏阴性的短小杆菌，家畜中猪、羊、牛对其最易感，可引起母畜传染性流产。

人类主要通过接触带菌动物或食用病畜及其相关乳制品而造成感染，布鲁氏菌病(以下简称布病)是世界范围内严重危害公共卫生安全的人兽共患传染病之一。

目前世界上有170多个国家和地区存在布病流行，每年约有50万的病例，因布病造成的经济损失高达约30亿美元。

近年来，我国家畜养殖量逐年上升，布病的流行范围逐步扩大，对我国家畜养殖业和人类健康形成较大威胁。

本文结合2006-2017年我国《兽医公报》公布的畜间布病疫情数据，对我国布病流行现状和研究进展展开讨论，分析布病流行趋势，以期为及时调整布病防控政策，掌握布病分布特征提供参考。

由于布病危害较大，因此感染早期的快速诊断及鉴定对于降低损失意义重大。

目前，临床上的布鲁氏菌检测主要是病原分离，但该方法耗时耗力，且不能做到早期迅速诊断。

近几年，随着分子生物学的迅速发展，特别是生物信息学、微生物基因组学的发展，以多重PCR、荧光定量PCR检测方法和基因检测技术为主的布病检测技术，以其操作简单迅速、高效稳定、易于操作等众多优点，成为近些年疫病检测的研究热点。

此外，各类疫苗的研制以及临床中西药物的联合使用，更为布病的有效防控开辟了新的途径。

1、流行状况我国畜间布病基本经历了20世纪50--70年代的流行期、80--90年代的基本控制期以及2000年以后的反弹上升期、2010年以后的流行期4个阶段。

目前，我国动物布病发病数量较多的省份有内蒙古、新疆、陕西、黑龙江和山西等，其中以内蒙古最为严重。

2011年，内蒙古的动物布病发病数达到117 623例，占全国动物发病总数的94.08%，是我国布病流行最为严重的地区，防控形势十分严峻。

从2006-2017年农业部《兽医公报》公布的相关数据(表1)可知，2011年我国畜间病例数达到了高峰，发病动物数量超过10万头(只)。

2012年后，无论人间还是畜间，虽然患病省份数量仍维持在较高水平，但畜间病例数呈现下降趋势。

白色念珠菌烯醇化酶抗原双抗体夹心法的建立及应用

白色念珠菌烯醇化酶抗原双抗体夹心法的建立及应用赵会海，贺政新，李芳，高鹏，王佳钰，王芳芳，秦立霞联勤保障部队第980医院检验科，河北石家庄050082【摘要】目的建立定量检测白色念珠菌烯醇化酶抗原的双抗体夹心法，为后续定量检测念珠菌性阴道炎患者阴道分泌物中的烯醇化酶抗原提供方法学基础。

方法用方阵滴定法确定最佳包被抗体浓度和最佳酶标二抗浓度，建立检测白色念珠菌烯醇化酶抗原的ELISA 法，用该法检测白色念珠菌标准菌株SC5314培养上清中烯醇化酶抗原的浓度，初步探索应用于诊断外阴阴道念珠菌病。

结果最佳包被抗Eno 单抗浓度为4.15μg/mL ；酶标二抗HRP 标记的抗烯醇化酶多抗最佳稀释倍数为1∶1000。

在第12小时时白色念珠菌培养上清中的烯醇化酶抗原开始检出，随着培养时间的延长，其上清中Eno 抗原的浓度也随着逐渐增高，第48小时时达到峰值后趋于稳定。

阴道分泌物上清中烯醇化酶抗原浓度随着真菌培养菌落计数的增加其浓度也在增加，有很好的相关性。

结论成功建立了定量检测白色念珠菌烯醇化酶抗原的双抗体夹心ELISA 方法，可应用于评价念珠菌性阴道炎患者阴道分泌物中的烯醇化酶抗原的水平。

【关键词】念珠菌性阴道炎；白色念珠菌；烯醇化酶；双抗体夹心酶联免疫吸附试验【中图分类号】R711.31【文献标识码】A【文章编号】1003—6350（2023）24—3600—04Development and application of an double-antibody sandwich ELISA method for the detection of enolase from Candida albicans.ZHAO Hui-hai,HE Zheng-xin,LI Fang,GAO Peng,WANG Jia-yu,WANG Fang-fang,QIN Li-xia.Department of Clinical Laboratory,the 980th Hospital of Joint Logistics Support Force of Chinese PLA,Shijiazhuang 050082,Hebei,CHINA【Abstract 】ObjectiveTo establish an double-antibody sandwich ELISA method for the detection of enolasefrom Candida albicans and provide the basis for the subsequent quantitative detection of enolase (Eno)antigen in vaginal secretions of patients with Candida vaginitis.Methods The optimal concentrations of coating anti-body and enzyme-la-beled secondary antibody were determined with the square matrix titration.An ELISA method was established to detect the enolase antigen of Candida albicans .The concentration of enolase antigen in culture supernatant of standard strain SC5314was detected by this method,and preliminary exploration was applied to the diagnosis of Vulvovaginitis candidi-asis (VVC).ResultsThe optimal concentration of Eno was 4.15μg/mL,and the optimal dilution ratio of HRP-labeledanti-enolase polyclonal antibody was 1∶1000.The enolase antigen in the supernatant of Candida albicans culture began to be detected at the 12th hour.With the extension of culture time,Eno antigen concentration in the supernatant increased gradually,reaching a peak at the 48th hour and then stabilizing.The concentration of enolase antigen in the supernatant of vaginal secretions increased with the increase of fungal colony count,and there was a good correlation.Conclusion A double-antibody sandwich ELISA method for detecting enolase antigen of Candida albicans was established successful-ly,which can be used to evaluate the level of enolase antigen in vaginal secretions of patients with Candida vaginitis.【Key words 】Vulvovaginitis candidiasis (VVC);Candida albicans ;Enolase;Double-antibody sandwich ELISA ·论著·doi:10.3969/j.issn.1003-6350.2023.24.022基金项目：河北省卫健委医学科学研究重点课题计划项目(编号：20180918)。

新版人畜共患传染病名录病种检测技术浅析

收稿日期：２０２３０６１２基金项目：浙江省“三农九方”科技项目（Ｎｏ．２０２３ＳＮＪＦ０５８）．资助作者简介：吕伟军，从事兽药及畜产品质量安全检测、兽医公共卫生研究。

通讯作者：周　炜，Ｅｍａｉｌ：ｚｈｏｕｗｅｉ０７３２＠ｓｏｈｕ．ｃｏｍ新版人畜共患传染病名录病种检测技术浅析吕伟军１，沈红霞１，池丽娟２，杨　磊１，孙思琪１，周　炜１（１．浙江省动物疫病预防控制中心，浙江杭州３１１１１９；２．中国动物疫病预防控制中心）中图分类号：Ｓ８５５　文献标识码：Ｂ　文章编号：１００５－７３０７（２０２４）０１－００１２－００６习近平总书记在中共中央政治局第三十三次集体学习时强调“要实行积极防御、主动治理，坚持人病兽防、关口前移，从源头前端阻断人兽共患病的传播路径”。

目前，有记载的人兽共患病有２００余种，有些病种尚无有效检测标准，有些病种检测方法林林总总，有些病种已有检测用试剂盒但尚未标准化或尚未在较大范围内试用、验证。

如何切实有效开展针对性防控、严守生物安全底线，是每一个畜牧兽医工作者需要面对的问题。

２０２３年６月，农业农村部针对全国现在主要人畜共患病流行情况，发布了新修订的人畜共患传染病名录，共收录２４种人畜共患传染病，包括４种病毒病、８种细菌病、８种寄生虫病和４种其他疫病（朊病毒、立克次氏体、螺旋体和衣原体），为开展针对性的防控指明了方向。

因而，对于这些病种的检测所采用的权威检测标准、确诊方法以及检测过程中需要处于何种生物安全级别成为疫病检测实验室的重中之重。

本文旨在梳理新版人畜共患传染病名录中２４个病种的现行有效的检测标准（国际标准、国家标准和行业标准）和开展相应实验室检测活动所需生物安全级别，以期为相应检测的开展提供更为明析的参考。

以下各病种情况具体见表１。

１　病毒病１．１　高致病性禽流感　高致病性禽流感的病原为禽流感病毒，按照中华人民共和国农业部令第５３号《动物病原微生物分类名录》和《农业部关于进一步规范高致病性动物病原微生物实验活动审批工作的通知》（农医发［２００８］２７号）的规定（后续病种同此依据），属第一类动物病原微生物，病原分离培养、动物感染实验需在生物安全第三级实验室（以下简称三级实验室，其他级别同）条件下开展；未经培养的感染性材料实验（感染性材料处理需在Ⅱ级生物安全柜中进行）、灭活材料实验需在二级实验室条件下开展。

布鲁氏菌病抗体检测技术研究进展

８％，敏感性达７５％。布病虎红平板凝集试验（ＲＢＴ）、布病试管凝集试验（ＳＡＴ）、免疫动物的血清抗体检测特异性达９竞争ＥＬＩＳＡ试验（ｃＥＬＩＳＡ）技术，但是对于布鲁氏菌病抗体的检１．４三种试验特点测速度和效果却没有达到理想中的结果，在此，本文主要针对布以上三种试验在操作过程中，都会存在对试剂的配置和人为鲁氏菌病抗体快速检测新方法一胶体金技术进行简单的分析和研操作试剂，以及人为对试剂所表现出来的现象进行分析，后续还
该种试验方式主要是快速凝集反应，主要用于检测动物是否２．１测定试剂
（１）测定试剂主要有氯金酸、柠檬酸三钠、碳酸钾、金黄色感染布鲁氏菌病。当前，在我国国内只有中国医学科学院流行病学微生物研究所生产供应布鲁菌病虎红平板试验抗原，材料包括葡萄球菌蛋白Ａ四种，该四种试剂在使用前一定要对其纯度进行阴性血清、阳性血清以及阴阳同一试管凝集反应的阴阳性血清。检测，试剂准备完成之后，分别支撑布鲁氏菌可溶性蛋白多糖复被检测血清和布鲁菌病虎红平板凝集抗原各取０．０３ｍｌ滴于玻合物抗原，金黄色葡萄球菌蛋白Ａ胶体金探针，在塑料底板上分璃板的方格内，每份血清都要进行搅拌，搅拌过程尽可能手动，别将吸水纸垫、硝酸纤维膜、金标垫以及玻璃纤维膜杨平垫组装搅拌工具可以使用火柴或者牙签，搅拌完成后，室温２０ ℃保持在一起。４ｍｉｎ内即可进行判定，对该过程中所产生的反应进行记录，与此（２）人体血清，血清要选择临床确诊为布鲁氏菌病患者的血同时和阴性血清以及阳性血清作为对照。清，以及正常人的血清。在血清的对照下，被检测血清出现任何程度的凝集现象都判２．２操作定其为阳性，不出现凝集现象即为阴性，没有症状感染。

动物布鲁氏菌快速检测方法的研究

动物布鲁氏菌快速检测方法的研究布鲁氏菌病是一种危害严重的人兽共患病,在世界范围内广泛流行。

我国布鲁氏菌病主要的诊断方法为细菌分离培养和血清学检测(虎红平板凝集和试管凝集试验),但满足不了快速检测的要求。

本论文开展布鲁氏菌快速检测方法的研究,从血清学抗体筛查→阳性样品的病原学检测→病原的分型鉴定,建立系列的检测方法,为布鲁氏菌病净化检疫,提供快速有效地手段。

1.建立胶体金试纸检测方法,适用于现场检测。

根据双抗原夹心法测抗体的原理,用葡萄球菌蛋白A和布鲁氏菌重组蛋白bp26抗原建立检测布鲁氏菌抗体的胶体金免疫层析试纸条。

特异性试验结果表明,阳性和阴性血清检测结果正确,说明该方法特异性较好。

试纸条保质期为4℃保存6个月。

2.建立荧光定量PCR检测方法,适用于检测病原。

以布鲁氏菌属OMP10保守片段为靶基因,设计特异性引物和Taqman荧光探针。

将OMP10基因片段克隆到pMD19-T载体,提取质粒,制备标准品及标准曲线。

特异性分析结果显示,对照菌株均未出现荧光信号,说明该方法特异性较好；灵敏性分析表明,该方法最低检出数量级为为10-4ng/μL:标准质粒的稳定性试验结果表明,在不同检测时间、不同反应管之间的域值的变化很小,组内组间变异系数均小于2%。

3.建立布鲁氏菌分型多重PCR方法,适用于病原进行分型。

根据布鲁氏菌基因组多拷贝插入元件IS711及其下游多态位点,设计布鲁氏菌牛、羊、猪种分型引物,优化PCR反应体系和条件,建立布鲁氏菌分型的多重PCR方法。

特异性分析结果显示,对照菌株未见扩增,说明该方法特异性较好。

灵敏性分析表明,其最低检出数量级为10-2ng/μL.。

酶免疫试验检测人畜布氏菌感染的研究概况

酶免疫试验检测人畜布氏菌感染的研究概况
鲁齐发;尚德秋
【期刊名称】《中国地方病防治杂志》
【年(卷),期】2001(16)6
【总页数】3页(P346-348)
【关键词】酶免疫试验;流行病学;布氏菌病;鉴别诊断;诊断;I-EIA法
【作者】鲁齐发;尚德秋
【作者单位】中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所，北京102206;中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所，北京10
【正文语种】中文
【中图分类】R516.704
【相关文献】
1.疏水衣作为酶免疫试验抗体吸附剂的应用检测布氏菌抗原 [J], 杨忠礼;张福田
2.快速免疫酶斑点试验法鉴测布氏菌感染 [J], 潘敏楠;陈阳
3.酶联免疫吸附双抗原夹心法检测人畜布氏菌抗体的研究 [J], 刘淑平;郭支喜;王曾良;胡学斌;张伟;鲁齐发
4.应用斑点酶联免疫试验快速检测绵羊布氏菌病 [J], 刘志文;张银国;闰守敦;盛兆银;赵兴旺;王学智;朱鹤赐
5.用布氏菌乳环抗原的5种血清学试验检测人畜布氏菌抗体的研究 [J], 赵鸿雁;李兰玉;崔步云;朴东日;鲁齐发
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布鲁氏菌病PCR检测的临床意义

布鲁氏菌病PCR检测的临床意义姚馨月;郑文艳【期刊名称】《内蒙古医学杂志》【年(卷),期】2016(048)002【总页数】4页(P189-192)【关键词】布鲁氏菌;PCR;诊断【作者】姚馨月;郑文艳【作者单位】内蒙古医科大学,内蒙古呼和浩特010059;中国人民解放军第253医院感染科,内蒙古呼和浩特010010【正文语种】中文【中图分类】R378.5布鲁氏菌病(brucellosis,简称布病)是由布鲁氏菌感染引起的人畜共患传染-变态反应性疾病[1]。

世界动物卫生组织(OIE)将其列为重要传染病，属于《中华人民共和国传染病防治法》规定的乙类传染病，并列为《家畜家禽防疫条例实施细则》中二类传染病中之首[2～4]。

布病在我国的整体流行趋势呈现出老疫区死灰复燃，新疫区范围扩大[5]。

布鲁氏菌病潜伏期为1～3周，初期症状类似重感冒，如发热、关节疼痛、疲劳、乏力、多汗、肝脾肿大等症状。

临床症状极不典型，在诊疗过程中易造成误诊，急性期布病如不及时诊断极易发展为慢性期。

慢性布病患者往往都会伴有不同程度的骨关节系统病变[6]。

本病的致命性并发症为中枢神经系统病变及心肌病变[7]。

所以布病的早期诊断，就变的尤为重要。

我国CDC布病诊断标准为：(1)流行病学接触史：密切接触家畜、野生动物、布鲁菌培养物等，或生活在疫区的居民；(2)临床症状和体征排除其他疑似疾病；(3)实验室检查：病原分离、试管凝集实验、补体结合实验、抗人球蛋白阳性。

凡具备第(1)、(2)项和第(3)项中的任何一项检查阳性即可确诊为布病。

布病的实验室检查方式是确诊布病的关键证据。

诊断布病的“金标准”是病原分离，但病原分离要求在P3级生物实验室进行，对实验室操作人员有较高的专业技术要求，耗时长，最终的菌落形态不易辨认，且有明显的操作暴露危险，增大医源性感染的可能。

在基层不易推广。

培养的阳性率极低。

1.1 凝集实验SAT一直是各国用作诊断布病的常规血清学诊断方法，我国更是将其列为了诊断布病的法定检测方法[8]。

人畜布鲁氏杆菌病的检测分析及防制

人畜布鲁氏杆菌病的检测分析及防制王杏芹;桑彩霞;王锋;张启耀;马坚;赵金东【期刊名称】《新疆畜牧业》【年(卷),期】2012(000)011【摘要】为掌握乌鲁木齐县布鲁氏杆菌病的流行趋势，逐步控制包括人在内的布鲁氏杆菌病的发病率，促进养殖业持续健康发展。

本文采用虎红平板凝集反应（RBPT）和试管凝集反应相结合的方法对乌鲁木齐县411份人血、5205份牛血和452份羊血进行布鲁氏杆菌病检测。

检出布鲁氏杆菌病阳性血清111份，其中人血2份、牛血71份、羊血38份；可疑血清15份，其中人血2份、牛血13份，羊布氏杆菌病阳性率最高，迭8．4％。

通过数据分析及流行病学调查发现，患病动物是引起布氏杆菌病传播的主要传染源。

目前，防制本病主要采取“检疫、检测、淘汰病畜、消毒”的综合防制措施。

【总页数】3页(P56-58)【作者】王杏芹;桑彩霞;王锋;张启耀;马坚;赵金东【作者单位】乌鲁木齐县畜牧兽医站,新疆乌鲁木齐830036;乌鲁木齐县畜牧兽医站,新疆乌鲁木齐830036;乌鲁木齐县养殖业办公室,新疆乌鲁木齐830036;乌鲁木齐县畜牧兽医站,新疆乌鲁木齐830036;乌鲁木齐县畜牧兽医站,新疆乌鲁木齐830036;乌鲁木齐县畜牧兽医站,新疆乌鲁木齐830036【正文语种】中文【中图分类】S855.12【相关文献】1.五原县人畜共患布鲁氏杆菌病的血清学调查与分析 [J], 康秉贤;2.细菌性人畜共患病之猪布鲁氏杆菌病 [J], A.P.MacMillan3.循化县人畜布鲁氏杆菌病的防治及其效果调查 [J], 孙建忠;仁措;马永明;马玉春;张云;马兰萍;白瑛4.平安县人畜布鲁氏杆菌病防治效果 [J], 刘国涛5.牛羊布鲁氏杆菌病的防制 [J], 魏伟;赵明范;张小敏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

酶联免疫双抗体夹心法检测牛初乳素中免疫球蛋白IgG

酶联免疫双抗体夹心法检测牛初乳素中免疫球蛋白IgG 项新华;尹香君;赵丹慧;李成文【期刊名称】《中国卫生检验杂志》【年(卷),期】2002(12)2【摘要】〔目的〕建立检测牛初乳素为原料的保健食品中免疫球蛋白IgG的常用酶联免疫双抗体夹心法。

〔方法〕分离纯化小牛血清中IgG,以牛IgG免疫新西兰兔,获得抗牛IgG的血清,分离纯化,制备兔抗牛IgG。

〔结果〕1000ng/孔兔抗牛IgG饮被酶联板,3倍比稀释牛IgG,夹心法检测。

〔结果〕在牛IgG0.031mg/ml-2.50mg/ml范围,浓度与吸光度值线性相关,方程为:y=0.358+0.767x,相关系数为r=0.995,当添加50mmIgG时,回收率为88.4％,变异系数为6.1％。

〔结论〕该方法具有特异性强、快速、灵敏和分析成本低等特点。

【总页数】2页(P137-138)【关键词】牛初乳素;IgG;酶联免疫双抗体夹心法;兔抗牛IgG【作者】项新华;尹香君;赵丹慧;李成文【作者单位】北京市疾病预防控制中心食品营养与卫生研究所;北京市创伤骨科研究所【正文语种】中文【中图分类】R446.6【相关文献】1.双抗体夹心酶联免疫法测定水牛初乳中的IgG [J], 李玲;曾庆坤;唐艳2.酶联免疫双抗原夹心法检测抗双链DNA抗体 [J], 毕文启3.酶联免疫转印技术(EITB)在检测人类脑囊虫病患者血清IgG和IgG4抗体中的应用 [J], 吴静; 李雅杰; 刘平; 王慧4.酶联免疫转印技术（EITB）在检测人类脑囊虫病患者血清IgG的IgG4抗体中的应用 [J], 吴静; 李雅杰; 等5.酶联免疫双抗原夹心法检测梅毒螺旋体抗体 [J], 李小刚;王奕江;刘君生;周雅群因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

双抗体夹心

• （二）实验试剂与器材 1HBSAg检测试剂盒 2加样枪 3温箱 4待测血清
• （三）操作步骤 • 1 用蒸馏水将洗涤液作20倍的稀释成洗涤工作液，充分摇匀后备用。 • 2 取出包被板，做好标记。留一孔做空白对照，其余加入阳性对照二孔和阴性对照三孔50ul/孔（或1滴／孔）及待测标本50ul／孔与相应的反应孔内，随即加入酶结合物50ul／孔（1滴／孔），空白对照孔不加，振荡混匀后，贴上板贴，置37度温箱中孵育30min。 • 3 撕下板贴，洗板5次（先弃去孔内液体，拍干，用洗涤液注满各孔，防止串流，停5-10s弃去，如此反复5次，每次均拍干）。
• 4 加入底物50u37度避光温育10min。 • 5加终止液50ul／孔（或1滴/孔），振荡混匀后，立即测试结果。 • 6以空白孔调零，在450nm波长处用酶标仪测各孔OD
• （四）结果判定 1 结果有效性：阴性对照OD值应该小于0.1，阳性对照的OD值减去阴性对照孔OD值应大于0.6，否则应重新实验。 2 CUT OFF 值计算： CUT OFF值=2.1×阴性对照孔平均OD值（阴性对照孔OD值小于0.05时，应按0.05计算）待测样品的OD值 ≧ CUT OFF值者，判为HBsAg 性，否则为阴性。
二双抗体夹心法测HBSAg
• （一）实验原理先将特异性抗体连接在固相载体上，形成固相抗体；加入待测标本和酶标抗体并温育，使标本中的抗原与固相抗体以及酶标记抗体充分反应，形成双抗体夹心免疫复合物，洗涤除去其他未结和物；再加入酶的底物（即显色剂）并温浴。最后加入终止液，根据颜色深浅判断抗原含量。颜色深浅与抗原量成正比。
• （五）注意事项 • 1 试剂盒自冰箱中取出室温平衡30min以上。 • 2 手工洗板时应避免孔内液体外溢，以防止相邻孔相互污染造成假阳性。 • 3 实验终止后20min内结果有效。