雌激素受体和孕激素受体在女性腺性膀胱炎中的表达及其意义

第26卷 第3期 汕头大学医学院学报 Vol.26 No.32013 Journal of Shantou University Medical College 2013 ・151・α-，β-雌激素受体和孕激素受体在女性腺性膀胱炎中的表达及其意义佘绍逸1)，郑晓2)，李彤1)，佘璇瑜1)，何学军1) ，林明恩1)（汕头大学医学院 1 第一附属医院泌尿外科，2 学生工作部，广东 汕头 515041） [摘要] 目的：探讨α-、β-雌激素受体(α、β-ER )、孕激素受体(PR )在腺性膀胱炎中的蛋白和mRNA 表达水平及其临床意义。

方法：采用免疫组化SP 和实时荧光PCR 法检测腺性膀胱炎(57例)和正常膀胱(15例)黏膜组织中α、β-ER 、PR 的表达。

结果：α-ER 在腺性膀胱炎的膀胱三角区及膀胱底部中的蛋白与mRNA 的表达均明显低于正常对照，而β-ER 、PR 在2个部位的表达均与正常对照无统计学意义。

结论：α-ER 的表达下调可能参与了腺性膀胱炎的病理形成。

[关键词] 腺性膀胱炎；α-雌激素受体；β-雌激素受体；孕激素受体；免疫组织化学[中图分类号] R694+3 [文献标识码] A [文章编号]1007-4716(2013)03-0151-04Expression of α-，β- Strogen Receptor and Progestogen Receptor inCystitis Glandularis and Their Clinical SignificanceSHE Shao-yi 1，ZHENG Xiao 2，LI Tong 1，SHE Xuan-yu 1，HE Xue-jun 1，LIN Ming-en 1(1 Department of Urology ，The First Affiliated Hospital ，Shantou University Medical College ，Shantou 515041，China ，2 Student Affairs Department ，Shantou University Medisal College ，Shantou 515041，China )[Abstract ] Objectives ：To investigate the expression and significance of α-，β-strogen receptor (α-，β-ER )and progestogen receptor (PR )in cystitis glandularis. Methods ：The expression of α-，β-ER and PR was detected by immunohistochemical and quantitative PCR technique in 57 cases of cystitis glandularis and 15 cases of normal bladder. Results ：The expression rate of α-ER was significantly higher than that of normal bladder mucosa tissue. The expression rate of β-ER and PR had no difference between two groups of trigone zone and bladder fundus. Conclusion ：The down-regulation expression of α-ER in bladder mucosa tissue may be related to the biological behavior of cystitis glandularis .[Key Words ] cystitis glandularis ，α-estrogen receptor ，β-estrogen receptor ，progestogen receptor ，immunohistochemistry腺性膀胱炎是一种膀胱黏膜增殖性、化生性病变，多发于女性[1]，其发病原因与机制尚未明了。

2003-01——2012-12我科选取经病理证实为女性腺性膀胱炎(57例)的黏膜标本，通过免疫组化和实时荧光PCR 检测腺性膀胱炎组织中α-、β-雌激素受体(α、β-ER )、孕激素受体(PR )蛋白及mRNA 表达情况，探讨ER 和PR 在腺性膀胱炎中的临床和病理学意义。

1 资料与方法 1.1 一般资料本组(年龄26~49岁，平均41.2岁)均为原发病变和绝经前患者，未接受膀胱灌注等治疗。

另取15例正常膀胱黏膜组织作对照(标本取自行膀胱结石膀胱切开取石术、输尿管再植术等)。

每份标本分为2份：一份保存于甲醛中以作免疫组化石蜡切片，另一份保存于液氮并转移至-80 ℃冰箱以作PCR RNA 提取。

1.2 试剂 即用型兔抗人α、β-ER 、PR 单克隆抗体(Santa Cruz 公司，美国)。

用免疫组化Envision 法，试剂盒购自北京中衫公司(中国)，用DAB 底物显色。

所有标本均经10%(体积分数)福尔马林液固定，常规脱水后石蜡包埋，取5张(4 μm 厚)切片，并苏木精-伊红及免疫组化染色和阴性对照。

全部标本染色后均由2位病理科教授复查确诊。

收稿日期：2013 - 07 - 05 基金项目：广东省医学科研基金立项课题(B2013267)；汕头市科技计划资助项目(2011-46) 作者简介：佘绍逸(1971 -)，男，本科，主任医师，主要从事泌尿外科工作。

通信作者：林明恩 E-mail ：me_lin20@・152・ 1.3 判定标准α、β-ER 及PR 的阳性表达呈棕黄色，定位于细胞质。

每份标本于高倍镜(×400)下随机选取10个视野，计数500个细胞中的阳性细胞数，计算α、β-ER 及PR表达的阳性细胞比率以平均值定义为组织内阳性细胞的百分比，临床上将其百分比的值分为5级：-(0%~10%)、+(11%~25%)、++(26%~50%)、+++(51%~75%)及++++(76%~100%)。

将后两者归纳为高表达，余低表达。

并统计两组得分情况。

1.4 实时荧光PCR 试剂LightCycler 实时PCR 扩增仪(Roche 公司，美国)，Trizol 试剂(Sigma 公司，美国)；PCR 反应试剂(TaKaRa公司，美国)。

用GAPDH 作内参基因，引物设计采用Primer 6.0，根据Genbank 所发布的目的基因序列核心编码区进行设计。

引物由上海英俊公司合成(表1)。

反转录合成cDNA ：按TAKARA 公司逆转录试剂盒PrimeScript RT reagent Kit 说明书步骤进行；每个反应管总体积20 μL ，Total RNA 取1 000 ng 总反应量。

反应条件：37℃，15 min (反转录反应)；85℃，5 s (反转录酶的失活反应)；-20 ℃保存反应产物cDNA 。

荧光PCR 反应条件：预变性，95℃ 30 s ；PCR 反应，95℃ 5s ，60℃ 20 s ，40个循环；溶解曲线分析，95℃，0 s ，65℃，15 s ，95℃，0 s 。

基因 序列(5’-3’)产物 退火温度/℃α-ERβ-ERGAPDH 正向 反向 正向 反向 正向 反向 GAGCAGGTGCCCTACTACCTATCATCTCTCGGCGCTTGT TTGTGCGGACGAGAAGCATCATGGCCTTGACAGAG GTCGGAGTCAACGGATTTGCCATGGGTGGAATCATATTG 142 126 146 87 80 861.5 PCR 数据计算根据LightCycler Real-time PCR 软件通过Cp 值∆∆Ct 法计算出来的目的基因相对于内参GAPDH 的表达量进行统计。

1.6 统计学处理用SPSS19.0软件，以卡方检验、秩和检验以及Spearman 等级相关分析进行统计处理。

2 结果 2.1 α-、β-ER 及PR 的蛋白表达情况 α-、β-ER 与PR 均表达在三角区与膀胱底部的黏膜层及平滑肌层的细胞质中着色呈弥漫或散在分布，呈棕黄色或黄褐色颗粒(图1~3，封3)。

α-ER 在腺性膀胱炎中的三角区及膀胱底表达均明显低于正常对照(P <0.01)；α-ER 在腺性膀胱炎三角区及膀胱底部的阳性表达率分别为33.7%、35.8%，而在正常膀胱中的表达分别为70.5%、62.5%。

而β-ER 表达两组间在三角区及膀胱底表达差别均无统计学意义(表2、3)。

(n /例数) 分级 α-ER β-ER 组别 n /例01234平均百分比/% 0 1 2 3 4平均百分比/%对照组 150125770.5 0 2 4 7 256.2 腺性膀胱炎组5731919124 33.71) 1 4 22 25 557.4 与对照组比 1) P <0.01 (n /例数) 分级 α-ER β-ER 组别 n /例01234平均百分比/% 0 1 2 3 4平均百分比/%对照组 150125762.5 0 2 4 7 243.6 腺性膀胱炎组5731622133 35.81) 1 4 22 25 541.9 与对照组比 1) P <0.01 2.2 α-、β-ER 荧光PCR 检测mRNA 表达情况 α-、β-ER 及内参扩增曲线见图4~7。

α-、β-ER 在对照组以及β-在腺性膀胱炎组中均可见mRNA 高表达。

α-ER 的mRNA 表达水平在三角区及膀胱底均明显低于对照组(P <0.05)。

而β-ER 的mRNA 表达水平与正常对照组在三角区及膀胱底两部位差别均无统计学意义(表4)。

三角区 膀胱底 组别 n /例α-ER β-ER α-ER β-ER 对照组腺性膀胱炎组15570.335±0.0280.137±0.0111)0.262±0.016 0.265±0.027 0.319±0.025 0.234±0.0171)0.218±0.0270.207±0.036与对照组比 1) P <0.05表1 实时PCR 引物序列 表2 两组膀胱三角区α-，β-ER 免疫组化分级结果 表4 两组膀胱组织α-，β-ER 实时荧光PCR 相对表达量表3 两组膀胱底部α-，β-ER 免疫组化分级结果・153・3 讨论研究证实，在女性膀胱三角区、膀胱黏膜及尿道黏膜上皮的细胞膜或细胞核上都有ER 表达，提示雌激素可能通过多种途径来影响泌尿系统[2-3]。