第11章免疫分析
第三版免疫学检验技术第章中级试题及答案
一、A1
1、下图所示的为哪一种ELISA技术的反应原理示意图（）。
A、双抗原夹心法
B、双位点一步法
C、间接法测抗体
D、竞争法E、捕获法
2、钩状效应是指用ELISA一步法测定标本中待测抗原时，抗原浓度过（），实测值偏（）的现象，极易造成假阴性
A、低，高B、高，高
C、高，低D、低，低
E、高，不变
13、【正确答案】D
【答案解析】斑点免疫层析试验以硝酸纤维素为载体，利用微孔滤膜的毛细管作用，滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移，犹如层析一般。
14、【正确答案】B
【答案解析】ELISA抗体夹心法检测抗原A时，固相载体的包被物是未标记的抗A抗体。
15、【正确答案】B
【答案解析】在双位点一步法测定中，应注意钩状效应，类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。当标本中待测抗原浓度相当高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成夹心复合物，所得结果将低于实际含量。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果。
11、【正确答案】A
【答案解析】制备抗体酶结合物的方法通常有戊二醛交联法、过碘酸盐氧化法和标记抗体鉴定法。
12、【正确答案】D
【答案解析】ELISA是在固相载体上包被抗原或抗体后，通过抗原抗体反应使酶标抗体（或酶标抗原）结合到载体上，经洗涤使结合的酶标抗体和游离的酶标抗体分离，洗去游离的酶标抗体（或酶标抗原）。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体。②酶标记的抗原或抗体。③酶作用的底物。间接法和捕获法还使用稀释的血清标本做试剂。戊二醛是一种双功能团试剂，可以使酶与蛋白质或其他抗原的氨基通过它而耦联。与ELISA的方法相反。
（间接法）
E.免疫组织化学技术
第11章 临床免疫学检验仪器与技术
施新明
目录
第一节 免疫荧光分析仪器与技术 第二节 散射比浊分析仪器与技术 第三节 酶免疫分析仪器与技术 第四节 化学发光免疫分析仪器与技术 第五节 自动化免疫分析仪的染色的技术原理是什么？ 2.时间分辨荧光免疫分析仪的基本原理和性能特点是什么？ 3.散射比浊仪器的分类和原理是什么？ 4.比浊法检测抗原过剩的方法有哪些？ 5.酶联免疫分析技术的原理是什么？ 6.化学发光酶免疫分析的技术原理是什么？ 7.吖啶酯化学发光免疫分析技术的原理是什么？ 8.电化学发光免疫分析技术的原理和特点是什么？ 9.光激化学发光免疫分析技术的原理是什么？
软件系统等。
1.条形码扫描器 2.样品轨架 3.样品针清洗站 4.清洗站 5.清洗机头 6.载片 托盘 7.试剂架 8.用于初始稀释的稀释板 9.用于系列稀释的稀释板
一、免疫荧光染色仪器与技术
（二）免疫荧光染色相关仪器
1.免疫荧光染色自动操作仪 加样系统由样品针和清洗站、样品轨架和试剂架等构成； 清洗系统包括储液桶、清洗站、清洗机头、废液排除管路
不足，存在抗原过量，需将待测样品进一步稀释复测。 3. 全程动力学空白对照，排除非特异性的干扰，确保检测结果
的可靠性。
五、散射比浊分析仪的性能要求
1.灵敏度 2.精密度 3.准确度 4.携带污染 5.温度准确度与波动度 6.样品和试剂加样准确度与重复性
第三节 酶免疫分析仪器与技术
一、酶联免疫吸附试验
三、全自动酶免疫分析系统
（一）全自动酶免疫分析系统的基本结构
全自动酶免疫分析系统是具有自动加样本、加试剂，自动控 温温育，自动洗板和自动判读计算等功能的分析系统。
可用于各种酶免疫实验、血库筛查、生化检测、细胞培养、 分子生物学等各个方面。
临床检验仪器第十一章临床免疫检验仪器习题
第十一章临床免疫检验仪器一、名词解释1.酶免疫分析技术：利用酶的高效催化和放大作用与特异性免疫反应结合而建立的一种标记免疫技术。
2.均相酶免疫分析法：检测过程中抗原抗体反应后，无需分离结合和游离的酶标记物，直接根据反应前后酶活性的改变进行待检物质测定的分析方法。
3.非均相酶免疫分析法：在酶免疫测定中，抗原抗体反应达到平衡后，需分离游离的和与抗原(或抗体)结合形成复合物的酶标记物，然后对经酶催化的底物显色程度进行测定，再推算出样品中待测抗原(或抗体)含量的分析方法。
4.发光免疫分析技术：利用化学发光现象，根据物质发光的不同特征，即辐射光波长、发光的光子数，与产生辐射的物质分子的结构常数、构型、数量等密切相关，通过受激分子发射的光谱、发光衰减常数、发光方向等来判断分子的属性及发光强度进而判断物质的量的免疫分析技术。
5.免疫浊度检测：将液相内的沉淀试验与现代光学仪器和自动分析技术相结合的一项分析技术。
6.放射免疫分析技术：以放射性核素为标记物的标记免疫分析技术。
7.非均相荧光免疫测定法：抗原抗体反应后，先把Ab*Ag 与Ab*分离，然后测定Ab*Ag 或A b*中的标记物的量，从而推算出标本中的A g 量的方法。
8.均相荧光免疫测定法：抗原抗体反应后，Ab*Ag 中的标记物失去荧光特性，不需进行A b*Ag 与A b*的分离直接测定游离的A b*量，从而推算出标本中的A g 量的方法。
9.闪烁体：是将核辐射能激发分子转化成可探测闪光的荧光物质。
常用的有有机闪烁体、无机闪烁体和特殊闪烁体等。
10.时间分辨荧光免疫分析：时间分辨荧光免疫测定是用镧系稀土元素及其螯合物(如 Eu3+螯合物) 作为示踪物标记抗原、抗体、核酸探针等物质，检测标本中的相应抗原或抗体的荧光免疫测定技术。
11.化学发光免疫技术：在检测化学反应中，某些化学基团被氧化后形成激发态，并在返回基态的同时发射一定波长的光子。
仪器利用这种化学基团标记在免疫分析的抗原或抗体上所建立起来的免疫分析为化学发光免疫分析。
临床免疫学检验课件第11章固相膜免疫分析技术1
不足之处 敏感度略低，价格略高（与ELISA
比 精密度较差，质控困难 稳定性较差（普通试剂） 不易制备定量、半定量试剂
不需大型仪器
临床上常用的固相膜免疫技术：
斑点金免疫渗滤试验(dot immunogold
filtration assay, DIGFA) 斑点金免疫层析试验（dot immunogold
A-标本;G-金标抗体;T-标准抗原 C-二抗（羊抗兔免疫球蛋白抗体）
3. 技术要点
（1）试剂盒的组成
• 主要成分胶体金层析条 • 所用试剂全部为干试剂
（2）操作要点： • 加样
将试剂条标记线一端侵入待测标本中2~5 s 或在标本加样处加一定量待检标本，平放 • 5~20 min内观察结果
• 结果判断：因方法而异。注意无棕红色线质控带出现
则试剂无效。
（二）斑点金免疫渗滤试验
（dot imumunogold filtration assay, DIGFA）
1. 原理
硝酸纤维素膜包被抗原或抗体
+标本（抗体或抗原）
快速免疫反应 无关成分流过渗滤装置
是床旁实验（point of
+免疫金
care test, POCT）主 免疫反应，浓缩胶体金
包被抗原
洗涤
洗涤
阳性：有色沉淀物 斑点酶吸附试验原理示意图
（二）技术要点
1. 抗原包被膜
1~2 μL抗原于膜上→包被后进行封闭
2. 抗原抗体反应
• 滴加样品血清，待检抗体与膜上抗原反应 • 洗涤后加酶标记二抗。
3. 确定酶结合物最佳稀释度
阴性样品不显色，阳性样品显色最强的酶结合物 稀释度
免疫分析教学课件ppt
免疫分析的检测方法包括肉眼观察、仪器测量和放射自显影 等。不同的检测方法适用于不同的免疫分析类型和检测范围 。
免疫分析的标准化与质量控制
标准化
免疫分析需要标准化以确保结果的准确性和可比性。国际上已有许多免疫分 析标准化组织，如国际临床化学联合会等，这些组织推动着免疫分析标准化 工作的发展。
原理
化学发光免疫分析是基于抗原-抗体反应的免疫分析方法，利用化学发光剂标记抗 体或抗原，与被测样本中的相应抗原或抗体发生特异性结合，再通过催化剂和发 光剂诱导化学发光反应，从而实现对被测物的定量或定性分析。
应用
化学发光免疫分析在医学和生物学领域广泛应用，如肿瘤标志物、心血管疾病、 传染病等检测。
荧光免疫分析
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抗原抗体的特异性
抗原和抗体的结合具有高度的特异性，这是因为抗体只能与相应的抗原结合。抗原抗体的 特异性决定了免疫分析的灵敏度和特异性。
抗原抗体的结合力
抗原和抗体结合的力主要是静电引力、范德华力和疏水相互作用等。这些力的相互作用使 得抗原和抗体能够紧密结合。
免疫分析的信号放大与检测
信号放大
免疫分析通常使用信号放大的方法以提高检测的灵敏度。常 见的信号放大方法包括酶联免疫分析、化学发光免疫分析和 荧光免疫分析等。
基于荧光免疫分析的登革热病毒检测研究
要点一
总结词
要点二
详细描述
该研究通过建立荧光免疫分析方法，实现了对登革热病 毒的高效、快速和灵敏检测，为登革热的防控和治疗提 供了有力支持。
荧光免疫分析是一种非放射性标记免疫分析方法，具有 灵敏度高、特异性强、操作简便等优点。该研究采用荧 光免疫分析法检测登革热病毒，通过对病毒抗原和抗体 的特异性反应进行检测，可以快速、准确地检测出登革 热病毒感染，为防控和治疗登革热提供了有力支持。
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目录
免疫分析概述免疫分析的实验技术免疫分析的生物化学基础免疫分析的质量控制免疫分析的未来发展趋势免疫分析实例解析
01
免疫分析概述
免疫分析是一种利用抗原-抗体特异性反应原理，对样本中的抗原或抗体进行定性或定量检测的方法。
免疫分析基于抗原-抗体之间的特异性结合反应，通过检测反应产物来对样本中的抗原或抗体进行定性或定量检测。
在自动化免疫分析仪器的基础上，对整个免疫分析流程进行优化，实现全流程自动化，包括样本处理、加样、孵育、洗涤、检测等环节，减少人为操作误差。
免疫分析的自动化
高灵敏度检测试剂的研发
通过提高检测试剂的灵敏度，能够更早地检测出疾病标志物，提高疾病的早期诊断率。
信号放大技术的运用
采用信号放大技术，如量子点、纳米线等纳米材料的应用，能够将信号放大，提高检测灵敏度和准确性。
常见肿瘤标志物的免疫分析
肿瘤标志物的免疫分析
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免疫荧光技术的应用
免疫荧光技术被广泛应用于细胞和组织的免疫标记研究。
01
02
03
免疫印迹技术的原理
免疫印迹技术是一种利用特异性抗体识别蛋白质条带，并通过显色反应显示蛋白质存在的方法。
免疫印迹技术的实验步骤
免疫印迹技术通常包括样品处理、电泳分离、转膜、特异性抗体孵育、显色反应等步骤。
免疫印迹技术的应用
抗原结合部位
抗体分子上发挥效应功能的部位，如补体激活、调理吞噬等。
效应功能部位
抗体的结构与功能
04
免疫分析的质量控制
实验计划的制定
制定详细的实验计划，包括实验目的、实验步骤、实验时间、预期结果等，以便于实验的顺利进行。
第十一章金免疫技术【52页】
三、临床应用与评价
1. 应用 （1）细胞的膜表面抗原 （2）细胞胞/组织内抗原 （3）组织中或亚薄切片中抗原 (4) 病毒检测或病毒分型
2.评价
（1）优点：标本用量少,敏感性高，特异性好, 标本用量少,可进行双标或多标检测。
原理：
免疫反应
胶体金颗粒(CG)沉积在Ag位置
CG 催化，对苯二酚还原剂
银离子(Ag+) 还原成 银原子(Ag)
银原子围绕金颗粒形成一个“银壳”
子
“银壳”催化，还原更多银离
“银壳”越长越大,抗原位置得到清楚放大
（二）操作技术要点
1.试剂：免疫金、配制新鲜配制银染液。 2.检测：多用于抗原检测。
目前得以广泛应用。
第一节 胶体金与免疫金的制备
1. 胶体金的制备 2. 免疫金的制备 3. 免疫金的保存
1.1胶体金的结构
胶体金是由金盐被还原成 原金后形成的金颗粒悬液。
胶体金颗粒由一个基础金核（原子金Au） 及包围在外的双离子层构成(内层AuCl2－， 外层H+）。
金颗粒间静电相互排斥而悬浮形成一种稳定 的胶体状态。
DIGFA
穿流（flow through）
DICA
横流（lateral flow）
(二) 方法类型
1.双抗体夹心法 2.竞争法/抑制法 3.间接法
1.双抗体夹心法
？
免疫层析试验双抗体夹心法测
双抗体夹心法
标本
Gold
test
control
结果观察
Gold
阳性
test control
免疫分析总结期末怎么写
免疫分析总结期末怎么写第一章：引言免疫分析是一种通过体内或体外应用免疫学原理，从而进行相关物质的测量、检测和分析的方法。
它主要依赖于免疫系统的高度特异性与亲和性，可以实现对不同物质的定量或定性检测。
免疫分析已经在医药、生物学、环境科学等领域得到广泛应用，并在疾病的诊断和治疗中起到了重要的作用。
本章将对免疫分析的基本原理和方法进行简要介绍。
第二章：免疫学基础免疫学作为生物学的重要分支，是研究生物体对抗外来物质（抗原）的免疫反应及其调控机制的科学。
本章主要介绍免疫学的基本概念、免疫系统的组成和功能、抗原与抗体的结构特点以及免疫应答的类型等内容。
深入了解免疫学的基础知识，对于理解免疫分析的原理和技术有着重要的意义。
第三章：免疫分析的基本原理免疫分析的基本原理是基于抗原与抗体之间的特异性反应。
本章将从物质的抗原性、抗体的特异性、抗原与抗体的结合反应等方面介绍免疫分析的基本原理。
另外，还将介绍一些免疫分析中常用的标记物和检测方法，如酶标记、放射性标记、荧光标记和流式细胞术等。
通过对免疫分析的基本原理的理解，可以为后续的实验设计和结果分析提供指导和依据。
第四章：常用的免疫分析方法免疫分析方法主要包括免疫沉淀、免疫层析、免疫电泳、免疫荧光和免疫酶标等。
本章将从实验操作流程、仪器设备和试剂等方面介绍上述方法的具体操作步骤。
同时，还将介绍一些实验中常见的问题和解决方法，以及实验结果的分析和解读。
熟悉这些免疫分析方法的特点和应用范围，可以有效地提高实验的成功率和结果的准确性。
第五章：免疫分析在医学诊断中的应用免疫分析在医学诊断中起着重要的作用，可以用于慢性疾病的早期诊断、肿瘤标志物的检测、感染病原体的鉴定等。
本章将从临床应用背景、实验操作和结果解读等方面介绍免疫分析在医学诊断中的应用。
另外，还将介绍一些免疫分析的新技术和方法，如免疫组化、免疫组织化学和免疫荧光等。
了解免疫分析在医学诊断中的应用，对于提高疾病的早期检测和准确诊断具有重要意义。
免疫分析读书报告
免疫分析读书报告免疫分析是一种重要的实验室技术，在医学、生物学和生物工程等领域都有广泛应用。
本文将从理论、方法和应用三个方面对免疫分析进行深入探讨。
理论基础免疫分析是利用抗原与抗体之间的特异性相互作用原理进行的。
抗原是引起免疫应答的物质，可以是蛋白质、多肽、糖类、脂质等。
抗体是机体对抗原产生的一类具有高度特异性的免疫球蛋白，可以通过与抗原结合来识别和清除它们。
免疫分析利用抗原-抗体之间的结合反应来检测、鉴定和定量化物质。
方法介绍免疫分析的常见方法主要包括免疫沉淀、酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫测定法（RIA）和免疫荧光法等。
其中，酶联免疫吸附试验是最常用的一种方法。
它通过将抗原或抗体固定在试验板上，再加入待测物样品和酶标记抗体，经过一系列洗涤和显色操作，可以通过测量光学密度来定量待测物的含量。
放射免疫测定法利用放射性同位素标记的抗体或抗原来测定待测物的含量，具有高灵敏度和高特异性。
免疫荧光法则通过荧光染料或荧光标记的抗体来检测目标物质，具有高灵敏度和高分辨率。
应用领域免疫分析在医学、生物学和生物工程等领域都有广泛应用。
在医学领域，免疫分析可以用于检测疾病标志物、诊断感染病原体、监测治疗效果等。
例如，酶联免疫吸附试验可以用于检测HIV感染，免疫荧光法可以用于检测风湿性关节炎。
在生物学领域，免疫分析可以用于研究蛋白质的表达和功能，研究细胞信号转导等。
例如，免疫沉淀可以用于检测蛋白质间的相互作用，ELISA可以用于测定细胞因子的含量。
在生物工程领域，免疫分析可以用于药物研发、生物制药等。
例如，放射免疫测定法可以用于检测药物代谢产物的含量，ELISA可以用于检测生物制药产品的纯度。
发展趋势随着科技的进步和需求的增加，免疫分析也在不断发展。
一方面，人们对检测方法的灵敏度和特异性要求越来越高，因此，在传统的基础上，需要不断改进和创新，开发出更加高效和精确的检测方法。
另一方面，人们对多参数和高通量分析的需求也越来越迫切，因此，需要发展出适用于大规模样品分析的免疫分析技术。
免疫分析
抗原的量
31
8.2 免疫分析中的分离方法
如何建立一个免疫分析方法，质量作用定律是其基础。它 要求： (1) 抗原是单一的化学物质。事实上，一个标记的抗原与 其未标记的抗原就往往有所不同； (2)抗体也应是均一的； (3)抗原和抗体均应是单价的；在一般情况下是做不到的 (4) 抗原与抗体间的反应要达到平衡状态，其微观上是可 逆的； (5) 结合相或游离相的测定必须准确，而且不受分离不完 全或非特异性吸附的影响。 上述条件一般很难都满足
35
固相免疫分离
将抗体固定在固相载体上，使特异性分析对象被抗体吸附 后得到与其他干扰物质分离。
常用固相载体
36
抗原、抗体的固相化 不论是抗原还是抗体均可固相化．并且均已被用于非均相免 疫分析。固相化方法很多，包括简单的非共价吸附和共价偶 联方式。吸附法基于塑料表面对蛋白质的吸附性能。这种方 法的缺点是缺乏重现性。共价偶联才是可靠的固定连接方法。
14
8.1.2 抗体 抗体是一类统称为免疫球蛋白(Immunoglobulin， 简写为 Ig) 的蛋白质。是机体免疫力的一类重要物
质基础，也是医学中用于疾病诊断、治疗、预防和
研究发病机理的极为重要的试剂及制剂。抗体的性
能对免疫分析是至关重要的。
15
IgG 分子的基本结构
16 Porter，1962
38
8.3 酶免疫分析
酶免疫分析(enzyme immunoassay, EIA )代表了这样一类免疫 分析方法，它利用酶催化底物的反应以产生有色的、发光的或 荧光的产物而被检测。是当前应用最广泛的免疫检测方法。 EIA 法 包 括 酶 联 免 疫 吸 附 分 析 法 (Enzyme-Linked
32
第十一章固相膜免疫分析技术
• 2、呈色性和光吸收性
• 3、稳定性
对电解质较敏感,电解质可破坏胶体金外周水化 层,而使其聚体沉淀下来。
大家应该也有点累了，稍作休息
大家有疑问的，可以询问和交流
9
(二)胶体金得制备
向一定浓度得金溶液中加入一定量得还原 剂使金离子还原成为金原子,形成金颗粒悬液。 常用得还原剂有:枸橼酸钠、白磷、乙醇、过 氧化氢、硼氢化钠、抗坏血酸、鞣酸等。
二、胶体金免疫技术得方法种类和 原理
(一)斑点金免疫渗滤试验(DIGFA) 原理:就是以硝酸纤维素膜为载 体并包被了抗 原或抗体得渗滤装置中,依次滴加标本、免疫 金及洗涤液,因微孔滤膜帖置于吸水材料上故 溶液流经渗滤装置时与膜上得抗原或抗体快 速结合并起到浓缩作用,达到快速检测目得。 阳性反应在膜上呈现红色斑点。
以枸橼酸钠为例说明制备方法:
1、制备一定浓度得HAuCl4水溶液,加热至沸。 2、搅动下准确加入一定量得枸橼酸三钠水溶液。
3、继续加热煮沸一定时间。观察溶液变化:淡黄
色 灰色 黑色
红色。
4、冷却至室温后加蒸馏水恢复至原体积。
胶体金得鉴定
主要鉴定指标有:颗粒大小、粒径得均一呈 度、有无凝集颗粒。
良好得胶体金应该就是清亮透明得,如混 浊或液体表面有漂浮物,提示制备得胶体金有 较多得凝集颗粒。
第十一章固相膜免疫分析技术
概述
• 固相膜免疫分析技术
以微孔膜作为固相载体,利用液体可以流 过微孔膜也可以通过毛细血管作用在膜上 向前移行得特性,以酶标记或各种有色微粒 子标记抗体或抗原作为标记物,通过抗原抗 体反应进行抗原或抗体检测得快速检验方 法。
固相膜免疫 分析技术
其她膜载体免疫 分析技术
斑点酶免疫吸附试验 免疫印迹试验
免疫分析技术生化分析
设计方案：
一个B淋巴细胞---只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞---能无限增殖
杂交细胞
• 单克隆抗体是大 规模细胞培养的 产物，而不是直 接来自于动物血 清。 • 制备单克隆抗体 的过程涉及到细 胞培养、细胞融 合等多种步骤。
杂交瘤技术产生的3个技术关键
1.B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的特性： B淋巴细胞（Blymphocytes）： 接受抗原刺激后，能分泌针对该抗原的特异性抗 体，在体液免疫中具有重要功能。 B淋巴细胞本身是一种终末分化细胞，通常不再进行 细胞分裂，存活一段时间后便会死亡---短命细胞
狂犬病Rabies 脊髓灰质炎 Polio
天花Smallpox virus
风疹 Rubella
肝炎 Hepatitis A 肝炎 Hepatitis B
流感Influenza 轮状病毒 Rotavirus
白喉 diphtheria Pertussis 百日咳
Comparison of maximum and current morbidity for vaccine-preventable diseases
半抗原
+
载体
完全抗原
B
B B T
B T
抗体
在青霉素进入体 内后，如果其降 解产物和组织蛋 白结合，就获得 了免疫原性，并 刺激免疫系统产 生抗青霉素抗体。 当青霉素再次注 射人体内时，抗 青霉素抗体立即 与青霉素结合， 产生病理性免疫 反应，出现皮疹 或过敏性休克， 甚至危及生命。
第一部分 抗原的类型
白喉 Diphtheria 206,939 麻疹 Measles 694,134 腮腺炎 Mumps 152,209 百日咳 pertussis 265,269 脊髓灰质炎 Polio (paralytic) 21,269 风疹 Rubella 57,686 CRS 20,000 破伤风 Tetanus 1,560 乙型流感 Heamophilus influenzae type B 20,000 乙型肝炎 Hepatitis B 26,611
免疫分析-药物分析课件
间接凝集反应
（正向）间接凝集反应
（反向）间接凝集反应
间接凝集抑制反应
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1. 凝集反应 agglutination
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2.沉淀反应（Precipitation test）
◆ 可溶性抗原（血清蛋白、细胞裂解液或组织液） 与相应抗体特异性结合且比例适当时，经过一段 时间孵育出现肉眼可见沉淀物的过程。
抗体对具有相同或相似抗原决定簇的不同抗 原发生反应，成为交叉反应（cross reaction）
11
免疫球蛋白---抗体
◆ 抗体（antibody） 由B细胞识别抗原后活化增殖分化为浆细
胞所产生的一类能与相应抗原特异性结合 的球蛋白 ◆ 免疫球蛋白（immunoglobulin， Ig）
具有抗体活性的或化学结构域抗体相似 的球蛋白
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抗原抗体的制备技术---免疫原的制备
◆ 可溶性抗原的制备 1.组织细胞抗原的制备 2.组织细胞或培养细胞可溶性抗原的制备 3.免疫球蛋白片段的制备
◆ 可溶性抗原的纯化 离心、沉淀法、凝胶过滤和离子交换层
析、亲和层析
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抗原抗体的制备技术---免疫原的制备
◆ 半抗原免疫原的制备 载体：蛋白质 多肽 大分子聚合物和某些颗粒
4
抗原
1. 免疫原性（Immunogenicity） 抗原刺激机体免疫系统产生免疫应答，诱导产 生抗体或致敏淋巴细胞的能力。
2. 抗原性（antigenicity） 抗原与相应抗体或致敏细胞发生特异性结合 反应的能力。
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抗原
◆ 完全免疫原（complete antigen） 同时具有以上两种性质。如：细菌，病毒，异种 动物血清和大多数蛋白等。
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三聚氰胺—免疫原的合成
免疫分析报告
免疫分析报告引言免疫分析是一种通过检测和测量生物体内免疫系统的反应来诊断疾病和评估免疫功能的方法。
免疫分析可以帮助医生确定某种疾病的存在、性质和严重程度，为病人提供个体化的治疗方案。
本文将介绍免疫分析的原理、常用的免疫分析方法以及其在临床医学中的应用。
免疫分析原理免疫分析是基于免疫反应的原理进行的。
免疫反应是一种生物学中的防御机制，通过识别和消灭外来入侵物质，维持机体内稳定的内部环境。
在免疫分析中，科学家们利用这种免疫反应来检测和测量特定的抗原或抗体。
免疫反应主要涉及到两种免疫细胞：B淋巴细胞和T淋巴细胞。
当机体受到外来入侵物的刺激时，这些免疫细胞会产生特定的抗体来与入侵物质结合，从而激活其他免疫细胞的参与，最终清除入侵物质并恢复机体内稳定的状态。
免疫分析利用这种特定的抗体与抗原结合的原理，在临床上广泛应用于疾病的诊断和治疗。
通过检测血液或其他体液中的特定抗体或抗原，可以确定某种疾病的存在以及病情的严重程度。
常用的免疫分析方法免疫分析方法根据检测的抗体或抗原的不同，可以分为直接免疫分析和间接免疫分析两种。
直接免疫分析直接免疫分析是指直接检测目标物质的存在与否，通常通过特定的抗体与目标物质结合，并对结合复合物进行检测和测量。
直接免疫分析方法包括：•酶联免疫吸附试验（Elisa）：Elisa是一种常用的免疫分析方法，通过酶的催化作用，将免疫反应的结果转化为可测量的光信号。
•免疫荧光法：免疫荧光法利用荧光探针与抗体或抗原的结合来进行检测。
荧光信号的强度可以表示目标物质的存在量。
间接免疫分析间接免疫分析是指通过检测与目标物质结合的第二抗体或试剂来间接检测目标物质的存在与否。
间接免疫分析方法包括：•免疫沉淀法：免疫沉淀法利用抗体与目标物质结合后，利用沉淀剂使结合复合物沉淀下来，从而检测目标物质的存在。
•免疫印迹法（Western blotting）：免疫印迹法通过电泳将蛋白质分离，然后利用抗体与目标蛋白质结合，并通过化学反应或荧光信号来检测蛋白质的存在。
免疫分析读书报告
免疫分析读书报告免疫分析作为一种重要的生物分析技术，广泛应用于医学、生物学、环境监测等领域。
通过免疫分析可以检测和测定各种生物分子，如蛋白质、抗原、抗体等，以实现对疾病的早期诊断、药物研发和环境监测等目的。
在本次读书报告中，我选择了《免疫分析实验技术》一书，深入了解了免疫分析的原理、方法和应用。
该书首先介绍了免疫系统的基本知识，包括抗原与抗体的结构和性质，免疫反应的机制和类型。
了解这些基本概念对于理解后续的免疫分析技术至关重要。
免疫反应是机体对外来物质的一种特异性防御反应，而这种特异性主要通过抗体的形成来实现。
抗体是由B细胞产生的一种具有高度特异性和亲和力的蛋白质，能够与抗原紧密结合，从而介导体内外的免疫反应。
基于此原理，免疫分析技术通过检测抗原与抗体的相互作用来实现生物分子的检测与测定。
随后，本书详细介绍了免疫分析的原理和方法。
常见的免疫分析方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫荧光技术、免疫电化学分析等。
其中，ELISA是应用最为广泛的一种免疫分析方法。
ELISA通过将抗原或抗体固定在固相载体上，利用酶标记的二抗或亲和素与目标分子结合后的产物与底物发生反应，从而测定抗原或抗体的浓度。
免疫荧光技术则利用荧光标记的抗体与目标分子结合，通过测量荧光信号的强度来检测目标分子的存在与浓度。
免疫电化学分析则是通过将抗原或抗体修饰在电极表面，利用电化学方法测定电化学信号的变化来检测目标分子。
各种免疫分析方法在原理和操作上有所差异，但都基于抗原与抗体的特异性相互作用，并利用信号指示物或检测方法来实现对目标分子的检测与测定。
在免疫分析领域，除了上述常见的方法外，还涌现了许多新的技术和方法。
书中提到了免疫芯片技术、免疫电子显微镜技术、质谱免疫分析技术等。
免疫芯片技术是将抗原或抗体固定在微型芯片上，通过微量反应室的阵列排列和多重检测技术，实现对多种目标分子的高通量检测。
免疫电子显微镜技术则利用电子显微镜观察目标分子与抗体相互作用的图像形态学变化，实现对抗体的迅速筛选和鉴定。
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磁颗粒ELISA是将两株单抗分别标记酶和异硫氰
酸荧光素(FITC)，另将一抗FITC抗体经化学反应
与磁颗粒偶联，制成可磁化固相通用分离剂。测
定时将样品和两种标记单抗加至试管中温育，然 后加入可磁化抗FITC颗粒分离剂，生成夹心免疫 复合物，洗涤，加酶底物显色。
三、酶免疫分析仪的性能评价和维护保养
粒直径0.47μm）作为固相，特异抗体或抗原包被在
微粒上。
第一次抗原抗体反应后，将反应液通过特制的玻璃 纤维膜，聚苯乙烯微粒吸附在玻璃纤维膜反应在膜上进行，标记酶为ALP，底物为4甲基伞酮磷酸酶，反应后进行荧光测定。
6、磁微粒固相酶免疫测定仪
瑞士出品的分析系统由分光光度测读仪、磁铁板 和试剂组成： 试剂包括：
抗异硫氰酸荧光素（FITC）抗体 特异抗体或抗原包被的磁微粒（颗粒直径1μm） FITC结合的特异抗体或抗原 碱性磷酸酶标记的特异抗体或抗原 什么样的反应 底物酚肽（phenolphthalein）磷酸酯
反应结束后将试管架放在磁铁板上，磁微粒被 磁铁吸引至管底，完成固相与液相的分离。酶作用 后反应液呈粉红色。
稳 定：
只要避免人为操作错误， 可连续数年良好工作。
准 确：
不存在交叉感染。反应振荡， 确保检测 准确。
高 速：
加注、读板速度快
扩 展 性：
软件可升级，样本量增加，可联机使用
用户做主更多：
开放式试剂 WINDOW操作系统 中/英/日自选操作界面 自定义编程 自动/自定义时间表 无限存档
需要了解的基本概念
酶免疫测定（Enzyme Immunoassay, EIA)
均相酶免测定 对象为小分子抗原或半抗原，主要用于药物 测定 异相酶免测定 需经过结合的标记物和游离的标记物的分离 才能测定. 分离的方法主要通过固相载体，故此法称为固相 酶免疫测定ELISA 。
ELISA的测定模式 :
4、管式固相酶免疫测定仪
1990年德国推出的全自动管式ELISA分析系统和配
套试剂
用链霉亲和素包被的聚苯乙烯管、生物素结合的抗
原或抗体，辣根过氧化物酶标记的抗体和显色底物
ABTS
测定中标准曲线可使用2星期，每次测定只需一点
定标
测定的精密度CV在3%左右
5、微粒固相酶免疫测定仪
美国生产自动酶免疫分析仪应用聚苯乙烯微粒（颗
仪器操作各单元如下（满板）
加样品时间：6-7分钟；9-10分钟（使用液面传感器） 加酶时间： 4分46秒(洗5遍，不浸泡) 加两种显色剂A、B共： 5分30秒 加终止液： 2分42秒 读板时间： 2分58秒
优势
自动化程度高：
前后处理一体化设计，减少人与样品的 接触机会，降低感染。各种自动安全检 测能。
第十一章
免疫分析技术和相关仪器
第一节 酶免疫分析仪
一、酶免疫分析技术的分类：
酶免疫分析(enzyme immunoassay，EIA)
根据是否需要分离结合与游离的酶标记物，可分为: 酶扩大免疫测定
均相酶免疫测定
克隆酶供体免疫测定 液相酶免疫法
非均相酶免疫测定
固相酶免疫法
(酶联免疫吸附测定 enzyme linked immunosorbent assay， ELISA）
测定波长：450nm
氧化耦联色原底物对 HRP的氧化耦联色原底物对主要有4氨基安替比林:苯酚耦联底物对(Trinder试剂)和2-甲基-2-苯 并噻唑啉腙(MBTH)；二甲基苯胺(DMA)耦联底物对 (Ngo—Lenhoff试剂)等。 在H202存在下，4—氨基安替比 林和苯酚经HRP作用缩合形成红色的醌亚胺，其在492 nm
间接法原理
标记抗体 （二抗） 待测抗 体
包被体
包被抗 原
俘获法原理
标记抗原
待测抗体 俘获抗体 （二抗） 包被体
双抗原夹心法原理
标记抗原 待测抗体 包被抗原 包被体
我们把采用酶标的方法测定物质含量的设备称为
酶标仪。
一般简单的酶标仪只有读数、数据处理的功能，
还需要配置孵育箱，洗板机，人工操作步骤繁琐
。
全自动酶联免疫系统集加样品、加试剂、孵育
、震荡、洗板、读数、数据处理7大功能于一体。
二、酶免疫分析仪的类型、工作原理及
基本结构
微孔板固相酶免疫测定仪器(酶标仪) 半自动微孔板ELISA分析仪 全自动微孔板ELISA分析仪 管式固相酶免疫测定仪器 小珠固相酶免疫测定仪器 磁微粒固相酶免疫测定仪器等
（一）评价指标和方法
1．滤光片波长精度检查及其峰值测定 2．灵敏度和准确度 3．通道差与孔间差检测 4．零点飘移 5．精密度评价 6．线性测定 7．双波长评价
重点是光学部分
1．滤光片波长精度检查 2．通道差与孔间差检测
四、酶免疫分析仪的临床应用
１．病原体及其抗体的检测 2．各种免疫球蛋白和细胞因子、补体等 3．肿瘤标志物 4．多种激素 5．药物和毒品
处有最大吸收
492nm，同时摩尔消光系数变大，显色加深。因而常用强
酸如硫酸或盐酸终止反应。OPD的缺点是其对机体具有致 突变作用。
TMB的显色反应虽与OPD一样同属氧化还原反应，但前者 的反应是可逆的，如终止液中存在还原剂(维生素C及亚硫 酸钠、SDS等)，则可反应显色迅速消退。TMB虽然溶解度 相对较低，但由于其高检测敏感性及无致突变作用，现已 基本上取代了OPD而成为HRP最为常的色原底物。
辣根过氧化物酶的色原底物
HRP最常用的色原底物有:
邻苯二胺(OPD)、2，2’-吖嗪-(3-乙酰苯基噻唑磺酸6)[ABTS](杂环吖嗪)
四甲基联苯胺(TMB) 4-氨基安替比林：苯酚耦联底物对
OPD被认为是HRP最为敏感的色原底物之一，其在HRP的 作用下，由过氧化氢(H202) 氧化而聚合成2，2’-二氨基偶 氮苯(DAB)。在pH5.0左右时，DAB在波长450nm处有广范 围的最大吸收，当pH值降为1.0时，最大吸收波长移动至
1、微孔板固相酶免疫测定仪器
有单通道和多通道两种类型
工作原理与主要结构和光电比色计相同
不同之处在于：
比色液的容器是塑料微孔板 以垂直光束通过待测液 通常使用光密度OD来表示吸光度
2、半自动微孔板式ELISA分析仪
在酶标仪的基础上再配置:
加液器 温育器 洗板机 测读仪 测定中需由手工将微孔板移至下一步骤的仪器中进行。
双抗体夹心法 间接法 竞争法
双抗体夹心法（三明治法）原理
待测物 标记抗体
包被抗体
固相支持物表面
夹心法的剂量--反应关系曲线
信号强度（Y）
Hook效应
线性范围
待测物浓度（X）
竞争法的原理
待测物
标记抗原 包被抗体
固相支持物表面
竞争法的剂量--反应关系曲线
信号强度（ Y ）
线性范围
待测物浓度（ X ）
3、全自动微孔板式ELISA分析仪
自动化酶免疫分析系统由:
加样系统
温育系统
洗板系统
判读系统
机械臂系统 液路动力系统 软件控制系统等组成
温育箱
反应板
迭式存储器
X-Y头架
样品架
50根装 50×3
4根独立 上下吸 移管
检 测
光 纤
反应板
反应板 夹具
清
洗 装 置
供水箱
废水箱
检测时间:以乙肝两对半（立可读）为例