第九章 高效液相色谱实验技术
高效液相色谱分析实验
高效液相色谱分析实验高效液相色谱(HPLC)是一种用于分离、检测和定量分析化学样品的分析技术，具有高分辨率、高灵敏度和高选择性。
在实验室中，HPLC广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全等领域。
本文将介绍HPLC的实验原理、步骤及关键技术。
一、实验原理HPLC的原理是将混合物通过高压注射，经过固定相柱进行分离。
在HPLC中，固定相柱是最重要的组成部分之一，它可以根据样品之间的化学性质选择不同的固定相柱，如反相柱、离子交换柱、手性柱等。
在HPLC实验中，样品可以通过两种方式进样，一种是自动进样器，另一种是手动进样。
进样器将样品注入进样站点后，通过高压泵将样品推入柱子中，样品在柱子中分离后，被通过光学检测器检测，进而得到分离的结果。
二、实验步骤1.样品准备：根据实验要求，准备需要进行分析的物质样品，将其溶解或稀释到适当的浓度。
2.选择柱子：根据样品的性质选择适当的固定相柱。
例如，如果样品是极性的，则选择反相柱。
3.设定实验条件：根据样品的特征和实验需求，设置高压泵的流速、检测器、柱温等参数。
4.样品进样：将样品使用自动进样器或手动进样器进行进样。
5.柱子分离：开启高压泵，将样品推入柱子中。
样品将在柱子中根据化学性质进行分离。
6.数据检测和记录：通过光学检测器检测样品的峰值，并记录分离结果。
可以使用计算机软件进行数据分析。
7.清洗和重用：实验完成后，需要对HPLC仪器进行清洗和重置，以便下次使用。
三、关键技术1.换柱：为了保证实验结果的准确性和可靠性，柱子需要定期更换。
柱子的寿命取决于样品的特性和使用情况。
2.校准标准品：在实验中使用标准品校准HPLC仪器，以确保仪器的准确性和灵敏度。
3.优化实验条件：通过改变流速、温度、柱子等实验条件，可以优化分离效果。
4.检测器选择：根据样品的性质选择合适的检测器，例如紫外检测器、荧光检测器等。
5.数据分析：使用HPLC软件对数据进行分析，生成和保存分析报告。
四、实验安全1.注意个人防护：在操作HPLC仪器时，应佩戴安全防护眼镜和手套，避免接触有害物质。
高效液相色谱实验
1、了解HPLC的结构和流程及操作方法；2、了解流动相的制备和样品溶液的制备；3、掌握该仪器的运行程序和具体操作内容；4、学会用HPLC对样品进行分析，并从图谱中获得有用数据。
二、实验原理高效液相色谱由储液器，泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成，储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动，经过反复多次的吸附—解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。
三、仪器和试剂1、仪器：美国安捷伦1200型HPLC一台（如图一）、50μL的微量注射器一个图一、常见的HPLC图2、试剂：磷酸乙腈溶液(PH=3)、重蒸水、邻氯苯甲酸1、流动相的准备 流动相只有一组：PH=3的磷酸乙腈溶液，进过脱气，用蠕动泵输送。
2、样品溶液的准备配置好邻氯苯甲酸溶液，按要求选好滤纸的孔径大小。
用低压过滤装置过滤，由于美国安捷伦1200型HPLC 配有脱气装置，因此滤液无需事先脱气就可以进行分析。
3、开机 当2完成后，开机，待色谱柱平衡。
4、基线的查看由于仪器内部压力的变化可以引起基线的不断波动，因此，需等待压力稳定后，基线平稳才能进行进样。
5、样品进样分析用微量注射器取10μL 的邻氯苯甲酸，微量注射器中不能有气泡，将微量注射器的针头插入到注射的孔时，打开微量注射阀，将邻氯苯甲酸注射进去后，迅速关闭阀门，抽出针头，等待仪器的分析结果。
6、色谱柱的清洗分析工作结束后，要清洗进样阀中的残留样品，也要用甲醇溶液来清洗色谱柱。
7、关机实验完毕后，关闭仪器和电脑。
五、实验数据及处理1、LC 参数表5-1 LC 参数数据表温度 流速 停止时间VWD 信号 后运行时间 最大压力 最小压力 25.0℃ 1.000 mL/min0.00 min236 nm0.00 min300 bar0 bar2、色谱柱参数 色谱柱柱子 柱长 柱子内径 运行压力 C18150 mm4.6mm88bar表5-2色谱柱参数表3、根据色谱分析谱图（见附页），经过注射10μL 的邻氯苯甲酸，得到了三组实验色谱图，列出谱图上的数据如下表：峰 # 保留时间/min 类型 峰宽/min 峰面积/mAU*s 峰高/mAU 峰面积/% 1 1.411VV 0.3191 76.03598 3.25529 0.3692 2 2.444 VV 0.1151 2.03350e4 2806.48608 98.7468 33.220VBA0.1189159.4780720.732140.7744表5-3 实验数据表4、理论塔板数的计算与分析已知，色谱柱长(L)、理论塔板高度(H)与理论塔板数(n)三者的关系为： n = L / H而且，理论塔板数和色谱参数之间的关系为： n = 16 ( t R / W b ) 2 = 5.54 ( t R / Y 1/2 ) 2 取第1组的数据计算可以得到： t R = 1.411 min = 84.66 sY 1/2 = 2.354(0.3191 / 4 ) =0.1878min= 11.27 s 则：n 1= 5.54 ( t R / Y 1/2 ) 2 = 313 (块)同上法，得到其他两组的理论塔板数：n 2=7227(块) n 3=11732(块)根据塔板理论，单位住长的理论塔板数越多，表明柱效越高，则可以得出，保留时间越长，色谱柱分离效能的越好。
高效液相色谱测定
高效液相色谱测定；
色谱条件与系统适用性实验：
以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（25：75）为流动相；检测波长为250nm，理论板数按葛根素峰计算应不底于4000。
对照品溶液的制备：
精密称取葛根素对照品10mg，置25ml量瓶中，加30%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。
精密量取2ml，置10ml量瓶中，加30%乙醇至刻度，摇匀，即得（每1ml 中含葛根素80ug）。
供试品溶液的制备：
取本品粉末（过三号筛）约0.1g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入30%乙醇50ml，称定重量，加热回流30分钟，放冷，再称定重量，用30%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品按干燥品计算，含葛根素不得少于2.4%
1。
高效液相色谱技术
高效液相色谱技术
高效液相色谱(HPLC)技术是一种用于分离、纯化、定性和定量分析溶液中化合物的技术。
它是在液相色谱技术基础上发展起来的，具有分离能力强、分辨率高、灵敏度高、分析速度快等优点。
HPLC技术的核心是色谱柱和溶液泵。
色谱柱是分离样品的重要部分，根据不同的分离目标可以选择不同类型的柱子，例如反相柱、离子交换柱、大小分子排阻柱等。
溶液泵用于将样品溶液以一定的流速推动通过色谱柱，保持流动相的恒定。
高效液相色谱技术主要包括以下几个步骤：
1. 样品预处理：将待分析样品进行处理，如提取、浓缩、溶解等，以便于后续的分析。
2. 进样：将样品注入到进样装置中，通过自动或手动控制，精确地给定进样体积。
3. 分离：在色谱柱中根据样品分离目标的性质和柱上固定相的特性，通过流动相的带动将样品分离。
4. 检测：利用检测器检测样品的浓度或质量，并将信号转化为电信号输出。
5. 数据处理：通过对检测器输出信号的处理和计算，得到对样品的定性和定量分析结果。
高效液相色谱技术在许多领域得到广泛应用，如药学、环境监测、食品安全等。
它能够对样品中的化合物进行高效、灵敏、准确的分离和分析，为科研和工业生产提供了强有力的工具。
高效液相色谱实验报告
高效液相色谱实验报告一、实验目的。
本实验旨在通过高效液相色谱技术，对给定的混合物进行分离和分析，掌握高效液相色谱仪的操作方法，以及对不同成分的定量分析。
二、实验原理。
高效液相色谱（HPLC）是一种高效、灵敏、准确的分析技术，它利用高压泵将样品溶液以高压送入色谱柱，通过与填料相互作用而进行分离。
在色谱柱中，不同成分将因其在填料中的亲和力不同而被分离开来。
通过检测器检测各个组分的峰面积或峰高，从而进行定量分析。
三、实验步骤。
1. 样品制备，将待分析的混合物溶解于适当的溶剂中，并进行过滤处理。
2. 色谱柱准备，连接色谱柱，并进行平衡处理。
3. 仪器调试，将色谱仪的流动相、检测器等参数进行调试。
4. 样品进样，将处理好的样品通过自动进样器送入色谱柱。
5. 数据采集，通过色谱仪软件进行数据采集和记录。
6. 数据分析，根据色谱图进行各组分的峰识别和定量分析。
四、实验结果。
通过本次实验，我们成功地对给定的混合物进行了分离和定量分析。
得到了混合物中各组分的峰面积和峰高，并通过标准曲线进行了定量分析。
实验结果表明，本实验的色谱分离效果良好，各组分分离度高，定量分析结果准确可靠。
五、实验总结。
通过本次实验，我们掌握了高效液相色谱技木的基本操作方法，了解了色谱柱的选择和调试、样品的制备和进样、数据采集和分析等基本步骤。
同时，我们也认识到了高效液相色谱技术在化学分析中的重要性和广泛应用性。
希望通过今后的实验操作，能够进一步提高我们的操作技术和分析能力。
六、参考文献。
1. Skoog, D. A., Holler, F. J., & Crouch, S. R. (2017). Principles of instrumental analysis. Cengage Learning.2. Snyder, L. R., Kirkland, J. J., & Glajch, J. L. (2011). Practical HPLC method development. John Wiley & Sons.以上就是本次高效液相色谱实验的全部内容，希望对大家有所帮助。
高效液相色谱实验报告
高效液相色谱实验报告引言：高效液相色谱(HPLC)是一种基于溶液动力学的分析方法，广泛应用于药学、化学、生物学等领域。
本实验旨在通过HPLC技术，分离和鉴定复杂混合物中的化合物，并探究其分离机制。
实验方法：1. 样品制备：取一定比例的复杂混合物样品，将其溶解于合适的溶剂中，得到均匀的样品溶液。
2. 色谱柱选择：根据样品性质和分离目标，选择合适的色谱柱和填料。
3. 流动相选择：根据样品溶解度和分离效果，选择合适的流动相组成和pH值。
4. 色谱条件设置：设置适当的进样量、流速和温度等参数，优化分析条件。
5. 样品进样：通过自动进样器将样品溶液注入色谱柱。
6. 梯度洗脱：通过调节流动相组成或浓度梯度，实现目标化合物的分离。
7. 检测器选择：根据样品性质和目标化合物的特征，选择合适的检测器。
8. 数据分析：利用色谱软件分析检测到的信号，得到峰面积和保留时间等参数。
实验结果：本实验以植物提取物为样品，以色谱柱A为分离柱，以甲醇-水（70:30）为流动相，在室温下进行HPLC分析。
优化的分析条件为：进样量为10 μL、流速为1 mL/min、检测波长为254 nm。
在色谱图中，观察到多个峰出现，对比标准品峰的保留时间和UV-Vis吸收谱与该峰相似度，结合质谱分析，成功鉴定了4种化合物：峰1为黄酮类化合物，峰2为苯丙素类化合物，峰3为生物碱类化合物，峰4为酚类化合物。
讨论：通过本实验，我们可以看到HPLC技术的优势和应用价值。
首先，HPLC可以对复杂混合物进行高效、准确的分离和定量分析，为后续鉴定提供了重要数据。
其次，HPLC操作简便，结果可靠，且可适用于不同种类的样品。
此外，优化实验条件对提高分析效果至关重要，需要通过不断试验和调整，找到最佳条件。
然而，HPLC仍存在一些局限性。
首先，HPLC分析所需的仪器设备和耗材相对昂贵，需要较高的投资成本。
其次，样品制备和前处理过程可能引入误差，影响分析结果的准确性。
高效液相色谱实验报告
联苯、甲苯、萘和菲以及它们混样的高效液相色谱分析实验目的1.熟练掌握高效液相色谱相关仪器的操作流程。
3.通过谱图分析，掌握运用谱图数据处理目标物质的方法。
一、实验原理色谱分析是运用物质在固定相和流动相两相间的分配系数不同而达到分离，它是一种分离技术，主要目的是对混合物中目标产物进行分离并定量分析的一种技术。
二、实验内容运用高效液相色谱仪测定联苯、甲苯、萘和菲以及四者混合物的色谱，熟练仪器的相关操作流程，能从检测的谱图中定性的指认四者峰的归属，并能定量的描述四者混合物中各自的相对含量。
三、实验步骤1、打开仪器电源开关，让仪器预热一段时间，此时可准备待测样品；2、待仪器运转正常，打开测试软件，先用甲醇清洗柱子（在Load状态下进样，分析时在Inject状态下）；3、进样状态下插入微量注射器，切到装填状态，注入样品，切回到进样状态。
4、点击分析按钮，输入分析的样品名；5、数据分析，通过软件查看积分面积。
五、实验结果液相色谱图0.00.51.01.52.0 2.53.0 3.54.0 4.55.0 5.56.0min0.01.02.03.04.05.06.0mV(x100)Detector A:254nm1.722/156063.034/11168863.383/7097684.037/25429775.046/7069594（2）联苯0.01.02.03.04.05.06.07.08.09.0min0.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.05.56.06.5mV(x100)Detector A:254nm1.7312.5784.1475.2130.01.02.03.04.05.06.07.08.09.0min0.00.51.01.52.02.53.03.54.04.55.0mV(x10)Detector A:254nm1.7213.0433.4084.0845.152（4）甲苯0.01.02.03.04.05.06.07.0min0.00.51.01.52.02.53.03.5mV(x10)Detector A:254nm1.7213.0565.193（5）菲0.01.02.03.04.05.06.07.0min0.01.02.03.04.05.06.07.0mV(x100)Detector A:254nm1.7303.4065.075谱图分析：依据各个物种标样的色谱图可以知道他们各自的出峰时间大致为：菲：5.075min ；联苯：4.147 min ；萘：3.408 min ；甲苯：3.032 min ；故此可以判断混样中出峰位置所对应的物种，5.046 min 对应为菲，4.037 min 对应为联苯，3.383 min 对应为萘，3.034 min 对应为甲苯。
高效液相实验报告
一、实验目的1. 熟悉高效液相色谱（HPLC）的基本原理和操作方法。
2. 掌握液相色谱仪的构造及其各部分的功能。
3. 学习并运用高效液相色谱法对样品进行分离和定量分析。
二、实验原理高效液相色谱法是一种利用高压液体作为流动相，通过固定相对样品进行分离和分析的技术。
其原理基于不同物质在固定相和流动相之间的分配系数差异，从而实现分离。
实验中，样品经过高压泵送入色谱柱，在流动相的作用下，不同物质在色谱柱中停留时间不同，从而实现分离。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：高效液相色谱仪、色谱柱、流动相过滤器、样品瓶、高压泵、检测器、数据工作站等。
2. 试剂：乙腈、甲醇、水、磷酸、氨水等。
四、实验步骤1. 样品准备：准确称取一定量的待测样品，用适当溶剂溶解，配制成一定浓度的溶液。
2. 流动相配置：根据实验要求，配置合适的流动相，并进行过滤。
3. 色谱柱准备：将色谱柱安装在色谱仪上，用流动相进行冲洗，去除色谱柱中的杂质。
4. 上样：将配制好的样品溶液注入色谱仪，通过高压泵送入色谱柱。
5. 分离：在流动相的作用下，样品中的各组分在色谱柱中依次流出。
6. 检测：利用检测器对流出物进行检测，记录色谱图。
7. 数据分析：利用数据工作站对色谱图进行分析，计算各组分的含量。
五、实验结果与分析1. 样品分离：实验中，样品中的各组分在色谱柱中得到了有效分离，分离效果良好。
2. 定量分析：根据标准曲线，计算各组分的含量，结果如下：| 组分名称 | 含量（%） || -------- | -------- || 组分1 | 2.5 || 组分2 | 1.8 || 组分3 | 0.9 || 组分4 | 0.5 |3. 误差分析：实验过程中，可能存在以下误差：- 仪器误差：色谱仪、检测器等仪器本身的精度和稳定性对实验结果有一定影响。
- 试剂误差：试剂的纯度和浓度对实验结果有一定影响。
- 操作误差：实验操作不规范、样品处理不当等因素可能导致误差。
高效液相色谱实验技术问题解答
1、高效液相色谱是如何实现高效、快速、灵敏的?解：气相色谱理论和技术上的成就为液相色谱的发展创造条件，从它的高效、高速和高灵敏渡得到启发，采用5一10四微粒出定相以提高柱效，采用高压泵加快液体流动相的流速;设计高灵敏度、死体积小的紫外、荧光等检测器，提高检测灵敏度，克服经典液相色谱曲缺点，从而到达高效、快速、灵敏。
2、与气相色谱法相比高效液相色谱有哪些优点和不足?解：气相色谱的分析对象是在校温下具有一定的挥发性、对热稳定购物质。
因此它只限于分析气体和沸点低的化合物或挥发性的衍生物。
而高效液相色谱由于以液体作为流动相，只要被分析的物质在选用的流动相中有一定的按解度，便可以分析，所以适用性广，不受样品挥发性和热稳定性的限制，特别适合于那些沸点高、极性强、热稳定性差的化合物，例如，生化物质和药物、离子型化合物、热稳定性差的天然产物等。
在目前已知的有机化台物中，只有20%样品可不经化学处理而能满意地用气相色谱别离，80%的有机化合物要用高效液相色谱分析。
气相色谱中流动相是惰性的，它对组分没有作用力，仅起运载作用、而高效液相色谱的流动相不仅起运载作用，而且流动相对组分有一定亲合力，可以通过改变流动相种类和组成提高别离的选择性，另外可作流动相的化合物多，选择余地广。
与气相色谱相比，高效液相色谱的另一个优点是样品的回收比较容易，只要开口容器放在柱子末端，就可以很容易地将所别离的各组分收集。
回收是定量的，可以用来提纯和制备具有足够纯度的单一物质。
高效液相色谱不足的是，日前检测器的灵敏度不及气相色谱。
必须特别注意“柱外效应”对柱效率及色谱别离的影响。
3、试比较气相色谱与液相色谱的H-u曲线，分析产生不同的原因。
解：从图可看出，气相色谱和液相色谱得到的H-u曲线，形状迥然不同，流动相的流速对柱效的影响也不一样，在气相色谱的H-u曲线上，塔板高度H随u变化呈双曲线.曲线有一最低点，这时柱效最高，板高最小，流速最正确。
高效液相色谱实验报告
高效液相色谱实验报告一、实验目的：1.学习并掌握高效液相色谱法的基本原理及操作方法；2.熟悉高效液相色谱分析仪的结构和性能；3.进行一些标准品的测定，验证高效液相色谱法的分析准确性和重复性。
二、实验原理：三、实验步骤：1.打开高效液相色谱仪的电源，启动设备，待仪器稳定后进行下一步操作。
2.准备待测样品溶液，并过滤以去除杂质。
3.打开进样器盖，将待测样品溶液通过注射器注入进样器。
4.设置流动相的组成和流速，并调节柱温箱温度，使样品能够顺利分离。
5.打开检测器并进行基线校正，确保仪器正常工作。
6.开始自动分析，记录输出数据。
7.报告结果并进行数据分析。
四、实验结果：本实验使用高效液相色谱法对其中一标准品进行分析测定，得到了一系列数据，具体如下：峰1：保留时间为10.345min，峰面积为1246.78mm^2；峰2：保留时间为12.789min，峰面积为1843.56mm^2；峰3：保留时间为15.367min，峰面积为2150.89mm^2；...五、实验讨论：通过高效液相色谱法的分析测定，我们可以得到样品中各组分的保留时间和相对峰面积。
根据实验结果，我们可以推测样品中可能存在着一些特定的化合物。
并且，我们还可以通过峰面积的大小来估计样品中各组分的含量，从而进行定量分析。
值得注意的是，在实验过程中，我们需要严格控制各个参数的稳定性，以确保结果的准确性和重复性。
同时，对于一些复杂样品的分析，可能需要进行柱后衍生化或其他特殊处理，以增强分离效果。
六、实验总结：通过本次实验，我们学习并掌握了高效液相色谱法的基本原理和操作方法，了解了高效液相色谱仪的结构和性能。
同时，通过对标准品的测定，验证了高效液相色谱法的分析准确性和重复性。
高效液相色谱法作为一种重要的分析方法，在科研和工业生产中有着广泛的应用前景。
[1]汪仲良，杨正葆，胡冬琴，杨建民.分析化学.高等教育出版社。
[2]高效液相色谱技术与应用.化学工业出版社。
高效液相色谱实验测定叶绿素
实验九高效液相色谱法同时测定叶绿素和类胡萝卜素学时：4一、实验目的1、了解高效液相色谱在叶绿体色素全分析的应用。
2、掌握生物样品的高效液相色谱实验技术。
3、初步掌握梯度洗脱实验技术。
二、实验原理从植物提取液分离出来的叶绿素和胡萝卜素已发现有多种异构体，而且常常是同时存在的。
因此对叶绿素和胡萝卜素的深入研究较为困难。
高效液相色谱既能对单一组分进行定量，又能对混合物中的多组分在分离的基础上进行定量。
既能用于主要成分的含量测定，又能用于微量和痕量组分的测定。
高效液相色谱是一种准确度好和精密度高的分析技术。
因此，尽管难以得到所有的植物色素标准品，但高效液相色谱技术仍被认为是研究叶绿素和胡萝卜素的一种最有效手段。
叶绿体色素提取液可以采用正相或反相高效液相色谱法分析，实验表明，反相高效液相色谱法更加方便。
但由于色素提取液各组分的极性差别较大，等度洗脱可能使某些组分的分离不够完全。
因此，对植物色素提取液的全分析应采用梯度洗脱方式以改善分离和缩短分析时间。
本实验采用高效液相色谱法可对绿色植物叶片提取液中的色素进行较全面的分离，并直接测定叶绿素a、叶绿素b和β-胡萝卜素的含量。
三、实验仪器与试剂1、仪器TSP高压梯度HPLC仪，3500-3200型高压梯度泵，UV-2000型双波长吸收检测器，Rheodyne 7725i六通进样阀，PC1000色谱工作站，微量进样器（100 µl），CQ - 50超声波除气装置，Hypersil BDS C18( 4.0mm×200 mm，5μm)。
2、试剂叶绿素a、叶绿素b和β-胡萝卜素纯品为Sigma公司产品，甲醇、二氯甲烷和乙腈为液相色谱淋洗剂，实验用水为二次去离子水（娃哈哈纯净水），经玻璃系统重蒸馏。
四、实验步骤1、色素的提取取0.5 g左右干净的新鲜的去脉菜叶，准确称重。
剪碎，置于研钵中，加0.1 g MgCO3和 5 mL 90% 丙酮，研磨至浆状，分次加入5 mL 丙酮，沥出提取液。
高效液相色谱实验报告
高效液相色谱实验报告
实验目的：
通过高效液相色谱仪分离和测定混合物中的化合物。
实验原理：
高效液相色谱（HPLC）是一种利用高压将样品中的化合物推
动通过填充在柱中的固相材料的分离技术。
在HPLC中，样
品溶液通过溶剂泵被推入柱中，然后溶剂流经柱床，在样品中的化合物与柱床中的固体相互作用，导致化合物被分离。
随后，溶剂中的化合物传送到检测器中进行检测。
实验步骤：
1. 准备样品溶液：将待测混合物溶解在适当的溶剂中。
2. 准备色谱柱：安装和预平衡色谱柱，选择适当的柱材、填料和流动相。
3. 设置色谱仪参数：设置流动相的流速、温度和检测器等参数。
4. 注入样品：使用自动进样器或手动注射器，将样品溶液注入进样器中，并注入色谱柱。
5. 进行分离：根据样品的特性和需要，使用适当的温度和梯度程序，进行分离。
6. 检测：将溶剂与样品中的化合物一起传送到检测器中，并记录峰高、峰宽和保留时间等数据。
7. 数据分析：通过对峰的分析，确定混合物中各成分的相对含量。
8. 清洗和保养设备：完成实验后，清洗和保养色谱柱和色谱仪
设备。
实验结果：
根据分离得到的色谱图，通过分析峰的保留时间和峰面积，确定混合物中各成分的相对含量。
实验结论：
高效液相色谱是一种有效的分离方法，能够对混合物中的化合物进行准确的分离和测定。
根据实验结果，我们可以得到混合物中各组分的含量信息，并进一步进行结构解析和质量控制等工作。
高效液相色谱法实验报告
一、实验目的1. 了解液相色谱的发展历史及最新进展。
2. 学习液相色谱的基本构造及原理。
3. 掌握液相色谱的操作方法和分析方法，能够通过HPLC分离和检测样品。
二、实验原理高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种利用高压泵将液体流动相输送至装有固定相的色谱柱，对混合物进行分离和分析的方法。
根据固定相和流动相的极性差异，将混合物中的组分分离，再通过检测器检测各个组分，从而实现对样品的分析。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：高效液相色谱仪、色谱柱、流动相储液体瓶、输液泵、进样器、检测器、记录器等。
2. 试剂：甲醇、磷酸、标准样品、待测样品等。
四、实验步骤1. 准备色谱柱：将色谱柱安装在色谱仪上，连接好各部件，调节好流速和温度。
2. 配制流动相：根据实验要求，将甲醇和磷酸按照一定比例混合，配制成流动相。
3. 进样：将待测样品溶解于流动相中，用进样器将一定量的样品注入色谱柱。
4. 分离：流动相通过色谱柱，根据固定相和流动相的极性差异，将样品中的组分分离。
5. 检测：分离后的组分进入检测器，检测器将信号传输至记录器，记录各个组分的峰面积。
6. 数据处理：将记录器上的数据输入计算机，进行数据处理和分析。
五、实验结果与分析1. 样品分离：根据色谱图，可以观察到待测样品中各个组分的峰，证明液相色谱法可以将样品中的组分分离。
2. 线性关系：在一定的浓度范围内，峰面积与样品浓度呈线性关系，说明该方法具有良好的线性。
3. 精密度：重复进样，观察峰面积的相对标准偏差（RSD），RSD越小，说明实验结果越稳定。
4. 灵敏度：通过减小进样量，观察峰面积的变化，说明该方法具有良好的灵敏度。
六、实验结论1. 本实验成功实现了待测样品的分离和检测，证明液相色谱法在样品分析中的应用价值。
2. 液相色谱法具有分离效能高、灵敏度高、操作简便等优点，适用于多种样品的分析。
高效液相色谱实验报告
高效液相色谱实验报告一、实验目的1了解液相色谱的发展历史及最新进展2 学习液相色谱的基本构造及原理3 掌握液相色谱的操作方法和分析方法，能够通过HPLC分离测定来对目标化合物的分析鉴定。
二、实验原理液相色谱法采用液体作为流动相，利用物质在两相中的吸附或分配系数的微小差异达到分离的目的。
当两相做相对移动时，被测物质在两相之间进行反复多次的质量交换，使溶质间微小的性质差异产生放大的效果，达到分离分析和测定的目的。
液相色谱与气相色谱相比，最大的优点是可以分离不可挥发而具有一定溶解性的物质或受热后不稳定的物质，这类物质在已知化合物中占有相当大的比例，这也确定了液相色谱在应用领域中的地位。
高效液相色谱可分析低分子量、低沸点的有机化合物，更多适用于分析中、高分子量、高沸点及热稳定性差的有机化合物。
80%的有机化合物都可以用高效液相色谱分析，目前以已经广泛应用于生物工程、制药工程、食品工业、环境检测、石油化工等行业。
三、高效液相色谱的分类吸附色谱法、分配色谱法、空间排阻色谱法、离子交换色谱法、亲和色谱法、化学键合相色谱法四、高效液相色谱仪的基本构造高效液相色谱至少包括输液系统、进样器、分离柱、检测器和数据处理系统等几部分。
1 输液系统：包括贮液及脱气装置、高压输液泵和梯度洗脱装置。
贮液装置用于存贮足够量、符合HPLC要求的流动相。
高效液相色谱柱填料颗粒比较小，通过柱子的流动相受到的流动阻力很大，因此需要高压泵输送流动相。
2 进样系统：将待测的样品引入到色谱柱的装置。
液相色谱进样装置需要满足重复性好、死体积小、保证柱中心进样、进样时引起的流量波动小、便于实现自动化等多项要求。
进样系统包括取样、进样两项功能。
3 分离柱：色谱柱是色谱仪的心脏、柱效高、选择性好、分析速度快是对色谱柱的一般要求。
商品化的HPLC微粒填料，如硅胶和以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球（包括离子交换树脂）等的粒度通常在3μm、5μm、7μm、以及10μm。
高效液相色谱法分离实验
高效液相色谱实验高乃群实验目的：1 进一步理解高效液相色谱的基本原理；2 熟悉高效液相色谱仪器的构成；3 了解影响高效液相色谱分离的主要操作参数。
实验原理：1. 基本原理在互不相溶的两相——流动相和固定相的体系中，当两相作相对运动时，第三组分（即溶质或吸附质）连续不断地在两相之间进行分配，这种分配过程即为色谱过程。
由于流动相、固定相以及溶质混合物性质的不同，在色谱过程中溶质混合物中的各组分表现出不同的色谱行为，从而使各组分彼此相互分离，这就是色谱分析法的实质。
也就是说，当一种不与被分析物质发生化学反应的被称为载气的永久性气体（例如H2、N2 、He、 Ar 、CO2等）携带样品中各组分通过装有固定相的色谱柱时，由于试样分子与固定相分子间发生吸附、溶解、结合或离子交换，使试样分子随载气在两相之间反复多次分配，使那些分配系数只有微小差别的组分发生很大的分离效果，从而使不同组分得到完全分离，例如一个试样中含A、B二个组分，已知B组分在固定相中的分配系数大于A，即K B > K A，如图1-1所示。
当样品进入色谱柱时，组分A、B以一条混合谱带出现，由于组分B 在固定相中的溶解能力比A大，因此组分A的移动速度大于B，经过多次反复分配后，分配系数较小的组分A首先被带出色谱柱，而分配系数较大的组分B则迟被带出色谱柱，于是样品中各组分达到分离的目的。
设法将流出色谱柱某组分的浓度变化用电压、电流信号记录下来，便可逐一进行定性和定量分析。
2.高效液相色谱法的分类及其分离原理液-固色谱法液—液色谱法离子交换色谱法凝胶色谱法a.液-固色谱法（液-固吸附色谱法）固定相是固体吸附剂，它是根据物质在固定相上的吸附作用不同来进行分配的。
①液-固色谱法的作用机制吸附剂：一些多孔的固体颗粒物质，其表面常存在分散的吸附中心点。
流动相中的溶质分子X(液相)被流动相S带入色谱柱后，在随载液流动的过程中，发生如下交换反应： X(液相)+nS(吸附)<==>X(吸附)+nS(液相)其作用机制是溶质分子X(液相)和溶剂分子S(液相)对吸附剂活性表面的竞争吸附。
高效液相色谱实验
实验1 气相色谱分析条件的选择和色谱峰的定性鉴定一、目的要求1.了解气相色谱仪的基本结构、工作原理与操作技术；2.学习选择气相色谱分析的最佳条件，了解气相色谱分离样品的基本原理；3.掌握根据保留值，作已知物对照定性的分忻方法。
4.掌握归一化法测定混合物各组分的含量。
二、基本原理气相色谱是对气体物质或可以在一定温度下转化为气体的物质进行检测分析。
由于物质的物性不同，其试样中各组份在气相和固定液液相间的分配系数不同，当汽化后的试样被载气带入色谱柱中运行时，组份就在其中的两相间进行反复多次分配，由于固定相对各组份的吸附或溶解能力不同，虽然载气流速相同，各组份在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定时间的流动后，便彼此分离，按顺序离开色谱柱进入检测器，产生的讯号经放大后，在记录器上描绘出各组份的色谱峰。
根据出峰位置，确定组分的名称，根据峰面积确定浓度大小。
对—个混合试样成功地分离，是气相色谱法完成定性及定量分析的前提和基础。
而其中气相色谱分离条件的选择至为关键。
主要涉及以下几个方面：1. 载气对柱效的影响：载气对柱效的影响主要表现在组分在载气中的扩散系数D m(g)上，它与载气分子量的平方根成反比，即同一组分在分子量较大的载气中有较小的D m(g) 。
根据速率方程：（1）涡流扩散项与载气流速无关；（2）当载气流速u 小时，分子扩散项对柱效的影响是主要的，因此选用分子量较大的载气，如N2、Ar，可使组分的扩散系数D m(g)较小，从而减小分子扩散的影响，提高柱效；（3）当载气流速u 较大时，传质阻力项对柱效的影响起主导作用，因此选用分子量较小的气体，如H2、He 作载气可以减小气相传质阻力，提高柱效。
2. 载气流速（u）对柱效的影响：从速率方程可知，分子扩散项与流速成反比，传质阻力项与流速成正比，所以要使理论塔板高度H最小，柱效最高，必有一最佳流速。
对于选定的色谱柱，在不同载气流速下测定塔板高度，作H-u 图。
高效液相色谱分析实验
高效液相色谱分析实验高效液相色谱分析（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种高分辨率、高灵敏度的分析技术，被广泛用于判断物质的化学性质和分析化学成分。
在分析过程中，液相色谱柱起着关键作用，能够分离出分子混合物中的单个化合物。
本文将介绍高效液相色谱分析实验的基本步骤。
1. 样品的制备样品的制备是高效液相色谱分析实验中非常关键的一步。
首先，需要确定要测量的分析化学成分，并准备代表性样品。
在制备样品的过程中，可能需要对样品进行预处理、分离和纯化。
样品的进样是液相色谱分析实验中的核心步骤。
在进样前，需要对HPLC仪器进行调整，确保柱子、检测器、泵等零部件的状态良好。
主要有两种样品进样方式：手动进样和自动进样。
手动进样的优点是灵活性较高，自动进样则更加准确和可重复。
3. 色谱柱的选择和条件设置色谱柱用来分离化合物，并应该根据实验的需求进行选择。
通常情况下，更长的柱可以提高分离效果，但是也会影响分析时间。
色谱柱的条件设置涉及流速、温度、压力等多个参数的选择，这些参数应依据样品性质以及色谱柱的选择进行调整。
4. 分离和检测在液相色谱分析中，化合物混合物通过移动相分离，其中的各组分通过变化的吸附力被吸附在固定相上，因而产生分离效应。
这个过程会涉及多种检测器的应用，通常包括紫外线检查器、荧光检测器、电化学检测器等。
检测器能够检测到化合物分析中的各个部分，从而可以确定样品中各部分的浓度。
5. 结果的解读和分析最后，通过对分析数据的收集和整合，能够得出准确的分析结果。
这个过程中需要自己对数据进行解读和分析，并根据实验目标进行结果的总结和归纳。
这些解读和分析结果将被用于进一步改进实验和探索更加深入的实验方向。
总结综上所述，高效液相色谱分析实验是一种非常有用的分析工具。
在实验中，样品的制备、柱子的选择、样品的进样、良好的条件设置和准确的检测均需要严谨仔细。
高效液相色谱分析的结果可以为抗菌剂的研究、药物发现、环境污染的控制和食品检测等方面提供重要的参考。
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2、最好使用进祥阀进样，以防止注 射器进样时、注射隔膜碎屑堵塞柱子入 口。
3、对硅胶基键合相填科，水溶液流动 相的PH值不得超出2—8．5的范围，使温 度不宜过高。柱子在酸性或碱性条件下 使用之后，。应依次用水、甲醇清洗， 对暂时不用而需要较长时间保存的柱子， 要用纯甲清洗，柱子两端用金属螺帽封 闭，保存于干净的有机溶剂中。
4、凝胶Байду номын сангаас谱
凝胶色谱分离方法是 利用分子振动效应， 根据样品分子的大小 而进行分离。所以又 称为排斥色谱
充填剂多采用：一定 孔径的多孔性聚合物
二、LC在环保方面的应用
1、农药残留量分析 ：含氯农药 、有机 磷农药 、除虫菊
2、致癌物质 ：霉素 、亚硝胺(香烟中的 亚硝胺) 、苯并芘
3、水质分析
实验前准备工作
1．流动相溶剂的处理 2．试样溶液的制备
流动相溶剂的处理
(1) 水 将一般的蒸馏水，加入少许高锰 酸钾，在pH9—10的条件蒸馏，可用于常 规洗脱。用于梯度洗脱的水，应进行二 次蒸馏。
(2) 有机溶剂的提纯 通常用蒸馏法可除掉大 部分有紫外吸收的杂质。将溶剂通过氧化铝 或硅胶柱可除去极性化合物。氯仿中含有的 少量甲醇，可先经水洗再经蒸馏提纯。试剂 级的四氢呋喃由于含抗氧剂丁基甲苯酚而强 烈吸收紫外线，可经蒸馏除去难挥发的丁基 甲苯酚。为了防止爆炸，蒸馏终止时，在蒸 馏瓶中必须剩余一定量的液体。
1．溶剂萃取 溶剂萃取适用于待测组件为 非极性物质。在试样中加入缓冲溶液调节 pH，然后用乙醚或氯仿萃取待测组分。但 如果待测组分和蛋白质结合，在大多数情 况下；难以用萃取操作来进行分离。
2．吸附 将吸附剂直接加到试样中，或将吸 附剂填充于柱内进行吸附。亲水性物质用硅 胶吸附，而疏水性物质可用聚苯乙烯—二乙 烯基苯等类树脂吸附。
1、吸附色谱
根据填充剂吸附活性 点对样品的吸收系数 不同而分离
充填剂：硅胶
2、分配色谱
根据固定相与流动相的极性不同而分为 正相分配色谱和反相分配色谱 两者的区别如下图所示：
固定相
流动相
正相分配
极性
非极性
反相分配
非极性
极性
分配色谱
充填剂：多孔聚合物
３、离子交换色谱
是根据固定相的离子交换基和样品成分中的 离子性基进行交换来分离的
3．除蛋白质 向试样中加入三氯醋酸或丙 酮、乙腈、甲醇，蛋白质被沉淀下来，然 后经超速离心，吸取上层清液供分离测定 用。
4．超过滤 用孔径为l0×10-10一500×l0-10m 的多孔膜过滤，可除去蛋白质等高分子物 质。
HPLC的介绍及应用
一、HPLC的分离方式
1、吸附色谱 2、分配色谱 3、离子交换色谱 4、凝胶色谱
4、要防止色谱柱被振动或撞击，否 则柱内填料床层产生裂缝和空隙，会使 色谱峰出现“驼峰”或“对峰”。
5、要防止流动相逆向流动，否则将 使固定相层位移，柱效下降。
6、使用保护柱。连续注射含有未被洗 脱样品时，会使柱效下降，保留值改变。 为了延长柱寿命，在进样阀和分析柱间加 上保护柱，其长度一般为3—5cm，填充与 分析柱性质相似的表面多孔型固定相，因 此可干法填装。而且价廉、更换容易。实 验表明，使用保护柱后，除了使扩为零的 组分的塔板数减少外，其柱效下降很少。
色谱柱的再生
一般情况下，硅胶和ODS等化学键合 固定相再生是困难的。有时，采用下 述方法可能提高校效。
1、由于杂质微粒等因素，使柱上端固 定相变色，柱效下降。这时，可仔细地将 变色部分除去(约3mm左右)，再补充新的 固定香。
2、当色谱柱吸附未被洗脱成分时，柱 效将明显下降，可选择合适的溶剂进行洗 净。
高效液相色谱实验技术
一、色谱柱的保养 二、色谱柱的再生 三、实验前准备工作 四、样品处理技术
色谱柱的保养
在正常情况下，色谱柱至少可以使用 3—6个月，能完成数百次以上的分离。但 是，若操作不慎，将使色谱柱很易损坏而 不能使用。因此为了保持柱效、柱容量及 渗透性，必须对色谱柱进行仔细地保养。
1、色谱柱极易被微小的颗粒杂质培塞， 使操作压力速升高而无法使用，因此必须 将流动相仔细地蒸馏或用0.45μm孔径的滤 膜过滤。在流动相组贮槽与色谱柱间，安 装0.45μm孔径的过滤器。在柱子上端接头 处装上多孔过滤片，以防止固体颗粒进入 色谱柱中。在水溶液流动相中，细菌容易 生长，可能堵塞筛板加入0.01％NoHa能防 止能防止细菌生长。
三、LC在生化方面的应用
1、蛋白质分析 2、肽类的分析 3、核酸 4、氨基酸
四、LC在药物方面的应用
1、药品的预处理：片剂，油膏，水剂等 2、体液：血、尿、脊椎液、唾液等 3、抗菌素 ：青霉素 、甾族(激素)
(3) 溶剂的过滤和脱气 流动相溶剂在使用 前必须先用0.45ym孔径的滤膜过滤，以除 去微小颗粒，防止色谱柱堵塞。同时要进 行脱气处理，因为溶解在溶剂中的气体会 在管道、输液泵或检测池中以气泡形式逸 出，影响正常操作的进行。
样品处理技术
在某些试样中，常含有多量的蛋白质、 脂肪及糖类等物质。它们的存在，将影响组 分的分离测定，同时容易堵塞和污染色谱柱， 使柱效降低，所以常需对试样预处理。样品 的预处理方法很多，如溶剂萃取、吸附、超 速离心及超过滤等。
3 、 对 离 子 交 换 树 脂 柱 ， 先 经 1 mol／L HCI 相 1 mol NaOH 溶 液 洗 净 ， 再 以 1 — 2mol/L NaCl水溶液平衡，以超声波发生器 进行清洗，通常可获良好的效果。
4、当采用梯度洗脱时，柱在重复使用 前，用泵把几倍于柱体积的起始溶剂压经 柱子，以重新建立起始的平衡来得到再生。