洋紫荆凝集素的分离纯化和性质

图 ! "#$ 在酸化的 %&’()*+,& -" 亲和柱上的层析 ./01 ! 233/4/56 7(*+8)5+0*)’(6 +3 "#$ +4 %&’()*+,& -" 9+:;8： ! 1 < = >? 78，@? 8: A (， @ 1 < 8: A 5;B&
图 @ %C%DE2FG 测定 "#$ 的亚基分子量 ./01 @ %;B;4/5 8+:&7;:)* L&/0(5 I&5&*8/4)5/+4 +3 "#$ B6 %C%DE2FG 21 233/4/56 ,)8’:&；"1 9):/B*)5/+4 ’*+5&/4,； （-N， ，@1 G00 ):B;8/4 （H<， ， !1 "+M/4& ,&*;8 ):B;8/4 ???） ???） （><， ，H， （!@， ，< 1 "#$ > 1 E&’,/4 ???） 965 1 9 H??）
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表! ’()*+ !
012,3 =96:39. A,.,8:9B/ A,.(D8 $,8:9B/ 4,669B/ A.189B/ A.8(D8 $)G189B/ ： ： 012,3 8968/6:3,:596 H> 779. < $ !
糖对 $%& 凝集活性的抑制作用
表+ *+,-. +
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洋紫荆种子凝集素的纯化
/012324+5267 63 89: 316; !"#$%&%" ’"(%)*"+"
洋紫荆凝集素的分离纯化和性质 !
彭建宗
摘要
陈兆平
广州
程双奇
!"#$%"）
（华南师范大学生物系
利用酸化处理的 &’()*+,-’ $. 亲和柱从洋紫荆种子中分离纯化出了洋紫荆集素 （ ./0） ， 其比活
性比抽提液提高了 "!1 倍， 活力回收率为 21 3 #4 。 ./0 分子量为 5" ###， 由两个相同的亚基组成。等电 聚焦凝胶电泳测得其等电点为 2 3 1!。其紫外吸收高峰在 67$ 89 处。 ./0 具一定的热稳定性和酸碱稳 定性。:;乙酰;<;氨基半乳糖能强烈地抑制 ./0 对兔红细胞的凝集作用， 乳糖、 半乳糖也有较强的抑制 作用。 关键词 凝集素， 洋紫荆， 亲和层析， 纯化
( 结果和讨论
（ C:G ） ( ! ! 洋紫荆凝集素的分离纯化 经 4,> 饱和度的 6 "DG 盐析后，凝集素被沉淀下 来，透析除盐后冻干，即得凝集素粗品， 凝集素粗品经酸化处理的 "#$%&7@N# E- 亲和层 析， 上样后用亲和柱的平衡液洗去未吸附部分， 当 265,H?小于 , ! ,6 后， 换用 + ?@A B / C&OA < （ QKI ! +） ， 比活力提高了 +=4 , ! 6 ?@A B / 乳糖溶液解吸附，获得一个具强凝集活性的蛋白峰 倍， 活力回收率为 G4 ! ,> （ M&RA# +） 。
用蒽酮比色法 （张志良， 测定， 以葡萄糖作标准糖。 +44,）
（, ! = ?I B ?A） 在凝血板上经倍比稀释后， 每孔加入 6= ! ! ! & 糖专一性的测定 6= ! A -./ A 糖溶液， 于 6=J 放置 ;, ?KH， 再加入兔红细胞悬浮液 6= ! 混匀后于 6=J 放置 + %， 检查凝 A， 集活性。 !!’ 稳定性的测定 直至 +,,J ， 每次保温 ! ! ’ ! ! 热稳定性 , ! = ?I B ?A -./ 于水浴中保温 = ?KH 后升高 =J ， 后取样检查凝集活性。 !!’!( 所用缓冲液有：C&2F*:2F （ , ! ,6 ?@A B /，$: ; ! L < = ! 5） ，C&6 :1DG * ，M7KN*:OA （, ! ,6 ?@A B /，$: 5 ! 6; < 4 ! +,） ，C&6 OD; *C&:* C&:6 1D（ $: E ! 6 < L ! 5） G , ! ,6 ?@A B /， 酸碱稳定性
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%&’()I&J FD!?? 凝胶过滤测定 "#$ 的分子量 ./01 > O+:&7;:)* L&/0(5 I&5&*8/4)5/+4 +3 "#$ （PH， ， ???） B6 %&’()I&J FD!?? ! 1 E(+,’(+*6:),& " （-N， ， （H<， ， @ 1 "+M/4& ,&*;8 ):B;8/4 ???） > 1 G00 ):B;8/4 ???） （><， ，< 1 965 1 9 （!@， ，- 1 "#$ H 1 E&’,/4 ???） H??）
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彭建宗等： 洋紫荆凝集素的分离纯化和性质
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糖含量
蒽酮比色法测得 "#$ 中性糖含量为 %& ! &’ 。
! ! # 糖专一性 在所测试的糖中， ()乙酰)*)氨基半乳糖对 "#$ 凝集兔红细胞的抑制能 力最强， 乳糖、 半乳糖的抑制作用次之，这表明 ()乙酰)*)氨基半乳糖是其专一性结合糖 （ +,-./ %） 。
! 收稿日期： "111;#2;#" 接受日期： "111;"6;#1 责任编辑： 王春茂
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彭建宗等： 洋紫荆凝集素的分离纯化和性质
6EL
各管合并， 透析除糖， 冻干即得纯品凝集素。 !!" 用 "#$%&’#( )*+,, 凝胶过滤测定 -./ 分子量， 用 "0"* 均按文献 （张龙翔等， 的方法测定。 12)3 测定亚基的分子量， +456） 分子量及亚基分子量的测定
植物学通报 6###，9; （%） ： 6$$ V 6$1 ,$%&)-) !#..)+%& /0 !/+"&1
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03 LO *MMA8AKO J)+,9*K,C+*()O ,8 *8 *JAN;K+’*K’N &’()*+,-’ $. J,IF98 3 P)’ )’9*CCIFKA8*KA8C *JKAQ; AKO ,M K)’ (F+AMA’N ./0 A8J+’*-’N "!1 KA9’- *8N K)’ *JKAQAKO +’J,Q’+O A- 21 3 #4 3 P)’ 9,I’JFI*+ R’AC)K A- 5" ### *8N K)’ 9,I’JFI’ J,8-A-K- ,M KR, AN’8KAJ*I -FLF8AK- 3 SK- A-,’I’JK+AJ (,A8K A- 2 3 1! 3 :;*J’KOI;<;C*I*JK,-*9A8’ A- K)’ 9,-K (,K’8K A8)ALAK,+- ,M ./03 0*JK,-’ *8N C*I*JK,-’ J*8 *I-, A8)AL; AK K)’ *CCIFKA8*KA,8 ,M +*LLAK ’+OK),JOK’- LO ./03 6.7 8)#+5 0’JKA8；+$12,(,$ 6$%,".$&$ ；TMMA8AKO J)+,9*K,C+*()O；=F+AMAJ*KA,8 凝集素是一类非酶、 非抗体的糖结合蛋白， 广泛分布于动物、 植物和微生物体内。植 物凝集素的生理功能是多样的， 表现在细胞识别、 物质代谢及胚胎细胞的发育和分化等诸 多方面 （ 0A’8’+， 。我们从洋紫荆种子中分离纯化出了一种凝集素 （ +$12,(,$ 6$%,".$&$ "117） ， 并对它的一些理化性质进行了研究。 I’JKA8）