一种抗真菌抗生素的分离纯化及初步鉴定
银杏内生真菌的分离纯化及抑菌性的鉴定
银杏内生真菌的分离纯化及抑菌性的鉴定作者：裴冬丽等来源：《湖北农业科学》2015年第09期摘要：采用组织分离法从银杏（Ginkgo biloba）健康组织中分离得到25株内生真菌，根据菌株在PDA培养基上的培养特征，5株被鉴定为链孢霉菌属、4株为酵母属、4株为曲霉属，3株为毛霉属、3株为青霉属，2株为根霉属，1株为简梗孢霉属，3株分离菌株不产孢子。
测定25株内生真菌对3种受试指示菌的抑制作用，共筛选得到11株至少对一种指示菌的生长有抑制作用的菌株，对抑菌活性较强的菌株进行形态学和显微分析鉴定。
关键词：分离；鉴定；银杏（Ginkgo biloba）；内生真菌；抑菌性中图分类号：S664.3 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）09-2116-04自第一株内生真菌1898年从黑麦草种子中分离出来以后，植物内生真菌才被广泛地关注。
内生菌最早是指在植物组织内生长的微生物，用来区分那些在植物表面上生长的表生菌。
现内生真菌定义为在其生活史的一定阶段或全部阶段，在健康植物组织和器官内部中生长的，且不会使其被感染的宿主（至少是暂时）表现出外在病症的一类真菌。
内生真菌多样性丰富，生物活性强，生长在植物体内的内生真菌可以和相对应的宿主相互协同、共同进化，并且还可以生成与宿主相同或相似的具有生物活性的代谢产物[1]，它们不仅能促进宿主植物快速生长，而且还可有效地增强宿主对生物胁迫和非生物胁迫的抗逆能力。
已有研究表明，植物内生真菌可以分泌一些新的活性物质对不同细菌、病原真菌产生抑制作用[2-5]。
银杏树（Ginkgo biloba）又名白果树，是第四纪冰川运动后遗留下来的最古老的裸子植物，是世界上珍贵树种之一，被称作植物界中的“活化石”。
它生长较慢，寿命极长，自然条件下从栽种到结银杏果需要20多年，40年后才能大量结果。
大多数植物在其生长过程中会受到几种甚至几十种病原菌的侵袭，但银杏在这漫长的生长过程中却很少发生病害，这可能与银杏内部含有特殊的内生真菌有关。
2025年卫生专业技术资格考试微生物检验技术(中级384)基础知识试题及解答参考
2025年卫生专业技术资格考试微生物检验技术(中级384)基础知识复习试题(答案在后面)一、A1型单项选择题（本大题有40小题，每小题1分，共40分）1、以下哪种微生物属于细菌的范畴？A、衣原体B、病毒C、支原体D、真菌2、在微生物检验中，用于分离培养细菌最常用的培养基是：A、营养肉汤B、血琼脂平板C、沙堡弱D、麦康凯琼脂3、题干：在微生物检验中，用于观察细菌形态的最常用染色方法是：A. 革兰染色法B. 酸性复红染色法C. 荧光染色法D. 酸性品红染色法4、题干：在进行细菌培养时，以下哪种培养基用于富集营养要求较高的细菌？A. 血琼脂平板B. 营养琼脂平板C. 伊红美蓝琼脂平板D. 氧化酶琼脂平板5、题干：以下哪种微生物属于革兰氏阳性菌？A、肺炎链球菌B、金黄色葡萄球菌C、大肠杆菌D、痢疾杆菌6、题干：以下哪种消毒方法适用于不耐热、不耐湿的物品？A、高压蒸汽灭菌法B、紫外线消毒法C、微波消毒法D、化学消毒法7、微生物检验技术中，关于细菌菌落计数的方法，以下哪项是错误的？A、显微镜直接计数法B、平板计数法C、比浊法D、染色计数法8、在微生物检验中，用于检测细菌内毒素的方法是：A、琼脂扩散法B、生化试验C、平板计数法D、鲎试验9、在微生物检验中，以下哪种方法适用于分离和纯化革兰氏阴性菌？A、巴氏消毒法B、稀释涂布平板法C、直接镜检法D、选择性培养基 10、在进行微生物培养时，以下哪种因素不会影响细菌的生长？A、温度B、pH值C、氧气D、水分11、题干：以下哪种细菌属于革兰氏阳性菌？A. 大肠杆菌B. 铜绿假单胞菌C. 金黄色葡萄球菌D. 铜绿假单胞菌12、题干：在微生物检验中，以下哪种方法主要用于检测细菌的氧化酶活性？A. 过氧化氢酶试验B. 革兰氏染色法C. 甲基红试验D. 奥普托辛试验13、在进行微生物分离培养时，以下哪种培养基适用于分离需氧菌？A. 血琼脂平板B. 沙氏培养基C. 麦康凯培养基D. 酵母浸膏琼脂平板14、在微生物检验中，以下哪种方法可以用于检测细菌的鞭毛？A. 水浸片法B. 琼脂平板划线法C. 染色法D. 培养法15、题目：微生物检验中，以下哪一项不是常用的消毒剂？A、70%乙醇B、1%过氧化氢C、5%来苏尔D、5%氯己定16、题目：在进行微生物培养时，以下哪一项操作不是无菌操作？A、使用无菌镊子夹取培养皿B、戴无菌手套进行操作C、用无菌吸管吸取培养液D、在操作过程中直接用手指触碰培养皿17、在微生物检验中，用于观察微生物形态和运动特性的基本方法是什么？A. 暗视野显微镜法B. 显微镜直接观察法C. 电子显微镜法D. 生化实验法18、在微生物培养中，以下哪项不是选择培养基的作用？A. 选择特定微生物生长B. 识别微生物种类C. 限制营养物质的利用D. 便于微生物的生长繁殖19、在微生物检验中，以下哪种方法常用于初步分离和纯化细菌？A. 细菌培养B. 涂片染色C. 生化鉴定D. 生理盐水稀释 20、在进行微生物计数时，常用的计数方法是什么？A. 直接计数法B. 倒置显微镜计数C. 血细胞计数板计数D. 每毫升计数法21、题干：在微生物检验中，用于观察微生物形态的仪器是：A. 电子显微镜B. 显微镜C. 分光光度计D. 荧光显微镜22、题干：在微生物培养过程中，以下哪种物质不是培养基的基本成分？A. 蛋白胨B. 碳源C. 水分D. 硫酸铜23、以下哪种细菌是引起流行性脑脊髓膜炎的病原体？A. 铜绿假单胞菌B. 鼠疫耶尔森菌C. 脑膜炎奈瑟菌D. 沙门菌24、下列关于真菌菌落特征的描述，错误的是：A. 真菌菌落通常较细菌菌落大B. 真菌菌落颜色多样C. 真菌菌落质地疏松，表面光滑或粗糙D. 真菌菌落产生色素，有助于鉴定25、题干：在进行微生物检验时，以下哪种物质不属于培养基的成分？A. 营养成分B. 水分C. 调节剂D. 阳性对照26、题干：在进行微生物分离时，以下哪种方法可以有效地去除杂菌？A. 煮沸法B. 高压蒸汽灭菌法C. 紫外线照射D. 过滤法27、在进行微生物培养时，下列哪种物质不是培养基的必需成分？A. 蛋白质胨B. 氮源C. 磷酸盐D. 纤维素28、以下哪种方法可用于检测细菌的致病性？A. 革兰染色B. 静止培养C. 动态培养D. 产毒素实验29、题干：在微生物检验中，用于检测细菌细胞壁成分的试验是？A.革兰染色B.芽孢染色C.糖发酵试验D.抗生素敏感试验 30、题干：在微生物培养过程中，以下哪种现象表示培养基被污染？A.培养基表面出现白色菌落B.培养基表面出现红色菌落C.培养基表面出现绿色菌落D.培养基表面出现黄色菌落31、以下哪种微生物是引起细菌性痢疾的主要病原菌？A. 霍乱弧菌B. 伤寒沙门氏菌C. 福氏痢疾杆菌D. 大肠埃希氏菌32、在进行微生物检验时，以下哪种方法用于检测细菌的耐热性？A. 酵母浸液法B. 产碱杆菌生长试验C. 沙门氏菌凝集试验D. 高温培养试验33、在进行微生物培养时，以下哪种培养基不能用于初次分离培养？A. 营养琼脂培养基B. 血琼脂培养基C. 选择性培养基D. 脂肪琼脂培养基34、关于微生物的形态学观察，以下哪种方法不能直接观察微生物的形态？A. 显微镜观察B. 培养观察C. 显微摄影D. 分离纯化35、以下哪种微生物是引起食物中毒的主要病原菌之一？（）A. 沙门氏菌B. 大肠杆菌C. 痢疾杆菌D. 嗜水气单胞菌36、在微生物检验中，常用的无菌操作技术不包括以下哪一项？（）A. 灭菌B. 灭藻C. 灭菌剂D. 灭菌接种37、在进行微生物分离培养时，以下哪种培养基适合用于分离细菌？A. 血琼脂平板B. 酵母浸膏琼脂平板C. 麦康凯琼脂平板D. 葡萄糖琼脂平板38、在进行细菌形态学观察时，以下哪种染色方法适用于观察细菌的革兰氏染色？A. 革兰氏染色法B. 酵母浸膏染色法C. 柔膜染色法D. 菌落计数染色法39、下列哪种微生物属于革兰氏阳性球菌？A、葡萄球菌B、链球菌C、肺炎链球菌D、大肠杆菌 40、在进行微生物培养时，以下哪种情况下最可能发生污染？A、培养基在121℃高压灭菌30分钟B、接种环在使用前用火焰灼烧C、操作者在接种过程中佩戴口罩D、培养皿在开盖过程中与空气接触二、A2型单项选择题（本大题有50小题，每小题1分，共50分）1、题干：以下哪种细菌属于革兰氏阳性球菌？A、链球菌属B、葡萄球菌属C、肠球菌属D、厌氧球菌属2、题干：在微生物检验中，用于检测细菌细胞壁肽聚糖的五色荧光染色法是？A、革兰氏染色法B、荧光抗体染色法C、碱性品红染色法D、革兰氏荧光染色法3、题干：在细菌形态学检验中，以下哪种方法可用于观察细菌的荚膜？A. 显微镜直接观察法B. 离心法C. 醋酸法D. 染色法4、题干：在进行细菌培养时，以下哪种现象表明细菌已经污染？A. 培养基表面出现均匀一致的菌落B. 培养基表面出现不同形态的菌落C. 培养基表面出现透明区域D. 培养基表面出现淡黄色区域5、在进行细菌培养时，以下哪种物质通常用于抑制杂菌的生长？A、葡萄糖B、琼脂C、青霉素D、葡萄糖酸钙6、在微生物检验中，下列哪种方法用于分离纯化细菌？A、显微镜观察B、涂片染色C、平板划线法D、显微镜计数7、在微生物检验中，常用的微生物纯化方法有：A、平板划线法B、稀释涂布平板法C、培养皿倒置法D、显微镜观察法8、在微生物培养过程中，以下哪项不是维持培养基pH稳定的方法？A、加入缓冲液B、定期更换培养基C、控制温度D、调节氮源9、题干：以下哪种物质在微生物培养中通常作为碳源？A. 蛋白胨B. 硫酸盐C. 酵母提取物D. 碳酸氢钠 10、题干：在微生物检验中，下列哪种方法用于检测细菌的革兰氏染色？A. 显微镜观察B. 生化试验C. 抗体检测D. DNA指纹分析11、在微生物检验中，用于观察微生物细胞壁成分的染色方法是：A. 美蓝染色法B. 革兰染色法C. 酸性复红染色法D. 菌落计数染色法12、在微生物培养中，以下哪种物质不是培养基的成分：A. 碳源B. 氮源C. 氧气D. 水13、在微生物检验中，用于检测细菌细胞壁成分的方法是：A. 红细胞凝集试验B. 酶联免疫吸附试验C. 鞭毛鞭打试验D. 噬菌体分离试验14、在微生物培养中，以下哪种现象表明细菌发生了自溶？A. 培养基中的细菌数量逐渐增多B. 培养基中的细菌形成菌膜C. 培养基中出现溶菌酶D. 培养基中的细菌数量突然减少15、某患者在手术过程中出现发热症状，血液培养结果为革兰氏阴性杆菌，下列哪种细菌最可能是引起感染的病原体？A. 大肠杆菌B. 铜绿假单胞菌C. 沙门氏菌D. 诺如病毒16、在进行微生物培养时，为防止污染，以下哪项措施是错误的？A. 使用无菌操作技术B. 使用无菌培养基C. 使用无菌水D. 将接种环在火焰上灼烧17、在微生物检验中，以下哪项技术用于检测细菌的致病性？A、显微镜观察B、生化反应C、血清学试验D、PCR检测18、在微生物的培养过程中，以下哪种因素可能导致细菌生长缓慢或停止？A、适宜的pH值B、充足的营养C、适宜的温度D、低浓度的抗生素19、题干：以下哪种细菌属于革兰氏阳性菌？A. 铜绿假单胞菌B. 乳酸杆菌C. 大肠杆菌D. 沙门氏菌 20、题干：在进行微生物分离培养时，以下哪种情况会导致细菌生长不良？A. 培养基pH值适宜B. 培养基温度适宜C. 培养基中缺乏氮源D. 培养基中水分充足21、题干：以下哪项不属于细菌的形态学分类？A、球菌B、杆菌C、螺旋菌D、支原体22、题干：在微生物检验中，以下哪项不是用于检测细菌的代谢产物？A、革兰染色B、氧化酶试验C、过氧化氢酶试验D、葡萄糖发酵试验23、某患者出现高热、寒战、咳嗽等症状，血液培养发现细菌生长。
某种苯酚降解细菌的分离,纯化,鉴定
某种苯酚降解细菌的分离、纯化、鉴定一、引言近年来，环境污染问题日益突出，其中有机污染物的排放成为了一个备受关注的话题。
苯酚作为一种有机化合物，其在工业生产和生活中被广泛使用，但是其排放也给环境造成了不小的压力。
寻找一种能够高效降解苯酚的细菌成为了当下研究的热点之一。
本文将围绕某种苯酚降解细菌的分离、纯化、鉴定展开讨论。
二、苯酚降解细菌的分离1. 采样地点选择在开始分离苯酚降解细菌之前，首先需要明确采样地点的选择。
一般来说，苯酚的排放源比较集中，因此我们可以选择一些工业废水排放口、化工厂周围土壤和水体等地点进行采样。
2. 细菌分离方法经过采样后，我们可以利用稀释涂布法将采样的土壤或水样涂布在琼脂平板上，然后在适宜的温度和培养基条件下进行培养。
通过分离光圈和纯化培养，我们可以获得一系列有苯酚降解能力的细菌菌落。
三、苯酚降解细菌的纯化1. 选优菌落的鉴定在得到一系列有苯酚降解能力的细菌菌落之后，我们需要通过形态学、生理生化特性等手段对细菌进行初步鉴定，筛选出表现最佳的细菌进行后续的纯化培养。
2. 纯化培养方法对选优细菌进行纯化培养可以采用多次转接法，即将单一细菌菌落进行二次以上的转接，以获得单一细菌培养物。
四、苯酚降解细菌的鉴定1. 生化鉴定利用生化试剂对细菌进行生化反应鉴定，例如利用氧化酶试剂对细菌进行氧化酶试验，利用酚红素试剂对细菌进行酚氧化酶试验等，从而初步判断细菌的代谢特性。
2. 分子生物学鉴定通过16S rRNA基因测序鉴定细菌的亲缘关系，确定其属种级别的分类位置。
五、个人观点和总结苯酚降解细菌的分离、纯化、鉴定是一项具有挑战性的工作，需要从多个角度进行综合分析和判断。
通过本文的探讨，我们不仅仅了解了苯酚降解细菌的基本分离和纯化方法，还深入了解了细菌鉴定和分类的相关技术。
希望通过这些工作，能够为环境污染治理和资源开发提供一些有益的参考和借鉴。
苯酚是一种常见的工业化合物，在工业生产和生活中被广泛使用。
[工作]菌种分离思路
![[工作]菌种分离思路](https://img.taocdn.com/s3/m/dde9f955326c1eb91a37f111f18583d049640fe0.png)
菌种分离思路：⌝菌种筛选方案：[1] 初筛：目的是删去明确不符合要求的大部分菌株，把生产性状类似的菌株尽量保留下来，使优良菌种不致于漏网。
初筛工作以量为主，测定的精确性还在其次。
初筛的手段应尽可能快速、简单。
[2] 复筛的目的是确认符合生产要求的菌株，所以，复筛步骤以质为主，应精确测定每个菌株的生产指标。
⌝菌种筛选的手段[1] 初筛[2] 从菌体形态变异分析[3] 平皿快速检测法：具体的有纸片培养显色法、变色圈法、透明圈法、生长圈法和抑制圈法等[4] 摇瓶培养法：初筛的摇瓶培养一般是一个菌株只做一次发酵测定，从大量菌株中选出10-20%较好的菌株，淘汰80-90%的菌株；而复筛中摇瓶培养一般是一个菌株培养3瓶，选出3-5个较好的菌株，再做进一步比较，选出最佳的菌株。
土中细菌的富集培养与分离分离土样中的大部分细菌的分离程序中无需进行富集。
但对某些少数细菌则要求特殊的富集或选择技术才能很好地被分离培养。
富集方法：运用细菌的酶诱导性，在分离培养基中添加若干抗生素、复杂底物及生长因子的前体物质来激活细菌某一特殊基因组，可以建立起若干富集技术。
富集可以促进抗性的产生并维持下来。
土样中细菌的富集：适度稀释后，取0.1m1涂布已添加及未添加富集底物(如几丁质、纤维素等)的土浸出汁平板。
植物体上细菌的分离：无菌富集，加植物浸出液适度培养取样，洗涤，取1ml经适度稀释后涂布平板。
水中细菌的分离：水样通过0.22μm无菌滤膜，取出滤膜用1ml无菌稀释液将滤膜上的沉积洗下。
用样本稀释液适度稀释,涂布平板倒置培养或滤纸压印分离法。
水中细菌分离的简易富集技术：(1) 在无菌的、用棉团塞好的广口三角烧瓶中连续培养，定期取样涂布适宜分离琼脂平板上；(2) 在不同水体的水样中加入一定的底物如蔗糖、多糖及蛋白质等，同样可以促进水中微生物的增殖。
(3) 培养过程中可加入低浓度的抗真菌剂以抑制真菌的生长。
(4) 另一富集方法是在培养烧瓶中添加细菌“附着材料”，如无菌的植物组织或土壤浸出液。
抗生素的分离与纯化
衡水学院结课论文抗生素的分离和纯化论文作者：邢五星系别：生命科学系专业：：生物科学学号************ 年级：2014级抗生素的分离和纯化抗生素是由生物包括微生物、植物、动物在其生命活动过程中产生的一类天然有机化合物,具有能在极小的浓度下有选择地抑制、促进或杀灭其他微生物和生物细胞的作用。
由于其存在于成分复杂的发酵液中,因此采用合理有效的分离纯化技术路线是新型抗生素研究成功与否的关键。
1.发酵液的预处理微生物发酵液的预处理,其目的不仅在于分离菌体和其他悬浮颗粒,还着眼于除去部分可溶性杂质和改变滤液的性质,以利于提取和精制后续各工作的顺利进行。
对于胞外产物,经预处理应尽可能使目的产物转移到液相,然后经固液分离除去固相;对于胞内产物,则首先收集菌体,经细胞破碎后,目的产物进入液相,然后再将细胞碎片分离。
改变发酵液过滤特性的方法有:调酸(等电点)、热处理、电解质处理、添加凝聚絮凝剂等。
另外通过调节发酵液的酸碱度或加入合适的溶剂也可以除去部分相应的杂质,如调节发酵液pH值过酸性或过碱性可以使大部分蛋白类杂质沉淀除去,用高浓度甲醇、乙醇或丙酮溶液浸提发酵液,既可以沉淀出大部分不溶性多糖和蛋白杂质,又可以降低发酵液粘稠度,有利于过滤、色谱分离等进一步处理。
廖文彬、鲍时翔等报道[1],采用有机溶剂乙醇B丙酮(1B1)的混合液可以很好的除去红树林放线菌发酵液中的的蛋白等杂质,有利于活性物质的分离纯化。
解翠华、夏焕章等报道[2]用草酸调节发酵液pH值至3,然后离心,可以使发酵液和菌丝体很好的分离,分别用乙酸乙酯对上清液进行萃取;对菌丝体进行抽提;都得到了具有活性的粗提物。
2.抗生素常用的分离纯化方法抗生素常用的分离纯化方法主要有溶媒萃取法、吸附法、离子交换法、沉淀和结晶、色谱分离等。
在提取时,可根据抗生素分离的难易,单独或同时使用上述方法。
2.11 溶媒萃取法溶媒萃取法是利用溶质在互不相溶的两相之间分配系数的不同,使溶质选择性的从一种溶剂转移到另一种溶剂中而得到纯化或浓缩的方法,它是生物工业中一种重要的分离提取方法。
抗真菌活性粘细菌的筛选及鉴定
抗真菌活性粘细菌的筛选及鉴定刘建玲;李宏铎;王军;万一【摘要】[目的]筛选出具有杭真菌活性的粘细菌并对其进行种类鉴定.[方法]从全国23个省、自治区的200个腐殖质土样中分离纯化出237株粘细菌;将菌株在4种不同培养基中发酵培养,发酵产物通过甲醇提取得到代谢产物;以白色念珠菌为模型对次级代谢产物进行高通量筛选.[结果]复筛后得到1株编号为ZJ2的粘细菌,其次级代谢产物具有抗白色念珠菌的活性,对该菌株进行16SrDNA克隆并测序,结果表明ZJ2为橙色粘球菌(Mixoroccus fulvus).[结论]菌株ZJ2的次级代谢产物中,存在对白色念珠菌生长有显著抑制作用的生物活性物质,具有潜在的研究和药用价值.%[ Objective] The paper was to screen myxobaterias with antifungal activity, and identifv its species. [ Method ] 237 myxobacterias were isolated and purified from 200 humus soil samples collected from 23 provinces in China. The strains were fermented in four different media, and the fermentation products were extracted by methanol to obtain metabolites. With Candida albicans as the model, the secondary metabolites were carried out high-throughput screening. [ Result] A strain of myxobacteria numbered Z J2 was ohtaincd after secondary screening, its secondary metabolites had activities against Candida albicans. 16SrDNA cloning and sequencing results showed that ZJ2 was Myxococcus fulvus. [ Conclusion ] The secondary metabolites of ZJ2 strain had bioactive substances with significant inhibition effect against the growth of C. albicans, which had potential study and medicinal value.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2011(039)019【总页数】3页(P11485-11487)【关键词】粘细菌;代谢产物;抗真菌活性;高通量筛选【作者】刘建玲;李宏铎;王军;万一【作者单位】西北大学生命科学学院,陕西,西安,710069;西北大学生命科学学院,陕西,西安,710069;陕西省微生物研究所,陕西,西安,710043;陕西省微生物研究所,陕西,西安,710043【正文语种】中文【中图分类】S43粘细菌(myxobacteria)是一类革兰氏阴性菌，多数为(0.6～1.2)μm×(2～10)μm 的细长杆状单细胞，能以粘性分泌液结合成薄而扩散的菌团状，而且能在固体表面滑动并产生子实体和抗逆性强的粘孢子［1-2］。
分离纯化的原理及操作流程
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霉菌的分离纯化和鉴定
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斜面接种法
斜面接种法主要用于接种纯菌，使其增殖后用以鉴定或保存菌种； 通常先从平板培养基上挑取分离的单个菌落，或挑取斜面的纯培养物 接种到斜面培养基上，称为斜面培养； 霉菌的斜面接种：适用于扩散型生长及绒毛状气生菌丝类霉菌（如毛 霉、根霉等）。常用点接法，即点接在斜面中部偏下方； 接种室避免碰到试管壁，防止污染；超净台酒精灯附近操作，注意灼 烧试管口及棉塞； 应斜持试管呈45度角，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养 基表面，造成污染；
注：根据不同培养基性质等因素，培养条件有所差异，需视情况而定。
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四、复筛
将获得的单菌落接种于复筛培养基，给予一定条件进 行培养，对产物产率、性能等相关标准进行评价，即可挑 出所需要的菌株； 根据目标菌的性质进行设计： 分解淀粉 分解脂肪 透明圈 分解纤维素 耐高温低温 耐酸碱高渗透压 产糖产酶效率—发酵 抑菌效果：滤纸片法、牛津杯法
极端环境：
尽量存放在与采样环境相当的条件下至菌种分离；
植物和动物：
确保样品的完整性，迅速对植物切口进行消毒，并用石蜡封 住以防外来菌种入侵，用无菌装置带回；如动物粪便的采集应在动物 排便后马上收集其中间部分，避免外源污染，置于无菌袋内；
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二、样品的预处理
1、目的菌的富集培养
根据目的菌的生理特性，加入其所需要的营养物质及微量成分进 行诱导增殖，增菌；设计特定的有利于待分离菌株生长的环境。 ——为了分离铁硫杆菌，可将样品加硫磺后培养； ——为了分离分解纤维素或角蛋白等的酶产生菌，可以将样品与 高浓度的纤维素或角蛋白（适当加入其他成分）在适当温度 下保湿培养一段时间，再进行分离；
酵母菌
丝状真菌的统称。凡是在营养基质上能形成绒毛状、
纳他霉素的提取工艺及效价测定的研究
纳他霉素的提取工艺及效价测定的研究崔文静;程书梅;张伟;袁耀武;马晓燕;李英军【摘要】通过对纳他霉素提取工艺的研究,建立了有机溶剂萃取法从湿菌体中提取纳他霉素的工艺路线和参数.发酵液经抽滤后收集湿菌体,加入适量甲醇,调节pH至10.0～10.5,离心后再调节pH至中性,经旋转蒸发结晶获得纳他霉素粗品.纳他霉素粗品再通过紫外分光光度法和管碟法效价检测,结果显示提取出的纳他霉素具有良好的生物活性.【期刊名称】《河北农业大学学报》【年(卷),期】2010(033)001【总页数】5页(P128-132)【关键词】纳他霉素;提取;效价测定【作者】崔文静;程书梅;张伟;袁耀武;马晓燕;李英军【作者单位】河北农业大学,食品科技学院,河北,保定,071000;河北农业大学,食品科技学院,河北,保定,071000;河北农业大学,食品科技学院,河北,保定,071000;河北农业大学,食品科技学院,河北,保定,071000;河北农业大学,食品科技学院,河北,保定,071000;河北农业大学,食品科技学院,河北,保定,071000【正文语种】中文【中图分类】Q939.97纳他霉素(Natamycin)也称游链霉素、匹马霉素(Pimaricin)或海松素,是一种天然的多烯大环内酯类抗生素[1],呈白色或乳白色,几乎无嗅无味,分子式为C33H47NO13[2]。
该抗生素是一种很强的抗真菌试剂,能有效的抑制酵母菌等真菌的生长。
目前,纳他霉素主要用于乳酪制品、果酱、肉类制品(肉汤、西式火腿)、广式月饼、糕点表面、易发酵食品加工器皿表面等[3-4]食品行业以及医疗上用于治疗真菌引起的眼科疾病。
不仅可以有效防止食品腐败,还能减少真菌毒素对人类的毒害。
随着对产纳他霉素菌种及发酵生产工艺研究的不断深入,完善纳他霉素提取工艺就显得尤为重要。
专利 US6,150,143报道了一种不需要加有机溶剂的回收方法,主要是通过两个步骤完成的:a.用匀浆法,高速剪切法,超声波技术,热处理,调 pH,酶解法,表面活性剂处理。
抗真菌活性物质产生菌的筛选及其产物分离纯化的初步研究的开题报告
抗真菌活性物质产生菌的筛选及其产物分离纯化的
初步研究的开题报告
一、研究背景及意义：
真菌感染因其易复发、难治愈等特点已成为医学上一个重要的难题。
而抗真菌活性物质是治疗真菌感染的一种有效手段。
因此，对抗真菌活
性物质产生菌的筛选及其产物分离纯化的研究已成为当今医学和动植物
保护领域中一个热门的研究方向。
二、研究内容及方法：
本研究将通过采集不同地区的土壤、植物等样品，利用不同的筛选
方法，筛选具有抗真菌活性的微生物菌株。
此外，还将通过菌株培养，
并进行产物分离纯化中间产物对筛选到的菌株进行初步鉴定。
根据产物
特性，采用不同的分离与纯化方法，将其纯化到一定程度，确立其结构
和生物活性。
三、研究预期结果：
预计本研究将筛选出数个具有良好抗真菌活性菌株，并对其中较为
有潜力的菌株进行产物分离纯化，最终得到纯度高、结构稳定、生物活
性好的抗真菌活性物质。
四、研究的意义：
得到的抗真菌活性物质可以广泛应用于医学、农业和环境保护等领域，使其更加科学、高效地应用于实践。
同时，本研究通过对抗真菌活
性物质产生菌的筛选及其产物分离纯化的初步研究，深入探究了微生物
菌株的活性代谢物的生物合成、作用机制等方面，从而有助于推动微生
物代谢物的相关研究。
工业微生物产生菌的分离筛选
根据微生物对环境因子旳耐受范围具有可塑性旳 特点，可经过连续富集培养旳措施分离降解高浓 度污染物旳环境保护菌。例如：降解高浓度苯胺 旳微生物分离；环己烷降解菌旳分离
2、控制培养条件：pH、温度及通气
富集培养基旳pH值调整到被分离微生物旳要求 范围不但有利于本身生长，也可排除一部分不需要 旳菌类。
搜集和筛选 旳途径：
➢向菌种保藏机构索取有关旳菌株，从中筛选所需 菌株
➢由自然界采集样品，如土壤、水、动植物体等， 从中进行分离筛选
➢从某些发酵制品中分离目旳菌株，如从酱油中分 离蛋白酶产生菌，从酒醪中分离淀粉酶或糖化酶旳 产生菌等
本章内容
一、 含微生物样品旳采集 二、 富集培养 三、 好氧微生物旳分离 四、厌氧微生物旳分离
3）、生长圈法
一般用于分离筛选氨基酸、核 苷酸和维生素旳产生菌 工具菌（指示菌）是某些相相应旳营养缺陷型菌株
将待检菌涂布于高浓度工具菌并缺乏所需营养物旳平板 上进行培养，若某菌株能合成平板所需旳营养物，在该 菌株旳菌落周围便会形成一种混浊旳生长圈
如 嘌呤营养缺陷型大肠杆菌与不含嘌呤旳琼脂混 合倒平板，在其上涂布含菌样品保温培养，周围 出现生长圈旳菌落即为嘌呤产生菌
筛选霉菌时，可在培养基中加入四环素等抗生素克 制细菌，使霉菌在样品旳百分比提升，从中便于分离到 所需旳菌株
三、好气微生物旳分离
经富集培养后来旳样品，目旳微生物得到增殖， 占了优势，其他种类旳微生物在数量上相对降低，但 并未死亡。所以，经过富集培养后旳样品，也需要进 一步经过分离纯化，把最需要旳菌株直接从样品中分 离出来。
➢ 移植时间是关键，应在所需菌种确已占优势 旳情况下进行。
土壤中苏云金芽孢杆菌的分离纯化与初步鉴定
作者 简介 ：王立 （１９８１一），男 ，哈尔 滨人 ，大学 本科 ，助理 工程 师 ．
间 为 ２００９年 ｌＯ月 ２－２００９年 ｌ０月 ４ 日。供 试 土 样 详 细来 源 以及相 应 采集 条件 见 表 ｌ。
表 １供试 土样 来 源
土 壤 中 苏 云 金 芽 孢 杆 菌 的 分 离 纯 化 与 初 步 鉴 定
王 立 刘 利 檬 张 思 雅
（哈 药 集 团生物 工程 有 限公 司 １５００２０）
苏 云金 芽孢 杆 菌 是 于 １９０１年 从 德 国苏 云 金 城 面 粉 厂 的某 批染 病 地 中海 粉 暝 中分 离 出 的杆 菌 。苏 云金 芽孢 杆 菌 （Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｈｕｒｉｎｇｉｅｎｓｉｓ，Ｂｔ）是广 泛 分 布 的革 兰 氏 阳性 细菌 ，《伯 杰 氏细 菌鉴 定 手 册 》中列 为 第 ２类第 １８群 芽孢 杆 菌属 。
牡丹 江铁岭 河南山
Ｍｄｊ００１ １０月 ４日 １４：２０黄豆地 ，睛
绥化是北林 区腰房村
ＳＨＯＯ１ １０月 ４日 ９：Ｏ０ 马铃 薯地 ，晴
佳 木 斯 市 常 青 乡 五 一 村 ＪｍｓＯ０１ １０月 ４日 １３：Ｏ０ 农 田 ，多 云
１．２ 试 剂 ＢＰ固体 培 养 基 配 方 为 牛 肉膏 ３克 ，蛋 白胨 ｌＯ
苏 云金 芽 孢 杆 菌 最初 由 自然 死 亡 昆虫 的虫 尸 中 分离 获得 。 １９８７年 从 土壤 中找 到新 的苏 云金 芽 孢 杆 菌 ，改 变 了只有 从 找 到 死 虫 体 中才 能找 到 这 些 细 菌 的 历史 。 至今 ，已从 世 界 各 地 采 集 的 昆 虫 、土 壤 、蚕 渣 、仓 库灰 尘 、植物 体 表 面 等 基 质上 分 离 到 数 万 株 苏 云金 芽孢 杆 菌 。
梧宁霉素C组分高产突变株的获得和产物初步鉴定
结论 经 高效液相色谱及飞行 时间质 谱对产物 的分析 ，证 实该突变株为原 出发菌株 中含量较低 的茴香霉素 的高产 菌株 。 关键词 ：不吸水链 霉菌目 的 选 育 抗 真 菌 抗 生 素 梧 宁 霉 素 高 产 菌 株 。 方 法 本 文 通 过 紫 外 线 诱 变 的 方 式 对 不 吸 水 链 霉 菌 梧 州 亚 种
０ （ｔ ｐ ｏ ｙ ｅ ｈｇ ｏｃｐｃ ｓｓｂｐ Ｗ ｚ ｏ ｅｓ ４进行 菌种选育 ，并使用 白念珠菌作 为生物活 性鉴定菌筛选 高产突变株 。 ４Ｓｒ ｔｍ ｃｓａ ｙ ｒｓｏ ｉｕ ｕ ｓ ． ｕｈ ｕ ｎｉ ０ ） ｅ ｓ
ｃ ｍ ｐ ｅ ｉｔｉ ｔｏ ｔ ． ｏ ｌ ｉ ｎ Ｔｈ ｎａｙｓｓｂｙ ｈｉ ｈ ｐ ｒｏ ｍ ａ ｃ ｉ ｕｉ ｈ ｏ ａ ｏ ｒ ｐ ｎ ｉ ｅｏ ｉ ｈｔ ｏ ｏｎ ｎｔｄ ｓｒｂｕ ｉ ｎ ｅｃ Ｃ ｎｃ ｕｓｏ ｅ ａ ｌ ｉ ｇ ｅ ｆ ｒ ｎ ｅ ｌ ｑ ｄ ｃ ｒ ｍ ｔ ｇ ａ ｈｙ ａ ｄ ｔｍ ｆｆ ｇ ｌ
ａ ｙ ｒ ｓ ｏ ｃ ｓ ｓ ｂ ｐ ｗｕ ｈ ｕ ｎ ＆ ０ ｓｍｕ ａ ｅ ｙ ＵＶ ｔ ｇ ｎ ｓｓ Ｔ ｅ ｂ ｏ ｃ ｉ ｉ ｆ ｈ ｇ ｉｌ ｔ ｎ ｓｗａ ｈ ｇ ｏ ｃ ｐｉ ｕ ｕ ｓ ． ｚ ｏ ｅ ｓ ４ ｗａ ｔｔ ｄ ｂ ｍｕ ａ ｅ ｅ ｉ． ｈ ｉ ａ ｔ ｔ ｏ ｉ ｈ ｙ ｅ ｄ ｍｕ ａ ｔ ｓ ｖ ｙ
ｍａｓ ｐ ｃ ｏ ｔ ｏ ｄｔａ ｔｅ ｉ ｄｏ ｎｎ ｒｅｓ ａ ｉ ｍｙ ｉ） ｓ ｅｙｌｗ ｅｏｉｉａ ｓ ａ ， ｅｅ ｓ ｓ ｓｅｔ ｍｅｒ ｓ ｗｅ ｔｈ ｅ ｆ ｒ ｙ ｈ ｈ ｙ ｌ Ｗｕ ｉｇｎ ｉ Ｃ（ｎｓ ｕ ｏ ｃｎ ｗａ ｒ ｉ ｔ ｒ ｎ ｌ ｔ ｉ ｗｈ ｒａ ｖ ｏ ｎｈ ｇ ｒ ｎ
源于银杏叶片中一个抗真菌蛋白(GAFP-1)的分离、纯化和鉴定
源于银杏叶片中一个抗真菌蛋白(GAFP-1)的分离、纯化和鉴定黄虎;邹振;谢伟军;龚蓁蓁【期刊名称】《江苏农业学报》【年(卷),期】2001(017)002【摘要】经过80%饱和度硫酸铵沉淀、几丁质亲和层析和SephadexG -75的凝胶过滤层析3个步骤，从银杏(Ginkgo Biloba L.)的叶片中纯化获得1个抗真菌蛋白，把它命名为GAFP-1。
以SDS-PAGE胶为基础进行电泳分析，GAFP-1的分子量约为30 kD。
氨基酸组分分析显示，1 ml GAFP-1的甘氨酸、谷氨酸和天冬氨酸残基较其它氨基酸残基多。
抑菌分析表明：1 μg或2 μg的GAFP-1能够抑制水稻纹枯病菌和棉花炭疽病菌菌丝的生长，但对水稻稻瘟病菌和小麦纹枯病菌菌丝的生长没有抑制效果。
GAFP-1的N-端10个氨基酸残基为Asp-Pro-Gly-Cys-Asn-Val-Leu-Glu-Asp-Ile，以这10个氨基酸残基为基础进行同源性比较发现，它与蛋白质数据库中已知的蛋白质没有同源性，表明GAFP-1可能是1个新的抗真菌蛋白。
【总页数】5页(P77-81)【作者】黄虎;邹振;谢伟军;龚蓁蓁【作者单位】中国科学院上海生物化学研究所,;中国科学院上海生物化学研究所,;中国科学院上海生物化学研究所,;中国科学院上海生物化学研究所,【正文语种】中文【中图分类】S664.301【相关文献】1.一种抗真菌抗生素的分离纯化及初步鉴定 [J], 万中义;张亚妮;李万德;张志刚;朱睍;王开梅;杨自文2.海洋放线菌Y12-26中抗真菌活性代谢产物的分离纯化与结构鉴定 [J], 程亮;罗明明;吴继纲;郝有武;徐文平;陶黎明3.丝状真菌SIIA-F1108产生抗真菌物质的分离纯化和结构鉴定 [J], 孟慧云;杨渊;王欣荣;李旭航;翟龙飞4.海洋放线菌BM-2菌株抗真菌活性物质的分离纯化与结构鉴定 [J], 马桂珍;吴少杰;付泓润;暴增海;王淑芳;葛平华5.海洋放线菌BM-2菌株抗真菌活性物质的分离纯化与结构鉴定 [J], 马桂珍;吴少杰;付泓润;暴增海;王淑芳;葛平华;因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
一株产甲萘醌-7(MK-7)菌的分离鉴定及产物合成条件的初步研究
一株产甲萘醌-7(MK-7)菌的分离鉴定及产物合成条件的初步研究徐建中;王颖妤;严为留;张伟国【摘要】本文从豆豉中分离出了一株高产MK-7的菌株并对其进行了鉴定,同时对该菌合成MK-7的条件进行了初步研究.在参照《伯杰氏细菌鉴定手册》,并根据形态学特征、生理生化特性、并结合16S rDNA序列分析结果,该菌属于解淀粉芽孢杆菌.该菌合成MK-7的最佳条件为:发酵温度37℃、装液量为30 mL/250 mL、接种量为2％和摇瓶培养时间为3h.研究发现,菌株Y-2合成的MK-7主要存在于细胞内.以上结果可为基于菌株Y-2选育高产MK-7菌株和实现MK-7的产业化提供理论依据.【期刊名称】《工业微生物》【年(卷),期】2016(046)003【总页数】7页(P1-7)【关键词】中国豆豉;甲萘醌-7;解淀粉芽孢杆菌;产物分布【作者】徐建中;王颖妤;严为留;张伟国【作者单位】江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡214122;江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡214122;江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡214122;江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室,江苏无锡214122【正文语种】中文豆豉(Douchi; Lobster sauce)是我国传统的大豆发酵制品，因其营养丰富、药食兼用，而在我国四川、江苏、山东等地区广泛食用。
根据参与发酵的优势微生物菌群不同，可将豆豉分为霉菌型豆豉和细菌型豆豉[1]。
细菌型豆豉多是利用枯草芽孢杆菌、豆豉芽孢杆菌、乳酸菌等微生物在较高温度下作用于蒸熟的大豆，借助微生物蛋白水解酶作用而制成的。
豆豉营养价值高，除含有大量人体必须的氨基酸外，还含有多种维生素如维生素K1和维生素K2[2]。
维生素K2，又称为甲萘醌，是由一个甲基萘醌母环和一条位于母环C-3位置上的异戊二烯侧链组成的一类具有醌类结构的脂溶性化合物[3]。
微生物的分离纯化实验报告
一、实验目的1. 理解微生物分离纯化的基本原理和方法。
2. 掌握倒平板、涂布平板等微生物接种技术。
3. 学习观察微生物的菌落形态特征，进行初步鉴定。
4. 培养无菌操作意识和实验室基本操作技能。
二、实验原理微生物的分离纯化是指从混杂的微生物群体中，分离出只含有一种或某一株微生物的过程。
实验中常用的分离纯化方法有稀释平板法、涂布平板法、划线分离法等。
通过在固体培养基上形成单菌落，可以实现对微生物的纯化。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：土壤样品、牛肉膏蛋白胨培养基、琼脂糖、无菌水、无菌棉签、无菌镊子、无菌培养皿、酒精灯、酒精棉球、显微镜等。
2. 仪器：恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、电子天平、无菌操作台等。
四、实验步骤1. 土壤样品的处理- 称取适量土壤样品，加入10倍体积的无菌水，充分振荡混匀。
- 以无菌操作，取1ml土壤悬液，加入9ml无菌水中，制成10^-1稀释液。
- 重复上述步骤，制成10^-2、10^-3等不同稀释度的土壤悬液。
2. 倒平板- 将牛肉膏蛋白胨培养基加热融化，待冷却至50-55℃时，倒入无菌培养皿中，使培养基厚度约为2-3mm。
- 待培养基凝固后，用无菌镊子取适量不同稀释度的土壤悬液，分别滴加到培养皿中。
- 将培养皿倒置，放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
3. 涂布平板- 将牛肉膏蛋白胨培养基加热融化，待冷却至50-55℃时，倒入无菌培养皿中，使培养基厚度约为2-3mm。
- 待培养基凝固后，用无菌棉签蘸取适量土壤悬液，均匀涂布在培养皿表面。
- 将培养皿倒置，放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
4. 划线分离- 将牛肉膏蛋白胨培养基加热融化，待冷却至50-55℃时，倒入无菌培养皿中，使培养基厚度约为2-3mm。
- 待培养基凝固后，用无菌接种针取适量土壤悬液，在培养皿表面进行划线分离。
- 将培养皿倒置，放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
5. 菌落观察与鉴定- 观察不同平板上的菌落形态，记录菌落的颜色、大小、形状、边缘等特征。
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一种抗真菌抗生素的分离纯化及初步鉴定摘要:从海南五指山采集的土样中分离到一株放线菌,编号为WS-23883,其发酵提取物对多种植物病原真菌具有很强的抑制活性｡对其产物进行提取精制及制备液相纯化,获得了纯度达90%以上的化合物｡生测表明,在20 μg/mL浓度下该抗生素对多种植物病原真菌的抑制率达100%｡根据活性产物紫外吸收光谱,可判断其为一多烯大环内酯类抗生素｡质谱分析表明,活性化合物分子质量约667 u,据此判断其为一四烯大环内酯类抗生素｡关键词:多烯大环内酯;抗生素;化合物;纯化;鉴定Isolation, Purification and Preliminary Identification of A Kind of Antibiotic with High Antifungal ActivityAbstract: One actinomyces strain WS-23883 was isolated from soil sample collected in Wuzhishan Mountain area, Hainan province. The extraction of the fermentation broth was bioassayed with some plant disease pathogens; and it exhibited high antifungal activity. The compound with purity above 90% was obtained through macroporus resin column absorbtion method and preparative HPLC. The bioassay showed that the inhitition ratio was 100% at the concentrition of 20 μg/mL. The UV absorption spectrum and mass spectrum showed that the compound was atetraene macrolide antibiotic.Key words: polyene macrolide; antibiotic; compound; purification; characterization 从海南五指山采集的土样中分离到一株放线菌,其发酵提取物对多种供试植物病原真菌及某些腐生真菌具有很强的抑制活性｡采用常规方法对该菌的发酵产物进行了提取精制,得到了纯度在90%以上的样品,从目标产物的紫外吸收光谱可判断其为一多烯类抗生素｡HPLC-MS检测表明,活性产物分子离子峰为667,可以确定其分子质量约为667 u,综合分析后确定其为一四烯大环内酯类抗生素｡1材料与方法1.1菌株1.1.1抗生素产生菌编号为WS-23883,从海南五指山采集的土样中分离得到,由湖北省生物农药工程研究中心保存｡1.1.2生测指示菌番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)､小麦颖枯病菌(Septoria nodorum)､小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)､水稻纹枯病菌(Rhizoctoniasolani)､水稻稻瘟病菌(Pyricularia oryzae)､毛霉(Mucor sp.)均为湖北省生物农药工程研究中心保存｡1.2培养基1.2.1种子培养基葡萄糖-酵母粉-麦芽提取物培养基｡采用带挡板的500 mL三角瓶,装量100 mL｡1.2.2抗生素发酵培养基甘露醇-豆胨液体培养基｡采用带挡板的500 mL三角瓶,装量100 mL｡1.2.3生测培养基采用PDA培养基｡用管碟法生测时,下层琼脂质量分数为1.5%,上层琼脂质量分数为1.0%｡用96孔板进行生测时,琼脂质量分数为0.8%｡1.3主要仪器设备B?譈CHI ROTA V APOR R-200型旋转蒸发仪,瑞士生产;分析型液相色谱仪:Waters 2690采用2996二极管阵列式检测器;制备型液相色谱仪:Waters 2525泵,2767自动收集系统,2996二极管阵列式检测器;液质联用分析仪:Waters 2695高效液相色谱仪,采用Waters 996二极管阵列式检测器,Masslynx V4.0色谱工作站,美国Micromass Quattro micro?誖四极杆质谱仪,电喷雾离子源(ESI),Masslynx V4.1液质联用分析软件｡1.4主要试剂色谱纯级甲醇､乙腈均为天津基准试剂有限公司生产;分析纯乙醇,西陇化工股份有限公司生产;大孔吸附树脂D3520,南开大学化工厂生产;液质联用氮气,购自武汉市汉阳钢厂,纯度为99.999%｡1.5色谱条件1.5.1分析条件采用美国Sunfire C18柱,流动相为水和乙腈,梯度洗脱,流速为0.3 mL/min｡1.5.2制备条件制备柱采用美国Sunfire OBD C18柱,250 mm×19 mm,粒径为10 μm;柱温为室温;流动相为水和乙腈,进样量为3 000 μL;流速为27 mL/min;检测条件:二极管阵列,全波长扫描｡1.5.3质谱检测条件电喷雾电离(ESI),毛细管电压为3.5 kV,锥孔电压为45 V,离子源温度为100 ℃,干燥气温度为300 ℃,脱溶剂气体流速500 L/h,锥孔气体流速为50 L/h｡1.6主要方法1.6.1抗生素发酵取低温(-20 ℃以下)保藏的WS-23883甘油管1支,在严格无菌条件下用吸管取 1 mL甘油-菌丝悬浮物转入种子培养基中,在旋转式摇瓶机上28 ℃､140 r/min培养4 d后转入发酵培养基中,接种量为10%(V/V),相同条件下培养5 d后结束发酵｡1.6.2发酵液处理将发酵液用稀盐酸调pH值至5.0后,5 000 r/min离心10 min,将菌丝体和上清液分开｡1.6.3上清液过柱及洗脱将经预处理的大孔吸附树脂装入50 mm×1 000 mm四氟砂芯玻璃柱中,将上清液以10倍柱料体积,按BV=0.5~1.0的流速过柱,再以4倍于柱料体积的纯净水洗涤,用2倍于柱料体积的75%(V/V)乙醇洗脱,每200 mL收集1份｡1.6.4菌丝体萃取称取菌丝体质量(湿体),加入2倍体积的75%(V/V)乙醇,充分搅匀后,转入带挡板的500 mL三角瓶中,每瓶装量200 mL,置摇床上180 r/min振荡萃取1 h,然后于5 000 r/min离心10 min,倒出上清｡菌丝残渣用同样的方法再萃取1次｡合并2次萃取液,置旋转蒸发仪上在50 ℃､160 r/min,7 kPa压力下浓缩至原体积的1/5,置4 ℃静置过夜析出结晶｡1.6.5样品干燥将上述结晶物离心,再以纯水洗涤,再次离心以去掉可溶性杂质｡将沉淀物用纯水悬浮,转入不锈钢冻干盒中,冰冻干燥,即得奶黄色疏松粉末｡过柱后的洗脱液旋转蒸发除去乙醇后冰冻干燥｡1.6.6样品活性测定称取1 mg样品,加入纯水,溶解后制得1 000 μg/mL溶液｡以毛霉为指示菌,用管碟法测定样品活性｡1.6.7样品分析称取上述样品1 mg,加入1 mL甲醇溶解,10 000 r/min离心5 min,再以Mill ipore 0.5 μm膜过滤,HPLC分析,进样量3 μL｡2结果与分析2.1提取物活性测定生物活性测定结果表明,WS-23883的提取物对5种真菌菌丝的抑制率均达到100%,表明其有很强的抗真菌作用｡2.2精制样品分析生测及HPLC分析(图1)表明,样品中主要活性物质保留时间为14.02 min,杂质峰很小,用面积积分法算出样品纯度在90%以上｡从样品紫外吸收光谱(图2)来看,呈典型的指状吸收峰,最大吸收波长为291､304､319 nm,以304 nm吸收最强｡根据文献资料[1,2],该化合物应属多烯大环内酯类抗生素｡2.3样品HPLC-MS分析从质谱图(图3)可以看出,在正离子和负离子质谱中各有一个较强的峰,分别为668.0和666.3,因而对应的分子离子峰为667,从而确定该活性化合物分子质量为667 u｡查已知多烯类抗生素数据可知,与该化合物最相近的是匹马菌素(Pimiricin)[3,4],其分子质量为665.7 u｡两者质量数相差1个单位,是仪器误差还是二者非同一物质,尚待进一步分析｡3小结与讨论多烯大环内酯类抗生素是一类具有多个共轭双键的抗生素,其紫外吸收呈指状,特征非常明显,因而根据紫外吸收光谱很容易判断｡根据共轭双键的数目,多烯类抗生素可分为三烯､四烯､五烯､六烯､七烯等5类｡由于共轭双键的向红效应,其最大吸收波长会随着双键数目的增加而增加,根据最大吸收波长即可判断此类抗生素的归属[2]｡多烯大环内酯类抗生素通常具有很强的抗真菌活性,且抗真菌谱广,对丝状真菌､酵母等均有活性｡其最大弱点是对紫外光很敏感,因而多用在医疗方面,如制霉菌素(四烯)､两性霉素B(七烯)常用于抗真菌感染,纳他霉素[4](四烯)可用于医药及食品添加剂,等等｡多烯大环内酯类抗生素也有用于防治农作物病害的例子,如菲律宾菌素[3](五烯)可用于防治农作物曲霉､青霉病,梧宁霉素(四霉素,四烯)可用于防治水稻稻瘟病[5]､苹果腐烂病[6]等｡很多农作物真菌病害如萝卜､白菜根肿病,棉花黄萎病,西瓜枯萎病等是通过土壤传播的,多烯大环内酯类抗生素在土壤中使用可大大削弱紫外线的作用,因而有可能用于作物土传性真菌病害的防治｡参考文献:[1] MURA S. Macrolide antibiotics [J]. Chemistry and Biology,1970(8):139-150.[2] 顾觉奋.分离纯化工艺原理[M].北京:中国医药科技出版社,1996.301-306.[3] 张志平,姚天爵.抗生素与微生物产生的生物活性物质[M].北京:化学工业出版社,2005.362.[4] 梁景乐. 纳他霉素高产菌株空间育种､工艺优化及工业放大研究[D].杭州:浙江大学,2005.[5] 韩润亭,张金花,任金平,等.生物农药梧宁霉素防治水稻稻瘟病田间药效试验[J].现代农业科技,2008(14):112-113.[6] 董德鑫,邢歧,李文珍,等.梧宁霉素发酵液防治苹果腐烂病试验[J].中国果树,1990(2):34-35.。