实验十二___土壤中产抗生素放线菌的分离纯化
土壤中产淀粉酶菌株的分离、鉴定与纯化
土壤中产淀粉酶菌株的分离、鉴定与纯化土壤中产淀粉酶菌株的分离、纯化鉴定及高活力淀粉酶菌株的筛选一、实验原理培养基是供微生物生长、繁殖、代谢的混合养料。
由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同。
但从营养角度分析，培养基中一般含有微生物所需的C源、N源、无机盐、生长因子以及水等。
从混杂微生物群体中获得只含某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离纯化。
平板分离法普遍适用于微生物的分离与纯化，其基本原理是选择适合于待分离微生物的生长条件，或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其它微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。
稀释涂布法或平板法时常用的分离与纯化的方法，以淀粉作为惟一碳源的培养基培养未分离细菌，能产淀粉酶的细菌能生长，且菌落周围出现透明圈（淀粉不透明，被消化后变透明），则产淀粉酶微生物被分离出来。
本实验采用透明圈检验法检测培养物中是否有产淀粉酶微生物的生长。
二、分离及纯化1、材料试剂:营养琼脂、淀粉、土壤、碘液等器皿：移液管、培养皿、试管、三角瓶、量筒、酒精灯、接种环等仪器：高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱其他：报纸、纱布、棉花、面线绳2、方法2.1培养基与器皿的准备和灭菌（1）培养基的配制称量1.2克淀粉。
加少量水加热溶化，然后加入6.8克营养琼脂，加水至150毫升，煮沸后倒入250ml容量的三角瓶中，加棉塞后放入高温蒸汽灭菌锅内灭菌备用。
（2）无菌水的制备分别取9ml蒸馏水加入5支试管中，加塞后用报纸包扎捆绑，放入高压蒸汽灭菌锅灭菌备用。
取90ml蒸馏水加入250ml三角瓶中，同样的操作，灭菌备用。
（3）器皿的准备将刻度吸管用报纸包扎，培养皿装入专用灭菌杯分别放入高温灭菌箱灭菌备用。
2.2菌悬液的制备和梯度稀释取10g土壤样品加入90ml无菌水中震荡, 然后静置2分钟。
取六只试管编号1—6分别加入9ml无菌水，从菌悬液中取1ml 上清液加入1号管后震荡摇匀，然后再从1号管中取1ml加入2号管震荡摇匀，依次操作六个试管，得到10ˉ1—10ˉ6六个稀释度的菌悬液。
实验2 土壤中稀有放线菌的分离--土壤样品采集
实验2 土壤中稀有放线菌的分离--土壤样品采集1 目的1.1 了解微生物分离和纯化的原理1.2 掌握常用的分离纯化微生物的方法2 原理从混杂微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物分离与纯化。
其基本原理是选择适合于待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求,或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。
土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。
因此土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。
本实验将采用不同的培养基从土壤中分离不同类型的微生物。
3 材料3.1 培养基淀粉琼脂培养基(高氏I号培养基)，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，马丁氏琼脂培养基，查氏琼脂培养基。
3.2 仪器或其它用具取样铲、塑料袋、记号笔、1．布点：按照土壤类型和作物种植品种分布，按土壤肥力高、中、低分别采样。
一般150-300亩（不同地区可根据情况确定）采取一个耕层混合样，采样点以锯齿型或蛇型分布，要做到尽量均匀和随机。
应用土壤底图确定采样地块和采样点，并在图上标出，确定调查采样路线和方案。
2．采样部位和深度：用取样铲，将表层5cm左右的浮土除去，取5～25cm处的土样0.5-1kg，在采样过程中，采取的混合样一般都大于该重量，所以要去掉部分样品，将所有采样点的样品摊在塑料布上，除去动植物残体、石砾等杂质，将大块的样品整碎，混匀，摊成园形，中间划十字分成四份，然后对角线去掉两份，若样品还多，将样品再混合均匀，再反复进行四分法，直至样品最终重量要求0.5-1公斤（试验用的样品2公斤）为止。
如下示意图。
一用取土器或锄头直接挖入耕层取样。
每个点切取的土块宽度、厚度应基本一致。
装入事先准备好的塑料袋内扎好。
北方土壤干燥，可在10～30cm处取样。
3．采样方法、数量：1)面积小，地势平坦，肥力均匀的田块，采用对角采样法。
土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化
土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化一、实验目的1. 学习、掌握从土壤稀释分离、划线分离各类微生物的技术。
2. 学习从样品中分离、纯化出所需菌株。
3. 学习并掌握平板倾注法和斜面接种技术，了解培养细菌、放线菌、酵母菌及霉菌四大类微生物的培养条件和培养时间。
4. 学习平板菌落计数法。
二、实验原理将待分离的样品进行一定的稀释，使微生物的细胞（或孢子）尽量呈分散状态，选用有针对性的培养基，在不同温度、通风等条件下培养，让其长成一个纯种单个菌落。
要想获得某种微生物的纯培养，还需提供有利于该微生物生长繁殖的最适培养基及培养条件。
微生物四大类菌的分离培养基、培养温度、培养时间见表2-1所示。
表2-1 微生物四大类菌的分离和培养要求样品来源分离对象分离方法稀释度培养基名称培养温度/℃培养时间/d土样细菌稀释分离10-5，10-6，10-7牛肉膏蛋白胨30～37 1～2土样放线菌稀释分离10-3，10-4，10-5高氏1号28 5～7 土样霉菌稀释分离10-2，10-3，10-4马丁氏琼脂28～30 3～5面肥或土样酵母菌稀释分离10-4，10-5，10-6马铃薯葡萄糖28～30 2～3细菌分离平板细菌单菌落划线分离10-2 牛肉膏蛋白胨30～37 1～2三、实验材料1. 菌源土样2. 培养基牛肉膏蛋白胨培养基，马丁氏培养基，高氏合成1号培养基，马铃薯葡萄糖培养基(制平板和斜面)，见附录Ⅲ。
3. 无菌水 250 mL锥形瓶，每瓶装99 mL无菌水(或95mL为分离霉菌用)，内装10粒玻璃珠。
4.5 mL无菌水试管(每人5～7支)。
4. 其他物品无菌培养皿，无菌移液管，无菌玻璃涂棒(刮刀)，称量纸，药勺，橡皮头，10%酚溶液。
（一）系列稀释平板法1. 取土样选定取样点，按对角交叉（五点法）取样。
先除去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤。
盛土的容器应是无菌的。
将5点样品约1kg充分混匀，除去碎石、植物残根等杂物，装入已灭过菌的牛皮纸袋内，封好袋口，并记录取样地点、环境及日期。
土壤中放线菌的分离和纯化实验（精选5篇）
土壤中放线菌的分离和纯化实验（精选5篇）第一篇：土壤中放线菌的分离和纯化实验土壤中放线菌的分离和纯化实验一、实验目的1、制作MS培养基的方法，掌握母液的保存方法。
2、掌握培养基的灭菌方法。
掌握外植体的消毒和超净工作台的使用。
4、掌握放线菌的分离纯化及染色的基本流程；5、掌握高氏一号培养基的配制方法；6、复习分离纯化放线菌的基本操作技术、培养方学会使用高压蒸汽灭菌锅。
7、培养微生物实验的设计思路和动手能力。
二、实验材料高压蒸汽锅、培养瓶、石斛的愈伤组织、超净工作台，酒精灯、酒精棉球、镊子、电子天平、称量纸、烧杯、量筒、显微镜、三角锥形瓶、无菌培养皿、接种环、酒精灯、分析天平；接种环、载玻片、盖玻片、玻璃珠、移液枪、剪刀三、实验原理植物组织培养即植物无菌培养技术，又称离体培养，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官(如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）、组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）第 1 页或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及原生质体,在无菌和适宜的人工培养基及温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株的学科。
四、实验步骤1、配制MS培养基8L，称取马铃薯1600g、香蕉400g、蔗糖240g、活性炭8半勺、琼脂80g、配制母液。
2、配制培养液时应注意：①在使用提前配制的母液时，应在量取各种母液之前，轻轻摇动盛放母液的瓶子，如果发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰这种母液，重新进行配制；为防止母液被微生物污染，有机母液放在冰箱里4℃保存；②用量筒或移液管量取培养基母液之前，必须用所量取的母液将量筒或移液管润洗2次；③量取母液时，最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸上，量取1种，划掉1种，以免出错。
溶化琼脂用粗天平分别称取琼脂9 g、蔗糖30 g，放入1 000 mL的搪瓷量杯中，再加入蒸馏水750 mL，用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状。
土壤中放线菌的分离 (2)
土壤中放线菌的分离简介放线菌（Actinomycetes）是一类广泛存在于地球各种土壤中的微生物，具有丰富的生物活性代谢产物和生物学功能。
分离土壤中的放线菌对于获得新的生物活性物质和解析放线菌菌株有着重要意义。
本文将介绍土壤中放线菌的分离方法及过程，并提供一些实践经验。
分离方法样品收集选择合适的样品收集地点至关重要。
一般情况下，草地、农田、果园等土壤中含有较丰富的放线菌资源。
在进行样品收集前，应先清理收集工具和容器，并使用无菌绳固定收集区域，避免外界杂质污染。
样品处理1.从采集的土壤中取得样品，并将其放入无菌锥形瓶中。
2.将样品添加至无菌水中，形成土壤悬浮液。
可以通过搅拌或振荡等方式充分悬浮土壤颗粒。
3.通过离心的方法，去除悬浮液中的大颗粒和杂质。
分离培养基的制备分离出放线菌的选择培养基非常重要，一般常用的培养基有：•考马斯琼脂培养基（Koj A）•聚芽孢杆菌琼脂培养基（SGA）•苯丁三唑糖脂琼脂培养基（BIS）其中，考马斯琼脂培养基是最为常用的一种，可以选择性地培养出放线菌。
分离操作1.在无菌条件下，将处理好的土壤悬浮液均匀涂布于分离培养基上。
2.用一次性平皿、玻璃块或玻璃棍等工具均匀划开土壤悬浮液，以增加放线菌的分离点。
3.培养皿密封后，放入恒温培养箱进行培养，通常在28-30℃下培养7-10天。
鉴定和筛选在培养箱中培养的结果显示出放线菌的单独菌落后，可以进行以下鉴定和筛选步骤：1.观察和记录菌落形态特征，包括颜色、形状、质地等。
2.进行显微镜下的形态观察，例如菌丝形态、芽孢形态等。
3.进行生理生化特性的鉴定，包括酶活性、产生代谢产物等。
4.进行16S rRNA或其它分子生物学方法的鉴定，以确定放线菌属别。
实践经验1.分离培养基的配制需要细心严谨，避免污染。
最好在无菌工作台环境下操作。
2.鉴定放线菌时，不同菌株之间可能存在形态和生理差异，需要谨慎观察和鉴定。
3.放线菌培养需要一定的时间，早期菌落的筛选和鉴定需耐心等待。
【精品】实验八 土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化13
一、实验目的 1、熟悉从自然界中分离微生物的原理； 2、掌握细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的分离纯化
方法。
二、实验原理 微生物四大类菌的分离和培养
三、实验材料
酵母菌及霉菌的分离与纯化 1、熟悉从自然界中分离微生物的原理；
1、菌源：自备。 2、在分区平板划线法中，为什么每次都需将接种环上稀释液 2、涂布法进行分离 3、培养 4、菌落计数 5、划线分离
五、实验报告
1、在你所制备的培养基的平板上长出的菌落分别属 于哪个类群？简述它们的菌落形态特征。
2、在分区平板划线法中，为什么每次都需将接种环 上剩物烧掉？
3、为什么要把培养皿倒置培养？
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土壤中放线菌的分离、鉴定设计方案
一、实验题目：分离放线菌。
二、实验原理：土壤中放线菌最丰富，品种齐全。
通常情况下，放线菌在比较干燥、偏碱性、含有机质丰富的土壤中数量居多。
土壤中含有的放线菌主要是链霉菌，人们通常将除链霉菌以外的其它放线菌统称为稀有放线菌，但往往由于样品中稀有放线菌的数量太少，常规的分离方法很难得到。
对样品进行风干、干热处理、培养基添加重铬酸钾等方法可以减少细菌和真菌的数量，以提高放线菌的获得率。
用干热和苯酚处理可减少链霉菌数量和比例的方法，可以分离得到更多种类的放线菌。
土壤中分离放线菌的方法很多，其中包括稀释法、弹土法、混土法和喷土法等，本实验主要采用稀释涂布平板法法来获得放线菌。
稀释涂布平板法：取少量梯度稀释菌悬液，置于已凝固的无菌平板培养基表面，然后用无菌的涂布波棒把菌液均匀地涂布在整个平板表面，经培养后，在平板培养基表面会形成多个独立分布的单菌落，然后挑取典型的代表移接至斜面，经培养后保存。
三、实验材料及器材（1）实验材料：采集的土壤材料。
材：微波炉、电磁炉、干燥箱、玻璃涂铲、50或100mL量筒（灭菌）、90mm培养皿（灭菌）、1或2mL移液管（灭菌）、标签纸、小玻璃珠（灭菌）、吸耳球，盖玻片等。
（3）实验试剂：可溶性淀粉、KNO3、K2HPO4·3H2O、NaCl、FeSO4·7H2O、MgSO4·7H2O、琼脂、盐酸、氢氧化钠、PH试纸、重铬酸钾。
四、实验步骤（一）采样1、放线菌的特点、生境分析放线菌以孢子和菌丝片段的形式存在于土壤，每克土壤内含有数万、数十万的孢子。
放线菌的孢子和孢囊孢子在适宜的环境下吸收水分，膨胀萌发，生出芽管1 － 3 个，芽管伸长长出分枝，分枝越来越多，形态菌丝体。
因其菌丝体在培养基内，即基内菌丝或称营养菌丝体。
基内菌丝体一般没有横隔，由于菌丝体长入培养基内和培养基表面，并纠缠在一起形成密集的菌落，所以用接种针将整个菌落培养基挑起而不破裂。
基内菌丝体向空间长出的菌丝体叫做气生菌丝体。
放线菌的实验报告
一、实验目的1. 掌握土壤中放线菌的采集、分离和纯化方法。
2. 学习放线菌的培养技术，观察其生长特征。
3. 提取放线菌产生的活性物质，并对其活性进行初步鉴定。
二、实验原理放线菌是一类呈菌丝状生长的微生物，广泛分布于土壤、空气和水中。
放线菌与人类的生产和生活关系密切，许多临床应用的抗生素均由放线菌产生。
本实验通过土壤中放线菌的分离、培养和活性物质提取，旨在了解放线菌的生长特征及其产生的活性物质。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 土壤样品- 高氏一号培养基- 种子培养基- 发酵培养基- 试剂：重铬酸钾、无菌水、酒精等2. 实验仪器：- 培养皿- 牛津杯- 接种环- 酒精灯- 无菌涂棒- 三角锥瓶- 高压蒸汽灭菌锅- 天平- 药匙- 烧杯- 量筒- 玻璃棒- 试管- 牛皮纸- 线绳四、实验步骤1. 土壤放线菌株的采集（1）选择取样点：选择有机质含量高的土壤，如菜地、林地等。
（2）采集样品：按对角交叉（五点法）取样，先除去表层约2cm的土壤，将铲子插入土中数次，然后取2～10cm处的土壤。
（3）将5点样品混合均匀，用无菌水稀释至10-1、10-2、10-3、10-4、10-5倍。
2. 放线菌的分离与纯化（1）制备高氏一号培养基平板：将高氏一号培养基加热溶解后，倒入培养皿中，待凝固后备用。
（2）将稀释后的土壤样品涂布于高氏一号培养基平板上。
（3）将平板置于37℃恒温培养箱中培养3～5天，观察菌落生长情况。
（4）挑取单菌落进行纯化，重复上述步骤，直至获得纯放线菌。
3. 放线菌的培养（1）将纯化后的放线菌接种于种子培养基中，置于37℃恒温培养箱中培养24小时。
（2）将种子液按一定比例接种于发酵培养基中，置于37℃恒温培养箱中发酵。
4. 活性物质提取（1）将发酵液离心分离，收集上清液。
（2）用重铬酸钾对上清液进行氧化反应，观察颜色变化，以初步鉴定活性物质。
五、实验结果与分析1. 放线菌分离与纯化：成功分离纯化出放线菌，菌落呈菌丝状，颜色多样。
实验(二)土壤中微生物的分离纯化及观察
实验结果
(P３4 五、１.(２、３)
你所做的涂布平板法和划线法是否较好地得到了单菌 落？如果不是，请分析其原因。
在不同的平板上你分离得到了哪些类群的微生物？简 述它们的菌落特征。
思考题
如何确定平板上某个单菌落是否为纯培养？请写出实 验的主要步骤。(P３4 五.2.(1)) 如果一项科学研究内容需从自然界中筛选到能产高温 蛋白酶的菌株，你将如何完成？请写出简明的实验方 案。
(二)、平板菌落计数法
目的要求
学习平板菌落计数的基本原理和方法。
基本原理
通过将样品制成均匀的一系列不同稀释度的稀释液，使
样品中的微生物细胞充分分散，成单个细胞存在，再取 一定量的稀释液接种，使其均匀分布于培养皿中特定的 选择性培养基内。
统计数量时，根据稀释倍数与取样量、平板上长出的菌
落数计算出每克或每毫升样品中的微生物数（CFU）。
７、挑菌落 将培养出的单菌落进行斜面接种， 并分别置37℃和28℃温室中培养，此后镜 检是否为单一微生物。若有杂菌，继续分 离纯化。
二、平板划线分离法（个人完成）
1、倒平板：将３种培养基溶化后，各倒一皿。并用记
号笔标明培养基名称、样品编号、个人学号等。
2、划线：分别挑取土壤样品中10－1的土壤悬液一环， 在三种平板上划线，以分离细菌、放线菌、霉菌。
5.培养：37℃倒置培养48h。
６ .计数：选择每个平板上长有30~300个菌落数的 稀释度计算样品含菌量。
实验结果 P34表格
依据实验结果，分析本次数据是否可靠。 计算每毫升大肠杆菌菌悬液的含菌量。
思考题（ P34（3）（5）（6）(7)）
为什么融化后的培养基要冷却至45℃左右才能倒平板？ 要使平板菌落计数准确，需要掌握哪几个关键？为什
从环境中分离放线菌的实验
器材灭菌 无菌蒸馏水。 3个锥形瓶、培养皿12个、玻璃棒3个、移液枪 1个、枪头12个、接种环1个、酒精灯1个、打 火机1个 分离 方法：将处理后的土壤悬浮液稀释100倍备用 。加热已制备并灭菌好的高氏合成1号琼脂+重 酪酸钾培养基，在无菌条件下倒10个平板然后 ，贴好标签，冷却。用平板稀释法，稀释度从 10-3到10-5,浓度将菌种接种在高氏合成1号琼 脂+重酪酸钾的平板培养基上,28℃培养5~7d。
注意：稀释样品时要在无菌条件下进 行；每个稀释度做3个培养皿，并做好标 记；实验中要留一个空白对照；注意划 线时不要将培养基划破，划线时将培养 基画满，使菌种均匀分布在培养基上。
THANKS
从 环 境 中 分 离 放 线 菌 实 验
制 作 小 组 ： 一 组
一、实验目的 1、学习从土壤中分离放线菌的方法 。 2、练习、掌握微生物接种、移植和 培养的基本技术。掌握无菌操作技 术。 3、掌握无菌操作技术。
二、实验原理
放线菌是原核生物，是重要的抗生素产生菌，在 土壤中的数量仅次于细菌，尤其在有机质丰富、透 气性好的中性到微碱性土壤中的数量较多。 土壤颗粒的分散程度对于分离放线菌也有影响。 用胆酸钠处理土壤悬液后土壤分散效果较好，且优 于纯蒸馏水。这可能是因为胆酸钠对土壤腐殖质具 有较强的结合能力从而有利于破坏土壤团聚结构。 重铬酸钾对土壤真菌、细菌的抑制作用较明显， 然而对放线菌并无抑制作用。而且其价格低廉。实 验证明酵母膏、SDS（十二烷基硫酸钠）也有抑菌的 作用。
将土样放入三角瓶中，加入少量胆酸 钠，再加适量蒸馏水振荡溶解制成土壤 悬浮液。调节稀释液的PH为7，略微加热 后冷却至40℃。之后，再加6%酵母膏和 用5 mmol / L 磷酸缓冲液稀释的0.05% SDS 震荡20min。 注意：所取的土样不可过湿，防止样 品中杂菌过多；至土壤稀释液时要振荡 充分，是土样与水充分混合，将菌分散 。
实验十二___土壤中产抗生素放线菌的分离纯化
实验十二土壤中产抗生素放线菌的分离纯化实验目的：1、从土壤中分离产抗生素的放线菌。
2、抗生素产生菌的抗菌谱测定。
3、掌握微生物的基本操作。
实验原理：放线菌是一类呈菌丝状生长，主要以孢子繁殖，革兰染色为阳性的单细胞原核微生物，是细菌中的一种特殊类型。
放线菌与人类的生产和生活关系极为密切，目前广泛应用的抗生素约70%是各种放线菌所产生。
许多临床应用的抗生素均由土壤中分离的放线菌产生。
微生物大量存在与土壤中，其中包括细菌、放线菌和真菌等，采用选择性培养基可分离土壤中的放线菌。
产抗生素的放线菌经液体培养后，其分泌的抗生素存在于离心所得的上清液中，可采用微生物的抑菌试验进行检测，从而筛选到所需的抗生素产生菌。
实验材料：1、土壤菜园土。
2、实验菌金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的8h培养物。
3、培养基淀粉琼脂和淀粉液体培养基。
4、其它10％的酚、牛津杯、灭菌生理盐水、接种环、无菌涂棒、酒精灯、无菌吸管等。
实验方法：一、土壤中放线菌的分离1、配制淀粉培养基配方一淀粉琼脂培养基（高氏培养基）可溶性淀粉2克；硝酸钾0.1克；磷酸氢二钾0.05克；氯化钠0.05克；硫酸镁0.05克；硫酸亚铁0.001克；琼脂2克水100毫升先把淀粉放在烧杯里，用5毫升水调成糊状后，倒入95毫升水，搅匀后加入其他药品，使它溶解。
加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水。
调整pH值到7.2～7.4，分装后灭菌，备用。
配方二面粉琼脂培养基面粉60克；琼脂20克；水1000毫升把面粉用水调成糊状，加水到500毫升，放在文火上煮30分钟。
另取500毫升水，放入琼脂，加热煮沸到溶解后，把两液调匀，补充水分，调整pH值到7.4，分装，灭菌，备用。
2、土壤悬液梯度稀释（1）将5.0g土壤加入到50ml灭菌的生理盐水中，震荡10min制备土壤悬液。
（2）用无菌吸管吸取1ml土壤悬液，加入到9ml灭菌的生理盐水中10倍稀释。
（3）按1：10稀释至10-3、10-4、10-5。
【精品】实验八 土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化95
五、实验报告
1、在你所制备的培养基的平板上长出的菌落分别属于哪个类群？简述它们的菌落形态特征。 2、在分区平板划线法中，为什么每次都需将接种环上剩物烧掉？ 3、为什么要把培养皿备。 2、培养基：牛肉膏蛋白胨培养基，高氏一号培养基，马丁氏培养基，豆芽汁葡萄糖培养基 3、无菌生理盐水。 4、其它物品 无菌培养皿、无菌移液管、无菌玻璃涂棒、称量纸、药勺、橡皮头、10％酚溶液。
四、实验步骤
1、制备土壤稀释液 2、涂布法进行分离 3、培养 4、菌落计数 5、划线分离
实验八 土壤中细菌、放线菌、 酵母菌及霉菌的分离与纯化
一、实验目的 1、熟悉从自然界中分离微生物的原理； 2、掌握细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的分离纯化方法。
酵母菌及霉菌的分离与纯化 1、熟悉从自然界中分离微生物的原理； 1、在你所制备的培养基的平板上长出的菌落分别属于哪个类群？简述它们的菌落形态特征。 1、在你所制备的培养基的平板上长出的菌落分别属于哪个类群？简述它们的菌落形态特征。 1、熟悉从自然界中分离微生物的原理； 1、熟悉从自然界中分离微生物的原理； 2、在分区平板划线法中，为什么每次都需将接种环上剩物烧掉？ 2、掌握细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的分离纯化方法。 3、为什么要把培养皿倒置培养？ 酵母菌及霉菌的分离与纯化 酵母菌及霉菌的分离与纯化 2、掌握细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的分离纯化方法。 1、熟悉从自然界中分离微生物的原理； 2、在分区平板划线法中，为什么每次都需将接种环上剩物烧掉？ 2、掌握细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的分离纯化方法。 2、在分区平板划线法中，为什么每次都需将接种环上剩物烧掉？ 微生物四大类菌的分离和培养 2、掌握细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的分离纯化方法。 2、在分区平板划线法中，为什么每次都需将接种环上剩物烧掉？ 4、其它物品 无菌培养皿、无菌移液管、无菌玻璃涂棒、称量纸、药勺、橡皮头、10％酚溶液。
实验十二土壤中微生物的分离纯化
（三）平板菌落计数法的原理
将待测菌液经适当稀释，涂布在平板上，经过培养后在平板上形成肉眼可见的菌落。统计菌落数，根据稀释倍数和取样量计算出样品中细胞密度（一般选择每个平板上长有50-200个菌落的稀释度计算每毫升的含菌量较为合适）。
由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，平板上形成的每个菌落不一定是单个细胞生长繁殖而成，有的可能来自两个或多个细胞。因此，平板菌落记数的结果往往比样品中实际细胞数低，这就是现在使用菌落形成单位取代以前用绝对菌落数来表示样品活菌含量的原因。
实验十二 土壤中微生物的分离及纯化 （设计性实验）
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掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术；
学习平板菌落计数的基本原理和方法，并掌握其基本技能。
初步观察来自土壤中的三大类群微生物的菌落形态特征；
一、目的要求
二、基本原理
土壤是微生物生存的大本营，所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的，原因是什么？ 由于土壤具备了各种微生物生长发育所需要的营养、水分、空气、酸碱度、渗透压和温度等条件，所以成了微生物生活的良好环境。可以说，土壤是微生物的“天然培养基”，也是它们的“大本营”因此，土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，人们可与从中分离、纯化获得许多有价值的菌株。
从微生物群体中经分离、生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征等综合考虑。有些微生物的纯培养要经过一系列的分离与纯化过程和多种特征（产酸产气情况、染色情况、营养要求、氧气需求、酸碱度、渗透压和温度等）鉴定方能得到。从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
土壤中放线菌的分离和纯化实验报告
土壤中放线菌的分离和纯化实验报告土壤中放线菌的分离和纯化实验报告土壤是一个很复杂，有许多层次的生态系统。
要想从事物体内分离得到目标产物，必须在特定条件下进行，而不能凭空臆断。
因此，实验室分离放线菌所需设备也应根据这些原则来选择和准备，如果单凭某种条件就妄加判断那么往往会导致实验失败或造成人力财力上的浪费。
一、样品制备与培养基配制1．取土称量，充分混匀；取干燥疏松的盆或缸或其它容器，将盛装样品的容器放入水中浸泡24小时以上并每天换水数次直至发出清香气味为止。
2．称取少量样品于蒸馏水中，混合均匀。
3．挑取含水量适当的样品接种于经灭菌消毒的马铃薯种子培养基平板上。
4．将经过灭菌消毒的培养皿置于恒温箱或酒精灯上加热使之软化。
5．软化后的样品立即倒入100毫升灭菌马铃薯琼脂培养基中。
6．迅速摇动平板混匀，冷却至45℃左右，用无菌操作法倒平板并贴签标记好。
二、增菌接种三、初代培养和测试计算平板上的菌落数，挑取相同的稀释度再按照步骤一继续培养。
然后检查各种参数及观察培养结果，对比最终的数值，以判断微生物对放线菌的敏感程度和产率。
四、菌种保藏采集长期保存的菌种可采用50℃的马铃薯培养基，将菌液接入0.7%-0.8%琼脂斜面中，斜面凝固后将斜面置冰箱中低温保存。
五、影响实验结果的主要因素环境条件和杂菌污染的因素都会严重地影响放线菌的分离纯化效果，如果只注意控制某个方面，忽视了另外两个条件都难以获得满意的结果，故要求分析工作者既要认真仔细又要灵活掌握，对那些关键性的技术环节和易受外界干扰因素影响的项目应给予足够的重视，这里只简略说明几点。
（1）温度是决定分离效果的主要因素之一。
通常情况下，分离放线菌要在25℃～28℃，湿度60%～70%的条件下进行，温度高达40℃，不但有碍于菌株的正常繁殖，还会导致菌种死亡。
2．采用多菌种混合分离的办法更能提高效率。
（3）琼脂浓度的影响在各种放线菌的分离中，无论是直接法还是间接法，均以琼脂培养基的营养丰富、无机盐和生长因子较多等优良特性著称，故为放线菌分离的常规方法，由于它在生长过程中氧化葡萄糖产酸，故利用这一特点来抑制微生物的呼吸，同时利用无机盐提供电子使酶钝化，因而提高了实验效果，并且减轻了劳动强度。
土壤中放线菌的分离与纯化
土壤中放线菌的分离与纯化放线菌是一类广泛分布于土壤中的革兰氏阳性细菌，具有许多生物活性物质的合成能力，因此在医药和农业领域具有广泛的应用前景。
而对于放线菌的分离与纯化，则是研究数字多样性、发掘新生物活性成分和开发新型药物的必要工作。
一、分离放线菌的样品采集在进行放线菌的分离与纯化之前，需要先采集土壤样品。
首先对采样是否合理、样品储存条件等要求进行评估。
然后在采样地的不同位置取样，每个样品之间要有足够距离，避免重复或低效地采集。
将采集到的样品分别按照一定的方式进行处理，常用的包括罗氏囊和加热处理。
可采用直接接种法和制备菌液法进行分离，直接接种法是将样品直接接种在寡速生菌平板上，不需要进行任何处理，制备菌液法先经过一定的处理如筛选、振荡等操作，然后再加入培养基中进行培养，优选后再进行接种。
三、放线菌的筛选分离后的放线菌种群中还包含其他微生物如生物体、细菌等，因此需要进行放线菌的筛选。
常用的筛选方法有颜色、形态、抗性和特异反应等多种选择，通过筛选后得到单个纯种放线菌株。
对于已经得到的放线菌菌株，进行菌株的鉴定是必要的。
鉴定的标准包括形态学特征如形状、大小、生长习性等、生化特性如酶系统、代谢途径等、分子生物学特性如16S rDNA序列等。
二氧化碳生成实验、酸碱性度测定、化学分析等，常用于进行放线菌菌株鉴定的方法。
对于分离和鉴定过的放线菌菌株，为了防止失活和污染，需要进行保存，并被录入保藏室中，应该根据放线菌不同的保存要求，选取合适的保存方式。
例如，低温保存的方法如短期保存冰箱法和长期保存冷冻物质保存法等。
通常选择液氮冷冻法则能够保证最长的保存时效。
总之，放线菌的分离与纯化是进行放线菌不同研究的基础，只有在得到了高纯度的菌株后，才能进一步进行后续的研究和开发工作，发掘其潜在的生物活性特性。
放线菌的分离与提纯 论文
放线菌的分离与提纯摘要：放线菌是一类呈菌丝状生长，主要以孢子或菌丝状态存在于土壤、空气和水中，革兰染色为阳性的单细胞原核微生物，是细菌中的一种特殊类型。
放线菌与人类的生产和生活关系极为密切，在医药工业上有重要意义。
本实验我们主要采用无菌培养、稀释法等方法对放线菌进行培养、分离和纯化，经过倒平板、制备梯度稀释液、涂布、培养、挑单菌落、保存等步骤即可使放线菌在固体培养基上形成单独菌落，并可得到纯菌株。
关键词：放线菌分离无菌一、实验目的学习从土壤中分离放线菌。
二、实验原理放线菌是重要的抗生素产生菌，主要分布在土壤中（主要是链霉菌），其数量仅次于细菌。
一般在中性偏碱性、有机质丰富、通气性好的土壤中含量较多。
由于土壤中的微生物是各种不同种类微生物的混合体，为了研究某种微生物，就必须把它们从这些混杂的微生物群体中分离出来，从而获得某一菌株的纯培养。
根据放线菌的营养、酸碱度等条件要求，常选用合成培养基或有机氮培养基。
如果培养基成分改变，或土壤预先处理（120℃热处理1h），或加入某种抑制剂（如加数滴10%酚等），都可以使细菌，霉菌出现的数量大大减少，从而淘汰了其它杂菌。
再通过稀释法，使放线菌在固体培养基上形成单独菌落，并可得到纯菌株。
三、仪器与材料（一）培养基（二）．溶液或试剂10%酚液，盛9ml无菌水的试管，盛90ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶，4%水琼脂。
（三）.仪器无菌玻璃涂棒、无菌吸管、接种环、无菌培养皿、链霉素和土样、显微镜、电热恒温水浴锅涂布器等。
（四）.流程倒平板→制备梯度稀释液→涂布→培养→挑单菌落→保存四、操作步骤（一）．来源土壤中放线菌丰富，品种齐全，可以筛选出新的放线菌。
（二）．培养基的制备1、称量和溶化按配方先称取可溶性淀粉，放入小烧杯中，并用少量冷水将淀粉调成糊状，再加入少于所需水量的沸水中，继续加热，使可溶性淀粉完全溶化。
然后再称取其他各成分，并依次溶化，对微量成分FeSO4 ．7 H2 O可先配成高浓度的贮备液，按比例换算后再加入。
土壤中抗生素产生菌的分离与抗菌活性检测
土壤中抗生素产生菌的分离与抗菌活性检测李若溪【摘要】放线菌是重要的抗生素产生菌.本实验利用牛肉膏蛋白胨培养基和高氏Ⅰ号培养基对土壤中的放线菌进行筛选,再通过平板涂布法、划线分离法对其进行分离纯化,发现培养基的成分会对放线菌的分离纯化效果产生直接影响,高氏Ⅰ号培养基分离出的放线菌较多.然后对其抗菌活性进行检测,发现放线菌能够产生抑制金黄色葡萄球菌和大肠杆菌生长的代谢产物,即抗生素.【期刊名称】《黑龙江科学》【年(卷),期】2019(010)014【总页数】2页(P40-41)【关键词】土壤;抗生素产生菌;抗菌活性检测【作者】李若溪【作者单位】西南大学,重庆400715【正文语种】中文【中图分类】Q931 引言放线菌在自然界中分布广泛，主要以孢子或菌丝状态存在于土壤、空气和水中，在含水量低、有机物含量高、中性或微碱性土壤中最为丰富。
本实验从土壤中分离微生物，找出能产抗生素的菌类，并对其进行分离纯化与抗菌活性检测。
在培养基上涂布大肠杆菌或金黄色葡萄球菌，并接种目标菌落，观察该菌落周围是否有抑菌圈产生，若有，即表明该菌落能产抗生素，可根据抑菌圈的大小、透明度、边缘整齐度来判断其抗菌活性的强弱[1]。
2 材料和方法2.1 材料、试剂与仪器桂花林、牛肉膏蛋白胨培养基、高氏Ⅰ号培养基、培养皿、500 ml三角瓶等。
2.2 方法与步骤第一，配置培养基。
对其进行灭菌与烘干，分离土壤中的微生物，然后倒平板、涂布、划线、分离纯化、培养。
第二，放线菌抑菌效果的检测。
按上述倒平板步骤倒牛肉膏蛋白胨培养基、高氏Ⅰ号培养基。
在超净工作台中，用移液枪与无菌枪头吸取300 μl金黄色葡萄球菌菌液或大肠杆菌菌液放于已写好标记的无菌平板中，用无菌玻璃涂布棒在培养基表面轻轻地涂布均匀。
用打孔器对在纯化过程中得到的放线菌单菌落进行打孔，以取得菌落块。
用接种针挑取菌落块，以菌落面向上的方式置于平板中。
要用保鲜膜进行封口，并做好标记[2]。
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实验十二土壤中产抗生素放线菌的分离纯化
实验目的：
1、从土壤中分离产抗生素的放线菌。
2、抗生素产生菌的抗菌谱测定。
3、掌握微生物的基本操作。
实验原理：
放线菌是一类呈菌丝状生长，主要以孢子繁殖，革兰染色为阳性的单细胞原核微生物，是细菌中的一种特殊类型。
放线菌与人类的生产和生活关系极为密切，目前广泛应用的抗生素约70%是各种放线菌所产生。
许多临床应用的抗生素均由土壤中分离的放线菌产生。
微生物大量存在与土壤中，其中包括细菌、放线菌和真菌等，采用选择性培养基可分离土壤中的放线菌。
产抗生素的放线菌经液体培养后，其分泌的抗生素存在于离心所得的上清液中，可采用微生物的抑菌试验进行检测，从而筛选到所需的抗生素产生菌。
实验材料：
1、土壤菜园土。
2、实验菌金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的8h培养物。
3、培养基淀粉琼脂和淀粉液体培养基。
4、其它 10％的酚、牛津杯、灭菌生理盐水、接种环、无菌涂棒、酒精灯、无菌吸管等。
实验方法：
一、土壤中放线菌的分离
1、配制淀粉培养基
配方一淀粉琼脂培养基（高氏培养基）
可溶性淀粉 2克；硝酸钾 0.1克；磷酸氢二钾 0.05克；氯化钠 0.05克；硫酸镁 0.05克；硫酸亚铁 0.001克；琼脂 2克水 100毫升先把淀粉放在烧杯里，用5毫升水调成糊状后，倒入95毫升水，搅匀后加入其他药品，使它溶解。
加热到煮沸时加入琼脂，不停搅拌，待琼脂完全溶解后，补足失水。
调整pH值到7.2～7.4，分装后灭菌，备用。
配方二面粉琼脂培养基
面粉 60克；琼脂 20克；水 1000毫升
把面粉用水调成糊状，加水到500毫升，放在文火上煮30分钟。
另取500毫升水，放入琼脂，加热煮沸到溶解后，把两液调匀，补充水分，调整pH值到7.4，分装，灭菌，备用。
2、土壤悬液梯度稀释
（1）将5.0g土壤加入到50ml灭菌的生理盐水中，震荡10min制备土壤悬液。
（2）用无菌吸管吸取1ml土壤悬液，加入到9ml灭菌的生理盐水中10倍稀释。
（3）按1：10稀释至10-3、10-4、10-5。
3、将3块灭菌平板分别标记10-3、10-
4、10-5。
4、将高氏1号培养基加热溶化，待冷至55-60℃时，加入10％的酚数滴，混合均匀。
分别吸取0.1ml稀释液于灭菌平皿中，再加入10-15ml恒温于55℃的含有酚的淀粉琼脂培养基中，轻轻旋转混合均匀。
5、平皿倒置于培养箱28℃恒温培养一周左右。
6、将平皿上的放线菌菌落挑取在淀粉琼脂平皿上四区划线进行分离纯化，28℃恒温培养一周左右，观察放线菌菌落特征。
7、涂片显微镜观察放线菌的菌丝特征。
二、抗菌谱测定
1、挑取一个放线菌的菌落接种到含有250ml淀粉液体培养基的三角瓶，28℃恒温培养一周左右。
2、将2ml培养8h的金黄色普通球菌和大肠杆菌分别加到200ml灭菌的牛肉膏蛋白胨培养基中混合均匀，每培养皿中到20ml，凝固后待用。
3、在上面培养皿中均匀放入4个牛津杯，每个牛津杯中加入1ml放线菌发酵培养液。
培养皿放入37℃培养箱恒温培养12h。
4、测量抑菌圈的大小。
结果与讨论
1、描述从土壤中分离的放线菌菌落的形态特征，并分别描述细菌、酵母菌和霉菌的菌落特征。
2、描述所分离的放线菌所产生的抗生素的抗菌谱。
3、分离放线菌时在淀粉固体培养基中加入10％的酚的作用是什么？
[设计的内容或知识点]
1、玻璃仪器的清洗和包扎。
2、培养基的配制和消毒灭菌。
3、放线菌的菌落培养特征的观察。
4、放线菌分离纯化方法——四区划线法。
5、微生物的染色方法和显微镜观察。
6、微生物的液体发酵。
7、抑菌试验。
[基本思路和方法]
A：卡特利链霉菌；B：弗氏链霉菌；C：吸水链霉菌金泪亚种；D：卡那霉素链霉菌；E：除虫链霉菌；F：生磺酸链霉菌。