放线菌的选择分离培养

2,倾注分离平板
每组2个培养皿,用记号笔在培养皿底面做好标记(10-2 1个,10-41个). 用吸管分别吸取10-2,10-4的稀释液各0.5ml放到标记好的培养皿中. 等灭好菌的高氏I号培养基冷却到60oC左右时,加入重铬酸钾溶液150ul,使得 终浓度为50ppm,倒入标记好的平板,与10-2,10-4的稀释液一起混合摇匀.
3,培养
平板倒置于 28℃培养箱中培养7天,观察菌落的生长情况,菌落特征.
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1 ,取样
三 ,操作步骤
2, 制备土壤稀释液
3, 倾注平板
4,培养
四,实验操作内容
每组所需材料:
土样,装有无菌水和少量玻璃珠的三角瓶1瓶,9ml无菌水两支, 1或2ml移 液管2支,2副培养皿,60ml高氏1号培养基1瓶.
实验步骤
1,制备土壤稀释液 取土样0.5g,土样热处理后,加入装有无菌水和少量玻璃珠的三角瓶中, 室温下手摇振荡10分钟,静止5分钟,用移液管取上清液1ml(10-2)加入到9ml 无菌水稀释到10-3,同样操作稀释到10-4.注意回收玻璃珠. 用移液管分别吸取10-2原液和10-4稀释液各0.5ml于标志稀释倍数的平板上 ( 10-2原液1个平行, 10-4稀释液1个平行).
3)稀有放线菌的筛选
由于链霉菌数量占绝对优势,而且菌落在基础培养基上生长快.因此常用 的方法筛选到的多为链霉菌.而其他放线菌非常少,其他放线菌在抗生素生产 中有重要作用,因此筛选稀有放线菌工作十分重要. 世界上实验室针对各种放线菌设计有专门程序,这些程序一般都是保密的,作 为技术关键. c, SDS,苯酚处理可以减少链霉菌数量,增加稀有放线菌出现的几率. d,各种抗细菌药物可以用于放线菌的选择培养
二,平板分离法
A 平板划线分离法 B 倾注平板法 C 稀释涂布平板法
1)放线菌分离常用基础培养基 2)选择性培养基
选择培养基的设计
如:高氏一号琼脂;精氨酸-甘油琼脂;葡萄糖-天冬酰胺琼脂.
a,为抑制细菌及霉菌的生长,可加入链霉素(抑制细菌)和制霉素等. b,加入重铬酸钾可同时抑制细菌和霉菌的生长;对放线菌生长无抑制作用 .
文化素质教育课程
"生命科学导论"实验
放线来自百度文库的选择分离培养
一,放线菌的选择分离培养
1 ,目的要求
从土壤中分离纯化放线菌,初步掌握微生物的分离纯化方法和无菌操作 技术.
2 ,简介
土壤中放线菌最丰富,品种齐全.从堆肥或过热的材料中如干草或蔗渣 中可分离到大量的嗜热放线菌,从淡水和海洋环境中分离到嗜碱性的和 嗜酸性的菌种. 土壤中含有丰富的放线菌,主要是链霉菌.而链霉菌以外的其他放线 菌,如小单孢菌,游动放线菌,诺卡氏菌等,它们是生物活性物质重要 的产生菌.但往往由于样品中稀有放线菌的数量太少,常规的分离方法 很难得到. 对样品进行风干,干热处理,培养基添加重铬酸钾的方法减少细菌和真 菌的数量;用干热和苯酚处理减少链霉菌数量的方法,可以分离得到更 多种类的放线菌.