蛋白酶产生菌的筛选和紫外诱变育种
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2011 年 21( 1)
生物技术
ຫໍສະໝຸດ Baidu
73
此，不同地域或同 一 地 域 的 不 同 菌 株 之 间 其 交 配 因 子 基 因 的 复等位基因数量与地理差距的大小极有可能成正比。与茶树 菇杂交结果也出 现 上 述 现 象 但 不 出 菇，在 同 一 属 不 同 种 之 间 交配因子基因的复等位基因的多少随地理差距大小的关系有 待进一步研究。
蛋白酶产生菌的筛选和紫外诱变育种
蔡婉玲，田宝玉* ，郭菁，蓝灿华，黄薇，黄建忠*
( 福建师范大学 工业微生物教育部工程研究中心，福建 福州 350108) 摘要: 目的: 筛选水产品加工用蛋白酶产生菌，为酶的的分子改造和水产品加工提供材料基础。方法: 通过在富含水产品蛋 白的场所的针对性采样，菌落平板筛选结合发酵上清液平板验证以及 Folin － 酚试剂定量检测确认筛选结果，并通过紫外诱变提 高产中性蛋白酶菌株的产酶能力。结果: 从 12 份土样中分离 187 株具有明显蛋白酶活性的单菌落。在挑取的 11 株透明圈明显 的蛋白酶产生菌中，菌株 W9 在所有菌株中可以稳定产生较高的蛋白酶酶活力，约为 1 594U / ml。通过对其进行紫外诱变后，在 突变株中筛选得到一株酶活约为 1 845U / ml 的 W9UV 突变株，比野生菌株酶活提高了 15． 6% 。结论: 突变菌株 W9UV 可稳定产 生较高的蛋白酶酶活力，发酵性能优良。 关键词: 筛选; 蛋白加工; 中性蛋白酶; 酶活; 紫外诱变
( Engineering Research Center of Industrial Microbiology，Ministry of Education，Fujian Normal University，Fuzhou 350108，China)
Abstract: Objective: To obtain high and well defined protease － producing strains． These strains can be used in seafood process to produce poly － peptide． Method: The protease － producing strains were first screen from soil by well － designed sampling sites and colony screening，fermentation supernatant identification and Folin － phenol measurement assay etc． To improve the production of protease capability for the target strain，UV mutagenesis were further introduced． Result: 187 protease － production strains were screened from the collected 12 soil samples． Further secondary screening indicated a strain W9 produced stably higher enzyme activity than any other strains among the primary screened 11 strains． The activity of strain W9 reached to 1 594U / ml． Mutant strain W9UV was obtained by UV mutagenesis which enhances the protease activity by 15． 6% in comparison with that of the wild strain W9，with the activity of 1845 U / ml． Conclusion: W9UV strain has a greater protease activity and more stably fermentation performance． Key words: screen; seafood process; neutral protease; enzyme activity; UV mutagenesis
中图分类号: Q503; Q959． 17 文献标识码: A doi: 10． 3969 / j． issn． 1004 － 311X． 2011． 01． 026
Screening and UV Mutagenesis of Protease Producing Strains
CAI Wan － ling，TIAN Bao － yu* ，GUO Jing，LAN Can － hua，HUANG Wei，HUANG Jian － zhong*
参考文献: ［1］卯晓岚． 中国大型真菌［M］． 郑州: 河南科学技术出版社，2000: 241 － 243． ［2］徐静娟，王树英． 茶树 菇 提取 物的 组 分分析［J］． 食 品工 业科 技， 2006，12( 3) : 165 － 167． ［3］Korhonen K． Interfertility and clonal size in the Armillaria mellea complex［J］． Karstenia，1978，( 18) : 31 － 42． ［4］Gong Y H，Liu R Z，Gao J F． The growth analysis in the kernel filling proces of k － type hybrid 901 and its parent wheat［J］． Agricultural Sciences in China，2005，4( 12) : 903 － 908． ［5］Li Z S，Li B，Tong Y P． The contribution of distant hybridization with decaploid Agropyron elongatum to wheat improvement in China［J］． Journal of Genetics and Genomics，2008，35: 451 － 456． ［6］Yan L J，Yao Z，Zheng Z M，et a1． Simulation of potential production and optimum population quantitative indices for the second hybrid rice［J］． Agrcultural Sciences，2006，5( 7) : 498 － 505． ［7］Zhao B H，Wang P，Zhang H X，et al． Source － sink and grain － filling characteristics of two － line hybrid rice Yangliangyou 6［J］． Rice Science， 2006，13( 1) : 34 － 42． ［8］Dong F，Liu H X，Jin H，et al． Symbiosis between fungi and the hybrid cymbidium and its mycorrhizal microstructures［J］． For． Stud． China， 2008，10( 1) : 41 － 44． ［9］ Ye Q G，Yao X H，Zhang S J，et al． Potential risk of hybridization in Ex Situ collections of two endangered species of Sinojackia Hu( Styracaceae) ［J］． Journal of Integrative Plant Biology，2006，48( 7) : 867 － 872． ［10］Wu X Q，Lu Y，Liang J Q，et al． Detection of mutation in embB gene of Mycobacterium tuberculosis from clinical isolates of tulberculous patients in China by means of reverse － dot blot hybridization ［J］． J Microbiol immunol，2006，4( 1) : 1 － 8．
［11］庄严，赵俊，泰国夫，等． 奥氏蜜环菌杂交双倍体子实体的人工诱 导［J］． 中国森林病虫，2003，22( 5) : 13 － 16． ［12］赵俊，赵杰，秦国夫． 高卢蜜环菌杂交菌株筛选初探［J］． 食用菌学 报，2007，14( 4) : 31 － 35． ［13］周会明，赵永昌，陈卫民，等． 杨柳田头菇交配型因子与菌丝生长 速度关系［J］． 云南植物研究，2010，32( 4) : 315 － 322． ［14］郑元忠，蔡衍山，傅俊生，等． 茶新菇性遗传模式和育种工艺研究 ［J］． 安徽农学报，2007，13( 4) : 32 － 33． ［15］Shaw Ⅲ CG，Roth L F． Persistance and distribution of a clone of Armillaria mellea in a ponderosa pine forest［J］． Phytopathology，1976， ( 66) : 1210 － 1213． ［16］Lin F C，Wang Z W，Sun Y，et al． Analysis of the mating type facts in natural population of Lentinula edodes in China［J］． Mycosystema， 2003，22( 2) : 235 － 240． ［17］程水明． 香菇单核菌丝生长速度与交配型分布的关系［J］． 湖北农 业科学，2007，46( 5) : 765 － 767． ［18］Kermish R M，Dacosta E W． Monokaryotization of culture of Lenzites trabea ( Pers． ) Fr． and other wood － destroying basidiomycetes by chemical agents［J］． Annual Botany，1963，27: 653 － 669． ［19］Arita I． Cytological studies on Pholiota［J］． Report of Tottori Mycology Institute，1979，7: l － 67． ［20］Kawabata H，Magae Y，Sasaki T． Mating type analysis of monokaryons regenerated from protoplasts of Flammulina velutipes［J］． Trans Mycology Society of Japan，1992，33( 2) : 243 － 247． ［21］李安政，林芳灿． 香菇交配型因子次级重组体的鉴定［J］． 菌物研 究，2006，4( 3) : 20 － 26． ［22］Kües U． Life history and developmental processes in the basidiomycete Coprinus cinereus［J］． Microbiology and Molecular Biology Reviews， 2000，64( 2) : 316 － 353． ［23］Rykowski K． Obserwacje nad owocowaniem opienki miedowej Armillaria mellea( vahl) karst ［J］． W czystych kulturach．［Obervations on the frutification of the honey fungus Armillaria mellea ( vahl) karst． in pure cultures． ］( in Polish ) Prace Intytutu Badawczego Lesnictwa，1974， ( 431) : 146 － 167．
生物技术
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73
此，不同地域或同 一 地 域 的 不 同 菌 株 之 间 其 交 配 因 子 基 因 的 复等位基因数量与地理差距的大小极有可能成正比。与茶树 菇杂交结果也出 现 上 述 现 象 但 不 出 菇，在 同 一 属 不 同 种 之 间 交配因子基因的复等位基因的多少随地理差距大小的关系有 待进一步研究。
蛋白酶产生菌的筛选和紫外诱变育种
蔡婉玲，田宝玉* ，郭菁，蓝灿华，黄薇，黄建忠*
( 福建师范大学 工业微生物教育部工程研究中心，福建 福州 350108) 摘要: 目的: 筛选水产品加工用蛋白酶产生菌，为酶的的分子改造和水产品加工提供材料基础。方法: 通过在富含水产品蛋 白的场所的针对性采样，菌落平板筛选结合发酵上清液平板验证以及 Folin － 酚试剂定量检测确认筛选结果，并通过紫外诱变提 高产中性蛋白酶菌株的产酶能力。结果: 从 12 份土样中分离 187 株具有明显蛋白酶活性的单菌落。在挑取的 11 株透明圈明显 的蛋白酶产生菌中，菌株 W9 在所有菌株中可以稳定产生较高的蛋白酶酶活力，约为 1 594U / ml。通过对其进行紫外诱变后，在 突变株中筛选得到一株酶活约为 1 845U / ml 的 W9UV 突变株，比野生菌株酶活提高了 15． 6% 。结论: 突变菌株 W9UV 可稳定产 生较高的蛋白酶酶活力，发酵性能优良。 关键词: 筛选; 蛋白加工; 中性蛋白酶; 酶活; 紫外诱变
( Engineering Research Center of Industrial Microbiology，Ministry of Education，Fujian Normal University，Fuzhou 350108，China)
Abstract: Objective: To obtain high and well defined protease － producing strains． These strains can be used in seafood process to produce poly － peptide． Method: The protease － producing strains were first screen from soil by well － designed sampling sites and colony screening，fermentation supernatant identification and Folin － phenol measurement assay etc． To improve the production of protease capability for the target strain，UV mutagenesis were further introduced． Result: 187 protease － production strains were screened from the collected 12 soil samples． Further secondary screening indicated a strain W9 produced stably higher enzyme activity than any other strains among the primary screened 11 strains． The activity of strain W9 reached to 1 594U / ml． Mutant strain W9UV was obtained by UV mutagenesis which enhances the protease activity by 15． 6% in comparison with that of the wild strain W9，with the activity of 1845 U / ml． Conclusion: W9UV strain has a greater protease activity and more stably fermentation performance． Key words: screen; seafood process; neutral protease; enzyme activity; UV mutagenesis
中图分类号: Q503; Q959． 17 文献标识码: A doi: 10． 3969 / j． issn． 1004 － 311X． 2011． 01． 026
Screening and UV Mutagenesis of Protease Producing Strains
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参考文献: ［1］卯晓岚． 中国大型真菌［M］． 郑州: 河南科学技术出版社，2000: 241 － 243． ［2］徐静娟，王树英． 茶树 菇 提取 物的 组 分分析［J］． 食 品工 业科 技， 2006，12( 3) : 165 － 167． ［3］Korhonen K． Interfertility and clonal size in the Armillaria mellea complex［J］． Karstenia，1978，( 18) : 31 － 42． ［4］Gong Y H，Liu R Z，Gao J F． The growth analysis in the kernel filling proces of k － type hybrid 901 and its parent wheat［J］． Agricultural Sciences in China，2005，4( 12) : 903 － 908． ［5］Li Z S，Li B，Tong Y P． The contribution of distant hybridization with decaploid Agropyron elongatum to wheat improvement in China［J］． Journal of Genetics and Genomics，2008，35: 451 － 456． ［6］Yan L J，Yao Z，Zheng Z M，et a1． Simulation of potential production and optimum population quantitative indices for the second hybrid rice［J］． Agrcultural Sciences，2006，5( 7) : 498 － 505． ［7］Zhao B H，Wang P，Zhang H X，et al． Source － sink and grain － filling characteristics of two － line hybrid rice Yangliangyou 6［J］． Rice Science， 2006，13( 1) : 34 － 42． ［8］Dong F，Liu H X，Jin H，et al． Symbiosis between fungi and the hybrid cymbidium and its mycorrhizal microstructures［J］． For． Stud． China， 2008，10( 1) : 41 － 44． ［9］ Ye Q G，Yao X H，Zhang S J，et al． Potential risk of hybridization in Ex Situ collections of two endangered species of Sinojackia Hu( Styracaceae) ［J］． Journal of Integrative Plant Biology，2006，48( 7) : 867 － 872． ［10］Wu X Q，Lu Y，Liang J Q，et al． Detection of mutation in embB gene of Mycobacterium tuberculosis from clinical isolates of tulberculous patients in China by means of reverse － dot blot hybridization ［J］． J Microbiol immunol，2006，4( 1) : 1 － 8．
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