中草药中乙酰胆碱酯酶抑制活性的筛选

中草药中乙酰胆碱酯酶抑制活性的筛选
张东博;任晋
【摘要】阿尔茨海默病是一种慢性中枢神经系统退行性疾病,是老年痴呆的主要类型.对于该病的治疗,一个有希望的策略是乙酰胆碱酯酶抑制剂的使用.为了寻找潜在的、高效的乙酰胆碱酯酶抑制剂,5种中草药的生物碱提取物的乙酰胆碱酯酶抑制活性通过经典的Ellman比色法被评价.结果表明,元胡与黄柏的生物碱提取物显示了显著的乙酰胆碱酯酶抑制活性,其余3种中草药的生物碱提取物显示了非常弱的乙酰胆碱酯酶抑制活性.结果暗示,从中草药的生物碱提取物中筛选乙酰胆碱酯酶抑制剂是可行的,能够为开发治疗阿尔茨海默病的新药提供有用的先导化合物.
【期刊名称】《甘肃科技》
【年(卷),期】2010(026)019
【总页数】2页(P172-173)
【关键词】阿尔茨海默病;筛选;乙酰胆碱酯酶抑制活性;Ellman比色法
【作者】张东博;任晋
【作者单位】兰州理工大学,甘肃,兰州,730050;兰州理工大学,甘肃,兰州,730050【正文语种】中文
【中图分类】R971
阿尔茨海默病 (AD)是一种发生于老年和老年前期以进行性神经退化为特征的大脑退行性疾病。

伴随着全球老龄化人口的增加,AD的发病率呈逐年上升的趋势[1]。

对于该病的治疗,目前最有效的手段是乙酰胆碱酯酶抑制剂的使用[2,3]。

现有的几
个高效的乙酰胆碱酯酶抑制剂,像石杉碱甲[4]、加蓝他敏[5]均源自于药用植物。

这暗示,对于乙酰胆碱酯酶抑制剂的筛选,中草药是极具价值的资源之一。

为了寻找潜
在的、高效的乙酰胆碱酯酶抑制剂,本文通过改进的 Ellman比色法[6,7]对 5种中
草药的生物碱提取物进行了乙酰胆碱酯酶抑制活性的评价。

1.1 供试药材
元胡 (Corydalis humosa),黄柏 (Bark of Phellodendron amurense),鸡骨草(Abrus cantoniensis),龙葵草 (Solanum nigrum),草乌 (Aconitum vilmorinianum),以上药材均购买自兰州黄河药材市场安宁医药公司复兴厚药庄,由兰州理工大学生命科学与工程学院杨林副教授鉴定。

1.2 供试试剂
工业乙醇,氯仿、浓盐酸、浓氨水 (分析纯),乙酰胆碱酯酶(sigma),石杉碱甲(sigma),5,5’-二硫双(2-硝基苯甲酸)(DTNB,sigma),碘化硫代乙酰胆碱(ATCI,sigma)。

2.1 生物碱提取物的准备
植物材料被风干、研成粉末。

取每种药材各100g,用 95%的乙醇在80℃水浴中回流提取 2次,每次 2h。

提取完毕后,合并乙醇提取液,过滤,滤液在减压条件下蒸至浸膏。

醇提浸膏被溶解在蒸馏水中,水溶液用 2M HCL调至 pH=2.0～3.0,静置过夜后,用浓氨水调至 pH=10～11,立刻用等体积的氯仿萃取三次,合并有机相,减压条件下蒸干得到总生物碱提取物。

此生物碱提取物被用于乙酰胆碱酯酶抑制活性的评价。

2.2 待测样品的配制
取以上生物碱提取物各 10mg,分别溶解于 1mL的无水乙醇中,用 pH=8.0的 PBS
缓冲液稀释成1mg/mL的待测样品溶液,以供活性测定使用。

2.3 乙酰胆碱酯酶抑制活性的测定
本文采用改进的 Ellman比色法[6]对 5种中草药的生物碱提取物进行乙酰胆碱酯
酶抑制活性的评价。

5种中草药在初浓度是 1mg/L时对乙酰胆碱酯酶的百分抑制率被测定,抑制作用明显的生物碱提取物,其对乙酰胆碱酯酶的半数抑制浓度 (IC50)被进一步测定,石杉碱甲作为阳性控制药,其对乙酰胆碱酯酶的抑制率也被测定。

每组反应均进行三次,测定值取平均值。

通过 El lman比色法对 5种中草药的生物碱提取物的乙酰胆碱酯酶抑制作用进行了测定,结果见表1。

从表 1可以看出,在初浓度是 1mg/L时,元胡与黄柏的生物碱提取物显示了显著的乙酰胆碱酯酶抑制活性,抑制率分别达到96.6±0.6%和91.6 ±0.9%,这两种中草药的生物碱提取物对乙酰胆碱酯酶的半数抑制浓度各是1.9±0.1μg/mL和
4.9±0.3μg/mL。

鸡骨草、龙葵草与草乌在相同浓度时显示了非常弱的乙酰胆碱酯酶抑制活性,抑制率依次是32.9±0.2%,23.5±0.7%和24.4± 0.4%。

石杉碱甲作为阳性控制药,其对乙酰胆碱酯酶的半数抑制浓度为74.0±2.1nmol/L,与文献值[8]相一致,说明实验数据可信。

元胡与黄柏的生物碱提取物展示了非常显著的乙酰胆碱酯酶抑制活性。

这说明,这两种中草药的生物碱提取物中可能存在着高活性的生物碱类乙酰胆碱酯酶抑制剂,具有乙酰胆碱酯酶抑制作用的活性成分有待进一步的分离。

另外,筛选的结果也说明,从药用植物的生物碱提取物中筛选乙酰胆碱酯酶抑制剂是可行的,能为开发治疗阿尔茨海默病的新药提供有用的先导化合物。

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