两种优良巴西杂交桉树的组织培养和快速繁殖

第34卷 第4期 桉树科技
V ol.34 No.4 ________________________________
基金项目：948引进国际先进林业科学技术项目“巴西桉树杂种及标准化施肥技术引进”(2013-4-36)；广东省林业科技创新项目(2016KJCX005)。

作者简介：刘果(1987— )，女，博士，主要从事林木遗传育种研究，E-mail:liuguopz@.
＊通讯作者：陈少雄(1965— )，男，博士，研究员，主要从事人工林定向培育技术研究，E-mail:sxchen01@.
两种优良巴西杂交桉树的组织培养和快速繁殖
刘 果，陈少雄＊
，高丽琼，尚秀华，陈鸿鹏，刘学锋
(国家林业局桉树研究开发中心, 广东 湛江524022)
摘要：本研究以巴西尾巨桉和巨赤桉两种优良杂交桉树的带芽茎段为外植体进行离体培养和快速繁殖研究。

结果表明：尾巨桉和巨赤桉再生芽诱导的最佳培养基为改良MS+6-BA 0.5 mg·L -1+NAA 0.2 mg·L -1，继代增殖的最适培养基为改良MS +6-BA 0.5 mg·L -1+NAA 0.15 mg·L -1。

芽诱导和继代增殖中6-BA 的浓度对两种杂交桉树有显著影响。

生根培养中，尾巨桉和巨赤桉生根情况差异显著，尾巨桉茎芽最适生根培养基为1/2MS+NAA0.2 mg·L -1+IBA 1.0
mg·L -1，巨赤桉茎芽最适生根培养基为1/2MS+NAA 0.15 mg·L -1+IBA 1.0 mg·L -1。

两种杂交桉树组织培养体系的
建立，为桉树良种选育和遗传转化体系的研究提供技术参考。

关键词：尾巨桉；巨赤桉；组织培养；快速繁殖
中图分类号：S725.2 文献标识码：A
Rapid Propagation of Two Brazilian Eucalypt Hybrids
by Tissue Culture
LIU Guo, CHEN Shao-xiong, GAO Li-qiong, SHANG Xiu-hua,
CHEN Hong-peng, LIU Xue-feng
(China Eucalypt Research Centre, Zhanjiang 524022, Guangdong, China )
Abstract: Stem-segments taken from hybrid clones of Eucalyptus urophylla × E. grandis and E. grandis × E. camaldulensis derived from Brazilian breeding programs were used as explants for clonal propagation via tissue culture. The results showed that the optimal tissue culture medium for inducing multiple buds on stem tissues of these two eucalypt hybrids was improved MS + 6-BA 0.5 mg·L -1 + NAA 0.2 mg·L -1. The appropriate medium for adventitious bud multiplication was improved MS + 6-BA0.5 mg·L -1 + NAA0.15 mg·L -1. The concentration of 6-BA had significant effects on bud induction and multiplication of both hybrid clones. For development of roots in vitro, there were significant differences between the two hybrids, with the optimal rooting medium for E. urophylla × E. grandis being ½MS + NAA 0.2 mg·L -1 + IBA 1.0 mg·L -1, and that for E. grandis × E. camaldulensis being ½MS + NAA 0.15 mg·L -1 + IBA1.0 mg·L -1. Development of the optimal tissue culture techniques for the two Brazilian eucalypt hybrids provide a technical reference for future research including propagation of superior varieties and use of these varieties in genetic transformation systems.
Key words: Eucalyptus urophylla × E. grandis ; E. grandis × E. camaldulensis ; tissue culture, rapid propagation
桉树(Eucalyptus )是世界上生长最快、用途广泛、三大效益(经济效益、社会效益和生态效益)显著的经济树种之一，目前全球已有100多个国家引种和大规模发展，其面积已突破2 000万hm 2，成为世界关注的重要资源[1-2]。

巴西桉树人工林面积位居世界第一，主要树种有：巨桉(E.grandis )、尾叶桉(E.urophylla )、尾巨桉(E.urophylla × E.grandis )、巨赤桉(E.grandis × E.
camaldulensis )、亮果桉(E.nitens )、蓝桉(E.globulus )
以及它们的种间杂交种[3-4]。

本研究中尾巨桉和巨赤桉两种杂交桉树的种子均来源于巴西。

尾巨桉是以尾叶桉为母本、巨桉为父本经人工杂交培育而成的杂交种。

其树型高大，干形圆满通直，综合了尾叶桉对低海拔干旱土壤的适应性与抗溃疡病能力强和巨桉生长快、制浆得率高的优点，是我国、巴西和南非等国制浆造纸的主
第4期(总第103期)刘果，等：两种优良巴西杂交桉树的组织培养和快速繁殖11
要原料林[1]。

巨赤桉是以巨桉为母本、赤桉为父本经人工杂交培育而成的杂交种。

其综合了巨桉生长快速和赤桉木材纹理细致、耐腐蚀、抗白蚁、抗菌能力强的特点，在实木加工中利用率较高[5]。

本研究通过巴西桉树引种试验，从中选择出优良单株进行组织培养技术探讨，以培育适宜当地的优良尾巨桉和巨赤桉组培苗，为两种杂交桉树的工厂化育苗提供技术参考，也为桉树种质资源的有效保存和构建桉树遗传转化体系建立基础。

1 材料和方法
1.1 试验材料和处理方法
1.1.1 试验材料试验林于2014年4月营造，造林密度为1.5 m × 3.0 m，造林后定期抚育。

在3年生巴西引种桉树试验林中，对尾巨桉和巨赤桉两种杂交桉树进行优良单株的选择，其生长数据见表1。

于2017年3月对优树进行环割促萌。

2017年4月在编号为101、102和201的优树环割处生长出的萌芽条上采集腋芽尚未萌发的侧梢和顶芽，并带回实验室以备用。

1.1.2 材料处理方法
将侧梢和顶芽除去叶片，剪成2 cm左右的带芽茎段，用流水冲洗2 h左右。

在超净工作台上用0.1%的升汞水消毒30 s，无菌水冲洗3次，再用0.1%的升汞水消毒30 s，无菌水冲洗4次。

用滤纸吸干茎段上的水分，切成0.5 ~ 1.0 cm的带芽茎段，用于接种。

表13年生尾巨桉和巨赤桉优良单株
杂交品种种源编号采种地点/编号平均树高/m 平均胸径/cm 优树株数/株
尾巨桉101 Itinga-SP 12.88 10.07 3 102 Anhembi-SP 13.54 11.47 2
巨赤桉201 Anhembi-SP 13.10 10.90 2
1.2 组织培养和植株再生试验方法
1.2.1 芽茎段诱导培养基和诱导条件的选择和优化
芽茎段诱导选用改良MS、B5、1/2 MS和改良H等4种基本培养基。

选出最佳基本培养基的种类后，细胞分裂素采用6-苄基嘌呤(6-BA) 0.5 mg·L-1、0.8 mg·L-1、1.0 mg·L-1，生长素萘乙酸(NAA)采用0.1 mg·L-1、0.15 mg·L-1、0.2 mg·L-13个浓度水平，进行2因素、3水平的试验。

以上培育基各配方蔗糖的用量为30 g·L-1，pH值为5.8。

按照每升30瓶的规格分装到玻璃瓶内，利用高温高压消毒方法进行灭菌。

每种处理接种40个芽茎段，将接种后的芽茎段接种于固体培养基上。

培养室室温25 ~ 28℃，日光灯辅助光照每天12 ~ 14 h，光照强度为1 000 ~ 1 500 Lux(1 Lux= 60.04×10-6 J·cm-2·min-1)。

外植体诱导30 d后，对出芽时间、出芽率、芽增殖系数、芽均高、有效芽比率进行统计并综合评分。

1.2.2 继代培养基和培养条件的选择和优化
继代培养选用改良MS作为基本培养基。

细胞分裂素采用6-苄基嘌呤(6-BA) 0.5 mg·L-1、0.8 mg·L-1和1.0 mg·L-1，生长素萘乙酸(NAA)采用0.1 mg·L-1、0.15 mg·L-1和0.2 mg·L-1 3个浓度水平，进行2因素、3水平的试验。

共9个试验号，每个试验号接种40个芽茎段。

继代培养的环境条件仍采用日光灯光照12 ~ 14 h，光照强度为1 000 ~ 1 500 Lux。

30 d后统计各试验的新芽个数、芽均高。

1.2.3 生根培养基和培养条件的选择和优化
以1/2MS培养基作为生根基本培养基，采用两步生根法对继代苗进行生根培养试验，即先将组培苗接种在1/2MS +萘乙酸(NAA)+吲哚丁酸(IBA) 0.5 mg·L-1、0.8 mg·L-1和1. 0 mg·L-1 (以不添加IBA 的1/2MS培养基作为对照)进行生根培养基的优化，选出适宜的IBA+NAA浓度组合。

各生根培养基中添加蔗糖30 g·L-1，琼脂糖7.0 g·L-1，pH值为5.8。

每个处理接种50个茎段，培养20 d后统计生根段数、生根率、平均每株根条数和平均根长。

1.3 数据统计分析
采用SPSS19.0软件对不同处理的数据进行单因素方差分析和Duncan法进行多重比较分析。

12 桉树科技第34卷
2结果与分析
2.1 诱导培养基和生长调节物质浓度的选择对芽茎段诱导的影响
2.1.1 诱导培养基对芽茎段诱导的影响
从表2可知，4种培养基均能诱导尾巨桉和巨赤桉腋芽萌发，但在不同基本培养基上，两种杂交桉树萌芽后芽的长势不同。

在改良MS培养基中，尾巨桉的出芽率为71.43%，巨赤桉的出芽率为69.44%，芽增殖指数分别为3.12和2.78，有效芽数量分别为27和22，继代中两种桉树在改良MS培养基中芽的长势好。

在1/2MS培养基中，两种桉树的诱导芽长势良好，但尾巨桉的出芽指数比改良MS培养基中稍低，且两种桉树的出芽率均比改良MS培养基中低。

改良H和B5培养基中，两种杂交桉树的出芽率均较低，无效芽数量较多，且芽的长势较细弱，在继代培养中芽的生长缓慢，不适宜作为丛生芽诱导的基本培养基。

多重比较的结果表明：改良MS培养基与1/2MS培养基相比，尾巨桉中除出芽率和出芽指数差异显著外(P<0.05)，其他生长因子差异不显著(P>0.05)；巨赤桉中改良MS培养基和1/2MS 培养基相比，仅出芽率差异显著(P<0.05)。

改良MS 培养基与改良H相比，除改良H培养基中尾巨桉的30 d芽均高表现出差异不显著外(P>0.05)，尾巨桉和巨赤桉的其他所有生长因子差异均显著；与B5培养基相比，除有效芽的个数在两种桉树中表现差异不显著(P>0.05)，其他生长因子均显著差异。

因此，改良MS培养基可作为诱导尾巨桉和巨赤桉芽茎段的首选基本培养基。

2.1.2 不同浓度生长调节物质的选择对芽茎段诱导的影响
选用改良MS培养基作为尾巨桉和巨赤桉的芽诱导基本培养基，加入不同浓度的6-苄基嘌呤(6-BA)和萘乙酸(NAA)，可提高两种杂交桉树的诱导分化能力(表3)。

9种芽茎段诱导培养基的培养结果为：改良MS培养基中6-BA浓度为0.5 mg·L-1，NAA浓度为0.2 mg·L-1时，尾巨桉和巨赤桉的芽茎段诱导的芽长势正常，基部的愈伤组织较小。

对9种培养基对芽茎段诱导效果进行显著性分析表明：添加6-BA浓度为0.5 mg·L-1，NAA浓度为0.2 mg·L-1的改良MS培养基对尾巨桉和巨赤桉的芽茎段诱导效果与其他8种培养基诱导的效果差异显著。

因此，3号培养基(改良MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1)是本研究尾巨桉和巨赤桉两种杂交桉树的芽茎段诱导的最佳培养基配方，其生长情况见图1 ~ 2。

表2 不同的基本培养基对尾巨桉/巨赤桉芽茎段诱导的影响
培养基样本数/个
时间/d 率/%
出芽指数
均高/cm 芽/个
芽的长势
改良MS 35/36 5/6 71.43a/69.44a 3.12a/2.78a 0.52a/0.76a 29a/26a 正常/正常
1/2MS 33/38 6/6 63.97b/52.63b 2.43b/2.91a 0.57a/0.65a 25a/28a 正常/正常
改良H 37/35 10/9 37.84c/48.57b 1.62b/1.45b 0.64a/0.31b 17b/21a 细弱/较细弱B5 37/34 9/7 32.34d/26.47d 1.90b/1.74b 0.24b/0.36b 24a/23a 较细弱/较细弱注：样本数=接种数‒污染数，出芽时间为接种到腋芽萌发的天数，出芽指数为发生芽的外植体上的平均出芽数。

同一栏中相同字母表示差异不显著(P<0.05)，下同。

表3 不同的植物生长调节物质的浓度对尾巨桉/巨赤桉芽茎段诱导的影响
处理号
6-BA
/(mg·L-1)
NAA
/(mg·L-1)
样本
数/个
出芽
时间/d
出芽率/% 出芽指数
30 d芽均
高/cm
有效芽
/个
愈伤组织
生长情况
小芽的长势
1 0.5 0.10 36/38 6/8 79.10b/85.23a 3.12b/2.31c 1.29a/0.73b 24b/29b ++/+++ 正常/细小
2 0.5 0.15 25/38 7/8 89.17a/76.61b 3.63b/2.43c 1.45a/1.18a 27b/18c ++/++++ 细小/长势差
3 0.5 0.20 37/35 6/5 98.15a/95.42a 4.16a/3.87a 1.56a/1.45a 42a/37a ++/+ 正常/正常
4 0.8 0.10 29/36 7/
5 72.09b/75.47b 2.91b/2.03c 0.93b/1.37a 23b/20b ++/+++ 叶黄/细小
5 0.8 0.15 37/3
6 9/
7 69.35c/71.60c 1.62d/2.50c 0.92b/0.65b 17c/26b ++++/++++ 叶黄/细小
6 0.8 0.20 35/38 7/6 75.17b/80.09b 1.37d/2.85b 1.05a/0.86b 24b/27b ++/++ 细小/正常
7 1.0 0.10 34/26 6/6 61.70d/66.14c 2.41c/1.57d 0.62b/0.93b 14c/17c +++/++ 长势差/叶黄
8 1.0 0.15 32/34 8/7 68.07c/73.58b 1.90d/1.42d 1.16a/0.78b 10d/22b +++/+++ 细小/叶黄
9 1.0 0.20 36/27 6/9 75.41b/76.29b 3.19b/2.87b 1.35a/0.84b 25b/17c +++/++++ 叶黄且厚/细
注：+：愈伤组织小；++：愈伤组织一般；+++：愈伤组织较大；++++：愈伤组织大且硬，下同。

第4期(总第103期)刘果，等：两种优良巴西杂交桉树的组织培养和快速繁殖13
图1 尾巨桉芽苗在3号芽诱导培养基上的生长情况图2 巨赤桉芽苗在3号芽诱导培养基上的生长情况
2.2 继代培养中生长调节物质的浓度选择对芽增殖
的影响
表4为不同浓度生长调节物质组合的9种改良
MS培养基中尾巨桉/巨赤桉的芽继代增殖结果。

从
表4可知：两种杂交桉树的继代芽在改良MS培养
基+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.15 mg·L-1中继代增殖效
果最显著，其增殖指数分别为3.86和3.68，继代2
次后芽均高分别达2.17 cm和2.39 cm。

6-BA的浓
度对两种杂交桉树的芽增殖效果有显著影响，NAA
对两种杂交桉树的芽增殖的影响不显著。

改良MS
+6-BA 0.5mg·L-1+NAA 0.15mg·L-1对两种杂交桉树的
芽继代增殖指数和继代2次后芽均高的2个指标与
其他8种培养基上的芽继代增殖的2个指标呈差异
显著。

因此，2号培养基(改良MS +6-BA 0.5 mg·L-1
+NAA 0.15 mg·L-1)可用来作为尾巨桉和巨赤桉继代
增殖的培养基。

尾巨桉和巨赤桉继代增殖生长情况
见图3和图4。

表4生长调节物质的选择和调配对尾巨桉/巨赤桉芽继代增殖的影响
处理号6-BA/(mg·L-1) NAA/(mg·L-1) 样本数/个增殖指数继代2次后芽均高/cm
1 0.5 0.10 81/51 3.12b/1.46d 1.81b/1.25d
2 0.5 0.15 63/102 3.86a/3.68a 2.17a/2.39a
3 0.5 0.20 61/78 3.39b/3.55a 1.82b/1.78b
4 0.8 0.10 64/58 3.07b/2.76b 1.47c/1.26d
5 0.8 0.15 64/35 2.78c/2.06c 1.69b/1.38c
6 0.8 0.20 45/89 2.37c/2.62b 1.42c/1.73b
7 1.0 0.10 60/45 2.50c/2.14c 1.33c/1.46c
8 1.0 0.15 58/31 2.76c/1.07d 1.41c/1.17d
9 1.0 0.20 39/39 2.95b/1.22d 1.16d/1.23d
图3 尾巨桉芽苗在2号增殖培养基上的生长情况图4 巨赤桉芽苗在2号增殖培养基上的生长情况
14 桉树科技第34卷
2.3 生根培养基和培养条件的选择和优化对组培苗生根的影响
通过选用不同浓度的IBA和NAA组合，在1/2MS基本培养基上对尾巨桉和巨赤桉两种杂交桉树的茎芽进行生根培养的结果进行分析(表5)可得：当NAA浓度为0.2 mg·L-1时，两种杂交桉树茎芽的生根率和平均每株根数随IBA浓度的增加而增加，且不同浓度IBA浓度间茎芽生根率和平均每株根数的差异均显著，而平均苗高的差异不显著。

当NAA 浓度为0.1 mg·L-1、IBA浓度为0.5 mg·L-1时，尾巨桉和巨赤桉茎芽的生根率与IBA浓度为0.8 ~ 1.0 mg·L-1的生根率差异显著，且随着IBA浓度的增加，愈伤组织生长更明显，不利于移栽种植。

当NAA浓度为0.15 mg·L-1时，两种杂交桉树茎芽的生根情况差异显著。

IBA浓度为0.5 mg·L-1和1.0 mg·L-1时，巨赤桉茎芽的生根率明显优于其他IBA和NAA浓度组合的实验组，尾巨桉茎芽的生根率随IBA浓度的增加而降低。

因此，从不同浓度IBA和NAA组合对尾巨桉和巨赤桉生根苗的各项生长因子(愈伤组织、苗高、平均每株根数和生根率)进行综合考虑，9号培养基(1/2MS+NAA0.2 mg·L-1+IBA1.0 mg·L-1)是尾巨桉茎芽生根的最佳培养基组合，6号培养基(1/2MS+NAA 0.15 mg·L-1+IBA 1.0 mg·L-1)是巨赤桉茎芽生根的最佳培养基组合。

尾巨桉和巨赤桉茎芽生根情况见图5和图6。

表5不同浓度NAA和IBA组合对尾巨桉/巨赤桉生根苗的影响
处理号NAA浓度
/(mg·L-1)
IBA浓度
/(mg·L-1)
生根段
数/段
生根率/%
平均每株
根数/根
苗高/cm
愈伤组织
生长情况
1 0.10 0.5 28/36 86.67a/61.18c 4.67c/5.14b 2.61b/3.12a ++/+
2 0.10 0.8 30/14 50.00d/70.00b 4.29c/4.67c 3.13a/2.72b ++/+++
3 0.10 1.0 26/22 70.00b/60.00c 4.33c/5.50b 2.75b/2.91b +++/+++
4 0.1
5 0.5 14/42 66.15c/73.85b 2.33e/6.00a 2.86b/3.05a ++/++
5 0.15 0.8 29/28 61.67c/53.33d 5.80b/4.67c 3.24a/2.67b ++/+++
6 0.15 1.0 35/33 53.33d/75.56b 5.83b/4.67c 2.91b/3.80a ++/+
7 0.20 0.5 19/10 47.27e/36.67f 6.33a/2.50e 2.52b/2.37b ++/++
8 0.20 0.8 27/19 70.00b/57.50d 5.40b/3.17d 2.69b/2.48b ++/++
9 0.20
1.0 51/17 8
2.50a/62.86c 5.10b/5.67b
3.06a/2.54b +/++
图5 尾巨桉在9号生根培养基上的生长情况图6 巨赤桉在6号生根培养基上的生长情况
3讨论与结论
桉树是多年生木本植物，富含酚类物质，其细
胞返幼状态较差，脱分化难度比较大，而且外植体
极易褐化。

在组织培养中不定芽的分化和生根均有
较大困难，在不同树种间组织培养再生的条件也有
明显的差异[6]。

不同的桉树树种由于遗传背景的不
同，导致在组织培养过程中不同阶段的基本培养基
和配方有所不同，且外植体在培养过程中本身会有
激素的沉淀[7]。

因此，必须根据不同树种外植体的
第4期(总第103期)刘果，等：两种优良巴西杂交桉树的组织培养和快速繁殖15
不同生长情况进行有针对性地调节各生长阶段培养基的成分和激素配比。

3.1 基本培养基的选择对尾巨桉和巨赤桉芽诱导的影响
基本培养基的组成对桉树芽诱导的影响比较显著。

Arruda等[8]的研究发现，适当提高基本培养基中钙离子的浓度，能够促使桉树愈伤组织中糖含量和总蛋白的增加，显著提高了植株器官的再生效果。

高国训[9]研究了植物组织培养中的褐化问题，结果表明培养基中过高的盐浓度会导致外植体的褐化。

Kalpana等[10]的研究认为，在植株再生过程中，培养基中高浓度硝酸铵(NH4NO3)能够代替植株再生所必需的生长调节物质的作用。

因此，选择合适的基本培养基对桉树芽诱导及芽增殖非常重要。

本研究选用在无机盐和有机物的配比上有差异的4种基本培养基(改良MS、1/2MS、改良H和B5)进行尾巨桉和巨赤桉的芽诱导培养。

结果表明，4种培养基对两种杂交桉树的芽诱导的影响显著，改良MS培养基可作为两种杂交桉树芽诱导的首选基本培养基。

3.2 植物生长调节物质的浓度选择对芽诱导和增殖的影响
植物生长调节物质的浓度调配，能够对植物器官再生起诱导作用[11]。

本研究中，从6-BA和NAA 的不同浓度比例组合对尾巨桉和巨赤桉芽诱导培养和继代增殖中可以得出：细胞分裂素和生长素的浓度比例适当，能够促进尾巨桉和巨赤桉的芽诱导和继代增殖，组合比值过高或过低都会对芽诱导和继代增殖产生抑制作用。

根据不同生长调节物质对芽诱导和继代增殖的影响结果表明，6-BA的浓度对两种杂交桉树的芽诱导和芽增殖均有显著影响。

抑制作用与6-BA浓度呈正相关，巨赤桉中6-BA的浓度与抑制作用尤为明显。

3.3 植物生长调节物质的浓度选择对诱导生根的影响
朱鹏等[12]对邓恩桉(E.dunnii)组织材料生根抑制物的研究表明，桉属树种的茎段必须通过外界理化条件的刺激才能够生成诱导根原基。

桉树茎芽的根原基可从皮部直接形成，也可以在形成愈伤组织的基础上再生成根原基。

从皮部直接形成根原基具有生根时间短、根茎结合度高的优势。

由愈伤组织再分化形成的根，其维管束系统与茎芽皮层的输导系统不联通，植株移栽后根的吸水能力差，成活难度较大[13-16]。

林彦等[17]采用IBA浓度0.5 mg·L-1时，茎芽基部的愈伤组织较少。

高丽琼等[18]研究了桉树无性系EC21的组织培养技术，当添加IBA浓度为0.8 ~ 1.0 mg·L-1时有利于桉树茎芽生根。

欧阳权等[19]在对桉树组培育苗新技术研究时发现，腺嘌呤和生长素之间有着某种相互作用，比例高时，有利于芽的形成；比例低时，有利于根的形成。

本研究通过利用不同浓度IBA和NAA组合的结果显示，尾巨桉和巨赤桉的生根情况差异较显著，尾巨桉在1/2 MS+NAA 0.2 mg·L-1+IBA 1.0 mg·L-1培养基上生根效果明显，愈伤组织较小；巨赤桉在1/2 MS+NAA 0.15 mg·L-1+IBA1.0 mg·L-1培养基上生根情况较好，愈伤组织小。

参考文献
[1]谢耀坚.中国桉树育种研究进展及宏观策略[J].世界林业
研究,2011,24(4):50–54.
[2]杨民胜,谢耀坚,刘杰锋.中国桉树研究三十年
(1981—2010)[M].北京:中国林业出版社,2011.
[3]殷亚方,杨民胜,王莉娟,等.巴西桉树人工林资源及其实
木加工利用[J].世界林业研究,2005,18(1):60–64.
[4]陈少雄,刘杰锋.科学经营,持续改良,巴西桉树领先的法
宝——巴西桉树人工林高产经营考察报告[J].桉树科
技,2012,29(1):1–12.
[5]祁述雄.中国桉树(第2版)[M].北京:中国林业出版
社,2002.
[6]刘敏燕,苏程瑜,张润桃,等.基本培养基对尾巨桉愈伤组织
诱导及再生的影响[J].广东农业科学,2013,8(13):50–52. [7]黄芳.赤桉优良无性系茎段组织培养技术的研究[J].安徽
农学通报,2012,8(9):52–53.
[8]Arruda S C C, Souza G M, Almeida M, et al.Anatomical
and biochemical characterization of the calcium effect on Eucalyptus urophylla callus morphogenesis in vitro[J].
Plant Cell Tiss Organ Cult,2003,63(2):143–154.
[9]高国训.植物组织培养中的褐变问题[J].植物生理学通
讯,1999,35(6):501–506.
16 桉树科技第34卷
[10]Kalpana P, Vishnoi R K, Kothari S L. Plant Regeneration
from Embryogenic callus of finger millet Eleusine coracana (L.) gaertn on higher concentrations of NH4NO3 as a replacement of NAA in the medium[J].Plant Science,1997,129(1):101–106.
[11]蒋淑磊,徐刚标.巨尾桉组织培养快繁技术研究[J].经济
林研究,2009,27(2):53–56.
[12]朱鹏,徐建民.邓恩桉组织材料生根抑制物研究[J].安徽
农业科学,2007,35(32):10236–10238,10560.
[13]宋建英.邓恩桉的组织培养和植株再生[J].林业科
学,2010,46(6):138–145.
[14]Brooker M I H,Kleining D A. Field Guide to Eucalyptus[M].
South–eastern Australia:Inkata Press, 2002.
[15]Marcucci P S N, Zelener N, Rodriguez J, et al. Selection of
a seed orchard of Eucalyptus dunnii based on genetic
diversity criteria calculated using molecular markers[J].
Tree Physiology,2003,23(9):625–632.
[16]王蒂.植物组织培养[M].北京:中国农业出版社,2004.
[17]林彦,谢耀坚.邓恩桉组织培养技术研究[J].桉树科
技,2007,24(1):16–21.
[18]高丽琼,谢耀坚,陆春花.EC21号桉树无性系的组织培养
技术研究[J].桉树科技,2000,17(1):27–29.
[19]欧阳权,增炼武,李洁汉.桉树组培育苗新技术[J].广西科
学,1994,1(3):49–57.。