胃癌组织中胃癌相关成纤维细胞、胃正常成纤维细胞的分离鉴定及增殖情况观察

、 αＳＭＡ Ｖｉｍｅｎｔｉｎ 阳性表达，ＣＫ１８ 阴性表达，胃ＮＦｓ 细胞存在Ｖｉｍｅｎｔｉｎ 阳性表达，αＳＭＡ、ＣＫ１８ 阴性表达。培养３ ～
６ 天，各来源胃ＣＡＦｓ 细胞ＯＤ 值均高于胃ＮＦｓ（Ｐ 均＜ ０． ０５）。结论 成功分离胃ＣＡＦｓ、胃ＮＦｓ。胃ＣＡＦｓ、胃ＮＦｓ
均存在Ｖｉｍｅｎｔｉｎ 表达。胃ＣＡＦｓ 增殖能力优于胃ＮＦｓ。
法 ３ 例胃癌患者，均行胃癌切除术，术中保留胃癌组织及胃正常黏膜组织。采用组织贴壁块法及胶原酶消化法
分离胃癌组织中的胃ＣＡＦｓ 及胃正常黏膜组织中的胃ＮＦｓ。原代培养胃ＣＡＦｓ、胃ＮＦｓ，差速贴壁传代法分离并纯化
细胞，差速贴壁２０ ｍｉｎ。倒置显微镜下观察胃ＣＡＦｓ、胃ＮＦｓ 细胞形态，采用免疫细胞化学染色法检测细胞α平滑
ｓｕｅｓ ａｎｄ ｎｏｒｍａｌ ｇａｓｔｒｉｃ ｍｕｃｏｓａ ｗｅｒｅ ｐｒｅｓｅｒｖｅｄ ｄｕｒｉｎｇ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ． Ｔｈｅ ｔｉｓｓｕｅ ａｄｈｅｎｓｉｏｎ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｃｏｌｌａｇｅｎａｓｅ ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ
ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｉｓｏｌａｔｅ ｔｈｅ ｇａｓｔｒｉｃ ＣＡＦｓ ｉｎ ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｔｉｓｓｕｅｓ ａｎｄ ｇａｓｔｒｉｃ ＮＦｓ ｉｎ ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｇａｓｔｒｉｃ ｍｕｃｏｓａ． Ｐｒｉｍａｒｙ ｃｕｌ
肌肌动蛋白（αＳＭＡ）、角蛋白１８（ＣＫ１８）、波形蛋白（Ｖｉｍｅｎｔｉｎ）。取３ 个来源分离的胃Ｃห้องสมุดไป่ตู้Ｆｓ、胃ＮＦｓ，分别于细胞贴
壁２４ 、ｈ ２ 、ｄ ３ 、ｄ ４ 、ｄ ５ 、ｄ ６ ｄ 采用ＭＴＴ 法测算细胞光密度（ＯＤ）值，绘制细胞生长曲线。结果 胃癌ＣＡＦｓ 细胞大
小不一，呈梭形或星形，排列不规则并呈重叠生长；胃ＮＦｓ 细胞均匀一致，呈长梭形，排列规则。胃ＣＡＦｓ 细胞存在
关键词：胃癌；癌相关成纤维细胞；正常成纤维细胞；细胞角蛋白１８；波形蛋白；α平滑肌肌动蛋白；细胞增殖
： ｄｏｉ １０． ３９６９ ／ ｊ． ｉｓｓｎ． １００２２６６Ｘ． ２０１８． ３１． ００２
： （ ） 中图分类号： 文献标志码： 文章编号
Ｒ３６
Ａ
１００２２６６Ｘ ２０１８ ３１０００５０４
， ， Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒａｓｓｏｃｉａｔｅｄ
ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ａｎｄ ｎｏｒｍａｌ ｇａｓｔｒｉｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ
， ， ， ， ， ＦＥＮＧ Ｌａｎｌａｎ ＳＵＮ Ｗｅｉ ＺＨＵ Ｊｉｈａｉ ＬＩＵ Ｊｕｎ ＺＨＡＯ Ｊｕｎ ＬＩＵ Ｙａｎ （ ， ， ） Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｑｉｎｇｈａｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｘｉｎｉｎｇ ８１００１６ Ｃｈｉｎａ
， （ ）， （ ）， ｓｃｏｐｅ ａｎｄ αｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ａｃｔｉｎ αＳＭＡ ｋｅｒａｔｉｎ １８ ＣＫ１８ ａｎｄ Ｖｉｍｅｎｔｉｎ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌ ， ， ， ， ， ｓｔａｉｎｉｎｇ． Ｔｈｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｇａｓｔｒｉｃ ＣＡＦｓ ａｎｄ ｇａｓｔｒｉｃ ＮＦｓ ｆｒｏｍ ３ ｓｏｕｒｃｅｓ ａｄｈｅｒｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｗａｌｌ ｆｏｒ ２４ ｈ ２ ｄ ３ ｄ ４ ｄ ５ ｄ ａｎｄ ， （ ） ６ ｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｏｐｔｉｃａｌ ｄｅｎｓｉｔｙ ＯＤ ｗａｓ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ｂｙ ＭＴＴ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ＣＡＦｓ ｗａｓ ｖａｒｉａｂｌｅ ｗｉｔｈ ｓｐｉｎ ， ， ｄｌｅ ｓｈａｐｅ ｏｒ ｓｔａｒ ｓｈａｐｅ． Ｔｈｅｙ ｗｅｒｅ ｉｒｒｅｇｕｌａｒｌｙ ａｒｒａｎｇｅｄ ａｎｄ ｉｎ ｔｈｅ ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ． Ｏｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒａｓｔ ＮＦｓ ｗｅｒｅ ｕｎｉｆｏｒｍ ， ， ｓｐｉｎｄｌｅｓｈａｐｅｄ ａｎｄ ａｒｒａｎｇｅｄ ｒｅｇｕｌａｒｌｙ． Ｇａｓｔｒｉｃ ＣＡＦｓ ｓｈｏｗｅｄ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ αＳＭＡ ａｎｄ Ｖｉｍｅｎｔｉｎ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｅｘ ； ， ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＫ１８ ｇａｓｔｒｉｃ ＮＦｓ ｃｅｌｌｓ ｈａｄ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｖｉｍｅｎｔｉｎ ａｎｄ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ αＳＭＡ ａｎｄ ＣＫ１８． Ａｆ ， （ ） ｔｅｒ ｃｕｌｔｕｒｅ ｆｏｒ ３６ ｄａｙｓ ｔｈｅ ＯＤ ｖａｌｕｅｓ ｏｆ ＣＡＦｓ ｆｒｏｍ ａｌｌ ｓｏｕｒｃｅｓ ｗｅｒｅ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ｇａｓｔｒｉｃ ＮＦｓ ａｌｌ Ｐ ＜ ０． ０５ ．
， ｔｕｒｅｄ ｇａｓｔｒｉｃ ＣＡＦｓ ａｎｄ ｇａｓｔｒｉｃ ＮＦｓ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ａｎｄ ｐｕｒｉｆｉｅｄ ｂｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ａｄｈｅｒｅｎｃｅ ｍｅｔｈｏｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｅｌｌｓ ｒｅｃｅｉｖｅｄ ｄｉｆ
ｆｅｒｅｎｔｉａｌ ａｄｈｅｎｓｉｏｎ ｆｏｒ ２０ ｍｉｎ． Ｔｈｅ ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｇａｓｔｒｉｃ ＣＡＦｓ ａｎｄ ｇａｓｔｒｉｃ ＮＦｓ ｃｅｌｌｓ ｗａｓ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｕｎｄｅｒ ｉｎｖｅｒｔｅｄ ｍｉｃｒｏ
山东医药２０１８ 年第５８ 卷第３１ 期
胃细癌胞组的织分中离胃鉴癌定相及关增成殖纤情维况细观胞察、胃正常成纤维
封兰兰，孙伟，朱吉海，刘臖，赵臖，刘燕 （青海大学医学院，西宁８１００１６）
摘要：目的 从胃癌组织中分离胃癌相关成纤维细胞（ＣＡＦｓ）及胃正常成纤维细胞（ＮＦｓ），并鉴定其功能。方
： （ ） （ ） Ａｂｓｔｒａｃｔ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｉｓｏｌａｔｅ ｔｈｅ ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ＣＡＦｓ ａｎｄ ｎｏｒｍａｌ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ＮＦｓ ａｎｄ ， ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｔｈｅｉｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｒｅｅ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｕｎｄｅｒｗｅｎｔ ｇａｓｔｒｉｃ ｒｅｓｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ ｔｉｓ