免疫组化sabc法原理

免疫组化sabc法原理
免疫组化SABC法原理
免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）是一种利用抗体和免疫反应来检测组织样本中特定蛋白质的方法。

免疫组化技术的发展为研究细胞和组织中蛋白质的表达和定位提供了一种有效的手段。

在免疫组化技术中，SABC法（Streptavidin-Biotin Complex）是一种常用的放大方法，用于增强目标抗原的检测信号。

SABC法的原理是通过将抗原特异性的一抗与生物素化的二抗结合，再利用亲和力很强的鸡蛋白素-链霉亲和素（Streptavidin-biotin）结合系统，将生物素与酶或荧光染料等标记物连接起来，从而使目标抗原能够被可视化。

具体而言，SABC法分为四个步骤：抗原修复、阻断、一抗孵育和二抗孵育。

首先是抗原修复，组织样本通常需要进行抗原修复处理，以恢复抗原的免疫活性。

抗原修复的方法包括热处理、酶解和酸性处理等。

接下来是阻断步骤，目的是阻止非特异性结合。

通常使用的阻断剂包括牛血清蛋白（BSA）、小鼠血清、马血清和羊血清等。

然后是一抗孵育，将具有特异性的一抗与待检测的抗原结合。

一抗可以是单克隆抗体或多克隆抗体，具体选择取决于实验的需求。

最后是二抗孵育，将生物素化的二抗与一抗结合。

二抗通常是兔源抗小鼠IgG的抗体，也可以是其他动物源的抗体。

生物素化的二抗通过亲和力结合到一抗上，形成免疫复合物。

在SABC法中，生物素与酶或荧光染料等标记物结合，常用的酶标记有辣根过氧化物酶（HRP），荧光标记有荧光素酶（FITC）和罗丹明（Rhodamine）等。

这些标记物能够使抗原产生可见的颜色或荧光信号。

在目标抗原上添加底物，使酶催化底物产生可见的颜色反应，或者直接观察荧光信号。

通过显微镜观察或图像分析系统，可以定量分析目标抗原的表达和定位。

免疫组化SABC法具有高度特异性和敏感性，能够定量检测目标抗原在组织中的表达水平和定位。

它在研究细胞生物学、病理学和分子生物学等领域发挥了重要作用。

同时，SABC法操作简单、灵敏度高，成本相对较低，因此被广泛应用于临床诊断和科研领域。

总结来说，免疫组化SABC法是一种常用的放大方法，通过将抗原特异性的一抗与生物素化的二抗结合，再利用鸡蛋白素-链霉亲和素结合系统连接标记物，实现对目标抗原的可视化。

该方法具有高度特异性和敏感性，被广泛应用于研究和临床诊断中。