不同产地细茎石斛的HPLC特征图谱研究及应用

不同产地细茎石斛的HPLC特征图谱研究及应用石斛药用历史始载于《神农本草经》,为我国传统名贵中药,具有益胃生津、滋阴清热的功效,主要用于治疗热病伤津、胃痛干呕、肺燥干咳、腰膝软弱等症。

现代药理实验证明,石斛具有抗肿瘤、免疫调节、抗氧化、降低血糖等多种活性。

石斛需求量日益增加,已成享誉国内外的绿色产品。

细茎石斛,俗称铜皮,在石斛传统道地产地安徽、浙江等地区,经考证,也是石斛的主要应用品种之一。

但被认为比霍山石斛、铁皮石斛功效稍逊。

在江浙一带,常以茎干偏黄的浙江产地的细茎石斛(黄铜皮)冒充浙江本地的铁皮石斛,常以茎干偏黄的安徽产地的细茎石斛冒充霍山石斛。

安徽产地的细茎石斛多为黄铜皮;云南产地的细茎石斛多为紫铜皮;浙江产地的细茎石斛则分为黄铜皮和紫铜皮。

本文选择不同产地细茎石斛、霍山石斛、浙江产地的铁皮石斛为研究对象,采用国内外公认最有效的质量控制手段——中药指纹图谱技术,对其进行高效液相色谱(HPLC)特征图谱比较研究,以期区分不同产地细茎石斛以及为其质量控制及鉴别提供方法依据,同时与霍山石斛和浙江产地的铁皮石斛比较,尝试作出真伪优劣的判断。

目的:1、建立不同产地细茎石斛的HPLC特征图谱分析方法,区分不同产地细茎石斛,为其质量控制及鉴别提供方法依据。

2、初步比较安徽产地的细茎石斛(黄铜皮)与霍山石斛的HPLC特征图谱。

3、初步比较浙江产地的细茎石斛(黄铜皮)与浙江产地的铁皮石斛的HPLC
特征图谱。

方法:1、采用HPLC特征图谱技术,建立不同产地细茎石斛HPLC特征图谱分析方法,采用国家药典委员会中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2004A版)进行相似度分析,生成特征图谱共有模式,并比较三个产地的细茎石
斛特征图谱的共性及差异。

2、比较安徽产地的细茎石斛(黄铜皮)与霍山石斛特征图谱的异同,并进行相似度评价。

3、比较浙江产地的细茎石斛(黄铜皮)与浙江产地的铁皮石斛特征图谱的异同,并进行相似度评价。

成果:1、建立的不同产地细茎石斛的HPLC特征图谱分析方法具有可行性和实用性。

(1)安徽产地的细茎石斛(黄铜皮)共标示出24个特征共有峰,其中峰15和峰16为安徽产地的细茎石斛(黄铜皮)较专属的特征峰,相似度为0.821～
0.995;云南产地的细茎石斛(紫铜皮)标示出27个特征峰,相似度为0.869～
0.937;浙江产地的细茎石斛(紫铜皮)标示出22个特征峰,相似度为0.907～
0.942;浙江产地的细茎石斛(黄铜皮)标示出28个特征峰,相似度为0.972～
0.973。

(2)以安徽产地的细茎石斛(黄铜皮)共有模式为对照,浙江产地细茎石斛(黄铜皮)相似度为0.378。

结果显示安徽产地的细茎石斛(黄铜皮)与浙江产地的细茎石斛(黄铜皮)HPLC特征图谱之间的相似度很低,差异明显。

(3)以安徽产地的细茎石斛(黄铜皮)共有模式为对照,浙江产地细茎石斛(紫铜皮)、云南产地细茎石斛(紫铜皮)的细茎石斛相似度分别为0.426、0.490。

结果表明安徽产地的细茎石斛(黄铜皮)与云南或浙江产地的细茎石斛(紫铜
皮)HPLC特征图谱之间的相似度很低,差异明显。

(4)以云南产地的细茎石斛(紫铜皮)共有模式为对照,浙江产地细茎石斛(紫铜皮)的相似度比较高为0.960。

结果表明不同产地的紫铜皮差异不明显。

(5)安徽产地的细茎石斛(黄铜皮)特征图谱最大的区别是在保留时间80～120 min内,呈现峰值比例明显较大的2个特征峰。

2、建立可鉴别安徽产地的细
茎石斛(黄铜皮)与霍山石斛的HPLC特征图谱分析方法。

(1)安徽产地的细茎石斛(黄铜皮)共标示出24个特征峰,相似度为0.821～0.995;霍山石斛共标示出40个特征峰,相似度为0.959～0.988。

(2)以安徽产地的细茎石斛(黄铜皮)共有模式为对照,霍山石斛的相似度为0.492,结果表明安徽产地的细茎石斛(黄铜皮)与霍山石斛的HPLC特征图谱之间的相似度低,差异大。

(3)结合两种石斛在各保留时间段的特征峰紫外光谱分析,霍山石斛与安徽产地的细茎石斛(黄铜皮)特征图谱最大的区别是在保留时间80～120 min内,霍山石斛的特征峰个数、峰位、峰形与峰值比例与安徽产地的细茎石斛不同,安徽产地的细茎石斛(黄铜皮)基本呈一组典型的黄酮类特征峰,而霍山石斛具有峰面积虽不大但专属性较强的一组特征峰。

(4)安徽产地的细茎石斛(黄铜皮)特征图谱最大的区别是在保留时间80～120 min内,呈现峰值比例明显较大的2个吸收峰,由此便可检测出霍山石斛中是否掺安徽产地的细茎石斛’(黄铜皮)。

3、建立可鉴别浙江产地的细茎石斛(黄铜皮)与浙江产地的铁皮石斛的HPLC 特征图谱分析方法。

(1)浙江产地的细茎石斛(黄铜皮)共标示出28个特征峰,相似度为0.972～0.973;浙江产地的铁皮石斛共标示出31个特征峰,相似度为
0.920～0.937。

(2)以浙江产地的细茎石斛(黄铜皮)共有模式为对照,浙江产地的铁皮石斛的相似度为0.775。

结果表明浙江产地的细茎石斛(黄铜皮)与浙江产地的铁皮石斛存在差异。

结论:1、细茎石斛HPLC特征图谱分析方法准确可靠,重复性好,为细茎石斛质量控制提供方法依据。

2、由于不同产地的细茎石斛HPLC特征图谱有较大差异
性,本方法可用于区分安徽产黄铜皮与浙江产黄铜皮,同时也可用于区分黄铜皮与紫铜皮。

3、本研究的价值之一在于安徽市场多用安徽产地的细茎石斛(黄铜皮)假冒霍山石斛,本方法可有效区分霍山石斛与安徽产地的细茎石斛(黄铜皮)。

4、本研究的价值之二在于江浙市场上多用浙江产地的细茎石斛(黄铜皮)假冒浙江产地的铁皮石斛,本方法可有效区分浙江铁皮石斛与浙江产地的细茎石斛(黄铜皮)。