Smad真核表达质粒构建及其在小鼠T淋巴瘤细胞中的表达
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关键 词 ：Ｔ淋 巴瘤 细胞 ；Ｓｍａｄ蛋 白；真核表达 质粒 ｄｏｉ：１０．３９６０３ 中图分类号 ：Ｒ７３３．４ 文献标 志码 ：Ａ 文章 编号 ：１００２—２６６Ｘ（２０１８）２１－０００９－０４
Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｍａｄ ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｌａｓｍｉｄ ａｎｄ ｉｔｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ＥＬ４ ｃｅｌｌｓ
山东 医药 ２０１８年第 ５８卷第 ２ｌ期
Ｓｍａｄ真 核 表 达 质 粒 构 建 及 其 在 小 鼠 Ｔ淋 巴瘤 细胞 中 的表 达
王婧 帆 。季然 ，李鑫 宇 ，陈金 铃 （南通 大学 医学 院病原 生物 学 系，江 苏南通 ２２６０００）
摘要 ：目的 构 建并鉴定 ｐｃＤＮＡ３．１一Ｓｍａｄ２、ｐｃＤＮＡ３．１一Ｓｍａｄ３及 ｐｅＤＮＡ３．１一Ｓｍａｄ４真核表达质粒 ，探 讨 Ｓｍａｄ在 小 鼠 Ｔ淋 巴瘤 细胞 （ＥＩＡ）中能否稳定表达 。方法 以 ＥＬ４细胞 ｃＤＮＡ为模 板 ，ＰＣＲ法获取转 录因子 Ｓｍａｄ２、Ｓｍａｄ３、 Ｓｍａｄ４ ｍＲＮＡ ＣＤＳ区即 目的 基 因片 段 ；构 建 含 有 目的基 因的 Ｔ载 体 ｐＭＤ１９．Ｔ．Ｓｍａｄ２、ｐＭＤ１９一Ｔ—Ｓｍａｄ３、ｐＭＤ１９．Ｔ． Ｓｍａｄ４；用 ＨｉｎｄⅢ和 ＥｃｏＲ Ｉ双 酶切 ｐｅＤＮＡ３．１载体 、ｐＭＤ１９一Ｔ—Ｓｍａｄ２，用 Ｘｈｏ Ｉ和 ＥｃｏＲ Ｉ双 酶切 ｐｃＤＮＡ３．１载体 、 ｐＭＤ１９－Ｔ—Ｓｍａｄ３及 ｐＭＤ１９一Ｔ·Ｓｍａｄ４，Ｔ４ ＤＮＡ 连 接 酶 连 接 纯 化 后 的 酶 切 产 物 ；将 连 接 产 物 转 化 ＤＨ５ｃ￣大 肠 杆 菌 感 受 态细胞并挑选 阳性 克隆 ，扩大培养并提 取重组质 粒 ；通过 ＰＣＲ、双 酶切及 ＤＮＡ测序 等方法 鉴定重 组质 粒。将构 建 好 的 ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓｍａｄ２、ｐｃＤＮＡ３．１一Ｓｍａｄ３、ｐｃＤＮＡ ３．１一Ｓｍａｄ４电转入 ＥＬ４细胞 ，７２ ｈ后用 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ法检测 ＥＬ４ 细胞 中 目的蛋 白的表达 。结果 ＰＣＲ和 双酶切 结果 均 提示 重组 质粒 ｐｃＤＮＡ３．１．Ｓｍａｄ２、ｐｃＤＮＡ３．１．Ｓｍａｄ３、ｐｃＤＮＡ ３．１一Ｓｍａｄ４构建成 功 ；测 序结 果 确 定 插 入 片段 无 突变 ，序 列 完 全 正 确 。重 组 质 粒 ｐｃＤＮＡ３．１一Ｓｍａｄ２、ｐｃＤＮＡ３．１一 Ｓｍａｄ３、ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓｍａｄ４转入 ＥＬ４细胞后上调 目的蛋 白 Ｓｍａｄ２、Ｓｍａｄ３、Ｓｍａｄ４蛋 白的表 达。结论 成 功构建 ｐｃＤ— ＮＡ３．１一Ｓｍａｄ２、ｐｃＤＮＡ３．１一ｓｍａｄ３和 ｐｃＤＮＡ３．１一Ｓｍａｄ４真核表达 质粒 ；将 Ｓｍａｄ真 核表 达质粒 成功 转染入 ＥＬ４细胞 ， 诱导 细胞 内 目的蛋 白高表达 。
ｏｄｓ Ｔｈｅ ｔａｒｇｅｔ ＣＤＳ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ Ｓｍａｄ２，Ｓｍａｄ３，ａｎｄ Ｓｍａｄ４ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｙ ＰＣＲ ｕｓｉｎｇ ＥＬ４ ｃｅｌｌｓ ｃＤＮＡ ａｓ，ｔｈｅ ｔｅｍｐｌａｔｅ； ｔｈｅｎ ｐＭ Ｄ１９－Ｔ—Ｓｍ ａｄ２， ｐＭＤ １９一Ｔ—Ｓｍａｄ３， ａｎｄ ｐＭ Ｄ１９一Ｔ—Ｓｍａｄ４ ｗｅｒｅ ｃｏｎｓｔｒ ｕ ｃｔｅｄ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ； ｔｈｅ ｐＭＤ１９．Ｔ．Ｓｍａｄ２ ａｎｄ ｐｃＤＮＡ３．１ ｖｅｃｔｏｒ ｗｅｒｅ ｃｕｔ ｂｙ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅｓ Ｈｉｎｄ ｍ ａｎｄ ＥｃｏＲ Ｉ ．ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｐＭＤ１９． Ｔ．Ｓｍａｄ３．ｐＭＤ１９．Ｔ—Ｓｍａｄ４ ａｎｄ ｐｃＤＮＡ３．１ ｖｅｃｔｏｒ ｗｅｒｅ ｃｕｔ ｂｙ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅｓ Ｘｈｏ Ｉ ａｎｄ ＥｃｏＲ Ｉ ，ａｎｄ ｔｈｅｎ ｗｅ ｌｉｇａｔｅｄ ｔｈｅ ｐｕｒ ｉｆ ｉｅｄ ｅｎｚｙｍｅ—ｄｉｇｅｓｔｅｄ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ Ｔ４ ＤＮＡ ｔｉｇａｓｅ；ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔｌｙ， ｔｈｅ ｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｔｒａｎｓｆｏｒｍ ＤＨ５ａ ｃｏｍｐｅｔｅｎｔ ｃｅｌｌｓ，ａｎｄ ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｌｏｎｅｓ ｗｅｒｅ ｐｉｃｋｅｄ ｕｐ；ｆ ｉｎａｌｌｙ，ｔｈｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｌａｓｍｉｄｓ ｗｅｒｅ ｉ— ｄｅｎｔｉｆ ｉｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ＰＣＲ ， ｄｏｕｂｌｅ－ｒｅｓｔｒｉｃｔ—ｅｎｚｙｍｅ ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ， ａｎｄ ＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ． Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｌａｓｍ ｉｄｓ ｏｆ ｐｃＤＮＡ３．１· Ｓｍａｄ２，ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓｍａｄ３， ａｎｄ ｐｅＤＮＡ３．１－Ｓｍ ａｄ４ ｗｅｒｅ ｔｒａｎｓｆｅｅｔｅｄ ｉｎｔｏ ＥＬ４ ｃｅｌｌｓ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔａｒｇｅｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｌａｓｍｉｄｓ ｏｆ ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓｍａｄ２，ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓｍａｄ３， ａｎｄ ｐｃＤＮＡ３．１．Ｓｍａｄ４ ｗｅｒｅ ｃｏｎｓｔｒｕ ｃｔｅｄ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ。ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｃｏｎｆｉｒ ｍ ｅｄ ｂｙ ＰＣＲ ａ ｎ ｄ ｄｏｕｂｌｅ－ｒｅｓｔｒ ｉｃｔ—ｅｎｚｙｍｅ．ＤＮＡ ｓｅ— ｑｕｅｎｃｉｎｇ ｒｅｓｕｌｔｓ ｗｅｒｅ ａ ｎ ａｌｙｚｅｄ ｂｙ ＤＮＡＭＡＮ，ａｎｄ ｗｅ ｆｕｒｔｈｅｒ ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｂａｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｏｆ ｐｅＤＮＡ３．１．Ｓｍａｄ２。ｐｃＤＮＡ３．１一Ｓｍａｄ３，ａｎｄ ｐｅＤＮＡ３．１一Ｓｍａｄ４． Ｔｒａｎｓｆｅｅｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｌａｓｍｉｄｓ ｏｆ ｐｅＤＮＡ３．１．Ｓｍａｄ２ ，ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓｍ ａｄ３，ａｎｄ ｐｃＤＮＡ３．１一Ｓｍａｄ４ ｉｎｔｏ ＥＬ４ ｃｅｌｌｓ ｃｏｕｌｄ ｒｅｍ ａｒｋａｂｌｙ ｕｐ—ｒｅｇｕｌａｔｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｓｍａｄ２，Ｓｍａｄ３，ａｎｄ Ｓｍａｄ４，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ｔｈｅ ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｌａｓｍｉｄｓ ｏｆ ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓｍａｄ２，
ＷＡＮＧ Ｊｉｎｇｆａｎ，ＪＩ Ｒａｎ，ＬＩ Ｘｉｎｇｙｕ，ＣＨＥＮ Ｊｉｎｌｉｎｇ （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＰｒｏｔｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｎａｎｔｏｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｔｏｎｇ ２２６０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ ｅｕｋａｒｙｏｔｉｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｌａｓｍｉｄｓ ｏｆ ｐｃＤＮＡ３．１一Ｓｍａｄ２，ｐｃＤＮＡ３．１一Ｓｍａｄ３，ａｎｄ ｐｃＤＮＡ３．１一Ｓｍａｄ４ ａｎｄ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｗｈｅｔｈｅｒ Ｓｍａｄ ｃａｎ ｂｅ ｓｔａｂｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｍａ ｃｅｌｌｓ（ＥＬ４）．Ｍｅｔｈ·
Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｍａｄ ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｌａｓｍｉｄ ａｎｄ ｉｔｓ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ＥＬ４ ｃｅｌｌｓ
山东 医药 ２０１８年第 ５８卷第 ２ｌ期
Ｓｍａｄ真 核 表 达 质 粒 构 建 及 其 在 小 鼠 Ｔ淋 巴瘤 细胞 中 的表 达
王婧 帆 。季然 ，李鑫 宇 ，陈金 铃 （南通 大学 医学 院病原 生物 学 系，江 苏南通 ２２６０００）
摘要 ：目的 构 建并鉴定 ｐｃＤＮＡ３．１一Ｓｍａｄ２、ｐｃＤＮＡ３．１一Ｓｍａｄ３及 ｐｅＤＮＡ３．１一Ｓｍａｄ４真核表达质粒 ，探 讨 Ｓｍａｄ在 小 鼠 Ｔ淋 巴瘤 细胞 （ＥＩＡ）中能否稳定表达 。方法 以 ＥＬ４细胞 ｃＤＮＡ为模 板 ，ＰＣＲ法获取转 录因子 Ｓｍａｄ２、Ｓｍａｄ３、 Ｓｍａｄ４ ｍＲＮＡ ＣＤＳ区即 目的 基 因片 段 ；构 建 含 有 目的基 因的 Ｔ载 体 ｐＭＤ１９．Ｔ．Ｓｍａｄ２、ｐＭＤ１９一Ｔ—Ｓｍａｄ３、ｐＭＤ１９．Ｔ． Ｓｍａｄ４；用 ＨｉｎｄⅢ和 ＥｃｏＲ Ｉ双 酶切 ｐｅＤＮＡ３．１载体 、ｐＭＤ１９一Ｔ—Ｓｍａｄ２，用 Ｘｈｏ Ｉ和 ＥｃｏＲ Ｉ双 酶切 ｐｃＤＮＡ３．１载体 、 ｐＭＤ１９－Ｔ—Ｓｍａｄ３及 ｐＭＤ１９一Ｔ·Ｓｍａｄ４，Ｔ４ ＤＮＡ 连 接 酶 连 接 纯 化 后 的 酶 切 产 物 ；将 连 接 产 物 转 化 ＤＨ５ｃ￣大 肠 杆 菌 感 受 态细胞并挑选 阳性 克隆 ，扩大培养并提 取重组质 粒 ；通过 ＰＣＲ、双 酶切及 ＤＮＡ测序 等方法 鉴定重 组质 粒。将构 建 好 的 ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓｍａｄ２、ｐｃＤＮＡ３．１一Ｓｍａｄ３、ｐｃＤＮＡ ３．１一Ｓｍａｄ４电转入 ＥＬ４细胞 ，７２ ｈ后用 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ法检测 ＥＬ４ 细胞 中 目的蛋 白的表达 。结果 ＰＣＲ和 双酶切 结果 均 提示 重组 质粒 ｐｃＤＮＡ３．１．Ｓｍａｄ２、ｐｃＤＮＡ３．１．Ｓｍａｄ３、ｐｃＤＮＡ ３．１一Ｓｍａｄ４构建成 功 ；测 序结 果 确 定 插 入 片段 无 突变 ，序 列 完 全 正 确 。重 组 质 粒 ｐｃＤＮＡ３．１一Ｓｍａｄ２、ｐｃＤＮＡ３．１一 Ｓｍａｄ３、ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓｍａｄ４转入 ＥＬ４细胞后上调 目的蛋 白 Ｓｍａｄ２、Ｓｍａｄ３、Ｓｍａｄ４蛋 白的表 达。结论 成 功构建 ｐｃＤ— ＮＡ３．１一Ｓｍａｄ２、ｐｃＤＮＡ３．１一ｓｍａｄ３和 ｐｃＤＮＡ３．１一Ｓｍａｄ４真核表达 质粒 ；将 Ｓｍａｄ真 核表 达质粒 成功 转染入 ＥＬ４细胞 ， 诱导 细胞 内 目的蛋 白高表达 。
ｏｄｓ Ｔｈｅ ｔａｒｇｅｔ ＣＤＳ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ Ｓｍａｄ２，Ｓｍａｄ３，ａｎｄ Ｓｍａｄ４ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｙ ＰＣＲ ｕｓｉｎｇ ＥＬ４ ｃｅｌｌｓ ｃＤＮＡ ａｓ，ｔｈｅ ｔｅｍｐｌａｔｅ； ｔｈｅｎ ｐＭ Ｄ１９－Ｔ—Ｓｍ ａｄ２， ｐＭＤ １９一Ｔ—Ｓｍａｄ３， ａｎｄ ｐＭ Ｄ１９一Ｔ—Ｓｍａｄ４ ｗｅｒｅ ｃｏｎｓｔｒ ｕ ｃｔｅｄ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ； ｔｈｅ ｐＭＤ１９．Ｔ．Ｓｍａｄ２ ａｎｄ ｐｃＤＮＡ３．１ ｖｅｃｔｏｒ ｗｅｒｅ ｃｕｔ ｂｙ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅｓ Ｈｉｎｄ ｍ ａｎｄ ＥｃｏＲ Ｉ ．ｗｈｉｌｅ ｔｈｅ ｐＭＤ１９． Ｔ．Ｓｍａｄ３．ｐＭＤ１９．Ｔ—Ｓｍａｄ４ ａｎｄ ｐｃＤＮＡ３．１ ｖｅｃｔｏｒ ｗｅｒｅ ｃｕｔ ｂｙ ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅｓ Ｘｈｏ Ｉ ａｎｄ ＥｃｏＲ Ｉ ，ａｎｄ ｔｈｅｎ ｗｅ ｌｉｇａｔｅｄ ｔｈｅ ｐｕｒ ｉｆ ｉｅｄ ｅｎｚｙｍｅ—ｄｉｇｅｓｔｅｄ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｂｙ ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ Ｔ４ ＤＮＡ ｔｉｇａｓｅ；ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔｌｙ， ｔｈｅ ｃｏｎｎｅｃｔｉｏｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｔｒａｎｓｆｏｒｍ ＤＨ５ａ ｃｏｍｐｅｔｅｎｔ ｃｅｌｌｓ，ａｎｄ ｔｈｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｌｏｎｅｓ ｗｅｒｅ ｐｉｃｋｅｄ ｕｐ；ｆ ｉｎａｌｌｙ，ｔｈｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｌａｓｍｉｄｓ ｗｅｒｅ ｉ— ｄｅｎｔｉｆ ｉｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ＰＣＲ ， ｄｏｕｂｌｅ－ｒｅｓｔｒｉｃｔ—ｅｎｚｙｍｅ ｄｉｇｅｓｔｉｏｎ， ａｎｄ ＤＮＡ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ． Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｌａｓｍ ｉｄｓ ｏｆ ｐｃＤＮＡ３．１· Ｓｍａｄ２，ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓｍａｄ３， ａｎｄ ｐｅＤＮＡ３．１－Ｓｍ ａｄ４ ｗｅｒｅ ｔｒａｎｓｆｅｅｔｅｄ ｉｎｔｏ ＥＬ４ ｃｅｌｌｓ， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔａｒｇｅｔ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｌａｓｍｉｄｓ ｏｆ ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓｍａｄ２，ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓｍａｄ３， ａｎｄ ｐｃＤＮＡ３．１．Ｓｍａｄ４ ｗｅｒｅ ｃｏｎｓｔｒｕ ｃｔｅｄ ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙ。ｗｈｉｃｈ ｗｅｒｅ ｃｏｎｆｉｒ ｍ ｅｄ ｂｙ ＰＣＲ ａ ｎ ｄ ｄｏｕｂｌｅ－ｒｅｓｔｒ ｉｃｔ—ｅｎｚｙｍｅ．ＤＮＡ ｓｅ— ｑｕｅｎｃｉｎｇ ｒｅｓｕｌｔｓ ｗｅｒｅ ａ ｎ ａｌｙｚｅｄ ｂｙ ＤＮＡＭＡＮ，ａｎｄ ｗｅ ｆｕｒｔｈｅｒ ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｂａｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｏｆ ｐｅＤＮＡ３．１．Ｓｍａｄ２。ｐｃＤＮＡ３．１一Ｓｍａｄ３，ａｎｄ ｐｅＤＮＡ３．１一Ｓｍａｄ４． Ｔｒａｎｓｆｅｅｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｐｌａｓｍｉｄｓ ｏｆ ｐｅＤＮＡ３．１．Ｓｍａｄ２ ，ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓｍ ａｄ３，ａｎｄ ｐｃＤＮＡ３．１一Ｓｍａｄ４ ｉｎｔｏ ＥＬ４ ｃｅｌｌｓ ｃｏｕｌｄ ｒｅｍ ａｒｋａｂｌｙ ｕｐ—ｒｅｇｕｌａｔｅ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｓｍａｄ２，Ｓｍａｄ３，ａｎｄ Ｓｍａｄ４，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ Ｔｈｅ ｅｕｋａｒｙｏｔｉｃ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｌａｓｍｉｄｓ ｏｆ ｐｃＤＮＡ３．１－Ｓｍａｄ２，
ＷＡＮＧ Ｊｉｎｇｆａｎ，ＪＩ Ｒａｎ，ＬＩ Ｘｉｎｇｙｕ，ＣＨＥＮ Ｊｉｎｌｉｎｇ （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＰｒｏｔｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｎａｎｔｏｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｔｏｎｇ ２２６０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔ ｅｕｋａｒｙｏｔｉｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｌａｓｍｉｄｓ ｏｆ ｐｃＤＮＡ３．１一Ｓｍａｄ２，ｐｃＤＮＡ３．１一Ｓｍａｄ３，ａｎｄ ｐｃＤＮＡ３．１一Ｓｍａｄ４ ａｎｄ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｗｈｅｔｈｅｒ Ｓｍａｄ ｃａｎ ｂｅ ｓｔａｂｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｍｏｕｓｅ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｍａ ｃｅｌｌｓ（ＥＬ４）．Ｍｅｔｈ·