HPLC―DAD同时测定香丹注射液中7种丹参酚酸类成分-5页精选文档

HPLC―DAD同时测定⾹丹注射液中7种丹参酚酸类成分-5页精选⽂档
HPLC―DAD同时测定⾹丹注射液中7种丹参酚酸类成分
2 ⽅法与结果
2.1 ⾊谱条件
⾊谱柱Thermo ODS2（4.6 mm×250 mm，5 ?m），流动相为⼄腈（A）-0.05%磷酸⽔（B）。

梯度洗脱条件为：起始流动相13%A-87%B；15 min，23%A-77%B；30 min，25%A-75%B；35 min，60%A-40%B。

流速1.0 mL/min，检测温度25 ℃，进样量20 ?L，检测波长280 nm。

2.2 对照品溶液的制备
精密称取对照品丹参素钠10.00 mg、原⼉茶醛13.80 mg、咖啡酸1.35 mg、丹酚酸B 13.00 mg、丹参酚酸A 6.30 mg、迷迭⾹酸5.00 mg、紫草酸5.50 mg，分别置5 mL棕⾊量瓶中，加70%甲醇溶解并定容⾄刻度，作为单⼀成分的对照品溶液。

精密吸取各对照品溶液适量，置10 mL棕⾊量瓶中，加70%甲醇稀释⾄刻度，摇匀，作为混合对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备
精密量取⾹丹注射液1 mL，置10 mL量瓶中，加70%甲醇稀释⾄刻度，经0.22 ?m的微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。

2.4 标准曲线的建⽴
按⾊谱条件，将系列浓度的混合对照品溶液依次进样20 ?L，测定。

以各成分的峰⾯积为纵坐标，以浓度为横坐标，进⾏线性回归，得回归⽅程，见表1。

表1 ⾹丹注射液中7种成分的线性关系
成分回归⽅程线性范围（?g/mL） r2
丹参素 Y=1E+07X+12 288.00 200.00～2.00 0.999 3
原⼉茶醛 Y=1E+08X+5 824.80 128.00～1.28 0.999 9
咖啡酸 Y=7E+07X-268.09 27.00～0.27 0.999 1
迷迭⾹酸 Y=4E+07X+3 946.90 100.00～1.00 0.999 8
紫草酸 Y=2E+07X+2 251.00 110.00～1.10 0.999 8
丹参酚酸B Y=2E+07X+10 316.00 260.00～2.60 0.999 9
丹参酚酸A Y=5E+07X+4 157.40 126.00～1.26 0.999 9
2.5 精密度试验
按“2.1”项下⾊谱条件，分别精密吸取对照品混合溶液20 ?L，连续进样6次，计算各成分的峰⾯积。

结果丹参素钠、原⼉茶醛、咖啡酸、迷迭⾹酸、紫草酸、丹酚酸B、丹参酚酸A的⾊谱峰峰⾯积的RSD分别为0.57%、0.28%、0.50%、0.37%、0.30%、0.44%、0.39%（n=6）。

2.6 稳定性试验
精密量取⾹丹注射液1 mL，按“2.3”项下⽅法制备供试品溶液，分别在0、6、12、24、36、48 h进样测定。

结果样品中丹参素钠、原⼉茶醛、咖啡酸、迷迭⾹酸、紫草酸、丹酚酸B、丹参酚酸A的⾊谱峰峰⾯积的RSD分别为1.39%、0.95%、1.20%、
1.06%、1.33%、1.51%、1.16%（n=6）。

2.7 重复性试验
精密量取⾹丹注射液1 mL共6份，分别按“2.3”项下⽅法制备供试品溶液，进样测定。

结果样品中丹参素钠、原⼉茶醛、咖啡酸、迷迭⾹酸、紫草酸、丹酚酸B、丹参酚酸A的⾊谱峰峰⾯积的RSD分别为0.55%、0.59%、0.66%、0.73%、0.60%、0.82%、0.91%（n=6）。

2.8 加样回收率试验
精密量取已知含量的⾹丹注射液1 mL各3份，分别精密加⼊对照品适量，按供试品溶液的制备⽅法制备并测定，计算回收率，结果丹参素、原⼉茶醛、咖啡酸、迷迭⾹酸、紫草酸、丹参酚酸B、丹参酚酸A的平均回收率分别为100.2%、99.5%、100.4%、101.0%、101.9%、98.5%、103.0%，RSD分别为1.03%、1.05%、1.18%、1.60%、0.96%、1.77%、
1.80%（n=3）。

2.9 样品含量测定
精密吸取⾹丹注射液各1 mL，分别按“2.3”项下⽅法制备供试品溶液，进样测定，根据标准曲线和峰⾯积计算样品中各成分的含量。

共测定3个⼚家⽣产的⾹丹注射液，结果见表2。

⾊谱图见图1。

表2 7种成分在不同⼚家⾹丹注射液中的含量（mg/mL）
成分新亚⾼科康宝制药亚宝药业
丹参素 2.245 2.190 1.928
原⼉茶醛 0.563 0.454 0.490
咖啡酸 0.010 0.009 0.006
迷迭⾹酸 0.117 0.081 0.051
紫草酸 0.094 0.073 0.032
丹参酚酸B 0.155 0.120 0.085
丹参酚酸A 0.260 0.192 0.203
A
B 注：A.对照品；B.供试品；1.丹参素；2.原⼉茶醛；3.咖啡酸；。