兽药残留
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中华人民共和国农业部 二OO三年一月二十二日
兽药残留
2.2.1高效液相色谱仪
•
高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、
色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中
的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进
入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相) 内，由
于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系
二.兽药残留检测
兽药残留
兽药残留检测方法
1.兽药残留的检验分析方法包括筛选、检测和确认。 2.
兽药残留
兽药残留检测方法
• 中华人民共和国农业部公告 • 第236号 • 根据《兽药管理条例》规定，我部组织制定了
12种动物性食品中兽药残留检测方法，现予发布， 请各地遵照执行。 • 附件：动物性食品中兽药残留检测方法 .doc
数，在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-
解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的
差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测
器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据
以图谱形式打印出来。
兽药残留
HPLC原理
• 1）高效液相色谱法只要求样品能制成溶液，不受 样品挥发性的限制，流动相可选择的范围宽，固 定相的种类繁多，因而可以分离热不稳定和非挥 发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围 的物质。
兽药残留
6）显色和比色 显色的温度和时间应按规定力求准确； 显色必须避光； 使用多道加液器加终止液； 显色完毕后尽快比色测定。
兽药残留
三.兽药残留监控措施
• 遵守最高残留限量和休药期规定是避免兽药残
留超标，确保动物性食品安全的关键。在畜牧业 生产过程中，只要科学、合理地使用兽药，不使 用违禁药物和未被批准的药物，就不会导致动物 性食品中兽药残留超标、危害消费者健康的情况 发生。
兽药残留
(B)实验设计
兽药残留
(C)实验的关键操作
① 试剂盒的选择和准备；
② 试样的处理；
③ 加样；
④ 洗涤；
⑤ 比色。
兽药残留
(D)检验具体操作
1）试剂盒的选择和准备 储存条件：2-8℃ ； 室温平衡：试验用试剂应提前1-2h从冰
箱中取出，待温度与室温平衡后使用； 及时保存：试剂完毕后不需用的部分应
兽药残留
兽药残留监控措施
到目前为止，农业部已先后制订、修订并颁布了240多种 兽药在动物性食品中最高残留限量标准和休药期标准；建 立了动物性食品中52种兽药残留的检测方法标准；建立了完 整的兽药残留检测网络结构，开展了兽药残留的基础研究 和实际监控工作，初步建立起适合我国国情并与国际接轨 的兽药残留监控体系。自1999年以来，我国已连续6年开展 了动物性食品中兽药残留的监测工作，监测地区、动物种 类、兽药种类、样品数量每年都有大幅度的增长。
磺胺类：磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶等；
呋喃类：呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因
等；
兽药残留
1.2兽药残留产生的原因
非法使用违禁或淘汰药物；
不遵守休药期规定；
滥用药物；
违背有关标签的规定；
屠宰前用药。
兽药残留
1.3兽药残留的危害
破坏微生态平衡，导致二重感染; 引发过敏反应； 导致病原菌产生耐药性; 毒性损害; 致畸、致癌、致突变作用兽;药残留
入置于平板上(直接滴样法)；或注入平板上
的牛津杯内（管碟法）；或吸入圆形滤纸
片后，再置于平板上(纸片法)；也可以在平
板上挖一定大小的圆孔，然后把被测物滴
入孔内（打孔法）；经培养后在物质扩散
所及的范围内出现抑菌法（或生长圈）,测
量圈的直径,并与标准曲线对比,计算出被测
物质的含量
兽药残留
•
• 固体平板扩散法 1、3、7 打孔法，2、8纸片 法，4、6管碟法5直接滴样法。
兽药残留
2020/11/6
兽药残留
兽药残留安全问题
• 出口日本的一万吨肉鸡，由于检测出抗球虫药氯羟吡啶的 残留量超标，要求我国政府销毁所有产品。与此同时，出 口到德国的蜂蜜由于农药“杀虫脒”残留超标而被退货， 接着欧共体、美国、日本也相继拒绝进口我国蜂蜜。
• 日本政府制订法规，规定对来自中国的鳗鱼须加强对抗生 素、磺胺制剂及恶喹酸三项有害物质控制检查，其中土霉 素等四环素类抗生素要求未检出（检测限为0.1mg/kg）。
兽药残留
一.兽药残留研究背景
兽药：预防和治疗畜禽疾病的药物；促进 生长、提高生产性能、改善动物性食品的 品质；也包括一些化学的、生物的动物保 健品或饲料添加剂。
现代化的动物集中饲养，经常需要使用抗 生素或其他药物来控制可能爆发的 兽药残留 疾病，
1.1兽药残留的类型
抗生素类：氯霉素、四环素、土霉素、青 霉素等；
兽药残留
2.2.3猪组织中盐酸克伦特罗的检 验
(1)盐酸克伦特罗概述
盐酸克伦特罗 （ clenbuterol，CLB）是一种选择性β2-肾上素受 体激动剂（简称β-兴奋剂），是国家按兴奋剂管理的药品， 为人、畜呼吸系统药物（氨哮素、克喘素） 。盐酸克伦特 罗可促进动物生长，加速脂肪转化，提高瘦肉率，被俗称 为“瘦肉精”。
• 2）与试样预处理技术相配合，HPLC 所达到的高 分辨率和高灵敏度，使分离和同时测定性质上十 分相近的物质成为可能，能够分离复杂相体中的 微量成分。随着固定相的发展，有可能在充分保
持生化物质活性的条件下完成其分离。
兽药残留
高效液相色谱法应用
• HPLC成为解决生化分析问题最有前途的方法。由 于HPLC具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱 柱可反复利用，流出组分易收集等优点，因而被 广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环 境分析、无机分析等各种领域。高效液相色谱仪 与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。
兽药残留
演讲完毕，谢谢听讲!
再见，see you again
2020/11/6
兽药残留
α-[(叔丁氨基)甲基]-4-氨基-3，5-二氯苯甲醇
盐酸盐
兽药残留
(2)盐酸克伦特罗加速脂肪转化
胰高血糖素 Байду номын сангаас甲状腺激素
激活
cAMP
激活
脂肪酶
兽药残留
(3)盐酸克伦特罗的非法使用
非法使用作为饲料添加剂，使用量大（是治疗剂量的5-10 倍），使用时间长（持续添加时间一般3周以上） ，代谢 慢，因而容易在动物体内（尤其是眼 、肺、肝、肾 ）残 留。 盐酸克伦特罗通过食物链进入人体，产生蓄积中毒， 如头晕、乏力、心律失常等。因此，国内外已经禁止β-肾 上腺素激动剂在动物生产中的应用。
兽药残留
2.2.2微生物测定法
microbiological assay 在规定条件下选用适当微生物测定某物 质含量的方法。被测定的物质可以是某些 生物生长所必需的维生素、氨基酸等，也 可以是抑制某些微生物生长的抗生素、农 药等。常使用的有液体稀释法和固体平板 扩散法。
兽药残留
微生物测定常用办法
及时放回冰箱保存。
兽药残留
2）试样的处理
尽可能使用新鲜样本；
进行必要的前处理。
3）加样
加样前样本必须混合均匀；
加在板孔底部，避免加在孔壁上
部；
兽药残留
4）温育
温育前必须震动混匀，但不可溅出；
温育的温度和时间应按规定力求准确；
温育必须避光。
5）洗涤
清洗必须彻底；
避免出现板孔干燥；
1.液体稀释法 • 在一组试管中分别加入一定的培养基，然
后加入不等量的被测物质，再将已培养好 的、用于测定的微生物接种进去,在规定的 条件下培养一定时间,观察其消长情况并与 标准曲线对比，计算出被测物质的含量。
兽药残留
微生物测定常用办法
2.固体平板扩散法
• 将溶化的固体培养基与被测定微生物混合
做成平板，把含不等量被测物质的液体滴
兽药残留
（4）猪组织中盐酸克伦特罗的检验—ELISA法
• GB/T 5009.192-2003《动物性食品中克伦特罗残留量的测定》，提出 了从ELISA(酶联免疫吸附测定)筛选、HPLC定量到GC-MS确证和定量 对动物性食品中克伦特罗残留量进行监测。
• （A)基本原理：微孔板包被有针对克伦特罗IgG的 抗抗体；加入克伦特罗抗体，经过温育和洗涤后； 加入酶标记物、标准或样品溶液，克伦特罗与酶 标记物竞争与抗体结合；没有连接的克伦特罗酶 标记物在被洗涤除去；加入酶底物和发色剂并且 温育，结合的酶标记物将无色的发色剂为蓝色的 产物，加入反应终止液使颜色有蓝转变为黄色。 在450nm处比色测定。
兽药残留
2.2.1高效液相色谱仪
•
高效液相色谱仪的系统由储液器、泵、进样器、
色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中
的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进
入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相) 内，由
于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系
二.兽药残留检测
兽药残留
兽药残留检测方法
1.兽药残留的检验分析方法包括筛选、检测和确认。 2.
兽药残留
兽药残留检测方法
• 中华人民共和国农业部公告 • 第236号 • 根据《兽药管理条例》规定，我部组织制定了
12种动物性食品中兽药残留检测方法，现予发布， 请各地遵照执行。 • 附件：动物性食品中兽药残留检测方法 .doc
数，在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-
解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的
差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测
器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据
以图谱形式打印出来。
兽药残留
HPLC原理
• 1）高效液相色谱法只要求样品能制成溶液，不受 样品挥发性的限制，流动相可选择的范围宽，固 定相的种类繁多，因而可以分离热不稳定和非挥 发性的、离解的和非离解的以及各种分子量范围 的物质。
兽药残留
6）显色和比色 显色的温度和时间应按规定力求准确； 显色必须避光； 使用多道加液器加终止液； 显色完毕后尽快比色测定。
兽药残留
三.兽药残留监控措施
• 遵守最高残留限量和休药期规定是避免兽药残
留超标，确保动物性食品安全的关键。在畜牧业 生产过程中，只要科学、合理地使用兽药，不使 用违禁药物和未被批准的药物，就不会导致动物 性食品中兽药残留超标、危害消费者健康的情况 发生。
兽药残留
(B)实验设计
兽药残留
(C)实验的关键操作
① 试剂盒的选择和准备；
② 试样的处理；
③ 加样；
④ 洗涤；
⑤ 比色。
兽药残留
(D)检验具体操作
1）试剂盒的选择和准备 储存条件：2-8℃ ； 室温平衡：试验用试剂应提前1-2h从冰
箱中取出，待温度与室温平衡后使用； 及时保存：试剂完毕后不需用的部分应
兽药残留
兽药残留监控措施
到目前为止，农业部已先后制订、修订并颁布了240多种 兽药在动物性食品中最高残留限量标准和休药期标准；建 立了动物性食品中52种兽药残留的检测方法标准；建立了完 整的兽药残留检测网络结构，开展了兽药残留的基础研究 和实际监控工作，初步建立起适合我国国情并与国际接轨 的兽药残留监控体系。自1999年以来，我国已连续6年开展 了动物性食品中兽药残留的监测工作，监测地区、动物种 类、兽药种类、样品数量每年都有大幅度的增长。
磺胺类：磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶等；
呋喃类：呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因
等；
兽药残留
1.2兽药残留产生的原因
非法使用违禁或淘汰药物；
不遵守休药期规定；
滥用药物；
违背有关标签的规定；
屠宰前用药。
兽药残留
1.3兽药残留的危害
破坏微生态平衡，导致二重感染; 引发过敏反应； 导致病原菌产生耐药性; 毒性损害; 致畸、致癌、致突变作用兽;药残留
入置于平板上(直接滴样法)；或注入平板上
的牛津杯内（管碟法）；或吸入圆形滤纸
片后，再置于平板上(纸片法)；也可以在平
板上挖一定大小的圆孔，然后把被测物滴
入孔内（打孔法）；经培养后在物质扩散
所及的范围内出现抑菌法（或生长圈）,测
量圈的直径,并与标准曲线对比,计算出被测
物质的含量
兽药残留
•
• 固体平板扩散法 1、3、7 打孔法，2、8纸片 法，4、6管碟法5直接滴样法。
兽药残留
2020/11/6
兽药残留
兽药残留安全问题
• 出口日本的一万吨肉鸡，由于检测出抗球虫药氯羟吡啶的 残留量超标，要求我国政府销毁所有产品。与此同时，出 口到德国的蜂蜜由于农药“杀虫脒”残留超标而被退货， 接着欧共体、美国、日本也相继拒绝进口我国蜂蜜。
• 日本政府制订法规，规定对来自中国的鳗鱼须加强对抗生 素、磺胺制剂及恶喹酸三项有害物质控制检查，其中土霉 素等四环素类抗生素要求未检出（检测限为0.1mg/kg）。
兽药残留
一.兽药残留研究背景
兽药：预防和治疗畜禽疾病的药物；促进 生长、提高生产性能、改善动物性食品的 品质；也包括一些化学的、生物的动物保 健品或饲料添加剂。
现代化的动物集中饲养，经常需要使用抗 生素或其他药物来控制可能爆发的 兽药残留 疾病，
1.1兽药残留的类型
抗生素类：氯霉素、四环素、土霉素、青 霉素等；
兽药残留
2.2.3猪组织中盐酸克伦特罗的检 验
(1)盐酸克伦特罗概述
盐酸克伦特罗 （ clenbuterol，CLB）是一种选择性β2-肾上素受 体激动剂（简称β-兴奋剂），是国家按兴奋剂管理的药品， 为人、畜呼吸系统药物（氨哮素、克喘素） 。盐酸克伦特 罗可促进动物生长，加速脂肪转化，提高瘦肉率，被俗称 为“瘦肉精”。
• 2）与试样预处理技术相配合，HPLC 所达到的高 分辨率和高灵敏度，使分离和同时测定性质上十 分相近的物质成为可能，能够分离复杂相体中的 微量成分。随着固定相的发展，有可能在充分保
持生化物质活性的条件下完成其分离。
兽药残留
高效液相色谱法应用
• HPLC成为解决生化分析问题最有前途的方法。由 于HPLC具有高分辨率、高灵敏度、速度快、色谱 柱可反复利用，流出组分易收集等优点，因而被 广泛应用到生物化学、食品分析、医药研究、环 境分析、无机分析等各种领域。高效液相色谱仪 与结构仪器的联用是一个重要的发展方向。
兽药残留
演讲完毕，谢谢听讲!
再见，see you again
2020/11/6
兽药残留
α-[(叔丁氨基)甲基]-4-氨基-3，5-二氯苯甲醇
盐酸盐
兽药残留
(2)盐酸克伦特罗加速脂肪转化
胰高血糖素 Байду номын сангаас甲状腺激素
激活
cAMP
激活
脂肪酶
兽药残留
(3)盐酸克伦特罗的非法使用
非法使用作为饲料添加剂，使用量大（是治疗剂量的5-10 倍），使用时间长（持续添加时间一般3周以上） ，代谢 慢，因而容易在动物体内（尤其是眼 、肺、肝、肾 ）残 留。 盐酸克伦特罗通过食物链进入人体，产生蓄积中毒， 如头晕、乏力、心律失常等。因此，国内外已经禁止β-肾 上腺素激动剂在动物生产中的应用。
兽药残留
2.2.2微生物测定法
microbiological assay 在规定条件下选用适当微生物测定某物 质含量的方法。被测定的物质可以是某些 生物生长所必需的维生素、氨基酸等，也 可以是抑制某些微生物生长的抗生素、农 药等。常使用的有液体稀释法和固体平板 扩散法。
兽药残留
微生物测定常用办法
及时放回冰箱保存。
兽药残留
2）试样的处理
尽可能使用新鲜样本；
进行必要的前处理。
3）加样
加样前样本必须混合均匀；
加在板孔底部，避免加在孔壁上
部；
兽药残留
4）温育
温育前必须震动混匀，但不可溅出；
温育的温度和时间应按规定力求准确；
温育必须避光。
5）洗涤
清洗必须彻底；
避免出现板孔干燥；
1.液体稀释法 • 在一组试管中分别加入一定的培养基，然
后加入不等量的被测物质，再将已培养好 的、用于测定的微生物接种进去,在规定的 条件下培养一定时间,观察其消长情况并与 标准曲线对比，计算出被测物质的含量。
兽药残留
微生物测定常用办法
2.固体平板扩散法
• 将溶化的固体培养基与被测定微生物混合
做成平板，把含不等量被测物质的液体滴
兽药残留
（4）猪组织中盐酸克伦特罗的检验—ELISA法
• GB/T 5009.192-2003《动物性食品中克伦特罗残留量的测定》，提出 了从ELISA(酶联免疫吸附测定)筛选、HPLC定量到GC-MS确证和定量 对动物性食品中克伦特罗残留量进行监测。
• （A)基本原理：微孔板包被有针对克伦特罗IgG的 抗抗体；加入克伦特罗抗体，经过温育和洗涤后； 加入酶标记物、标准或样品溶液，克伦特罗与酶 标记物竞争与抗体结合；没有连接的克伦特罗酶 标记物在被洗涤除去；加入酶底物和发色剂并且 温育，结合的酶标记物将无色的发色剂为蓝色的 产物，加入反应终止液使颜色有蓝转变为黄色。 在450nm处比色测定。