气相色谱法对甘草片中有机氯的测定

气相色谱法对甘草片中有机氯的测定
麦妙
【摘要】目的:建立中成药甘草片中有机氯农药残留量的气相色谱检测方法,为开展中成药有机氯残留寻找简便可靠的检测方法.方法:甘草片样品经丙酮与石油醚混合有机溶剂超声提取,经硫酸磺化后,选用气相色谱-电子捕获检测(GC-ECD)及农残专用石英毛细管柱(30 mm×0.25 mm ×0.25 μm),外标法计算含量.结果:气相色谱法对甘草片中有机氯的最低检出限为1.15×10-4～6.65×10-4 mg/kg,相对标准偏差(RSD)2.18％～6.45％,回收率89.7％～ 101.2％.结论:气相色谱法检测甘草片中的有机氯快速、简便、可靠,能广泛用于中成药有机氯农药残留的检测.
【期刊名称】《中国中医基础医学杂志》
【年(卷),期】2014(020)005
【总页数】3页(P690-691,699)
【关键词】气相色谱法;甘草片;有机氯农药残留
【作者】麦妙
【作者单位】海南省三亚市食品药品监督管理局,海南三亚 572000
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
甘草被誉为中药中的“国老”，其性平、味甜，具有益气补中、缓急止痛、润肺止咳、泻火解毒之功效，尤其是其特有的甜味能盖过其他药材的苦味，在儿科处方中
较为常见[1]。

甘草片属中成药，具有镇咳祛痰作用，主要有效成分为甘草流浸膏。

由于甘草品的止咳效果显著，其在临床上的应用十分广泛。

正所谓“十方九草”，随着现代科学技术的发展，甘草的临床应用更是越来越广泛[2～4]，正是如此大的需求量，市面上的甘草多为人工种植品。

有机氯类农药是被广泛运用的杀虫剂，但对人体百害无一利，该类农药具有难分解、性质稳定的特点，故而残留期长，且容易在人体内累积造成慢性中毒，长期的大量使用对环境已经造成了较大的污染[5]，我国在20世纪80年代已停用了有机氯类农药，但目前仍能在中药中检出该类农药。

为探究有机氯在中成药中的残留[6]，本文将气相色谱法用于检测甘草片中有
机氯含量，期望通过该检测手段快速、准确地检测中成药中有机氯类农药的残留量。

1 仪器与试药
1.1 仪器
岛津气相色谱仪GC-2010plus)含气相色谱工作站和电子捕获检测器(Ni-ECD)，农残专用石英毛细管柱(30 m ×0.25 mm ×0.25 μm)，旋转蒸发仪YRE-202B(上海
标和仪器公司)，电子分析天平(上海方瑞仪器厂)，循环水真空泵SHZ-III型(江苏
金坛仪器厂)，超声波发生器(江苏金坛仪器厂)，800B台式离心机(上海安亭科学仪器厂)。

1.2 试药
石油醚、丙酮、硫酸、二氯甲烷及无水硫酸钠等均购自广州化学试剂厂，所用试剂均为分析纯;六六六(BHC)包括α-BHC、γ-BHC、β-BHC、δ-BHC 4 种异构体;滴
滴涕(DDT)也有4种异构体，分别为PP'-DDE、PP'-DDD、OP'-DDT 和 PP'-DDT;五氯硝基苯(PCNB)浓度均为100 μg/ml。

以上有机氯标准品购自国家标准物质研究中心。

2 方法
2.1 色谱条件
岛津气相色谱仪和气相工作站，Ni-ECD检测器，农残检测专用石英毛细管柱(30
m×0.25 mm×0.25 μm);进样口温度250℃，检测器温度300℃，柱温220℃[7]。

升温程序为:初始温度120℃，每分钟升温10℃，升到200℃终止，保持终止温度
2 min，从200℃以每分钟2℃的速率升温，升到230℃后保持2 min，载气为高
纯氮气，流速为1.5 ml/min，压力为100 kPa，尾吹气流量56.3 ml·min－1，进样量1 μL 不分流进样[8]。

2.2 标准曲线绘制
混合对照品溶液的制备:先制备对照品储备液，精密吸取α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC、PP'-DDE、OP'-DDT、PP'-DDD、PP'-DDT 和五氯硝基苯 1 ml，置于25 ml容量瓶中，用丙酮与石油醚混合有机溶剂稀释至刻度，储备液浓度为4.0
μg·ml－1;精确吸取一定体积的对照品储备液于25 ml容量瓶中，用石油醚稀释至刻度，分别配置 0.01、0.05、0.10、0.50及1.0 μg·ml－1不同浓度的一系列对
照品溶液;在上述的色谱条件下进样1 μL，以浓度为横坐标(X)、峰面积为纵坐标(Y)，建立标准曲线方程[9]。

2.3 精密度实验
精密吸取一定量标准品溶液，相当于含量5 μg/L，按照2.1色谱条件连续进样6次，记录峰高和保留时间，根据峰面积计算RSD值。

2.4 重现性实验
称取甘草片样品3份，每份按照含甘草流浸膏粉100 mg为标准，加入30 ml丙
酮与石油醚混合有机溶剂，超声提取25 min过滤弃渣，并用5 ml石油醚洗涤2
次并入上述滤液中，滤液放入旋转蒸发瓶中浓缩干，再用石油醚定容并用浓硫酸磺化，2500 r/min离心15 min，静置取上清液中，再按2.1色谱条件连续进样6次，根据峰面积计算RSD值[10]。

2.5 回收率实验
称取相当于含甘草流浸膏粉100 mg的甘草片样品，制备供试品溶液，分别加入
浓度为0.05、0.10、0.15 μg/ml的对照品标准溶液，3 个浓度均按2.1色谱条件
连续进样6次，记录峰高和峰面积并计算回收率[11]。

3 结果
3.1 线性考察结果
表1显示，对照品混合物的浓度在10～1000 μg·ml－1范围内线性良好，相关系数r≥0.9961。

表1 标准曲线方程检测指标保留时间(min)回归方程相关系数最低检出限
(mg/kg)α-BHC 4.876 y=4629.75x －3427.22 0.9961 0.000125 γ-BHC 5.205
y=3385.32x－714.04 0.9963 0.000255 β-BHC 5.774 y=2471.19x－919.61
0.9981 0.000588 δ-BHC 7.329 y=3292.91x－782.31 0.9975 0.000214 P'-DDE 7.898 y=2556.41x－1829.22 0.9969 0.000323 P'-DDT 10.021 y=2129.92x－771.78 0.9982 0.000455 P'-DDD 11.532 y=1928.85x－397.12 0.9990
0.000496 P'-DDT 12.395 y=2722.33x－1928.24 0.9978 0.000689 PCNB
13.274 y=2199.54x －922.37 0.9984 0.000301
3.2 精密度和重复性结果
根据对照品混合溶液峰面积计算RSD值在2.18% ～6.45%范围内，检测仪器的精密度良好;样品峰面积计算RSD值为6.17%，检测方法重现性好(精密度和重现性
就是通过峰面积计算RSD值，不要单独将各测定峰面积值列出)。

3.3 回收率实验结果
表2显示，样品平均回收率89.7% ～101.2%，该检测方法回收率高且准确、可靠。

表2 回收率试验结果平均回收率(%)-BHC 96.17 97.33 96.17 γ-BHC 95.25 95.17 100.96 β-BHC 95.74 101.17 90.81 δ-BHC 87.32 86.94 87.95 P'-DDE 97.88 98.22 100.69 P'-DDT 100.02 99.15 97.82 P'-DDD 91.53 100.05 89.91 P'-DDT
92.39 101.04 92.73 g/ml α检测指标0.05 μg/ml 0.10 μg/ml 0.15 μ PCNB
93.74 93.84 86.99
3.4 样品检测结果
样品和对照品溶液做随行对照检测，含量计算采用外标法。

从色谱图1、2中可见，本甘草片样品中只检测出β-BHC，检测出的残留量为0.008 mg/kg。

4 结论
农药残留会污染药材而影响用药安全，尤其是高毒性的有机氯类农药，会对人体健康和用药安全产生极大影响[12，13]。

中成药的质量不仅要相关的有效成分合格，同时农残、重金属等对药品质量都有影响，对人体健康有危害的物质，也应限定在一定范围内。

我国是中成药的生产和消费大国，临床疗效也充分证明了中成药的独特作用，但目前中成药的出口和国外对中成药的接受程度均受到限制，其中农残是一个很重要的原因[14]，为此加强中成药的农药残留分析十分必要。

世界卫生组织从20世纪80年代就将农残列为检测项目，我国2000版《中国药典》开始对农
残进行限量要求，特别是《中药材生产质量管理规范》的实施，对从源头上控制农药残留量起到了至关重要的作用[15]。

图1 混合标准品气相色谱图注:1～9分别代表α-BHC、γ-BHC、β-BHC、δ-BHC、P'-DDE、P'-DDT、P'-DDD、P'-DDT、PCNB
图2 样品的色谱图
中成药成分比较复杂，甘草片中就含有阿片粉、樟脑、八角茴香油、苯甲酸钠、甘草酸等许多成分，部分化合物的结构、理化性质等与有机氯农药相似，使得样品与有机氯农药的分离、净化难度增大。

为保证检测结果的可靠性，中成药中有机氯农残的处理技术一般较为繁琐，这也是当前有机氯农残检测中普遍存在的问题。

繁琐的前处理步骤降低了检测效率和检测的可靠性，不能满足实际需要，而建立简便、快速、可靠的样品前处理和分离检测方法，已成为未来中成药中有机氯农残检测的
发展趋势[12]。

针对当前中成药有机氯农残检测主要集中在BHC和DDT上的特点，本文以石油醚和丙酮为超声提取溶剂，采用外标法计算含量，并参照《中华人民共和国药典(2010版)》中“有机氯类农药残留检测法”。

该检测相对简便、快速，其准确度和可靠性高，在实际检测工作中，不但适用于中成药甘草片的有机氯检测，也可以用于检测其他中成药样品中有机氯的农药残留。

参考文献:
[1]王亚军.芍药甘草汤加味治疗小儿功能性再发性腹痛疗效观察[J].中国全科医学，2012，15(21):2482-2483.
[2]贾绍燕.二陈汤加味辨证治疗感冒后咳嗽的临床疗效观察[J].中国全科医学，2012，15(6):680-681.
[3]宁晓然，闫永龙，于织波，等.复方甘草酸苷治疗自身免疫疾病相关性皮损疗效观察[J].中国全科医学，2012，15(21):2454-2456.
[4]薛德文，丛宁，韩建军，等.复方甘草酸单铵半胱氨酸氯化钠注射液在原发肝癌动脉栓塞介入治疗中的护肝作用[J].中国全科医学，2007，10(2):120-122. [5]陈静，房新宇，沈菊芳，等.蔬菜中20种有机氯类农药残留气相色谱分析方法的研究[J].化学世界，2010，7:408-411.
[6]梁卫青，浦锦宝，郑军献，等.气相色谱法测定中药材中有机氯农药残留量[J].浙江中医杂志，2011，46(5):376-377.
[7]Pin Z，Xiao JH，Tie HS.Simultaneous determination of 15 organochlorine pesticide residues in soil byGC/MS/MS[J]，2008 IEEE 4113-4114.
[8]何茂秋，张明时，李存雄，等.气相色谱法快速测定甘草中9种有机氯农药残留量[J].安徽农业科学，2011，39(20):12070-12071.
[9]马麟，段启，周海玲.气相色谱法测定太子参中有机氯农药残留量[J].广州中医药
大学学报，2011，28(3):268-271.
[10]Binou1，Xin CL，Hong L.Determination of organochlorine pesticide residues in herbs by capillary gas chromatography[J].Life Science Journal，2007，4(1):40-42.
[11]陈娟，张明时，宋锡全.气相色谱法测定中成药8种有机氯农药残留量[J].贵州科学，2011，29(1):89-93.
[12][8]王秀敏，邓英杰，张修宇，等.毛细管气相色谱法测定栽培黄芪中有机氯农药残留量[J].沈阳药科大学学报，2006，23(3):156-158.
[13][9]何佩雯，赵海誉，杜钢，等.气相色谱技术在中药农药残留检测中的应用[J].中国实验方剂学杂志，2010，16(2):126-133.
[14][10]Campillo N，Penalver R，Hernandz-Cordoba M.Pesticide analysis in herbal infusions by solid-phase micro extraction and gas chromatography with atomic emission detection[J].Talanta，2007，
71(3):1417-1422.
[15][11]戴博，金红宇，张华峰，等.凝胶渗透色谱-固相萃取净化气相色谱-质谱法检测甘草、黄芪、人参和银杏叶中24种农药残留[J].药物分析杂志，2011，
31(3):558-563.
[16][12]Tonghua Sun， JingpingJia， DengjieZhong， etal.Determination of 17 kinds of banned organochlorine pesticides in water by activated carbon fiber solid phase micro extraction coupled with GC/MS[J].The Japan Society Anal Chem，2006，22(6):293-296.。