电泳鉴定

电泳鉴定
一．准备工作
1．实验器具与材料：
（1）移液枪：10μl
（2）吸头：20μl
（3）吸头台：放置200μl和20μl的吸头一个
（4）三角烧瓶：50ml一个
（5）琼脂糖
2.实验器具的处理与准备
（1）塑料制品：（包括吸头等）送至高压3次，试验前将枪头放入吸头台。

（2）电泳板及电泳槽：用自来水冲洗干净备用
3.试剂配制和准备：
（1）电泳缓冲液（TAE）:
先配制0.5mol/l PH8.0的EDTA溶液：将37.2g EDTA-NA 加入160ml蒸馏水中，在搅拌器上剧烈搅拌。

在用NaoH调节溶液PH值至8.0（约需4gNaoH）。

用蒸馏水定容至200ml。

后送至高压灭菌。

室温保存。

再配制50*TAE溶液：在400ml蒸馏水中溶解121g Tris碱，加入28.55ml冰乙酸和50ml
0.5ml/l EDTA 溶液，再加蒸馏水定容至500ml，室温保存。

（2）琼脂糖溶液（1.0%）:
50*TAE溶液取10ml，稀释成500ml，取50ml溶解0.5g琼脂糖，电炉上煮至沸腾，溶化的琼脂物冷却至60℃左右时加入10mg/ml EB 5 ul,充分混匀，将温热的凝胶倒入已置好梳子的电泳板中，在室温下放置45min左右后进行电泳。

（3）溴化乙锭（EB）(10mg/ml):
在20ml水中加入0.2g溴化乙锭，磁力搅拌数小时。

然后用铝箔包裹容器或将溶液转移至棕色瓶中，室温保存。

（4）加样缓冲液(loading Buffer) 一般为6* loading Buffer
二．电泳鉴定时注意事项：
佩戴一次性手套，避免皮肤接触EB.无论作胶还是电泳缓冲液尽量用新的，不要超过两周。

三．电泳步骤
1. 50*TAE 取10ml稀释成500ml，取50ml溶解0.5g琼脂糖。

电炉上煮沸后加入EB5ul.
另外450ml TAE倒入电泳槽中。

2.用透明胶封闭电泳板，琼脂糖溶液冷却至温热时，倒入带数组的电泳板中，冷却
后，拔出梳子，放入电泳槽中。

3.加样：PCR Marker：1ul Marker+1ul Loading Buffer +4ul TAE 混匀于塑料膜上，加入
孔中。

4. 接上电源，电压120V，电流50mA进行电泳。

5. 电泳约1小时后，紫外灯检测。