银杏叶提取物抑制Bcl-2表达后对糖尿病心肌病的影响

银杏叶提取物抑制Bcl-2表达后对糖尿病心肌病的影响
曹鹏飞;孙荣江;马晓燕;高海成;刘志艺
【摘要】目的探讨银杏叶提取物(GBE)对链脲佐菌素(STZ)大鼠糖尿病心肌病(DCM)后的作用,阐明银杏叶提取物对STZ大鼠糖尿病心肌病后Bcl-2表达的影响.方法 40只雄性Wistar大鼠分对照组(10只)、模型组(10只)、阳性药组(10只)和治疗组(10只).观察GBE干预STZ大鼠心肌损伤后,大鼠体质量、血糖、形态学及Bcl-2蛋白表达.结果对照组体重高于模型组(P＜0.05).暴露于GBE后,模型组大鼠体重增高(P＜0.05);模型组Bcl-2的蛋白表达水平较正常组降低(P＜0.05),而治疗组较模型组升高(P＜0.05).结论 GBE可能增强STZ诱导的大鼠糖尿病心肌病中Bcl-2的表达,进而调控心肌的损害.
【期刊名称】《中国实验诊断学》
【年(卷),期】2018(022)009
【总页数】4页(P1618-1621)
【关键词】链脲佐菌素;糖尿病心肌病;细胞凋亡因子;银杏叶提取物
【作者】曹鹏飞;孙荣江;马晓燕;高海成;刘志艺
【作者单位】江苏农牧科技职业学院,江苏泰州225300;东北师范大学;长春中医药大学;吉林大学;吉林大学
【正文语种】中文
【中图分类】R285.5
糖尿病性心肌病(DCM)多发生在糖尿病患者,但与高血压性心脏病和冠状动脉粥样
硬化性心脏病有本质的区别[1]。

它的临床结果表现为充血性心力衰竭、心源性休克,甚至猝死[2]。

银杏叶提取物被广泛用于心脑血管疾病[3]。

研究发现,细胞凋亡是一系列程序控制的,可通过信号通路介导的病理过程,调控信号通路可阻断细胞凋亡,进而维持或改善心功能。

据报道,银杏叶(GBE)与心脑血管疾病和其抗氧化活性存在密切的关系。

然而,有关GBE对STZ诱导的DCM过程中对Bcl-2的作用,迄今报道甚少。

1 材料与方法
1.1 实验动物、试剂及仪器雄性Wistar 大鼠40只,体重180-220 g(合格证号：SCXKJ2014-0006)；链脲佐菌素(上海前尘生物科技有限公司)；Bcl-2单克隆抗体和SP-9000试剂盒(内含固定配液A、B和C)购于北京中衫金桥生物技术有限公司。

MD-100生化分析仪(美国),徕卡4215切片机(德国),三诺血糖仪(长沙三诺生物传
感技术有限公司)。

1.2 动物分组及治疗 40只大鼠随机分成对照组,模型组,阳性药组及治疗组。

除正常对照组外,各组大鼠先腹腔注射25 mg/kg STZ,造模稳定2 d。

用生理盐水刺激模
型组和对照组,而治疗组大鼠以 250 mg/kg 体质量灌胃给予GBE；阳性药组大鼠
以15 mg/kg体质量注射贝那普利。

1.3 生化指标测定尾静脉取血,利用血糖试纸分析血糖的改变。

1.4 HE染色大鼠心脏置入4%多聚甲醛中固定,经石蜡切片,仅用于HE和免疫组化染色。

制好的组织切片脱蜡后,严格按照说明书步骤执行操作。

400倍选取5个视野,利用病理分析系统,采集阳性信号,测定平均吸光度(A)值。

1.5 统计学分析借助SPSS15.0软件,用单因素方差分析法,分别对大鼠体质量、血
糖水平及Bcl-2的蛋白表达展开分析,用表示。

2 结果
2.1 体质量和血糖 STZ诱导的模型组大鼠体重与正常对照组相比降低(P<0.05)。

而GBE治疗组大鼠血糖活性与模型组相比有所增加(P<0.05)。

STZ诱导的模型组大鼠血糖活性和正常对照组相比增加(P<0.05)。

而GBE治疗组大鼠血糖活性和模型组相比有所降低(P<0.05),见表1。

表1 大鼠体质量、血糖变化组别体质量(g)1周2周血糖水平1周2周正常对照组301.1±4.5334.1±9.16.5±1.16.6±0.2模型组
321.0±5.61)323.3±8.11)7.9±0.41)8.2±0.31)阳性药组
336.6±11.22)342.1±13.62)6.7±0.52)6.5±0.62)治疗组
329.7±5.12)335.1±6.52)6.8±0.42)6.7±0.22)
与正常对照组比较,1)P<0.05；与模型组比较,2)P<0.05。

2.2 心肌HE组织形态学变化 HE染色结果：在正常对照组,心肌的排列非常整齐,横纹工整而清晰,未出现肿胀现象；造模后,有界限清晰的坏死灶出现在大鼠心肌,其内发现旺盛的成纤维细胞增生组织,同时有一定量的胶原纤维产生。

而GBE预防后其损伤的心肌病灶降低,其纤维化程度有所减轻,见图1。

A:正常对照组； B:模型组； C：阳性药组； D:治疗组。

图1 各组大鼠心肌组织形态学变化
2.3 Bcl-2表达 Bcl-2蛋白在对照组心肌间质中仅见少量阳性表达,颜色是棕黄色；而发生病变后其心肌间质Bcl-2阳性表达较对照组降低(P<0.01)；GBE治疗组Bcl-2阳性表达较模型组略有所增加(P<0.05),见图2。

A:正常对照组； B:模型组； C：阳性药组； D:治疗组。

图2 各组大鼠心肌中Bcl-2蛋白的表达
3 讨论
糖尿病(DM)是遍及全球性疾病,DCM发病机制复杂,现有研究认为：DCM是高血
糖、高甘油三酯和高非脂化脂肪酸等糖尿病特有的代谢异常,能够引起细胞内钙失衡、激活肾素血管紧张素系统和蛋白激酶C、增加细胞因子(TGF-β1和肿瘤坏死因子等)分泌以及氧化应激等,进而引发心肌结构改变,最终导致功能损伤[4]。

TGF-β是一类调控蛋白超家族,均为多肽结构,具备多种生物活性。

主要以TGF-β1、TGF-β2 和TGF-β3 三种形式存在于哺乳动物体内,其中以TGF-β1最为重要[5]。

有实验表明：TGF-β能够促进CFB增殖,同时还可以调节细胞外基质(extracellular matrixc,ECM)合成[6]。

许多动物能够被STZ诱发产生DM[7],一般实验采多用大鼠和小鼠进行造模[8]。

盐酸异丙肾上腺素是ISO注射液的主要成份,为β受体激动剂,可增强心收缩力,加快心率,使骨骼肌血管和支气管平滑肌舒张[9]。

做为抢救药,在临床上广泛用于治疗心源性或感染性休克、心搏骤停等[10]。

GBE为银杏叶的主要成分,包含黄酮类和萜内酯类。

有研究表明：GBE可有效调控间质成纤维细胞中糖基化终末产物中TGF-β1 和 CTGF mRNA 的表达[11]。

另外,GBE能抗氧化,有利于心血管系统和神经系统的保护作用[12]。

本研究结果提示1周后,模型组大鼠体质量和血糖水平即发生较明显的变化。

给予GBE后体质量值逐渐有所恢复。

血糖水平、损伤程度和TGF-β1的蛋白表达水平随STZ作用后明显增加；而给予GBE后,可降低血糖和改善心肌损伤程度。

综上所述,GBE 可能具有治疗心肾损伤的功效,其具体机制可能与它的抗炎和抗氧化作用有关,另外可能它参与了多种炎性因子和凋亡因子的代谢过程,从而起到防治心肾损伤的功效。

【相关文献】
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