紫花地丁乙酸乙酯部位的化学成分研究

紫花地丁乙酸乙酯部位的化学成分研究
柳航;胡巍;方芸
【摘要】Objective To study the chemical constituents in ethyl acetate fraction from Viola yedoensis.Methods The constituents were isolated by various chromatographic techniques (silica gel,RP-MPLC,and PHPLC)and their structures were determined on the basis of their spectroscopic
data,as well as literatures.Results Eight compounds were obtained and identified as quercetin-3-O-β-D-glucosyl-(1 -4)-O-α-L-rhamnoside (1),keampferol-3-O-rutinoside (2),keampferol-3 -O-β-D-glucosyl-(1 -2)-O-
α-L-rhamnoside (3),6,7 -dihydroxycoumarin (4),7 -hydroxy-8 -methoxycoumarin (5),6 -hydroxy-7 -[O-α-L-rhamnosyl-(6-1)-O-β-D-glucoside]coumarin (6),naringenin (7),and luteolin (8).Conclusion Compounds 1, 3,and 6 were isolated from Viola genus for the first
time,and compounds 2 were isolated from this plant for the first time.%目的：对紫花地丁乙酸乙酯部位的化学成分进行研究。

方法采用硅胶柱色谱、反相中压柱色谱和制备液相色谱等方法进行分离纯化，运用波谱数据并结合文献鉴定结构。

结果分离得到了8个化合物，分别鉴定为槲皮素－3－O－β－D－葡萄糖－
（1→4）－O－α－L－鼠李糖苷（1）、山奈酚－3－O－芸香糖苷（2）、山奈酚－3－O－β－D－葡萄糖－（1→2）－O－α－L－鼠李糖苷（3）、6，7－二羟基香豆素（4）、7－羟基－8－甲氧基香豆素（5）、6－羟基－香豆素－7－O－α－L－鼠李糖基－（1→6）－O－β－D－葡萄糖苷（6）、柚皮素（7）、木犀草素（8）。

结论化合物1、3和6首次从该属植物中分离得到，化合物2首次从该植
物中分离得到。

【期刊名称】《安徽医药》
【年(卷),期】2015(000)006
【总页数】4页(P1068-1070,1071)
【关键词】紫花地丁;化学成分;香豆素;黄酮
【作者】柳航;胡巍;方芸
【作者单位】南京大学医学院附属鼓楼医院药学部，江苏南京 210008;南京大学
医学院附属鼓楼医院药学部，江苏南京 210008;南京大学医学院附属鼓楼医院药
学部，江苏南京 210008
【正文语种】中文
紫花地丁为堇菜科(Violaceae)堇菜属植物紫花地丁(Viola yedoensis Makino)的
干燥全草，味苦、辛，性寒，有清热解毒、凉血消肿之功效［1］，用于疔疮肿毒，痈疽，丹毒，毒蛇咬伤。

现代药理研究表明，其具有抗菌抗炎、抗艾滋病［2］、抗凝血、调节免疫［3］等作用。

文献报道，堇菜属植物主要含黄酮［4］、香豆
素［5］和生物碱［6］等成分。

本课题组研究发现紫花地丁70%乙醇提取物乙酸
乙酯萃取部位的抗菌抗炎活性显著，因此对该部分进行了初步的化学成分研究，分离得到8个化合物，经波谱数据分析分别鉴定为槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-(1→4)-O-α-L-鼠李糖苷 (1)、山奈酚-3-O-芸香糖苷 (2)、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖-
(1→2)-O-α-L-鼠李糖苷 (3)、6，7-二羟基香豆素(4)、7-羟基-8-甲氧基香豆素 (5)、6-羟基-香豆素-7-O-α-L-鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-葡萄糖苷 (6)、柚皮素 (7)、木
犀草素(8)。

其中化合物1、3和6首次从该属植物中分离得到，化合物2首次从
该植物中分离得到。

1 仪器和材料
质谱测定用Agilent 1100 series LC-MSD Trap SL型质谱仪。

核磁共振谱测定用Inova 500型核磁共振仪。

薄层色谱用硅胶GF254和柱色谱硅胶(100～200目，200～300目)均为青岛海洋化工厂产品。

C18反相硅胶为日本YMC公司产品。

Sephadex LH-20为瑞士Amersham Pharmacia公司产品。

中压制备液相为慧德易QuikSep 50 I型中压层析系统。

制备液相色谱仪为日本Shimadazu LC-
6AD(YMC-Park ODS-AC18制备柱，20 mm ×250 mm，5 μm)。

紫花地丁购于南京鼓楼医院中草药房，经南京鼓楼医院药学部张海霞副主任药师鉴定为紫花地丁 (V.yedoensis)，批号130524。

样本保存于鼓楼医院临床药学研究室。

2 提取分离
紫花地丁5 kg，70%乙醇回流3次，每次2 h，60℃减压浓缩得到浸膏485 g。

此浸膏加水2 L混悬，分别用等体积的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，每部分萃取3次，萃取液减压浓缩，得到石油醚萃取物47 g，乙酸乙酯萃取物144 g，正丁醇萃取物66 g。

乙酸乙酯萃取物140 g(留样4 g)，以氯仿—甲醇(100∶0～100∶50)梯度洗脱，得到133个流份。

按照薄层色谱法检测结果，主要成分相同的流份合并，得到29个部分。

Fr.7采用硅胶柱色谱分离，石油醚—丙酮(100∶5 ～100∶15)梯度洗脱得到 Fr.9 和Fr.16，Fr.9 和 Fr.16 分别经 Sephadex LH-20 柱色谱分离得到化合物7(7 mg)和化合物8(13 mg)。

Fr.9采用硅胶柱色谱分离，石油醚—丙酮(100∶8～100∶20)梯度洗脱得到 Fr.13，Fr.13 通过重结晶得到化合物5(22 mg)。

Fr.14经Sephadex LH-20柱色谱分离得到化合物4(30 mg)。

Fr.22～24通过中压制备液相，以甲醇—水(10∶90 ～35∶65，30 mL·min-1)梯度洗脱4 h，约300 mL收集一份，得到23个流份，Fr.6通过制备
高效液相得到化合物1(7 mg)和化合物2(6 mg)，Fr.13制备得到化合物3(8 mg)，Fr.17 制备得到化合物6(7 mg)。

3 结构鉴定
化合物1:黄色粉末 (甲醇)，ESI-MS m/z:633［M+Na］+，分子式为
C27H30O16。

1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:12.55(1H，s，5-OH)，
10.82(1H，brs，7-OH)，9.68(1H，s，4＇-OH)，9.36(1H，s，3＇-OH)，
7.49(1H，d，J=1.5 Hz，H-2＇)，7.41(1H，dd，J=8.5，1.5 Hz，H-6＇)，
6.77(1H，d，J=8.5 Hz，H-5＇)，6.17(1H，d，J=1.5 Hz，H-6)，6.38(1H，d，J=1.5 Hz，H-8)，5.17(1H，brs，Rha 1＇-H)，4.35(1H，d，J=
7.5 Hz，Glu 1＇-H)，0.94(3H，d，J=5.0 Hz，Rha 6＇-CH3)。

13C-NMR(125 MHz，DMSO-
d6)δ:156.8(C-2)，133.9(C-3)，177.4(C-4)，161.2(C-5)，98.9(C-6)，164.2(C-7)，93.7(C-8)，157.0(C-9)，104.3(C-10)，121.6(C-1＇)，115.3(C-2＇)，144.8(C-3＇)，148.5(C-4＇)，116.2(C-5＇)，121.4(C-6＇)，101.3(C-1＇)，70.3(C-2＇)，69.6(C-3＇)，82.4(C-4＇)，68.8(C-5＇)，17.5(C-6＇)，104.1(C-1＇)，74.5(C-2＇)，76.3(C-3 ＇)，69 .4(C-4 ＇)，76.7(C-5 ＇)，60.6(C-6 ＇)。

以上数据与文献［7］对照基本一致，确定化合物为槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-
(1→4)-O-α-L-鼠李糖苷，首次从堇菜属中分离得到。

化合物2:黄色粉末 (甲醇)，ESI-MS m/z:595［M+H］+，分子式为C27H30O15。

1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:12.51(1H，s，5-OH)，10.85(1H，s，7-OH)，10.08(1H，s，4＇-OH)，7.95(2H，d，J=8.0 Hz，H-2＇，6＇)，
6.83(2H，d，J=8.0 Hz，H-3＇，5＇)，6.18(1H，d，J=1.5 Hz，H-6)，
6.39(1H，d，J=1.5 Hz，H-8)，5.35(1H，d，J=
7.5 Hz，Glu 1＇-H)，4.39(1H，d，J=1.0 Hz，Rha 1＇-H)，0.99(3H，d，J=5.5 Hz，Rha 6＇-CH3)。

13CNMR(125 MHz，DMSO-d6)δ:156.9(C-2)，133.8(C-3)，177.3(C-4)，
161.0(C-5)，98.7(C-6)，164.1(C-7)，93.8(C-8)，157.0(C-9)，104.1(C-10)，121.6(C-1＇)，131.0(C-2＇，6＇)，115.5(C-3＇，5＇)，160.5(C-4＇)，
101.3(C-1＇)，74.2(C-2＇)，76.6(C-3 ＇)，70.2(C-4 ＇)，75.8(C-5＇)，
66.9(C-6＇)，100.9(C-1 ＇)，70.4(C-2＇)，70.8(C-3＇)，72.1(C-4 ＇)，
68.5(C-5＇)，18.1(C-6＇)。

以上数据与文献［8］对照基本一致，确定化合物为
山奈酚-3-O-芸香糖苷，首次从紫花地丁中分离得到。

化合物3:黄色粉末 (甲醇)，ESI-MS m/z:617［M+Na］+，分子式为
C27H30O15。

1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:12.52(1H，s，5-OH)，
10.83(1H，s，7-OH)，10.11(1H，s，4＇-OH)，7.96(2H，d，J=7.5 Hz，H-2＇，6＇)，6.86(2H，d，J=7.5 Hz，H-3＇，5＇)，6.19(1H，d，J=1.5 Hz，
H-6)，6.40(1H，d，J=1.5 Hz，H-8)，5.58(1H，d，J=1.0 Hz，Rha 1＇-H)，4.45(1H，d，J=7.5 Hz，Glu 1＇＇-H)，0.99(3H，d，J=6.0 Hz，Rha 6＇-
CH3)。

13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ:156.7(C-2)，133.7(C-3)，177.4(C-4)，161.2(C-5)，98.6(C-6)，164.0(C-7)，93.7(C-8)，156.9(C-9)，103.8(C-10)，121.4(C-1＇)，130.9(C-2＇，6＇)，115.3(C-3＇，5＇)，160.4(C-4＇)，
100.8(C-1＇)，82.1(C-2＇)，70.2(C-3＇)，72.4(C-4＇)，71.1(C-5＇)，17.6(C-6＇)，105.9(C-1 ＇)，74.2(C-2 ＇)，77.0(C-3 ＇)，69 .3(C-4＇)，76.6(C-5＇)，60.9(C-6＇)。

以上数据与文献［9］对照基本一致，确定化合物为山奈酚-3-O-β-
D-葡萄糖-(1→2)-O-α-L-鼠李糖苷，首次从堇菜属中分离得到。

化合物4:淡黄色针晶(氯仿)，ESI-MS m/z:179［M+H］+，分子式为C9H6O4。

1H-NMR(500 MHz，CDCl3)δ:6.23(1H，d，J=9.5 Hz，H-3)，7.63(1H，d，
J=9.5 Hz，H-4)，6.94(1H，s，H-5)，6.77(1H，s，H-8)。

以上数据与文献［10］对照基本一致，确定化合物为6，7-二羟基香豆素。

化合物5:白色粉末(氯仿)，ESI-MS m/z:215［M+Na］+，分子式为C10H8O4。

1H-NMR(500 MHz，CDCl3)δ:6.22(1H，d，J=9.5 Hz，H-3)，7.60(1H，d，
J=9.5 Hz，H-4)，7.09(1H，d，J=8.5 Hz，H-5)，6.82(1H，d，J=8.5 Hz，H-6)，4.05(3H，s，8-OCH3)。

以上数据与文献［11］对照基本一致，确定化合物
为7-羟基-8-甲氧基香豆素。

化合物6:白色粉末 (甲醇)，ESI-MS m/z:487［M+H］+，分子式为C21H26O13。

1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:6.29(1H，d，J=9.5 Hz，H-3)，7.86(1H，d，J=9.5 Hz，H-4)，7.19(1H，s，H-5)，9.31(1H，brs，6-OH)，7.08(1H，s，
H-8)，5.13(1H，d，J=7.0 Hz，Glu 1＇-H)，4.49(1H，brs，Rha 1＇-H)，
1.06(3H，d，J=6.0 Hz，Rha 6＇-CH3)。

13C-NMR(125 MHz，DMSO-
d6)δ:160.0(C-2)，113.5(C-3)，144.2(C-4)，111.4(C-4a)，109.7(C-5)，
145.8(C-6)，148.1(C-7)，102.3(C-8)，149.9(C-8a)，101.1(C-1＇)，74.0(C-2＇)，76.5(C-3＇)，70.2(C-4＇)，75.6(C-5＇)，66.9(C-6＇)，100.2(C-1＇)，70.4(C-2 ＇)，70.7(C-3 ＇)，71.8(C-4 ＇)，68.5(C-5＇)，17.0(C-6＇)。

以上数据与文献［12］对照基本一致，确定化合物为6-羟基-香豆素-7-O-α-L-鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-葡萄糖苷，首次从堇菜属中分离得到。

化合物7:淡黄色结晶 (甲醇)，ESI-MS m/z:295［M+Na］+，分子式为
C15H12O5。

1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:5.38(1H，dd，J=12.5，3.0 Hz，H-2)，2.64(1H，dd，J=16.0，3.0 Hz，H-3a)，3.21(1H，dd，J=16.0，12.5 Hz，H-3b)，12.34(1H，s，5-OH)，10.79(1H，s，7-OH)，5.90(2H，brs，H-6，8)，7.28(2H，d，J=8.5 Hz，H-2＇，6＇)，6.75(2H，d，J=8.5 Hz，H-3＇，5＇)，9.65(1H，brs，4＇-OH)。

13C-NMR(125 MHz，DMSO-
d6)δ:78.4(C-2)，42.1(C-3)，196.8(C-4)，163.9(C-5)，94.9(C-6)，167.6(C-7)，95.0(C-8)，163.1(C-9)，101.7(C-10)，128.8(C-1＇)，128.5(C-2＇，6＇)，157.7(C-4＇)，115.1(C-3＇，5＇)。

以上数据与文献对照［13］基本一致，故确
定化合物为柚皮素。

化合物8:淡黄色粉末 (甲醇)，ESI-MS m/z:309［M+Na］+，分子式为
C15H10O6。

1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ:12.93(1H，s，5-OH)，
10.79(1H，s，7-OH)，9.32(1H，s，3＇-OH)，9.73(1H，brs，4＇-OH)，6.67(1H，s，H-3)，6.23(1H，d，J=2.5 Hz，H-6)，6.44(1H，d，J=2.5 Hz，H-8)，7.41(1H，d，J=2.5 Hz，H-2＇)，6.90(1H，dd，J=8.0，2.5 Hz，H-5＇)，7.43(1H，dd，J=8.0，2.5 Hz，H-6＇)。

13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ:163.9(C-2)，102.8(C-3)，181.6(C-4)，157.3(C-5)，98.8(C-6)，164.7(C-7)，93.8(C-8)，161.4(C-9)，104.1(C-10)，122.2(C-1＇)，114.1(C-2＇)，146.4(C-3＇)，150.4(C-4＇)，116.7(C-5＇)，119.1(C-6＇)。

以上数据与文献对照［14］基本一致，确定化合物为木犀草素。

4 结论
本研究对紫花地丁乙酸乙酯部位进行分离纯化，采用硅胶柱色谱、反相中压柱色谱和制备液相色谱等方法得到了8个化合物，运用波谱数据并结合文献，分别鉴定为槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-(1→4)-O-α-L-鼠李糖苷 (1)、山奈酚-3-O-芸香糖苷(2)、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖-(1→2)-O-α-L-鼠李糖苷 (3)、6，7-二羟基香豆素(4)、7-羟基-8-甲氧基香豆素 (5)、6-羟基-香豆素-7-O-α-L-鼠李糖基-(1→6)-O-β-D-葡萄糖苷(6)、柚皮素 (7)、木犀草素(8)。

其中化合物1、3和6首次从该属植物中分离得到，化合物2首次从该植物中分离得到。

5 讨论
中药化学成分的提取、分离中，合理利用分析液相、中压液相和制备液相等先进的分析、分离技术，有助于快速发现和分离天然产物中的单体成分。

在分离中，香豆素和黄酮苷元易于结晶，分离相对容易。

但黄酮苷和香豆素苷由于母核上具有酚羟基，液相分析时经常拖尾，包含一些杂质峰，影响样品的纯度。

因此，我们在分析
和制备的流动相中加入0.05%的三氟乙酸，可有效防止样品拖尾，由于三氟乙酸具有挥发性，样品冷冻干燥后能全部被除掉(甲酸和乙酸等加入后则不易除掉)，完全不影响下一步的结构鉴定，为样品的制备和纯化提供了便利。

参考文献:
【相关文献】
［1］国家药典委员会.中国药典(一部)［S］.北京:中国医药科技出版社，2010:317.
［2］毛晓霞，苗光新，于海龙，等.紫花地丁的研究进展［J］.承德医学院学报，2010，
27(3):302-305.
［3］李永生，何希瑞，杨燕，等.紫花地丁化学成分与药理活性研究新进展［J］.环球中医药，2013，6(4):313-318.
［4］曹捷，秦艳，尹成乐，等.紫花地丁化学成分及抗氧化活性［J］.中国实验方剂学杂志，2013，19(21):77-81.
［5］孙艺方，杜利利，周乐，等.紫花地丁抗菌活性成分研究［J］.中国中药杂志，2011，
36(19):2666-2671.
［6］姚霞，罗秀珍，谢忱.堇菜属植物化学成分和药理作用研究进展［J］.医药导报，2008，27(7):782-786.
［7］赵青，李创军，杨敬芝，等.黄皮叶的化学成分研究［J］.中国中药杂志，2010，35(8):997-1000.
［8］孙莲，马彦玲，巴图尔，等.芜菁子化学成分的研究［J］.华西药学杂志，2012，12(1):54-56.
［9］罗镭，张琳，田景奎，等.乌药叶化学成分的研究［J］.中草药，2009，40(6):856-858. ［10］王晓宇，陈冠儒，邓子云，等.鬼针草化学成分研究［J］.中国中药杂志，2014，
39(10):1838-1844.
［11］王知斌，姜海，夏永刚，等.刺五加叶中香豆素类化合物的结构鉴定［J］.中医药信息，2012，29(3):19-21.
［12］Sarker S，Waterman P，Armstrong J.Coumarin glycosides from two species of Eriostemon［J］.Journal of Natural Products，1995，58(7):1109-1115.
［13］葛永斌.金橘化学成分研究［J］.中药材，2014，37(3):435-438.
［14］邓瑞雪，张创峰，刘普，等.流苏花黄酮类化学成分的分离鉴定［J］.食品科学，2014，35(1):74-78.。